专利名称：灵芝三萜提取方法
技术领域：
本发明涉及一种以灵芝为原料提取成分方法，特别涉及灵芝三萜提取的方法。
背景技术：
三萜类化合物是灵芝的主要化学和药效成分之一。灵芝中所含三萜类化合物具有特别显著的生理活性。随着现代科学对灵芝研究的深入，至目前为止，总共分离到350余种化学成分，其中不少化学成分在抗肿瘤、保肝、降血糖、降血脂、增强单核吞噬细胞系与NK细胞功能、增强体液免疫功能、抗放射、镇痛、镇静、抗衰老等方面显示出了较强的活性。目前，一般采用有机溶剂法提取灵芝三萜，通常需要较长的提取时间并消耗大量的提取溶剂，同时大量有机溶剂的使用会给人体和环境带来不利的影响。另外由于灵芝子 实体由纤维素、半纤维素和木质素等主要成分构成，结构紧密，传统的浸提法时间长、耗能高，活性成分提取物得率低。

发明内容
本发明的目的是提供一种新型的灵芝三萜的提取工艺，降低资源消耗、减少生产成本和不必要的设备投入，且有利于环保。本发明的一种实施方式，提供一种灵芝三萜的提取方法，包括I)获取灵芝干粉，向灵芝干粉中加入复合酶溶液，在35 60°C下复合酶作用酶解I 4h，酶解结束后加热灭活复合酶；2)将加热灭活后的灵芝干粉按如下条件进行提取二次加入乙醇，使乙醇浓度达40% 80%，调pH值为9 10，进行频率为20 IOOKHz的超声处理控温30°C 90°C提取2 4h后分离提取液；3)将步骤2) 二次提取得到的提取液调节pH为2 5，进行吸附和洗脱，洗脱液除醇浓缩至原体积的5 20%得浓缩液，加浓缩液3 4倍体积的水搅拌均匀后静置沉淀，由沉淀物得到灵芝三萜提取物。步骤I)中复合酶为木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶中任意两种或三种混合物。木瓜蛋白酶用量为每克灵芝干粉4800 800000U、纤维素酶用量为每克灵芝干粉90 1500U,果胶酶用量为每克灵芝干粉32 200U。复合酶溶液用量为每克灵芝干粉加入3mL。步骤3)中树脂为大孔非极性吸附树脂。步骤2)中使用氢氧化钠饱和溶液调节pH值。步骤3)中使用lmol/L的HCl溶液调节pH值。步骤3)使用35% 75%乙醇洗脱。本发明的内容涉及复合酶酶解、超声波碱醇提取、大孔吸附树脂吸附等集成技术从灵芝子实体中高效提取灵芝三萜的方法。本发明方法所用溶剂安全、低毒，避免了传统方法中采用氯仿、甲醇等有机溶剂对环境的污染。与超临界二氧化碳萃取法相比，具有提取设备简单、操作方便、成本低、速度快、收效高等特点。采用超声波辅助提取灵芝三萜并通过树脂吸附，相对于传统的有机溶剂法，可使灵芝三萜提取率显著提高，采用生物酶酶解原料后再提取相对于传统的热水浸提法，可使灵芝三萜的提取率和提取量得到较大提高，且易除去杂质、最大限度地保持三萜活性等优点。
具体实施例方式下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法，使用到的酶与吸附树脂为市售商业产品，下面对发明作进一步详细的说明。实施例I :(I)取50. Og粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(O. 6g木瓜蛋白酶，比活力为800000U/g ;和I. 2g纤维素酶，比活力为15000U/g)加入到150ml水中，
并将该溶液加入到超声萃取釜中，在35°C下对原料进行酶解4h，酶解结束后，升温至100°C灭酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到40%，再加入氢氧化钠饱和溶液调PH为9后，加热至40°C，保温提取2h，期间使用50KHz的超声波超声lOmin，一釜原料提取2次。(3)将以上分离所得碱醇提取液减压旋蒸除醇，用lmol/L的盐酸溶液调pH为5后将料液倒入HPD700型大孔吸附树脂，进行吸附。(4)吸附完毕并水洗至无色后，用35%的乙醇进行解吸至无色为止，并将所得解吸液进行旋蒸浓缩除醇，将解析液浓缩至原体积的1/20后，加入浓缩液4倍量的水，搅拌均匀后静置沉淀12h，将沉淀IOOOrpm离心除水。(5)将所得沉淀烘干并粉碎得灵芝三職,得率为2. 56%,含量为34. 5%。实施例2 (I)取50. Og粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(I. 2g木瓜蛋白酶，比活力为800000U/g ;和O. 6g纤维素酶，比活力为15000U/g)加入到150ml水中，并将该溶液加入到超声萃取釜中，在50°C下对原料进行酶解3h，酶解结束后，升温至100°C灭酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到50%，再加入氢氧化钠饱和溶液调PH为10后，加热至50°C，保温提取2h，期间使用20KHz的超声波超声50min，一釜原料提取2次。(3)将以上分离所得碱醇提取液减压旋蒸除醇后，用lmol/L的盐酸溶液调pH为4后将料液倒入HPD700型大孔吸附树脂，进行吸附。(4)吸附完毕并水洗至无色后，用50%的乙醇进行解吸至无色为止，并将所得解吸液进行旋蒸浓缩除醇，将解析液浓缩至原体积的1/10后，加入浓缩液3倍量的水，搅拌均匀后静置沉淀12h,后进行IOOOrpm离心除水。(5)将所得沉淀烘干并粉碎得灵芝三職,得率为2. 62%,含量为41. 4%。实施例3 (I)取50. Og粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(O. 3g木瓜蛋白酶，比活力为800000U/g ；0. 3g纤维素酶，比活力为15000U/g ;和5. Og果胶酶，比活力为20000U/g)加入到150ml水中，并将该溶液加入到超声萃取釜中，在50°C下对原料进行酶解2h，酶解结束后，升温至100°C灭酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到70%，再加入氢氧化钠饱和溶液调PH为10后，加热至60°C，保温提取2h，期间使用IOOKHz的超声波超声90min，一釜原料提取2次。(3)将以上分离所得碱醇提取液除醇后，用lmol/L的盐酸溶液调pH为3后将料液倒入HPD700型大孔吸附树脂，进行吸附。(4)吸附完毕并水洗至无色后，用60%的乙醇进行解吸至无色为止，并将所得解吸液进行旋蒸浓缩除醇，将解析液浓缩至原体积的1/8，后加入浓缩液3倍量的水后，搅拌均匀后静置沉淀12h,后进行IOOOrpm离心除水。(5)将所得沉淀烘干并粉碎得灵芝三職,得率为3. 12%,含量为48. 5%。 实施例4 (I)取50. Og粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(O. Sg木瓜蛋白酶，比活力为800000U/g ；0. 8g纤维素酶，比活力为15000U/g ;和O. 8g果胶酶，比活力为20000U/g)加入到150ml水中，并将该溶液加入到超声萃取釜中，在60°C下对原料进行酶解lh，酶解结束后，升温至100°C灭酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到80%，再加入氢氧化钠饱和溶液调PH为9后，加热至70°C，保温提取2h，期间使用80KHz的超声波超声30min，一釜原料提取2次。(3)将以上分离所得碱醇提取液减压旋蒸除醇后，用lmol/L的盐酸溶液调pH为2后将料液倒入HPD700型大孔吸附树脂，进行吸附。(4)吸附完毕并水洗至无色后，用70%的乙醇进行解吸至无色为止，并将所得解吸液进行旋蒸浓缩除醇，将解析液浓缩至原体积的1/5，后加入浓缩液4倍量的水后，搅拌均匀后静置沉淀12h,后进行IOOOrpm离心除水。(5)将所得沉淀烘干并粉碎得灵芝三職,得率为3. 13%,含量为51. 2%。实施例5:(I)取50. Og粉碎好的干燥灵芝子实体，装入超声萃取釜中，将复合酶(2. Og木瓜蛋白酶，比活力为800000U/g ；2. Og纤维素酶，比活力为15000U/g ;和O. 8g果胶酶，比活力为20000U/g)加入到150ml水中，并将该溶液加入到超声萃取釜中，在60°C下对原料进行酶解lh，酶解结束后，升温至100°C灭酶O. 5h。(2)向釜中加入95%的乙醇和水，至提取液体积达到500ml，乙醇浓度达到75%，再加入氢氧化钠调PH为9后，加热至90°C，保温提取2h，期间使用70KHz的超声波超声40min, 一釜原料提取2次。(3)将以上分离所得碱醇提取液减压旋蒸除醇后，用lmol/L的盐酸溶液调pH为2后将料液倒入HPD700型大孔吸附树脂，进行吸附。(4)吸附完毕并水洗至无色后，用75%的乙醇进行解吸至无色为止，并将所得解吸液进行旋蒸浓缩除醇，将解析液浓缩至原体积的1/6，后加入浓缩液3倍量的水后，搅拌均匀后静置沉淀12h,后进行IOOOrpm离心除水。(5)将所得沉淀烘干并粉碎得灵芝三萜，得率为3. 36%，含量为52. 3%。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说,在不 脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于发明的保护范围。
权利要求
1.灵芝三萜提取方法，包括如下步骤 1)获取灵芝干粉，向灵芝干粉中加入复合酶溶液，在35 60°C下复合酶作用酶解I 4h，酶解结束后加热灭活复合酶； 2)将加热灭活后的灵芝干粉按如下条件进行提取二次 加入こ醇，使こ醇浓度达40% 80%，调pH值为9 10，进行频率为20 IOOKHz的超声处理控温30°C 90°C提取2 4h后分离提取液； 3)将步骤2)二次提取得到的提取液调节pH为2 5，过树脂进行吸附和洗脱，洗脱液除醇浓缩至原体积的5 20%得浓缩液，加浓缩液3 4倍体积的水搅拌均匀后静置沉淀，由沉淀物得到灵芝三萜提取物。
2.根据权利要求I所述的灵芝三萜提取方法，其特征在于所述复合酶溶液中复合酶为 木瓜蛋白酶、纤维素酶和果胶酶中任意两种或三种混合物。
3.根据权利要求2所述的灵芝三萜提取方法，其特征在于所述木瓜蛋白酶用量为每克灵芝干粉4800 800000U、纤维素酶用量为每克灵芝干粉90 1500U，果胶酶用量为每克灵芝干粉32 200U。
4.根据权利要求I所述的灵芝三萜提取方法，其特征在于所述步骤I)中复合酶溶液用量为姆克灵芝干粉加入3mL。
5.根据权利要求1-4任一项所述的灵芝三萜提取方法，其特征在于所述树脂为大孔非极性吸附树脂。
6.根据权利要求1-5任一项所述的灵芝三萜提取方法，其特征在于所述步骤2)中使用氢氧化钠饱和溶液调节pH值。
7.根据权利要求1-6任一项所述的灵芝三萜提取方法，其特征在于所述步骤3)中使用lmol/L的HCl溶液调节pH值。
8.根据权利要求1-7任一项所述的灵芝三萜提取方法，其特征在于所述步骤3)使用35% 75%こ醇洗脱。
全文摘要
本申请公开了一种灵芝三萜提取方法，该方法包括复合酶酶解灵芝子实体、超声波处理提取和灵芝三萜提纯。本发明具有提高产品的含量和得率，提高名贵药用菌灵芝的综合利用率，降低资源消耗和生产成本，减少提取设备投入的效果。
文档编号A61P1/16GK102772448SQ201210288800
公开日2012年11月14日 申请日期2012年8月15日 优先权日2012年8月15日
发明者贾利忠 申请人:苏州菩芸生物科技有限公司