专利名称：乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种磷脂复合物及其制备方法，特别涉及一种去甲斑蝥素衍生物的磷 脂复合物及其制备方法，属医药制备技术领域。
背景技术：
去甲斑蝥素为斑蝥素的合成衍生物，是由我国首先开发的治疗肝癌的新药，主要 用于原发性肝癌的治疗。文献“去甲斑蝥素的药学研究与临床应用进展”(吴建梅等，中国 药学杂志，2002，37 (8) :566 一 569)研究表明，由于临床应用时去甲斑蝥素的泌尿系统毒性 较大，其临床最大用药剂量有严格限制。文献“肝靶向去甲斑蝥素修饰物的合成及其纳米粒 的制备”(胡展红等，中国药学杂志，2009，44 (9) 679-684)和文献“乳糖化-去甲斑蝥素纳 米粒的肝靶向抗癌活性研究”(胡展红等，中草药，2010,41(12))中，公开了一种利用乙二 胺为连接臂，将去甲斑蝥素与乳糖酸偶联，合成新的化合物乳糖化-去甲斑蝥素，其在体内 被肝细胞的去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor, ASGP-R)特异性识别，从 而提高药物肝靶向性，降低药物的肾毒性。但是，将乳糖化-去甲斑蝥素与磷脂制备成复合 物，目前国内外未见报道。

发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种能有效改善乳糖化-去甲斑蝥素脂溶性的 乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物，且提供一种制备该复合物工艺简单，生产成本低，产率高 的的方法。为达到上述目的，本发明采用的技术方案是提供一种乳糖化-去甲斑蝥素磷 脂复合物，乳糖化-去甲斑蝥素与磷脂的质量比为1:1 1:5 ；所述磷脂的平均分子量为 700 800。其中，所述磷脂包括大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂或合成磷脂；磷脂优选平均分子量 为750的大豆卵磷脂。所述乳糖化-去甲斑蝥素与磷脂的质量比优选为1:1.5。所述乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物的制备方法，包括如下步骤
(1)将磷脂溶于适量溶剂A中，搅拌溶解；所述溶剂A包括氯仿、二氯甲烷、甲醇、四氢 呋喃及其含有上述溶剂的各种比例的混合溶剂；
(2)称取与磷脂的质量比为1 1 1 5的乳糖化-去甲斑蝥素，加入适量溶剂B中，超 声分散；所述溶剂包括甲醇、乙醇及其含有上述溶剂的各种比例的混合溶剂；溶剂B的用量 为乳糖化-去甲斑蝥素的反应浓度为5 100mg/ml ；
(3)将乳糖化-去甲斑蝥素混悬液加至磷脂溶液中，在温度为25 35°C的条件下搅
拌；
(4)将所得溶液过滤，滤液旋蒸除去溶剂，真空干燥，得到黄色粉末状乳糖化-去甲斑 蝥素磷脂复合物。
其中，所述溶剂A与溶剂B的用量体积比为1:1 1:5。本发明的原理是由于乳糖化-去甲斑蝥素的高水溶性和低渗透性，导致其口服 生物利用度低，使其临床使用具有局限性，为改善高水溶性药物的脂溶性，将药物与磷脂按 一定配比在非质子传递体系溶剂中结合而形成复合物，通过制备药物磷脂复合物，其理化 性质和生物学特性将发生很大改变，可改善药物的脂溶性进而提高其在体内的吸收。具体 地说，其依据是(1)乳糖化-去甲斑蝥素抗癌作用的发挥在于其结构中氧桥结构的完整， 并且其末端的半乳糖残基可被肝脏表明的去唾液酸糖蛋白受体专一性识别，达到肝脏的主 动靶向治疗作用。(2)乳糖化-去甲斑蝥素结构中有大量羟基存在，磷脂可与其发生氢键缔 和，反应容易进行，产率高，终产物保留了乳糖化-去甲斑蝥素的药效基团。(3)利用药物极 性基团与磷脂缔和，使药物极性基团受到屏蔽，达到提高乳糖化-去甲斑蝥素脂溶性的目 的。本发明所得复合物在HPLC上显示与乳糖化-去甲斑蝥素相同的保留时间，说明形 成的是复合物，而不是新的化合物，但该复合物与乳糖化-去甲斑蝥素和磷脂的物理混合 物在红外光谱(IR)、差热分析(DSC)及核磁共振分析(1H-NMR)中存在明显差别顶中乳糖 化-去甲斑蝥素在3359. 98957CHT1处的酚-OH宽峰带已与磷脂的-OH吸收峰重合，而磷脂 在1732. 07269cm"1处的-C=O吸收峰也向低波数移动至1695. 42528CHT1，提示在形成磷脂复 合物的过程中，磷脂的-C=O与乳糖化-去甲斑蝥素-OH形成了一定强度的缔和。磷脂复合 物与物理混合物-C=O吸收峰位置的差异，即1695. 42538CHT1和1737. 85913cm"1,以及指纹 区内磷脂复合物与物理混合物的差别，都可以说明制备的磷脂复合物并不是两种物质的简 单物理混合，其形成过程中有化学键缔和；DSC中混合物在157°C 173°C之间表现出磷脂 的热力学特性，但在189°C有较强烈的吸收峰，考虑为药物吸热峰。与药物及磷脂相比，磷脂 复合物的DSC图谱发生了明显改变，药物的吸热峰消失，在119°C 182°C之间出现了多个 明显的吸热峰，提示形成磷脂复合物后，药物和磷脂的热力学性质已被明显改变；1H-NMR中 显示，乳糖化-去甲斑蝥素糖基上的各氢向高场发生了部分位移，推测是糖基上的羟基与 磷脂中的氢键供体结合，形成的磷脂复合物中各共轭基团使得电子云密度发生了改变。以 上四种图谱说明了所制备的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物不是新生成的化合物，但也不 同于其二者的简单物理混合物，而是以一种复合物的形式存在。由于上述技术方案的运用，本发明技术方案的优点在于
(1)制备乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物后，能够有效提高药物的脂溶性，从而改善口 服给药后其在体内的吸收，提高生物利用度。(2)所用原料成本低，反应易于进行，产率高，容易实现工业化大生产；在制备过程 中的有毒物质二氯甲烷及甲醇都可通过旋蒸除尽；反应复合物率达到97. 2%，终产物不需 要进一步纯化。因此，生产成本低，制备工艺简单，终产物产率高，纯度高，容易实现工业化 大生产。


图1是本发明实施例提供的乳糖化-去甲斑蝥素与混合物的HPLC分析结果比较； 图2是本发明实施例提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物与混合物的顶分析结果
比较；图3是本发明提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物与混合物的DSC分析结果比较； 图4是本发明提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物与混合物的UV分析结果比较。
具体实施例方式下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述。实施例一
称取大豆磷脂0. 075g溶于IOmL 二氯甲烷中，搅拌溶解；称取乳糖化_去甲斑蝥素 0. 05g，加入IOmL甲醇中，超声分散后，加入到大豆磷脂溶液中，35°C水浴搅拌2小时，过 滤，滤液蒸去溶剂，真空干燥48小时，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物0. 122g(产率 97. 2%)。采用流动相条件为乙腈pH3. 2磷酸水=10:90对乳糖化-去甲斑蝥素，磷脂，乳糖 化-去甲斑蝥素磷脂复合物及物理混合物进行HPLC分析，其结果参见附图1，图中，a为乳 糖化-去甲斑蝥素，b为磷脂，c为复合物，d为物理混合物；由图1的结果表明，乳糖化-去 甲斑蝥素及其磷脂复合物在此条件下的色谱行为一致，保留时间为5. 188min,这说明乳糖 化-去甲斑蝥素与磷脂形成的是一种复合物，而不是新的化合物。对乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物及混合物进行红 外扫描，其结果参见附图2。图中，a为乳糖化-去甲斑蝥素，b为磷脂，c为复合物，d为 物理混合物；图a显示了的乳糖化-去甲斑蝥素的特征吸收峰1. -0H, 3359. 98957^1 ； 2. -C=O, 1694. 31676cm-1 ；图 b 显示 了磷脂的特征吸收峰1. -0H, 3423. 64035cm-1; 2. -CH2, 2926. 00699cm-1 ； 3. -C=O, 1732. 07269cm-1 ；4. -P=O, 1234. 43934cm-1 ；图 c 中乳糖 化-去甲斑蝥素在3359. 98957CHT1处的酚-OH宽峰带已与磷脂的-OH吸收峰重合，而磷脂 在1732. 07269cm"1处的-C=O吸收峰也向低波数移动至1695. 42528CHT1，提示在形成磷脂复 合物的过程中，磷脂的-C=O与乳糖化-去甲斑蝥素-OH形成了一定强度的缔和。磷脂复合 物与物理混合物-C=O吸收峰位置的差异，即1695. 42538CHT1和1737. 85913cm"1,以及指纹 区内磷脂复合物与物理混合物的差别，都可以说明制备的磷脂复合物并不是两种物质的简 单物理混合，其形成过程中有化学键缔和。对乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物及混合物进行差 示热分析，其结果参见附图3。图中，a为乳糖化-去甲斑蝥素，b为磷脂，c为复合物，d为 物理混合物；图3结果表明，乳糖化-去甲斑蝥素在190°C左右有一强烈的吸热峰，表明药 物熔点为190°C。磷脂为一混合物，无明显的熔点，在127°C 212°C内都有不明的吸热峰 出现。物理混合物在157°C 173°C之间表现出磷脂的热力学特性，但在189°C有较强烈的 吸收峰，考虑为药物吸热峰。与药物及磷脂相比，磷脂复合物的DSC图谱发生了明显改变， 药物的吸热峰消失，在119°C 182°C之间出现了多个明显的吸热峰，提示形成磷脂复合物 后，药物和大豆磷脂的热力学性质已被明显改变，磷脂复合物不是两种物质的简单混合物。对乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂及乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物进行核磁 共振分析，其结果参见附图4。图中，a为乳糖化-去甲斑蝥素，b为磷脂，c为复合 物，图4结果表明，乳糖化-去甲斑蝥素1H-NMR (400MHz，氘代DMSO)，δ (ppm) :1.619 (4H, s, 1-H) ； 2. 982 (2H, q, J=7. 2, 3-H) ； 3.146 (1H, t, J=6. 8, 5-H) ； 3. 236 (1H, t, J=6. 4，5-H) ； 3. 321 (4H, m, 12—H, 15—H, 10-2H) ； 3. 399 (2H, t, J=4. 4，4_H) ； 3. 491 (2H, t, J=5. 6，16-H) ； 3. 579 (2H, m, 13-H, 14-H) ； 3. 672 (2H, m, 8_H, 9-H) ； 3. 961 (1H, s, 7-H) ； 4. 055 (1H, d, J=4. 4，6-H) ； 4. 255 (1H, d, J=6. 4，11-H) ； 4. 663 (2H, s, 2—H)；磷脂复合物 1H-NMR (400MHz, 氘代 DMS0)，δ (ppm) 1.629 (4H, s, 1-H) ； 2. 99 (2H, q, J=7. 2, 3-H) ； 3. 425 (4H, m, 12-H, 15-H, 10-2H) ； 3. 505 (2H, t, J=4. 4，4_H) ； 3. 518 (2H, t, J=5. 6，16-H) ； 3. 613 (2H, m ，13-H, 14-H) ； 3. 685 (2H, m, 8_H, 9-H) ； 0. 853 (4H, s, 6-H, 4_H)。实施例二
称取大豆磷脂0. 05g溶于IOmL 二氯甲烷中，搅拌溶解；称取乳糖化-去甲斑蝥素 0. 05g，加入IOmL甲醇中，超声分散，加至大豆磷脂溶液中，25°C水浴搅拌1小时，过滤，滤液 蒸去溶剂，真空干燥48小时，得Lac-NCTD磷脂复合物0. 093g (产率93. 4%)。实施例三
称取大豆磷脂1. Og溶于IOmL 二氯甲烷中，搅拌溶解；称取乳糖化-去甲斑蝥素0. 5g， 加入IOmL甲醇中，超声分散，加至大豆磷脂溶液中，30°C水浴搅拌1. 5小时，过滤，滤液蒸 去溶剂，真空干燥48小时，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物1. 42g (产率94. 7%)。实施例四
称取大豆磷脂50. Og溶于IOOmL 二氯甲烷中，搅拌溶解；称取乳糖化_去甲斑蝥素 10. 0g，加入IOOmL甲醇中，超声分散，加至大豆磷脂溶液中，35°C水浴搅拌2小时，过滤，滤 液蒸去溶剂，真空干燥48小时，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物57. 84g (产率96. 4%)。
权利要求
1.一种乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物，其特征在于乳糖化-去甲斑蝥素与磷脂的 质量比为1:1 1:5 ；所述磷脂的平均分子量为700 800。
2.根据权利要求1所述的一种乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物，其特征在于磷脂包 括大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂或合成磷脂；磷脂优选平均分子量为750的大豆卵磷脂。
3.根据权利要求1所述的一种乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物，其特征在于乳糖 化-去甲斑蝥素与磷脂的质量比优选为1:1.5。
4.一种制备如权利要求1所述的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物的方法，其特征在于 包括如下步骤(1)将磷脂溶于适量溶剂A中，搅拌溶解；所述溶剂A包括氯仿、二氯甲烷、甲醇、四氢 呋喃及其含有上述溶剂的各种比例的混合溶剂；(2)称取与磷脂的质量比为1:1 1:5的乳糖化-去甲斑蝥素，加入适量溶剂B中，超 声分散；所述溶剂包括甲醇、乙醇及其含有上述溶剂的各种比例的混合溶剂；溶剂B的用量 为乳糖化-去甲斑蝥素的反应浓度为5 100mg/ml ；(3)将乳糖化-去甲斑蝥素混悬液加至磷脂溶液中，在温度为25 35°C的条件下搅拌；(4)将所得溶液过滤，滤液旋蒸除去溶剂，真空干燥，得到黄色粉末状乳糖化-去甲斑 蝥素磷脂复合物。
5.根据权利要求4所述的一种制备乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物的方法，其特征在 于溶剂A与溶剂B的用量体积比为1 1 1 5。
全文摘要
本发明公开了一种利用磷脂与乳糖化-去甲斑蝥素的大量-OH形成氢键缔和，得到乳糖化-去甲斑蝥素磷脂复合物，该新复合物在保留乳糖化-去甲斑蝥素原抗癌活性的同时，显著改善其脂溶性，因此能改善其在体内的吸收，提高生物利用度。它是利用氢键将乳糖化-去甲斑蝥素和磷脂连接起来得到的新化合物，具有较好的脂溶性。其制备方法简单，产率高，具有保持原有抗肿瘤作用的基础上，提高药物体内吸收，提高治疗肝癌的疗效的作用。
文档编号A61P35/00GK102068702SQ20101061892
公开日2011年5月25日 申请日期2010年12月31日 优先权日2010年12月31日
发明者周奕, 张学农 申请人:苏州大学