专利名称：药用化合物的制作方法
技术领域：
本发明是关于某些N-羟基-N-〔3-〔2-(卤代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲类化合物、含有这些化合物的组合物以及它们的应用方法。
5-脂氧合酶(5-LO)催化花生四烯酸转变为白三烯生化合成的第一步。白三烯与许多非常重要的生物活性有关。许多疾病如气喘、关节炎、牛皮癣、局部缺血、变态反应疾病、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)和炎性肠病(IBD)都与作为重要介质的白三烯有关。
人们尽了相当大的努力，其目的在于控制白三烯生物合成。一般来讲，以控制白三烯生物合成为目标的研究工作其目的在于发现5-LO途径的抑制剂，尤其是5-LO特效抑制剂。
在英国专利申请GB2，196，629中公开了作为抗白三烯剂的某些环取代-N-羟基-N-取代苯甲酰胺和肉桂酰胺类化合物。环取代基可以是式(Ra)(Rb)C＝CH-基团，其中(Ra)(Rb)C＝是含有3～19个碳原子的不饱和脂肪烃烯基;式R3-C≡C-基团，其中R3是氢原子、含有1～18个碳原子的饱和或不饱和的脂肪烃基;或式R4-S-基团，其中R4是含有1～20个碳原子的脂肪烃基。N-取代基可以是C1～6烷基、C3～7环烷基、或取代或未取代的芳基。
在欧洲专利申请0196184中公开了某些芳基化合物，其中包括某些肉桂异羟肟酸类似物。在实施例81～91中还包括某些N-羟基脲类化合物。在EPO 0292699、EPO 0279281和EPO 0279263中公开了据说具有抑制脂氧合酶的某些以脲为基础的化合物或含脲化合物。这些文献没有认识到在脲骨架上3-〔2-(卤代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基取代基的重要性。
在WO 90/12008中公开了作为5-和12-脂氧合酶抑制剂的某些未取代和取代的苯基、萘基和噻吩基N-羟基脲。许多上述衍生物的制备方法及生物活性已经公开。本发明涉及这样一种发现，即一组选择的N-羟基-N-〔3-〔2-(4-卤代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲是极其有效的5-LO抑制剂，本文定义的本发明化合物是十分有效的5-LO抑制剂，并具有有用的预防和治疗作用。本发明化合物及它们的药学上适用的盐具有出人意料高的效力。
因此，本发明的主要目的是提供具有出人意料高效力的选择性5-LO抑制剂，可用于治疗气喘和变态反应疾病、炎性肠病、牛皮癣、休克、局部缺血、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)和关节炎。
本发明的另一目的是提供治疗上述病患的治疗组合物。
本发明的又一目的是提供治疗上述病患的方法。
熟悉本技术领域的专业人员可以从下面的叙述和权利要求书中明白本发明的其他目的、特点和优点。
本发明提供了下式的N-羟基-N-〔3-〔2-(卤代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲及其药学上适用的盐，

式中R1为氢或卤素;
X为氟或氯。
除了式Ⅰ化合物外，本发明还提供了含有式Ⅰ化合物及其药学上适用的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。
本发明也提供了治疗哺乳类动物气喘、变态反应疾病、炎性肠病、牛皮癣、休克、ARDS和关节炎的方法，该方法包括给上述需要治疗的哺乳类动物服用抑制5-LO剂量的式Ⅰ化合物。
本发明还提供了制备用于制备式Ⅰ化合物的2-〔2-(4-卤代苯硫基)苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉中间体的方法。
下述化合物举例说明包含在式Ⅰ范围内的化合物N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-5-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲本发明的化合物或其前体可以按照下述方法制备。
合成路线1

式中Y为溴或氯;THP为四氢吡喃基;TMS为三甲基甲硅烷基;R1和X如上对式Ⅰ所定义。
在合成路线1中，使2-卤代苯硫基肉桂基卤与O-四氢吡喃基羟胺在惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中反应，可将反应产物分离或进一步与酸反应，得到相应的N-肉桂基-N-羟胺。可将所得的N-(2-卤代苯硫基肉桂基)-N-羟胺分离出来或进一步与三甲基甲硅烷基异氰酸酯在惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中反应，得到所需的式Ⅰ化合物。
用于上述方法的第一步反应的合适溶剂为非质子传递溶剂，优选二甲基甲酰胺。
该反应在大约0℃至大约50℃的温度范围内进行。优选地，该反应在大约室温下进行。
用于第二步反应的合适的酸为无机酸，优选浓盐酸。
用于第二步反应的合适的溶剂包括质子性溶剂，优选甲醇。
第二步反应可以在大约0℃至大约30℃的温度范围内进行。优选地，该反应在大约室温下进行。
用于异氰酸酯缩合反应的合适的溶剂包括醚类，优选二噁烷。该反应可以在大约0℃至大约50℃的温度范围内进行，优选在室温下进行。H2NOTHP反应物按照Angew.Chem.Int.Ed.，5，511(1966)中所述方法制备。
如果不能从市场上买到合成路线1中的2-卤代苯硫基肉桂基卤，它们可以用本技术领域中专业人员熟知的方法通过下述合成路线2和3中所示的几条途径中的任何一条得到。
合成路线2

合成路线2所示的是用取代的苯甲醛开始的路线。在途径B中，将2-卤代苯硫基苯甲醛与乙烯基格利雅试剂在惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中反应，得到相应的1-羟基-1-(2-卤代苯硫基苯基)丙-2-烯，后者可被分离或如下所述进一步反应。该反应在本技术领域中专业人员已知的进行格利雅反应的一般条件下进行。相似地，在途径A中，使2-溴苯甲醛与乙烯基格利雅试剂在惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中反应，得到相应的1-(2-溴苯基)丙-2-烯-醇，可以将其分离或在催化剂，最好是POCl3存在下进一步与合适的醇保护基，最好是二氢吡喃反应，得到相应的1-四氢吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯。可将1-四氢吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯分离或在惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中在2位进行取代反应，得到相应的1-四氢吡喃氧基-1-(2-卤代苯硫基苯基)丙-2-烯，可以将其分离或在惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中用酸水解，得到2-卤代苯硫基肉桂基卤。
乙烯基格利雅试剂的缩合反应在本技术领域中专业人员已知的进行格利雅反应的一般条件下进行。虽然在合成路线2中的途径A中所示的是四氢吡喃基，但是可以使用许多对碱稳定的醇保护基中的任何一种如四氢吡喃氧基、甲氧乙氧基甲基、甲氧甲基、甲硅烷基及其它。该反应在合适的酸或碱催化剂存在下在惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中进行，选择酸还是碱，取决于醇保护基，这对本技术领域内的专业人员来说是熟知的。取代反应是通过依次用(C1-C4)烷基锂试剂和适当的苯基二硫化物处理1-四氢吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯进行的。进行取代反应的合适溶剂为对质子惰性的醚类如乙醚，优选四氢呋喃。该反应在大约-100℃至大约-40℃的温度之间进行，优选温度范围为大约-55℃至大约-85℃。
在合成路线2中的途径A和B中的每一条中，使中间体化合物与浓酸，最好是无机酸如HCl或HBr反应，得到2-卤代苯硫基肉桂基卤中间体。
如果不能从市场上买到途径A和B的起始化合物，它们可以通过明显的和本技术领域专业人员熟知的方法制得。或者，并且是优选地，途径B的起始化合物如下述合成路线3所示那样制备。
合成路线3

在合成路线3中，使4-卤代硫酚在非质子传递溶剂，包括醚类如四氢呋喃和乙醚，最好是四氢呋喃中，在大约-40℃至大约-100℃，最好是大约-55℃至大约-85℃的温度下与(C1-C4)烷基锂试剂如甲基锂、正丁基锂、仲丁基锂和叔丁基锂反应，得到相应的硫酚锂。使该硫酚锂在非质子传递溶剂，包括醚类如THF和乙醚，最好是THF中，在大约0℃至大约100℃，最好是大约20℃至大约70℃的温度下与2-(2-氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉反应，得到苯环上邻位的4-卤代苯硫基取代基。
然后用4.5N HCl水解2-噁唑啉(其中2-噁唑啉的浓度大约为0.05M)并回流，得到相应的2-(4-卤代苯硫基)苯甲酸，后者在惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中用氢化铝锂或其它合适的氢化物还原剂还原，得到相应的醇。可将所述醇分离或使其在合适的惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中进一步与重铬酸吡啶鎓反应，得到2-(4-卤代苯硫基)苯甲醛。
或者，可以通过与甲基碘反应使2-噁唑啉季铵化，然后在合适的惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂混合物中用硼氢化钠或其它合适的氢化物还原剂还原，然后用3N HCl水解，得到2-(卤代苯硫基)苯甲醛。本发明还包括制备下式的2-〔2-(4-卤代苯硫基)苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉的方法，

式中R1为氢或卤素，X为氟或氯，所述方法包括a)在非质子传递溶剂中在大约-40℃至大约-100℃的温度下使4-氟苯硫酚或4-氯苯硫酚与C1-C4烷基锂试剂反应，得到相应的硫酚锂;b)在非质子传递溶剂中在大约0℃至大约100℃的温度下使从a)得到的硫酚锂与下式的2-(2-氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉反应，得到所述的2-〔2-(4-卤代苯硫基)苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉，

式中R1为氢或卤素。
惯用语“惰性或实质上惰性的溶剂或溶剂的混合物”指反应在其中能够发生然而在别的方面却对该反应没有实质影响的作为媒质的物质。
为了适应具体取代基的反应性，改良上述方法可能是必需的。这样的改良对熟悉本技术领域的专业人员是明显的和熟知的。
如以上所述，本发明包括式Ⅰ所定义化合物的药学上适用的盐。虽然本发明化合物通常为中性的，但本发明特定的化合物具有能足以与许多无毒的无机碱、无毒的无机或有机酸反应形成药学上适用盐的酸性或碱性官能团。通常应用形成酸加成盐的无机酸有例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸等，有机酸有例如对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸等。因此，所述药学上适用的盐其实例有硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、羟乙酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐等。优选的药学上适用的酸加成盐是与无机酸如盐酸和氢溴酸形成的盐，以及与有机酸如马来酸和甲磺酸形成的盐。
碱加成盐包括由碱金属或碱土金属的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等得到的加成盐。因此，用于制备本发明盐的上述碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钙、碳酸钙等。钾盐和钠盐形式是特别好的。
应该认识到，式Ⅰ化合物存在不同的异构体形式。本发明不限制于任何具体的异构体，而是包括所有可能的各个异构体及其混合物。
式Ⅰ化合物及其药学上适用的盐也能以各种溶剂化物存在，例如与水、甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺等形成溶剂化物。还可以制备上述溶剂化物的混合物。所述溶剂化物的溶剂可以来自结晶的溶剂(为制备或结晶用的溶剂所固有)，或是外来的。这些溶剂化物也属于本发明的范围。
使等摩尔或过量的酸或碱与式Ⅰ化合物于合适的相互呈惰性的或实质上惰性的溶剂或溶剂混合液中反应，制得本发明式Ⅰ所包括的药学上适用的盐。溶剂的具体选择取决于起始物质和生成的盐的相关溶解度，可以用某些试剂的浆状物而不是溶液来制备盐。形成盐的反应在大约-10℃～大约100℃，最好在约室温下进行，溶剂用一般的方法除去。
下面的实施例进一步详细叙述本发明，但无论如何下面的实施例无意限制本发明。
实施例1N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制备A.2-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉在-78℃下，向4-氟苯硫酚(3.64g，28.4mmol)在50ml无水THF中的溶液中加入正丁基锂(17.8ml的1.6M己烷溶液)。30分钟后，滴加2-(2，6-二氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉(5.0g，23.7mmol)在10ml无水THF中的溶液。将反应混合物温热至室温，然后加热至60℃维持5.5小时。冷却后，将反应混合物倒入水中，然后用乙醚提取。提取液依次用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，得到粗产物，在硅胶上用10∶1己烷/乙酸乙酯洗脱层析，得到本小标题化合物。
元素分析 C H N S F计算值 63.93 4.73 4.39 10.04 11.90实测值 63.69 4.75 4.39 10.41 11.61m.p.118-20℃B.2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯甲酸将2-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉(5.0g，15.66mmol)加到310ml4.5N HCl水溶液中，回流过夜。用乙酸乙酯提取冷却后的反应混合物两次。提取液依次用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，得到本小标题化合物。
C.2-(4-氟苯硫基)-6-氟苄醇在冰浴冷却下，将LiAlH4(0.77g，20.4mmol)悬浮在30ml无水乙醚中。然后加入在6ml乙醚中的2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯甲酸(4.53g，17.0mmol)和6mlTHF，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。按顺序向反应混合物中加入0.8ml水、0.8ml 15%NaOH水溶液和2.4ml水，使反应混合物骤冷。滤出产生的白色沉淀，用乙醚充分洗涤。合并滤液和洗涤液，浓缩后，得到本小标题化合物。
D.2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯甲醛将重铬酸吡啶鎓(8.34g，22.2mmol)悬浮在30ml二氯甲烷中。然后向悬浮液中滴加2-(4-氟苯硫基)-6-氟苄醇(3.73g，14.8mmol)在10ml二氯甲烷中的溶液。将反应混合物搅拌过夜。通过硅藻土(Celite )过滤反应混合物，然后通过硅胶过滤，得到本小标题化合物，m.p.94-97℃。
E.1-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯-1-醇将2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯甲醛(2.06g，8.23mmol)溶于21ml无水THF中，冷却至-78℃。然后滴加溴化乙烯基镁溶液(12.4ml 1.0M四氢呋喃溶液)，将反应混合物温热至室温。然后将反应混合物倒入饱和NH4Cl中，用乙醚提取两次。提取液依次用水和盐水洗涤，用K2CO3干燥，得到本小标题化合物。
F.1-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕-3-溴丙-1-烯将1-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基)丙-2-烯-1-醇(2.29g，8.23mmol)溶于10ml己烷和10ml乙醚中，在冰浴中冷却。然后滴加浓HBr(4.6ml，41.2mmol)，并在室温下将反应混合物剧烈搅拌5小时。将反应混合物倒入水中，用乙醚提取两次。提取液依次用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，得到本小标题化合物。
G.N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕-O-四氢吡喃基羟胺将O-四氢吡喃基羟胺(2.88g，24.6mmol)溶于15ml无水DMF中。加入1-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕-3-溴丙-1-烯(2.80g，8.2mmol)在6mlDMF中的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物倒入200ml水中，用乙醚提取两次。提取液用水洗涤三次，然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥，得到粗产物。在硅胶上用5∶1己烷/乙酸乙酯洗脱层析，得到本小标题化合物。
H.N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕羟胺将N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕-O-四氢吡喃基羟胺(1.26g，3.34mmol)溶于17ml甲醇中，在冰浴中冷却。然后滴加浓HCl(1.7ml)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物蒸发至干，然后在饱和NaHCO3溶液中浆化，用乙醚提取两次。提取液依次用水和盐水洗涤，用K2CO3干燥，得到本小标题化合物。
I.N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲将N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕羟胺(0.91g，3.1mmol)溶于16ml无水二噁烷中。然后滴加三甲基甲硅烷基异氰酸酯(0.36g，3.1mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入1N HCl溶液中，然后用乙醚提取两次。提取液依次用水和盐水洗涤，用K2CO3干燥，得到粗产物。用乙酸乙酯重结晶，得到本小标题化合物。
元素分析 C H N S F计算值 57.13 4.19 8.33 9.53 11.29实测值 57.42 4.32 8.18 9.27 11.11mp.138-139.5实施例2N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲A.1-(2-溴苯基)丙-2-烯-1-醇将2-溴苯甲醛(27g，0.146mmol)在无水THF中的溶液在干冰/异丙醇浴中冷却至-78℃，向其中滴加175ml 1.0M的乙烯基格利雅试剂的四氢呋喃溶液，使反应缓慢温热过夜至室温。用饱和NH4Cl骤冷反应混合物，浓缩掉四氢呋喃。将反应混合物倒入水中，用乙醚提取两次，依次用水和盐水洗涤，用K2CO3干燥，得到本小标题化合物。
B.1-四氢吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯向在150ml无水THF中的1-(2-溴苯基)丙-2-烯-1-醇(31.0g，0.145mol)中先加入20ml3，4-二氢-2H-吡喃，然后加入1ml POCl3，在室温下将混合物搅拌两天左右(一个周末)。用饱和NaHCO3溶液中和后，浓缩。所得物在水和乙醚之间分配，水层用乙醚再次提取。合并有机相，依次用水和盐水洗涤，用K2CO3干燥，浓缩。用纯己烷→5%乙酸乙酯己烷溶液为梯度洗脱剂对本小标题产物粗品进行HPLC层析，得到本小标题化合物。
C.1-四氢吡喃氧基-1-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯将1-四氢吡喃氧基-1-(2-溴苯基)丙-2-烯(5.39g，18.1mmol)溶于60ml无水THF中，冷却至-78℃，加入正丁基锂(12.5ml 1.6M己烷溶液)，并将混合物搅拌5分钟。向该反应混合物中加入在15ml无水THF中的4-氟苯基二硫化物(5.54g，18mmol)。撤去冷浴，将反应混合物温热至室温。用饱和NH4Cl骤冷混合物，用乙醚提取两次。有机液用水洗涤两次，然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩。先用己烷，然后用20∶1己烷/乙醚为流动相将本小标题化合物粗品进行HPLC纯化，得到本小标题化合物。
D.1-〔(2-(4-氟苯硫基)苯基〕-3-溴丙-1-烯在氮气氛下和冰浴冷却下，向在20ml乙醚中的1-四氢吡喃氧基-1-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯(2.71g，7.87mmol)中加入浓HBr，并将混合物在0℃下搅拌1小时。撤去冰浴，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物倒入水中，用己烷提取两次。合并有机液，依次用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩，得到本小标题化合物。
E.N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕-O-四氢吡喃基羟胺向在10ml无水二甲基甲酰胺中的O-四氢吡喃基羟胺(2.77g，23.6mmol)中滴加在10ml二甲基甲酰胺中的1-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕-3-溴丙-1-烯(2.54g，7.87mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物倒入200ml水中，用乙醚提取两次。合并有机液，用水洗涤两次，然后用盐水洗涤，用K2CO3干燥后浓缩。本小标题化合物粗品用HPLC层析，先用3∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，再用2∶1己烷/乙酸乙酯洗脱，得到本小标题化合物。
F.N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕羟胺向在25ml甲醇中并在冰浴中冷却的N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕-O-四氢吡喃基羟胺(1.76g，4.9mmol)中滴加2.5ml浓HCl。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后浓缩至干。将混合物在乙醚和饱和NaHCO3之间分配，水层再用乙醚提取一次。合并有机层，用水和盐水洗涤，用K2CO3干燥，得到本小标题化合物。
G.N-羟基-N-〔3-(2-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲向在24ml无水二噁烷中的N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕羟胺(1.30g，4.7mmol)中滴加三甲基甲硅烷基异氰酸酯，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物倒入饱和NH4Cl中，用乙醚提取两次。合并有机液，用1N HCl洗涤，再用水洗涤两次，然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥。固体物用乙酸乙酯重结晶，用冷乙醚洗涤，得到0.76g本小标题化合物，m.p.124-125℃。
元素分析 C H N S计算值 60.36 4.75 8.80 10.07实测值 60.54 4.75 8.66 9.85实施例3N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制备A.2-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕-4，4-二甲基噁唑啉向处在氮气氛下和冷却至-78℃的在无水THF中的4-氟苯硫酚(9.26g，72.2mmol)中滴加正丁基锂(45.2ml，1.6M)，得到白色浆状物。向该混合物中滴加在20ml无水THF中的2-(2，4-二氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉(7.63g，36.1mmol)。将混合物温热至室温过夜。加入另外50ml THF得到一种溶液，并将反应物搅拌大约两天(一个周末)。将混合物倒入水中，用1N HCl酸化至pH5。将混合物用乙醚提取两次，合并有机液，先用水洗涤，然后用0.2N NaOH洗涤。有机层再次用水洗涤，然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩后，得到13.2g粗产物，用己烷重结晶后，得到8.82g本小标题化合物。
B.N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲基本上按照上述实施例1步骤B-I中所述方法，得到本小标题化合物。用乙酸乙酯重结晶后，得到0.94g所需的本小标题化合物;m.p.151-153℃。
元素分析 C H N S F计算值 57.13 4.20 8.33 9.53 11.30实测值 57.11 4.39 8.52 9.36 11.60实施例4N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-5-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制备基本上按照上述实施例3所述的方法，从适当取代的2-(2，5-二氟苯基)-4，4-二甲基噁唑啉开始制备，经乙酸乙酯重结晶，得到0.31g本标题化合物。
元素分析 C H N S F计算值 57.13 4.20 8.33 9.53 11.30实测值 57.32 4.16 8.10 9.57 11.50实施例5N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲的制备基本上按照上述实施例1步骤E-I所述的方法，从市售的2-〔(4-氯苯基)硫基〕苯甲醛制得了本标题化合物，m.p.126-128℃。
元素分析 C H N计算值 57.40 4.52 8.37实测值 57.54 4.41 8.37实施例6N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制备基本上按照上述实施例1所述的方法，制得本标题化合物，m.p.127-128℃。
元素分析 C H N S F计算值 57.13 4.19 8.33 9.53 11.39实测值 57.12 4.15 8.27 9.69 11.85实施例7N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制备基本上按照上述实施例3所述的方法，制得本标题化合物，m.p.125-127℃。
元素分析 C H N S Cl F计算值 54.47 4.00 7.94 9.09 10.05 5.38实测值 54.39 4.00 7.65 8.83 10.00 5.69
实施例8N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲的制备基本上按照上述实施例3所述的方法，制得本标题化合物，m.p.137-139。
元素分析 C H N S Cl F计算值 54.47 4.00 7.94 9.09 10.05 5.38实测值 54.67 4.00 7.78 9.24 10.03 5.66如上所述，本发明化合物可用于抑制5-脂氧合酶催化花生四烯酸转变成5-氢过氧-6，8，11，14-二十碳四烯酸(5-HPETE)。因此，本发明的另一具体方案是提供抑制花生四烯酸转变成白三烯的方法，该方法包括给需要抑制5-脂氧合酶的哺乳动物服用有效量的式Ⅰ化合物或其药学上适用的盐。
这里所用的术语“有效量”意指可以抑制5-脂氧合酶催化的由花生四烯酸转变成白三烯的生化合成途径的第一步，特别是抑制5-脂氧合酶的本发明化合物的量。本发明方法设想的抑制5-脂氧合酶的方法包括治疗和/或预防处理。当然，服用本发明化合物的具体剂量要由病例的具体情况决定，这包括例如服用的具体化合物、给药途径、需要治疗的疾病情况。一般日剂量含约0.01mg/kg～约20mg/kg本发明的活性化合物。通常，优选日剂量为约0.05～约10mg/kg，以约0.1～约5mg/kg为最理想。
本发明化合物可通过各种途径给药，包括口服、直肠给药、经皮给药、皮下注射、静脉注射、肌内注射和鼻内给药。本发明化合物特有的优点是具有高效力，因此较低的剂量能够有效地抑制5-LO催化反应。
许多生理作用与白三烯有关。因此，确信本发明化合物能够治疗哺乳动物的许多与白三烯有关的病患，如气喘、变态反应疾病(包括过敏性鼻炎)、炎性肠病、牛皮癣、局部缺血、休克、成人呼吸窘迫综合征和关节炎。因此，本发明还提供了以上述给出的抑制由5-脂氧合酶催化的花生四烯酸转变为白三烯的剂量，通过使需要抑制5-脂氧合酶的哺乳动物服用治疗气喘、变态反应疾病、炎性肠病、牛皮癣、休克、局部缺血、成人呼吸窘迫综合征或关节炎有效量的本发明化合物治疗上述疾病的方法。
在服用本发明化合物之前，最好将本发明化合物配制成制剂。因此，本发明另一具体实施方案是药物组合物，该组合物含有有效量的式Ⅰ化合物或其药学上适用的盐以及药学上适用的载体、稀释剂或赋形剂。
上述组合物中的有效成分占该组合物0.1%～99.9%重量。“药学上适用的”意指载体、稀释剂或赋形剂与组合物中的其他成分必须是可配伍的并且对接受者无毒害的。
可以按已知的方法，应用熟知的容易得到的成分制备本发明的上述药物组合物。在制备本发明组合物中，通常将有效成分与载体混合，或者将有效成分用载体稀释，或者将有效成分封装在可以是胶囊、小药囊、纸或其他包装材料的载体内。如果载体用作为稀释剂，那么该载体可以是固体、半固体或液体物质，它们作为有效成分的载体、赋形剂或介质。因此，组合物可以为片剂、小丸剂、粉剂、锭剂、小药囊剂、扁囊剂、

剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(作为固体或在液体介质中)、含有例如最高达10%重量有效化合物的软膏剂、软明胶胶囊剂和硬明胶胶囊剂、栓剂、无菌注射液、无菌封装的粉剂等。
合适的载体、赋形剂和稀释剂的实例有乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁及矿物油。该组合物另外还可以包括润滑剂、湿润剂、甜味剂、调味剂等。可以将本发明组合物用本技术领域熟知的方法进行配制，以便在给患者服用后提供迅速释放、缓释或延释有效成分。
最好将组合物以单位剂量形式进行配制，每个单位剂量一般含有约0.1～约500mg，最好为约1～约250mg的有效成分。术语“单位剂量形式”是指适用于人或其他哺乳动物作为单次剂量的实际上独立的单位，每个单位剂量形式含有经计算能产生所需治疗效果的、预先确定数量的有效成分以及合适的药用载体。
下面详细介绍组合物配方实施例，无论如何无意限制本发明的范围。当然，“有效成分”是指式Ⅰ化合物或其药学上适用的盐。
配方1用以下成分制备硬明胶胶囊数量(mg/胶囊)有效成分 2.50干淀粉 200硬脂酸镁 10总量 460mg将上述成分混合并装入460mg容量的硬明胶胶囊。
配方2用以下成分制备片剂数量(mg/片)有效成分 250微晶纤维素 400雾状二氧化硅 10硬脂酸 5总量 665mg将各成分混合并压制成每片为665mg重的片剂。
配方3用以下成分制备气雾剂溶液
重量%有效成分 0.25乙醇 29.75抛射剂22(氯二氟甲烷) 70.00总量 100.00有效化合物和乙醇一起混合，将该混合物加到部分抛射剂22中，冷至-30℃并转入灌注装置。然后向不锈钢容器中装入所需要的量，并用剩余的抛射剂稀释。再将阀门装到容器上。
配方4每片含60mg有效成分的片剂按以下方法制备有效成分 60mg淀粉 45mg微晶纤维素 35mg聚乙烯吡咯烷酮(为10%水溶液) 4mg羧甲基淀粉钠 4.5mg硬脂酸镁 0.5mg滑石 1mg总量 150mg有效成分、淀粉和纤维素过美国筛号45目筛并充分混合。将含聚乙烯吡咯烷酮的水溶液与制得的粉末一起混合，然后混合物过美国筛号14目筛。这样制成的颗粒于50℃干燥，并过美国筛号18目筛。将羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石预先过美国筛号60目筛，然后将其加到颗粒中，混合后将其在压片机上压片，得到每片重150mg的片剂。
配方5每粒含80mg有效成分的胶囊剂按以下方法制备有效成分 80mg淀粉 59mg微晶纤维素 59mg硬脂酸镁 2mg总量 200mg将有效成分、纤维素、淀粉和硬脂酸镁混合并过美国筛号45目筛，装入200mg容量的硬明胶胶囊中。
配方6每粒含225mg有效成分的栓剂按以下方法制备有效成分 225mg饱和脂肪酸甘油酯 2，000mg总量 2，225mg有效成分过美国筛号60目筛，将其悬浮在预先用必需的最低热量熔化的饱和脂肪酸甘油酯中。然后将混合物倒入标量为2g容量的栓剂模中，并使其冷却。
配方7每5ml剂量含50mg有效成分的混悬剂按以下方法制备有效成分 50mg羧甲基纤维素钠 50mg糖浆 1.25ml苯甲酸溶液 0.10ml食用香料 适量色素 适量纯水加至总量为 5ml将有效成分过美国筛号45目筛，并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合，形成调匀的糊状物。在搅拌下用部分水稀释苯甲酸溶液、食用香料和色素，并将其加到上述糊状物中。然后加入足量的水至所需要的体积。
配方8静脉内注射的制剂可按以下方法制备。
有效成分 100mg藻酸钠 500mg等渗盐水 1，000ml通常将上述成分的溶液以1ml/分钟的速度给患者静脉内注射。
用以下实验来说明本发明化合物抑制5-脂氧合酶的能力。
致敏方法给雄性Hartley豚鼠(200～250g)注射3次卵白蛋白(OA，10mg/kg)，使其主动致敏。OA给予方法第1天和第3天各腹膜内注射1针，第5天皮下注射1针。21～25天后作体外实验。
体外实验方法实验当天，给(致敏)豚鼠吸入CO2，使其窒息死亡。取出气管，剔除周围结缔组织，并切成螺旋状条，并进一步将每个螺旋状条对半切开，供成对实验用。将组织置于37℃恒温的具套管的体积为10ml的组织浴槽中，并用棉线将其与Grass力位移转换器(FT03C型)连接。在Grass多种波动描记器(Model 7D)上显示等长张力的变化。气管条在改良的Kreb′s液中进行温育。改良的Kreb′s液的组成(毫摩尔)如下NaCl，118.2;KCl，4.6;CaCl2·2H2O，2.5;MgSO4·7H2O，1.2;NaHCO3，24.8;KH2PO4，1.0;葡萄糖，10.0。该缓冲液中含5μM消炎痛，其作用是通过去除环氧合酶产物的影响，增强半胱氨酰白三烯(LT)的收缩作用。各组织浴槽通入95%O2∶5%CO2。将气管条置于2g的静止张力下，并在进行实验前，给其60分钟的最小稳定期。在稳定期期间，每隔15分钟更换一次浴槽液。
浓度-反应曲线通过在先前的浓度仍然与组织接触时，按半对数增量，增大器官浴槽中激动剂的浓度，获得气管条的累积浓度-反应曲线(Van Rossum，Arch.Int.Pharmacodyn.Ther.，143，299～330(1963)。在前面的浓度引发的收缩达到平稳时期后，增加激动剂浓度。从每个组织获得一条浓度-反应曲线。为了将组织之间的波动减到最小，收缩反应是以在浓度-反应曲线结束时加到浴槽中的10μM氯化氨甲酰胆碱后所获得的最大反应的百分比表示。在60分钟稳定期后，先用10μM氯化氨甲酰胆碱激发组织，以保证组织活着。在记录氯化氨甲酰胆碱初次激发的最大收缩反应后，冲洗组织，并在实验方案开始实施前，重新平衡60分钟。EC50和抑制百分率的测定为了评价新的5-脂氧合酶抑制剂在Schultz-Dale反应中的作用，在开始制作浓度-反应曲线前，将各个化合物与组织一起温育30分钟。载体(DMSO)给配对的对照组织。此时向所有浴槽中加入10μM新安替根，以阻断释放的组织胺的作用。在药物存在和不存在的条件下，记录抗原浓度为30ng/ml时所得到的反应，并计算出每对组织的抑制百分比。用线性回归求出IC50值。
LT或氯化氨甲酰胆碱浓度-反应曲线用于测定该药物作为5-脂氧合酶抑制剂的特异性。在上述实验中，试验化合物按上述方法温育。用线性回归法求出EC50值，它表示引发50%最大反应所需要的激动剂的摩尔浓度。用“学生”t检验分析试验化合物存在和不存在时EC50值的差别，以P＜0.05视为差别显著。
体内研究试验前2天腹膜内注射0.3ml抗OA抗血清，使雄性Hartley豚鼠(350～500g)被动致敏。超免疫血清制备方法如下给主动致敏的雄性豚鼠在第1天和第5天各腹膜内注射1次含2mgOA的50%福氏完全佐剂。第21天，动物放血，收集血清，于-20℃贮存。试验当天，将被动致敏的豚鼠用剂量为35～40mg/kg的戊巴比妥钠腹膜内注射麻醉，用Tygon小口径管(o.d.＝03)作右侧颈静脉插管，并与针筒相连，用于注入选择的药物。用与置于左侧颈动脉的Tygon插管相连的Statham压力传感器测量血压。作气管插管术，用Harvard啮齿动物呼吸器给每只动物吸入室内空气，一次呼吸进出肺部的空气体积设定为1ml/100g体重，呼吸频率为60次/分钟。静注琥珀酰胆碱(5mg/kg)以抑制自发呼吸。用与气管插管上的T形管相连的Statham压力传感器测定作为总肺阻力指标的气管内压力。压力传感器的输出信号在Grass多种波动描记器上显示出来。采用Deltaphase等温器，使动物体温维持在正常范围内。在作手术前，用管饲法给每只豚鼠灌入试验化合物或载体(PEG 400)。接着在选定的时间进行OA激发。OA激发前5分钟，给动物静脉注射新安替根(5mg/kg)、心得安(1mg/kg)和消炎痛(10mg/kg)。OA引起的气管压力的增加以采用止血器夹住气管所得到的最大压力的百分比表示。为了测定各个药物的作用，从每个试验浓度下载体和药物处理的动物计算出%抑制率。
表Ⅰ抑制5-脂氧合酶的作用体外IC50在30mg/kg，PO，实施例号 uM 2小时条件下体内抑制%1 0.05 972 0.10 963 0.19 43a4 0.23 525 0.14 956 0.13 817 0.09 77a8 0.13 46注a＝剂量为10mg/kg应该理解，本说明书和实施例是为了进行说明，而不是限制本发明。可以对本发明进行变动和改进，但不脱离后附的权利要求书中所定义的本发明的精神和范围。
权利要求
1.制备下式的N-羟基-N-[3-[2-(卤代苯硫基)苯基]丙-2-烯基]脲的方法，
式中R1为氢或卤素；X为氟或氯，该方法包括，使N-肉桂基-N-羟胺与三甲基甲硅烷基异氰酸酯在醚性溶剂中反应，得到所需的式Ⅰ化合物。
2.根据权利要求1的方法，其中所制备的化合物选自下述化合物及其可药用的盐N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-5-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-4-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)-3-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲;N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲。
3.根据权利要求1的方法，其中制备的是N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氟苯硫基)-6-氟苯基〕丙-2-烯基〕脲。
4.根据权利要求1的方法，其中制备的是N-羟基-N-〔3-〔2-(4-氯苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲。
5.制备药物组合物的方法，其中包括将式Ⅰ的N-羟基-N-〔3-〔2-(卤代苯硫基)苯基〕丙-2-烯基〕脲或其药学上适用的盐与其一种或多种药学上适用的载体、稀释剂或赋形剂混合，
式中R1为氢或卤素，X为氟或氯。
全文摘要
本发明是关于N-羟基-N-[3-[2-(4-卤代苯硫基)苯基]丙-2-烯基]脲类化合物、含有上述化合物的组合物以及应用上述化合物作为5-脂氧合酶抑制剂的方法。
文档编号A61P37/08GK1066062SQ9210289
公开日1992年11月11日 申请日期1992年4月22日 优先权日1991年4月23日
发明者G·A·海特, E·D·米海利希, D·W·施奈德, T·苏亚雷斯 申请人:伊莱利利公司