专利名称：一种从含羞草中提取总黄酮的方法
技术领域：
本发明属于黄酮提取方法技术领域，具体为一种从含羞草中提取总黄酮的方法。
背景技术：
含羞草为豆科(Fabaceae)含羞草属(Mimosaceae)植物含羞草(Mimosa pudica) 的全草，为亚灌木状草本植物，又名知羞草、怕羞草、喝乎草、望江南、怕丑草，剌 含羞草等。含羞草原产于热带美洲，1645年由荷兰人引入台湾，主要分布在我国华 东、华南、西南等地的山坡丛林、路旁、湿地，今作为观赏植物广为栽培。《全国中
草药汇编》载含羞草"甘、濯、凉，具有清热利尿、化痰止咳、安神lM的作用。 《广西本草选编》记载"味甘微濯，性凉，有小毒。有安神镇静，凉血止血功效。
临床多用于急性肝炎，神经衰弱，失眠，肺结核咳血，血尿，小儿疳积，结膜炎，跌 打损伤，带状疱疹等症。近年来有关于它治疗糖尿病疗效较好的报道。
含羞草中的主要化学成分为黄酮苷、酚类、氨基酸、有机酸、植物甾醇类等成分， 在含羞草较多的活性成分中，尤以黄酮苷类的含量较高且活性突出。现已从含羞草中 分离得到的黄酮类化合物包括有荭草苷、异荭草苷、5，7,3' ，4'-四羟蒼6~C-[P-D-斧糖- (1—4) ]-P-D-葡糖黄酮碳苷、5,7，3' ，4' -四羟基-8-C-D-芹糖-(1—4) ]-e-D-葡糖黄酮碳苷、5，7，4，-三羟基-6-C-[。-L-鼠李糖(1—2)] -》-D-葡糖黄酮碳苷、7,8,3， ，4，-四羟基-6"C-[a-L-鼠李糖-(1—2)]-D-葡 糖黄酮CT、7，8,3， ，4，-四羟基-8-C-[a-L-鼠李||~(1—2)]-3-D"葡糖黄酮碳苷 等，其中所含的荭草苷、异荮草苷等黄酮苷类成分结构较稳定，不宜被 破坏，具 有抗氧化、降血压、增加冠脉流量、降血脂、抗菌消炎等方面的活性。目前，尚未见 到从含羞草中提取纯化总黄酮类化合物的报道。近年来从中草药中提取黄酮类化合物的方法多采用超声提取法、回流提取法及冷浸提取法，采用这些方法存在溶齐鹏量大、 提取时间长、操作麻烦、工作效率较低等缺点，且分离纯化黄酮类成分多采用反复硅 胶柱色谱，操作步骤多，有机溶剂用量大，尤其是常要用到氯仿、甲醇等有害^U, 对环境造成污染，生产成本高。

发明内容
针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种快速从含羞草 中提取总黄酮的方法的技术方案，该方法工艺简单，生产成本低，总黄酮的转移率高。 所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤
1) 将含羞草全草晾干后粉碎成粗粉，过筛；
2) 将含羞草粗粉m渗漉筒中，用含水乙醇浸泡后，以含水乙醇进行渗漉，收 集渗漉液；
3) 渗漉液真空M，回收乙醇，得到 液；
4) 脱色处理步骤3)得到的繊液用活性織声脱色，抽滤，除去活性碳，
5) 步骤4)得到的滤液真空浓缩，得到滤液浓缩液；
6) 大孔树脂纯化将步骤5)得到的滤液浓縮液通过大孔吸附树脂分离富集， 然后先用H20洗脱，再依次用10 70%含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70%丙酮洗脱， 分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并10 70%含水乙醇各部位的洗脱液，将合 并的洗脱液舰鄉，得到洗脱繊夜；
7) 二次大 L树脂纯化将步骤6)中得到的洗脱l缩液通过大孔吸附树脂柱分 离富集，然后先用H20洗脱，再依次用10 70%含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70% 丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并20 60%含水乙醇各部位的洗 脱液，将合并的洗脱液Mil^t缩、再进一步真空浓缩干燥，即得含羞草总黄酮提取物 干粉。
5戶，的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤l)中含羞草全草挑
选后打成粗粉，过20 40目筛。
所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤2)中将含羞草粗粉 m渗漉筒中，用50 80%的含水乙醇浸泡12 14小时后，用含羞草粗粉8 16倍 量的50 80%含水乙醇进行渗漉提取，流速为4 6 mL/min，收集渗漉液。
阮述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤3)中渗漉液在水浴 温度5(TC以下真空自，回收乙醇，得到 液。
所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤4)中将、 液用粉 末状活性炭在50。C以下超声脱色30-60分钟，活性炭的用量为含羞草粗粉用量的2-5 %，脱色1 2次，抽滤，除去活性炭，滤液备用。
戶皿的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤5)中将滤液在50 °。以下真空 ，得到滤液^L缩液。
戶，的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)、步骤7)中选用 20 60%含水乙醇进行梯度洗脱。
戶，的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)、步骤7)中所述 的 为5(TC以下真空MI。
所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)中将洗脱WI液 真空亂缩千燥，得到干粉，将干粉加7jC溶解后进入下步工艺。
大孔吸附树脂是近代发展起来的一类有机高聚物吸附剂，广泛应用于中草 药成分的提取分离。中国医学科学院药物研究所试用大孔吸附树脂对糖类、生 物碱、黄酮等进行吸附，并在此基础上用于天麻、赤勺、灵芝和照山白等中草 药的提取分离，结果表明大孔吸附树脂是分离中草药水溶性成分的一种有效方 法，除无机矿物质外，其它中药有效部位均可不同程度的被树脂吸附纯化。
上述一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其工艺简单、操作方便、设，资少、
6M^、了溶剂用量，无环境污染，生产成本低。采用紫外法测定所得到的总黄酮提取物
干粉，提取物中总黄酮的含量为42.60%左右，其中荭草苷含Ki8.84X左右，总黄 酮的转移率达76.56%左右，总黄酮的转移率高。
本申请文件中涉及的百M量除另有说明外，液体的百M量为体积比，固体的 百M量为重量比。
具体实施例方式
现结合具体实施例，对本发明作进一步说明，具体工艺步骤如下所述
1)原料处理将含羞草全草杉随后打成粗粉，过20-40目筛；2)提取将含羞
草粗粉m渗漉筒中，用50%含水乙醇浸泡14小时后，用含羞草粗粉16倍量的50 %含水乙醇进行渗漉提取，流速为5mL/min，收集渗漉液；3) Mffi浓縮提取液在 7jC浴鹏5CTC以下真空、Mg，回收乙醇，得到含2 mL 鄉、W每g含羞草粗粉；4) 脱色处理将步骤3)得到的浓缩液用粉末状活性炭在5(TC以下超声脱色30射中， 话性炭的用量为含羞草粗粉用量的2%，脱色l次，抽滤，除去活性碳，滤液备用； 5) MS浓縮将步骤4)得到的滤液继续在5(TC以下真空浓缩到含lniL滤液WI液 /每g含羞草粗粉；6)大孔树脂纯化将步骤5)得到的滤液 液通过DiaionHP-20 大孔吸附树脂分离富集，然后先用H20洗脱，再依次用10%含水乙醇、20%含水乙醇、 40%含水乙醇、60%含水乙醇、70°/。含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70%丙酮洗脱，分别 收集3倍柱^l只的各部位洗脱液，合并10-70%含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的 洗脱液在5(TC以下真空浓缩，得到洗脱浓缩液；7) 二次大 L树脂纯化将步骤6) 中得到的洗脱浓縮液通过Diaion HP-20大孔吸附树脂柱分离富集，然后先用H20洗 脱，再依次用10%含水乙醇、20%含水乙醇、40%含水乙醇、60%含水乙醇、70%含水乙 醇进行梯度洗脱，最后用70%丙酮洗服分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并 20-60%含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液在50"以下真空 、千燥，即 得含羞草总黄酮提取物干粉。上述步骤6)中用H20洗脱除掉水溶性杂质，步骤7)
7中用H20和10%含水乙醇洗脱除掉7夂溶性杂质;最后都用70%丙酮洗脱除掉全部杂质， 再生大孔吸附树脂。步骤6)中还可以将洗脱浓縮液真空浓缩^B喿，得到干粉，将干 粉加水溶解后进入下步工艺。
申请人在步骤2)中采用60%含水乙醇、70%含水乙醇或80%含水乙醇浸泡后渗漉， 含羞草粗粉浸泡时间为12小时，提取用含水乙醇用量为含羞草粗粉的8倍、10倍、 12倍或14倍量，流速为4 mL/min或6 mL/min;在步骤4)中活性炭的用量为含羞 草粗粉用量的3%或4%，超声脱色时间为40辦中、50分钟或60 6H中，脱色2次， 每次脱色处理均加入同样量的活性炭；在步骤6)中采用15%含水乙醇、30%含水乙醇、 50%含水乙醇、60%含水乙醇进行梯度洗脱，合并15-60%含水乙醇各部位；或者采用 20%含水乙醇、35%含水乙醇、45%含水乙醇、65°/。含水乙醇进行梯度洗脱，合并20-65% 含水乙醇各部位；在步骤7)中分别采用15%含水乙醇、25%含水乙醇、45%含水乙醇、 60%含水乙醇进行梯度洗脱，合并25-60%含水乙醇各部位；或者采用20%含水乙醇、 30%含水乙醇、40%含水乙醇、50%含水乙醇、60%含水乙醇进行梯度洗脱，合并30-60% 含水乙醇各部位；其它方法和上述具体工艺步骤相同，也基本旨继到本发明所述的技 术效果。
上述步骤2)中用含羞^1i粉8 16倍量的意思是若含羞草粗粉为lkg，则溶剂 用量为8 16升。步骤3)中得到含2 mL浓縮、^/每g含羞草粗粉的意思是浓縮液 的浓缩程度由含羞草粗粉重量来决定，若含羞草粗粉为lg，则、 液体积为2毫升。 步骤5)中含1 mL搶液鄉M/每g含羞草粗粉的意思是滤液鄉液的、鹏禾號由 含羞草粗粉重量来决定，若含羞草粗粉为lg，则滤液 it缩液的的体积为1毫升。
本发明所述的从含羞草中提取总黄酮的方法，工艺简单、操作方便、设 资少、 M^了翻,量，无环境污染，生产成本低。采用紫外法测定所得到的总黄酮提取物 干粉，提取物中总黄酮的含量为42.60%左右，其中荭草苷含敏8.84%左右，总黄 酮的转移率达76.56%左右，总黄酮的转移率高。
权利要求
1、一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤1)将含羞草全草晾干后粉碎成粗粉，过筛；2)将含羞草粗粉装入渗漉筒中，用含水乙醇浸泡后，以含水乙醇进行渗漉，收集渗漉液；3)减压浓缩渗漉液真空浓缩，回收乙醇，得到浓缩液；4)脱色处理步骤3)得到的浓缩液用活性炭超声脱色，抽滤，除去活性碳，滤液备用；5)减压浓缩步骤4)得到的滤液真空浓缩，得到滤液浓缩液；6)大孔树脂纯化将步骤5)得到的滤液浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，然后先用H2O洗脱，再依次用10～70％含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70％丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并10～70％含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液减压浓缩，得到洗脱浓缩液；7)二次大孔树脂纯化将步骤6)中得到的洗脱浓缩液通过大孔吸附树脂柱分离富集，然后先用H2O洗脱，再依次用10～70％含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70％丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并20～60％含水乙醇各部位的洗脱液，将合并的洗脱液减压浓缩、再进一步真空浓缩干燥，即得含羞草总黄酮提取物干粉。
2、 如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤l) 中含羞草全草挑选后打成粗粉，过20 40目筛。
3、 如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤2) 中将含羞草粗粉装入渗漉筒中，用50 80%的含水乙醇浸泡12 14小时后，用含羞 草粗粉8 16倍量的50 80%含水乙醇进行渗漉提取，^il为4 6 mL/min，收集渗 漉液。
4、 如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤3)中渗漉液在水浴温度5(TC以下真空浓縮，回收乙醇，得到浓縮液。
5、 如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤4)中将^it缩液用粉末状活性炭在5(TC以下超声脱色30-60射中，活性炭的用量为含羞草粗粉用量的2-5%，脱色1 2次，抽滤，除去活性炭，滤液备用。
6、 如权禾腰求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤5)中将滤液在50°C以下真空 ，得到滤液,縮液。
7、 如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)、步骤7)中选用20 60%含水乙醇进行梯度洗脱。
8、 如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)、步骤7)中呢悉的MiSM为5(rc以下真空^1。
9、 如权利要求1所述的一种从含羞草中提取总黄酮的方法，其特征在于步骤6)中将洗脱,液真空^L缩^B喿，得到干粉，将干粉加水溶解后进入下步工艺。
全文摘要
一种从含羞草中提取总黄酮的方法，属于黄酮提取方法技术领域。包括以下步骤含羞草粉碎成粗粉，过筛；将含羞草粗粉用含水乙醇浸泡后，以含水乙醇进行渗漉；渗漉液减压浓缩得到浓缩液；浓缩液用活性炭超声脱色，滤液备用；滤液减压浓缩得滤液浓缩液；大孔树脂纯化滤液浓缩液通过大孔吸附树脂分离富集，用H₂O和10～70％含水乙醇进行梯度洗脱，合并10～70％含水乙醇各部位的洗脱液减压浓缩；洗脱浓缩液二次大孔树脂纯化，合并20～60％含水乙醇各部位的洗脱液减压浓缩、再进一步真空浓缩干燥，得含羞草总黄酮提取物干粉。采用上述方法得到的提取物中总黄酮含量为42.60％左右，总黄酮转移率达76.56％左右。
文档编号A61K36/48GK101474240SQ20091009573
公开日2009年7月8日 申请日期2009年1月22日 优先权日2009年1月22日
发明者珂 袁 申请人:浙江林学院