专利名称：新型的抗菌素化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类新型的抗菌素化合物，以及它们在治疗人和其它动物的各种微生物感染和疾病中的用途。
昆虫和陆生无脊椎动物面临着许多机会受微生物病原体感染的危险，这类病原体是一类成功的生物种群，它们已经在地球上存在数亿年，今天已有数百万个种类，远远多于其它微生物种群的数量。因此，昆虫和其它陆生无脊椎动物必须具备有效的避免或克服受潜在感染的方法。
昆虫与哺乳动物和其它生物体一样具有基于血细胞对外来物质的非特异性吞噬作用的“先天”免疫系统，当受到常规的微生物诱导物(如脂多糖和(1，3)-β-D-葡聚糖)攻击时便产生出一系列的抗微生物肽，如防卫素、杀菌肽和attacin。但是，至今没有证据表明昆虫或任何其它无脊椎动物中存在一般在哺乳动物中用于对感染作出响应的B-淋巴细胞/T-淋巴细胞类型的无性、可诱导免疫系统。因此，昆虫可能具有其它未被发现的防疫系统以保护它们不受微生物的侵犯。
先前还没有证据表明昆虫合成出非肽类抗菌素。20世纪50年代通过对102种北美节肢动物进行研究(DeCoursey，Webster等人，1953)，结果仅发现两种活性萃取物，并且还推测是因为存在醌(不具有抗菌素的活性化合物)才具有活性。最近从朝鲜锯蜂中分离出抗菌化合物对羟基肉桂醛(Leem，Jeong等人，1999)，但是没有关于这种化合物的哺乳动物毒性的数据。
在1997年至1999年间，本申请人从澳大利亚的东海岸收集了大量的陆生无脊椎动物，并对它们中大多数进行萃取，对萃取物筛选出具有生物活性的种类。来自澳大利亚白蚁的一种具体萃取物Nasutitermes triodiae(等翅目白蚁科)(Froggatt)表现出具有对抗革兰氏阳性有机物枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的抗微生物活性。所述萃取物还表现出仅具有中等水平的对两种转化哺乳动物细胞(即SP2/O-Ag8(一种来自Balb/C鼠的非分泌小鼠骨髓瘤细胞)和NCI-H460(一种来自人的小细胞肺癌细胞系))的生长抑制活性。
已从N.triodiae的萃取物中纯化出四种具有同质性的化合物。它们为trinervitadiene的三醇(式(6))、所述三醇的单乙酸酯(式(8))、两种具有所述trinervitadiene的碳骨架的二醇(式(7)和(9))。另外，前述三醇的三乙酸酯(式(10))通过与乙酸酐的酯化反应来合成。对于这些化合物，除了二醇(9)外，其余均是以前未被报导过的结构。此外，所有的化合物具有可测量的抗微生物活性，这对于任何trinervitadiene来说是以前未报导过的性质。三醇(6)表现出具有中等良好的抵抗目标有机物的抗微生物效能。新的二醇(7)具有与所述三醇相似的抗微生物效能，而已知的二醇(9)具有2至4倍的效能。单乙酸酯和三乙酸酯尽管比所述二醇或三醇的效能差，但同样具有活性。在哺乳动物细胞培养物中的三醇(6)经测试表明对哺乳动物细胞中的受测有机物具有选择毒性。
因此这些trinervitadiene化合物可用作人或兽医抗菌素，或在工业或其它加工方法中作为抗菌剂。另外，由于此处提供的结果第一次说明trinervitadiene的碳骨架衍生物具有抗微生物性质，因此可合理地推导出该碳骨架的其它衍生物也同样具有相似的选择性抗微生物性质。
本发明公开由此，本发明第一方面提供了一种治疗患者的微生物感染或疾病的方法，所述方法包括给予所述患者有效量的下式的化合物，及其药学上/兽医学上可接受的盐 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且(i)取代基A1至A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基，或(ii)取代基对A1和A2、A1和A3、A2和A3、A2和A4、A3和A4、A3和A5、A4和A5、A4和A6、A5和A6、A6和A7、A7和A8、A7和A9、A8和A9、A8和A10、A9和A10、A9和A11、A10和A11、A11和A12、A1和A12、A2和A12中的任何一对或多对形成取代或非取代杂环基团，其中任何没有形成取代或非取代杂环的取代基，包括A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基；条件是C1和C2、C1和C15之间的键只有一个可为双键或环氧键，当C1和C2之间的键为双键或环氧键时，A7通过单键键合到C2上，当C1和C15之间的键为双键或环氧键时，A13通过单键键合到C15上，当C8和C9之间的键为双键或环氧键时，A1和A12分别通过单键键合到C9和C8上，并且当C11和C12之间的键为双键或环氧键时，A3和A3分别通过单键键合到C11和C12上。
除非另外声明，否则术语“低级”是指具有1至6个碳原子的基团。
适合的“低级烷基”和在术语“低级烷氧基”、“低级烷硫基”、“低级烷氨基”、“低级烷基磺酰基”、“低级烷基亚磺酰基”和“低级烷基磺酰氧基”中的低级烷基部分可为直链或支链基团，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。
适合的“低级烯烃”可为CH2、CHCH3、CHCH2、CHCHCH3等。同样，适合的″低级炔烃″可为CH、CCH3、CCH、CCCH3等。
适合的“低级烷氧基”可为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
适合的“低级羧基”可为羧甲基、羧乙基、羧丙基、羧异丙基、羧丁基、羧异丁基、羧叔丁基等。
适合的“低级醛基”可选自如甲醛、乙醛、丙醛、异丙醛、丁醛、异丁醛、叔丁醛等的醛基。
适合的“低级酮基”可选自甲酮基、乙酮基、丙酮基等。
适合的“低级酯基”可为甲酸酯基、乙酸酯基、丙酸酯基、异丙酸酯基、丁酸酯基、异丁酸酯基、叔丁酸酯基等。
适合的“低级酰氧基”可为乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基等。
适合的“低级醇基”可为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、异丁醇、叔丁醇等基团。
适合的“低级烷硫基”包括甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基等，以及低级烷硫基取代的低级烷基，如甲硫基甲基、甲硫基乙基、甲硫基丙基、甲硫基丁基、乙硫基甲基、乙硫基乙基、乙硫基丙基、乙硫基丁基等。
适合的“低级烷氨基”包括甲氨基、乙氨基、丙氨基、丁氨基等，以及单或二(低级烷基)氨基取代的低级烷基，如甲氨基甲基、甲氨基乙基、甲氨基丙基、甲氨基丁基、乙氨基甲基、乙氨基乙基、乙氨基丙基、乙氨基丁基、二甲氨基甲基、二甲氨基乙基、二甲氨基丙基、二甲氨基丁基、二乙氨基甲基、二乙氨基乙基、二乙氨基丙基、二乙氨基丁基等。
适合的“低级烷基磺酰基”可为甲基磺酰基、乙基磺酰基、丙基磺酰基、丁基磺酰基等。
适合的“低级烷基亚磺酰基”包括甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、丙基亚磺酰基、丁基亚磺酰基等。
适合的“低级烷基磺酰氧基”包括甲基磺酰氧基、乙基磺酰氧基、丙基磺酰氧基、丁基磺酰氧基等。
适合的取代或非取代的杂环基团可为具有5至8个原子(包括由式(1)的结构贡献的2-3个碳原子在内)的碳和氧主链，包括环缩醛或环碳酸酯。这些杂环基可被OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基中的一种或多种所取代。
优选A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH、O、SH、NH2和OR。更优选A1、A2、A3、A5、A6、A6、A8、A10和A11独立选自H、OH和OR。在OR基团中的R为如上定义的低级烷基(优选甲基或乙基)或低级酰基。
优选A4、A9和A13独立选自低级烷基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。更优选A4和A13独立选自甲基、甲酸酯基和甲醇基团，A9选自甲醇和CH2OR基团。同样在OR基团中的R为如上定义的低级烷基(优选甲基或乙基)或低级酰基。
优选A12选自低级烷基、低级烯烃或低级炔烃。更优选A12选自甲基和CH2。最优选A12为CH2。
还优选所述A1至A13中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，其中R如上定义。
式(1)的化合物的适合的药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐包括非毒性盐，如酸加成盐，如无机酸加成盐(如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐等)、有机酸加成盐(如甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐等)，与氨基酸形成的盐(如精氨酸盐等)、金属盐如碱金属盐(如钠盐、钾盐等)和碱土金属盐(如钙盐、镁盐等)、铵盐、有机碱加成盐(如三甲基胺盐、三乙基胺盐等)等。
优选用于本发明方法的化合物及其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐具有下式 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且取代基A1至A13独立选自H、OH、O、低级烷基、低级烯烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基；条件是当C1和C15之间的键为双键或环氧键时，A13通过单键键合到C15上，当C8和C9之间的键为双键或环氧键时，A1和A12分别通过单键键合到C9和C8上，并且当C11和C12之间的键为双键或环氧键时，A3和A4分别通过单键键合到C11和C12上。
更优选用于本发明方法的化合物及其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐具有下式 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且取代基A1至A13独立选自H、OH、O；甲基、乙基、丙基、丁基；亚甲基、亚乙基和亚丙基；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛；甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯基团；乙酰氧基、丙酰氧基和丁酰氧基以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团。
条件是当C8和C9之间的键为双键或环氧键时，A1和A12分别通过单键键合到C9和C8上，并且当C11和C12之间的键为双键或环氧键时，A3和A4分别通过单键键合到C11和C12上。
甚至更优选用于本发明方法的化合物及其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐具有下式 其中取代基A4、A7、A8、A9、A10和A13如式(1)中的定义；或下式的化合物及其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐 其中取代基A4、A7、A8、A9、A10和A13如式(1)中的定义。
最优选用于本发明方法中的化合物选自1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇，1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α-二醇，1(15)，8(19)-Trrnervitadiene-3α，5α，18-三醇5-乙酸酯，1(15)，8(9)-Trinervitadiene-2β，3α-二醇，和1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇3，5，18-三乙酸酯。
对于药学和/或兽医学应用来说，配制所述化合物或其药学上/兽医学上可接受的盐，使得可通过任何常规的途径给药，如通过口服、鼻、直肠、阴道、肌内、静脉内给药途径给药。为了方便，优选配制所述化合物，使得可通过口服给药，其中可将所述化合物或其药学上/兽医学上可接受的盐与通常已知的粘合物质和赋形剂混合。适合的口服制剂可为胶囊剂、片剂、小胶囊剂或糖浆剂的形式。
一般所述化合物或其药学上/兽医学上可接受的盐可以有效抗微生物的量，如1至100mg/kg、优选5至20mg/kg给药。
本发明的方法可用于治疗选自如伤口(包括外科伤口)的细菌感染、肺感染(如肺结核)、皮肤感染和全身性细菌感染的抗微生物感染或疾病。
本发明的第二方面提供了一种用于治疗患者的微生物感染或疾病的药学和/或兽医学制剂，所述制剂包括式(1)至(5)中的任一种化合物与适合的药学上/兽医学上可接受的赋形剂的混合物。
式(1)至(5)中的任一种化合物还可用于其它非药学/兽医学用途，如消毒剂和清洁剂。
因此，本发明的第三方面提供了一种对表面(如硬表面，如厨房的台面、浴室的砖等表面)进行消毒的方法，所述方法包括向所述表面施加一定量的下式的化合物及其盐 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且
(i)取代基A1至A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基，或(ii)取代基对A1和A2、A1和A3、A2和A3、A2和A4、A3和A4、A3和A5、A4和A5、A4和A6、A5和A6、A6和A7、A7和A8、A7和A9、A8和A9、A8和A10、A9和A10、A9和A11、A10和A11、A11和A12、A1和A12、A2和A12中的任何一对或多对形成取代或非取代杂环基团，其中任何没有形成取代或非取代杂环的取代基，包括A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基；条件是C1和C2、C1和C15之间的键只有一个可为双键或环氧键，当C1和C2之间的键为双键或环氧键时，A7通过单键键合到C2上，当C1和C15之间的键为双键或环氧键时，A13通过单键键合到C15上，当C8和C9之间的键为双键或环氧键时，A1和A12分别通过单键键合到C9和C8上，并且当C11和C12之间的键为双键或环氧键时，A3和分A4别通过单键键合到C11和C12上。
本发明的第四方面提供了一种下式的抗微生物化合物及其盐 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且(i)取代基A1至A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基，或(ii)取代基对A1和A2、A1和A3、A2和A3、A2和A4、A3和A4、A3和A5、A4和A5、A4和A6、A5和A6、A6和A7、A7和A8、A7和A9、A8和A9、A8和A10、A9和A10、A9和A11、A10和A11、A11和A12、A1和A12、A2和A12中的任何一对或多对形成取代或非取代杂环基团，其中任何没有形成取代或非取代杂环的取代基，包括A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基；条件是C1和C2、C1和C15之间的键只有一个可为双键或环氧键，当C1和C2之间的键为双键或环氧键时，A7通过单键键合到C2上，
当C1和C15之间的键为双键或环氧键时，A13通过单键键合到C15上，当C8和C9之间的键为双键或环氧键时，A1和A12分别通过单键键合到C9和C8上，并且当C11和C12之间的键为双键或环氧键时，A3和A4分别通过单键键合到C11和C12上；条件是所述化合物不为1(15)，8(9)-Trinervitadiene-2β，3α-二醇。
优选第四方面的化合物为基本纯的形式。
本发明的第五方面提供了基本纯的形式的抗微生物trinervitadiene化合物，所述化合物可得自象白蚁属的白蚁。
在整篇说明书中，除非另外声明，否则术语“包括”应理解为意味着包括所声明的全部或一部分的成分，或全部或一部分的成分组，但也不排除其它全部或一部分的成分，或全部或一部分的成分组。
包括在本说明书中的任何关于文件、作用、材料、设备、制品等的讨论仅仅是为本发明提供背景的目的。但不能认为任何或全部这些物质或材料均是来自现有技术的某一部分，或是在本申请的每一个优先权日前在澳大利亚已经存在的、在与本发明相关的领域中的常规知识。
下面将参考以下非限定性的实施例来对本发明作进一步的描述。
通过以下操作来测定抗微生物活性用所述甲醇溶的萃取物浸透1/4英寸直径的滤纸片(Bacto)，在冷空气流中蒸发去溶剂，将所述滤纸片放入含枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(ATCC菌株6633；9.2mL的对数期培养物中，Abs600nm＝1/200mL含1.5％(重量/体积)琼脂的Luria-Bertani培养基)的细菌平板中。将所述板在28℃下培养24小时，测量透明区域的直径。将所述萃取物稀释，按相同方法测试HPLC色谱的流分。在一些情况下，通过将来自色谱柱的流分蒸发至干燥，然后重新溶解在甲醇中，简单地直接抽取10μL甲醇溶的样品至细菌平板中，接着如上描述进行处理。
为了纯化流分23，(6)的化合物，通过半制备反相HPLC，采用YMC ODS-AQ封端的C18柱(250mm×10mm)(Sapphire Biosystems)将6mL所述甲醇溶萃取物分成12批，每批0.5mL进行纯化，测试条件如下装柱条件每批0.5mL萃取物溶剂A＝99.95％水+0.05％(体积比)三氟乙酸溶剂B＝100％乙腈洗脱条件0-2分钟为100％的A2-22分钟为线性梯度的0-100％的B22-35分钟为100％的B流速4mL/min按时间段收集流分(1分钟/流分)。在230nm检测各洗脱液的吸光度。
将12批所有相应流分混合，将每种混合流分洗脱液在氮气气氛下蒸发至干燥。称量残余物并再次溶于少量的适合溶剂中，其中溶于甲醇中以进行制备或分析HPLC和电雾化质谱，溶于氘代氯仿中以进行核磁共振(NMR)波谱等。
对于除流分23外的其它流分中的化合物而言，使用相同的方案，但还有以下附加的步骤。再使用4mL萃取物，混合所有20批洗脱液并如上进行处理。经过第一步制备HPLC步骤后流分24和26中的物质为混合物，因此使用以下两种等浓度色谱法中的一种对所述混合的活性流分作进一步纯化。
在两个等浓度纯化中第一步骤均使用相同的YMC ODS-AQ封端的C18柱(250mm×10mm)(Sapphire Biosystems)。等浓度方法1(用于纯化流分24，(7)分四批)装柱条件 各批为0.5mL的流分24(7)的甲醇溶液洗脱条件 20分钟内为乙腈∶四氢呋喃∶水*＝42∶28∶30等浓度方法2(用于纯化流分26，(8和9)分两批)装柱条件 各批为0.5mL的流分26(8和9)的甲醇溶液洗脱条件 25分钟内为乙腈∶水*＝80∶20(*含0.05％三氟乙酸的水(体积比))通过分析HPLC，使用与制备方法相同的洗脱梯度条件(即水-乙腈梯度，接着为100％的乙腈)对纯化的流分进行测定。唯一不同的是分析柱为YMC ODS-AQ封端的C18柱(250mm×3mm)，流速为0.55mL/min，每次测试时样品的装载量为20μL。
使用一系列的标准光谱技术测定所述混合活性流分的纯度和组成，这些光谱技术包括电雾化质谱(ESMS)、高分辨电轰击质谱(HREIMS)、电轰击质谱(EIMS)和一维和二维方式的300及500MHz的质子核磁共振和碳核磁共振。
通过在37℃下将两种哺乳动物赘生性细胞系(SP2/0-Ag8(一种来自Balb/C鼠的非分泌小鼠骨髓瘤细胞系)和NCI-H460(一种来自人的小细胞肺癌细胞系))的培养物暴露在N.trioiae的甲醇溶萃取物的固定稀释溶液中，或暴露在流分23，(6)的固定浓缩液中19小时。通过标准方法使细胞在无菌的96-孔组织培养聚簇板的孔中生长。使用细胞增殖剂WST-1(Roche Diagnostics)，按照制造商的说明评估细胞的生长，并将增殖数据与那些得自未处理的对照孔的数据进行对比。
使用国家委员会制定的肉汤微量稀释液试验的临床实验室标准(NCCLS，2000.NCCLS文件M7-A5-Method for Dilution AntimicrobialSusceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically，ApprovedStandard-第15版)测定对枯草芽孢杆菌ATCC菌株6633的最低抑制浓度。使用青霉素G和庆大霉素与金黄色葡萄糖球菌ATCC菌株29213和25923和粪肠球菌ATCC菌株29212对该测试进行标准化。按照NCCLS标准(NCCLS，2000.NCCLS文件M100-S10(M7)-Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing；TenthInformational Supplement(Aerobic Dilution).NCCLS，Wayne，Pennsylvania)对标准化结果进行评估。结果N.triodiae的粗制的70％甲醇溶萃取物显示出对抗枯草芽孢杆菌的抗微生物活性(在标准滤纸片测试中透明区的直径为9mm)和对抗哺乳动物细胞的中等抑制活性(在约30μg/mL浓度时为对照样品的37％)。在相同的测试方案中，对大肠埃希氏菌(Escherichia coli)(一种革兰氏阴性细菌)的受试菌株(ACM3221)没有活性。
在对甲醇溶活性物进行色谱分离后，测定在22至23分钟(流分23)的部分洗脱液以及23至24分钟(流分24)和25至26分钟(流分26)的部分洗脱液的抗微生物活性。流分23从6mL粗制萃取物中得到总量为9mg的纯化合物，表明原始浓度为1.5mg/mL。
流分23(6)中的化合物的分子式经ESMS和HREIMS测定为C20H32O3，其中ESMS出现m/z343(MNa+)和m/z663(M2Na+)的钠化离子(sodiated ion)，而HREIMS出现m/z302.2243的M+-H2O离子，其中对C20H30O2的m/z计算为302.2246。
流分23中的化合物(6)的1H NMR和13C NMR的化学位移数据显示在表1中。确定流分23中的化合物为1(15)，8(19)-trinervitadiene-3α，5α，18-三醇(6)。该化合物在以前未被报导过。
化合物(6)对抗枯草芽孢杆菌的最低抑制浓度估计为≤50μg/mL。经过纯化的化合物(6)在高达100μg/mL的浓度下也没有被检测出具有抑制NCI-H460细胞的增殖的作用。化合物(6)在高达30μg/mL的浓度下也没有被检测出具有抑制SP2/O细胞的增殖的作用。 1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3，5α，18-三醇流分24同样显示出抗微生物活性的流分24中的物质经过第一色谱步骤后为至少两种化合物的混合物。因此进行如上所述的“等浓度法1”，收集在14至17分钟洗脱出的生物活性u.v.-吸收单峰的流分。
从10mL原料中纯化得到总量为4mg的存在于流分24中的纯生物活性化合物，表明在粗制萃取物中原始浓度约为0.4mg/mL。
流分24(7)中的化合物的分子式经ESMS和HREIMS测定为C20H32O2，其中ESMS出现m/z327(MNa+)的钠化离子，而HREIMS出现m/z304.2403的M+离子，其中对C20H30O2的m/z计算为304.2402。
流分24中的化合物(7)的1H NMR和13C NMR的化学位移数据显示在表2中。确定流分24中的化合物为1(15)，8(19)-trinervitadiene-3α，5α-二醇(7)。该化合物在以前未被报导过。
在纸片扩散试验中5μg的化合物(7)得到直径7mm的透明区。化合物(7)对抗枯草芽孢杆菌的最低抑制浓度估计为≤50μg/mL。 1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α-二醇流分26流分26中的物质经过第一色谱步骤后为至少两种生物活性化合物的混合物。因此进行如上所述的“等浓度法2”并收集两种活性流分。将在约12分钟时从色谱柱中洗脱出的第一种流分标记为流分26A，将在约14分钟时从色谱柱中洗脱出的第二种流分标记为流分26B。流分26A从10mL原料中纯化得到总量为0.5mg的存在于流分26A中的纯生物活性化合物，表明在粗制萃取物中原始浓度约为0.05mg/mL。
流分26A(8)中的化合物的分子式经ESMS和HREIMS测定为C22H34O4，其中ESMS出现m/z 345(MH+-H2O)，363(MH+)、385(MNa+)、747(M2Na+)的离子，而HREIMS出现m/z362.2460的M+离子，其中C22H34O4应在362.2457出现；出现m/z344.2350的M+-H2O离子，其中C22H32O3应在344.2351出现。
流分26A中的三醇的单乙酸酯(8)的1H NMR化学位移数据显示在表3中。通过对所述三醇(6)的部分乙酰基化，并证实在所得的乙酰化混合物中存在的主要组分与天然的三醇单乙酸酯的保留时间和1H NMR波谱一致来进一步证实所述三醇单乙酸酯。使用的方法如下使所述三醇(6)(1mg)和乙酸酐(10μL)的无水吡啶溶液(100μL)在室温下保持3小时。将反应物用水稀释，用二氯甲烷萃取，使所得萃取物通过制备HPLC洗脱，采用标准柱，采用50∶50至100∶0的乙腈/水梯度洗脱液。当在正常的梯度洗脱条件下分析保留时间为18分钟的流分时，表明该流分包含的主要组分与天然三醇单乙酸酯(8)的保留时间一致。该主要组分的1H NMR波谱(表3)也与天然三醇单乙酸酯(8)的匹配。
因此确定流分26A中的化合物为1(15)，8(19)-trinervitadiene-3α，5α，18-三醇5-乙酸酯(8)。该化合物在以前未被报导过。
在纸片扩散试验中未知浓度和质量的化合物(8)得到直径15mm的透明区。在标准肉汤微量稀释试验中，化合物(8)对抗枯草芽孢杆菌的最低抑制浓度估计为＞50μg/mL。 1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇5-乙酸酯流分26B从10mL原料中纯化得到总量为1.5mg的存在于流分26B中的纯生物活性化合物，表明在粗制萃取物中原始浓度约为0.15mg/mL。
流分26B(9)中的化合物的分子式经ESMS和HREIMS测定为C20H32O2，其中ESMS出现m/z327(MNa+)、631(M2Na+)的离子，而HREIMS出现m/z304.2404的M+离子，其中C20H32O2应在304.2402出现。
流分26B中的trinervitadiene二醇(9)的1H NMR化学位移数据显示在表4中。通过将对流分26B的化合物测得的化学位移与以前公开的1(15)，8(19)-trinervitadiene-2β，3α-二醇(9)的1H NMR数据(Goh，Chuah等人，1984；Braekman，Daloze等人，1983；Prestwich & Collins，1981；Prestwich等人，1976b)比较确定其就是1(15)，8(19)-trinervitadiene-2β，3α-二醇(9)。
在纸片扩散试验中未知浓度和质量的化合物(9)得到直径15mm的透明区。在标准肉汤微量稀释试验中，化合物(9)对抗枯草芽孢杆菌的最低抑制浓度估计为≤25μg/mL。虽然该化合物的结构已被公开(Goh，Chuah等人，1984；Braekman，Daloze等人，1983；Prestwich &Collins，1981；Prestwich等人，1976b)，但以前并没有报导其具有潜在的抗微生物活性。 1(15)，8(19)-Trinervitadiene-2β，3α-二醇1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇3，5，18-三乙酸酯(10)通过将三醇(6)乙酰化合成1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇3，5，18-三乙酸酯(10)。使所述三醇(6)(1mg)和乙酸酐(30μL)的无水吡啶溶液(100μL)在室温下保持3天。将反应物用水稀释，用二氯甲烷萃取，使所得萃取物通过在标准条件下的制备HPLC。收集主要的流分，并通过短的硅胶柱(含二氯甲烷)过滤，得到三乙酸酯(10)(1mg)，在上述材料和方法部分中描述的标准分析HPLC条件下进行色谱分析时，该化合物在洗脱时在第28分钟出现单主峰。
所述反应产物的分子式经ESMS和HREIMS测定为C26H38O6，其中ESMS出现m/z469(MNa+)的钠化离子，而HREIMS出现m/z386.2449的M+-AcOH离子，其中C24H34O4应在386.2457出现。
所述trinervitadiene三醇三乙酸酯(10)的反应产物的1H NMR化学位移数据显示在表5中。因此确定该乙酰化产物为1(15)，8(19)-trinervitadiene-3α，5α，18-三醇3，5，18-三乙酸酯(10)。该化合物在以前未被报导过。
在纸片扩散试验中5μg的化合物(10)得到直径11mm的透明区。化合物(10)对抗枯草芽孢杆菌的最低抑制浓度估计为＞50μg/mL。 1(15)，8(19)-trinervitadiene-3α，5α，18-三醇3，5，18-三乙酸酯还发现只从N.exitiosus种的工蚁(worker)得到的萃取物没有显示出抗微生物活性，并没有显示出任何属于trinervitadiene衍生物的u.v.吸收特征峰，所述萃取物在标准梯度HPLC色谱中在22-28分钟区间洗脱出。另一方面，与上述工蚁同巢的兵蚁的萃取物显示出抗微生物活性。
当将兵蚁的萃取物进行标准梯度HPLC色谱分析时，观察到trinervitadiene衍生物的生物活性u.v.-吸收特征峰。这表明在萃取前将兵蚁和工蚁分开可提高检测和纯化生物活性trinervitadiene衍生物两者的效率。讨论先前已经报导了一系列来自白蚁的具有trinervitadiene碳骨架的化合物(如Prestwich，Tanis等人，1976a，b；Vrkoc，Budesinsky等人，1978a，b；Dupont，Braekman等人，1981；Prestwich，Spanton等人，1981；Baker & Walmsley，1982；Braekman，Daloze等人，1986)。在许多属于白蚁科、Nasutitermitinae亚科的9个白蚁属的白蚁种的萃取物中已经发现了trinervitadiene衍生物。但是，本发明是第一次将这些报导的化合物(6、7和8)进行分离，并第一次制备出化合物(6)的三乙酸酯(10)。这些化合物的新颖性可通过先前没有报导过在trinervitadiene衍生物的碳骨架的5和18位上羟基化或由其它取代基取代的事实(如化合物(6))来支持。另外，先前没有报导过关于任何trinervitadiene或其衍生物，包括其分离或制备在此处描述的化合物(6、7、8、9和10)的抗微生物活性的数据。
已确定化合物(6)具有≤50ppm的最低抑制浓度，并且其对微生物细胞的毒性为其对人细胞毒性的至少两倍，可能具有比这高得多的选择性。式(9)的化合物具有≤25ppm的最低抑制浓度，并在低至12ppm时仍具有显著的抑制活性。化合物(7)、(8)和(10)具有较低但仍可检测的抗微生物活性。例如，羟基的乙酰化似乎降低了活性，但没有消除活性，而还可明确的是在trinervitadiene碳骨架上的基团的数目和排列可调节抗微生物活性的水平。
因此，可期望将化合物(6、7、8、9和10)和其它其中基团的数目、位置和性质发生改变(如化合物11-16的具体衍生物)的trinervitadiene衍生物用作抗菌素或用于上述的一些其它目的中。或者，它们可作为研制具有增强的抗菌活性的衍生物的最重要的化合物。
有趣的是对工蚁的防御分泌物的作用的进一步研究导致将trinervitadiene衍生物分为“防御化合物”(即是假设它们的功能仅仅是防御白蚁群体抵抗无脊椎动物或脊椎动物捕食者的进攻)类型。但是，本发明发现这些化合物所具有的抗微生物活性提高了它们在白蚁群体中抑制微生物寄生虫的天然功能的可能性。表11(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇(6)的1H和13C NMR数据(CDCl3)
a化学位移，(δ)在75.43MHz下采用CDCl3(76.9)作为CDCl3溶液的参比；b化学位移，(δ)在500MHz下采用CHCl3(7.26)作为CDCl3溶液的参比；c当独立的质子多重峰为无法分辨的化学位移时取粗略估计值。表21(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α-二醇(7)的1H和13C NMR数据(CDCl3)
表31(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇5-乙酸酯(8)的1HNMR数据(CDCl3)
表41(15)，8(9)-Trinevitadiene-2β，3α-二醇(9)的1H NMR数据(CDCl3)
表51(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇3，5，18-三乙酸酯(10)的1H NMR数据(CDCl3)
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本领域的技术人员应理解在没有偏离本发明广泛的宗旨或范围下可对本发明(如具体的实施方案)作出各种变化和/或修改。因此，本发明的实施方案在各方面都应认为是举例说明，而非是对本发明的限定。
权利要求
1.一种治疗患者的微生物感染或疾病的方法，所述方法包括给予所述患者有效量的下式的化合物，及其药学上/兽医学上可接受的盐 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且(i)取代基A1至A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基，或(ii)取代基对A1和A2、A1和A3、A2和A3、A2和A4、A3和A4、A3和A5、A4和A5、A4和A6、A5和A6、A6和A7、A7和A8、A7和A9、A8和A9、A8和A10、A9和A10、A9和A11、A10和A11、A11和A12、A1和A12、A2和A12中的任何一对或多对形成取代或非取代杂环基团，其中任何没有形成取代或非取代杂环的取代基，包括A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基；条件是C1和C2、C1和C15之间的键只有一个可为双键或环氧键，当C1和C2之间的键为双键或环氧键时，A7通过单键键合到C2上，当C1和C15之间的键为双键或环氧键时，A13通过单键键合到C15上，当C8和C9之间的键为双键或环氧键时，A1和A12分别通过单键键合到C9和C8上，并且当C11和C12之间的键为双键或环氧键时，A3和A4分别通过单键键合到C11和C12上。
2.权利要求1的方法，其中A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH、O、SH、NH2和OR，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
3.权利要求1或2的方法，其中A4、A9和A13独立选自低级烷基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
4.权利要求3的方法，其中A4和A13独立选自甲基、甲酸酯基和甲醇基团，A9选自甲醇和CH2OR基团，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
5.权利要求1至4中任一项的方法，其中A12选自低级烷基、低级烯烃和低级炔烃。
6.权利要求5的方法，其中A12选自甲基和CH2。
7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述A1至A13中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
8.权利要求2至7中任一项的方法，其中R为甲基或乙基。
9.权利要求1的方法，其中所述化合物及其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐具有下式 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且取代基A1至A13独立选自H、OH、O、低级烷基、低级烯烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
10.权利要求9的方法，其中A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH、O和OR，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
11.权利要求9或10的方法，其中A4、A9和A13独立选自低级烷基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
12.权利要求11的方法，其中A4和A13独立选自甲基、甲酸酯基和甲醇基团，A9选自甲醇和CH2OR基团，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
13.权利要求9至12中任一项的方法，其中A12选自低级烷基、低级烯烃和低级炔烃。
14.权利要求13的方法，其中A12选自甲基和CH2。
15.权利要求9至14中任一项的方法，其中所述A1至A13中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
16.权利要求10至15中任一项的方法，其中R为甲基或乙基。
17.权利要求1的方法，其中所述化合物及其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐具有下式 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且取代基A1至A13独立选自H、OH、O；甲基、乙基、丙基、丁基；亚甲基、亚乙基和亚丙基；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯基团；乙酰氧基、丙酰氧基和丁酰氧基以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团。
18.权利要求17的方法，其中A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH和O；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯基团；乙酰氧基、丙酰氧基和丁酰氧基以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团。
19.权利要求17或18的方法，其中A4、A9和A13独立选自甲基、乙基、丙基、丁基；亚甲基、亚乙基和亚丙基；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯和丁酸酯基团；乙酰氧基、丙酰氧基和丁酰氧基以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团。
20.权利要求17至19中任一项的方法，其中A12选自甲基、乙基、丙基、丁基、亚甲基、亚乙基和亚丙基。
21.权利要求20的方法，其中A12选自甲基和CH2。
22.权利要求17至21中任一项的方法，其中所述A1至A13中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
23.权利要求22的方法，其中R为甲基或乙基。
24.权利要求1的方法，其中所述化合物及其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐具有下式 其中取代基A4、A7、A8、A9、A10和A13如权利要求1的定义。
25.权利要求1的方法，其中所述化合物及其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐具有下式 其中取代基A4、A7、A8、A9、A10和A13如权利要求1的定义。
26.权利要求24或25的方法，其中A4、A7、A8和A10独立选自H、OH、O、SH、NH2和OR，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
27.权利要求24至26中任一项的方法，其中A9和A13独立选自低级烷基、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
28.权利要求27的方法，其中A9和A13独立选自甲醇和CH2OR基团，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
29.权利要求24至28中任一项的方法，其中所述A4、A7、A8、A9、A10和A13中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
30.权利要求26至29中任一项的方法，其中所述R为甲基或乙基。
31.权利要求1的方法，其中所述化合物选自1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇，1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α-二醇，1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇5-乙酸酯，1(15)，8(9)-Trinervitadiene-2β，3α-二醇，和1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇3，5，18-三乙酸酯。
32.权利要求1至31中任一项的方法，其中将所述化合物或其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐以1至100mg/kg的量给予所述患者。
33.权利要求1至32中任一项的方法，其中所述抗微生物感染或疾病选自伤口的细菌感染、肺感染、皮肤感染和全身性细菌感染。
34.一种用于治疗患者的微生物感染或疾病的药学和/或兽医学制剂，所述制剂包括权利要求1至31中任一项定义的化合物或其药学上可接受的盐/兽医学上可接受的盐与适合的药学上/兽医学上可接受的赋形剂的混合物。
35.一种对表面进行消毒的方法，所述方法包括向所述表面施加一定量的下式的化合物及其盐 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且(i)取代基A1至A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基，或(ii)取代基对A1和A2、A1和A3、A2和A3、A2和A4、A3和A4、A3和A5、A4和A5、A4和A6、A5和A6、A6和A7、A7和A8、A7和A9、A8和A9、A8和A10、A9和A10、A9和A11、A10和A11、A11和A12、A1和A12、A2和A12中的任何一对或多对形成取代或非取代杂环基团，其中任何没有形成取代或非取代杂环的取代基，包括A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基；条件是C1和C2、C1和C15之间的键只有一个可为双键或环氧键，当C1和C2之间的键为双键或环氧键时，A7通过单键键合到C2上，当C1和C15之间的键为双键或环氧键时，A13通过单键键合到C15上，当C8和C9之间的键为双键或环氧键时，A1和A12分别通过单键键合到C9和C8上，并且当C11和C12之间的键为双键或环氧键时，A3和A4分别通过单键键合到C11和C12上。
36.权利要求35的化合物，其中A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH、O、SH、NH2和OR，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
37.权利要求35或36的方法，其中A4、A9和A13独立选自低级烷基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
38.权利要求37的方法，其中A4和A13独立选自甲基、甲酸酯基和甲醇基团，A9选自甲醇和CH2OR基团，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
39.权利要求35至38中任一项的方法，其中A12选自低级烷基、低级烯烃和低级炔烃。
40.权利要求39的方法，其中A12选自甲基和CH2。
41.权利要求35至40中任一项的方法，其中所述A1至A13中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
42.权利要求36至41中任一项的方法，其中R为甲基或乙基。
43.权利要求35的方法，其中所述化合物及其盐具有下式 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且取代基A1至A13独立选自H、OH、O、低级烷基、低级烯烃、低级烷氧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
44.权利要求43的方法，其中A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH和OR，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
45.权利要求43或44的方法，其中A4、A9和A13独立选自低级烷基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
46.权利要求45的方法，其中A4和A13独立选自甲基、甲酸酯基和甲醇基团，A9选自甲醇和CH2OR基团，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
47.权利要求43至46中任一项的方法，其中A12选自低级烷基、低级烯烃和低级炔烃。
48.权利要求47的方法，其中A12选自甲基和CH2。
49.权利要求43至48中任一项的方法，其中所述A1至A13中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
50.权利要求43至49中任一项的方法，其中R为甲基或乙基。
51.权利要求35的方法，其中所述化合物及其盐具有下式 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且取代基A1至A13独立选自H、OH、O；甲基、乙基、丙基、丁基；亚甲基、亚乙基和亚丙基；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯基团；乙酰氧基、丙酰氧基和丁酰氧基；以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团、OCH和OCCH3。
52.权利要求51的方法，其中A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛；甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯基团；乙酰氧基、丙酰氧基和丁酰氧基以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团。
53.权利要求51或52的方法，其中A4、A9和A13独立选自甲基、乙基、丙基、丁基；亚甲基、亚乙基和亚丙基；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯基团以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团。
54.权利要求51至53中任一项的方法，其中A12选自甲基、乙基、丙基、丁基、亚甲基、亚乙基和亚丙基。
55.权利要求54的方法，其中A12选自CH2和CH。
56.权利要求51至55中任一项的方法，其中所述A1至A12中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
57.权利要求56的方法，其中R为甲基或乙基。
58.权利要求35的方法，其中所述化合物及其盐具有下式 其中取代基A4、A7、A8、A9、A10和A13如权利要求35的定义。
59.权利要求35的方法，其中所述化合物及其盐具有下式 其中取代基A4、A7、A8、A9、A10和A13如权利要求35的定义。
60.权利要求58或59的方法，其中A4、A7、A8和A9独立选自H、OH、O、SH、NH2和OR，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
61.权利要求58至60中任一项的方法，其中A9和A13独立选自低级烷基、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
62.权利要求61的方法，其中A9选自甲醇和CH2OR基团，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
63.权利要求58至62中任一项的方法，其中所述A4、A7、A8、A9、A10和A13中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
64.权利要求58至63中任一项的方法，其中所述R为甲基或乙基。
65.权利要求35的方法，其中所述化合物选自1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇，1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α-二醇，1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇5-乙酸酯，1(15)，8(9)-Trinervitadiene-2β，3α-二醇，和1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇3，5，18-三乙酸酯。
66.一种下式的抗微生物化合物及其盐 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且(i)取代基A1至A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基，或(ii)取代基对A1和A2、A1和A3、A2和A3、A2和A4、A3和A4、A3和A5、A4和A5、A4和A6、A5和A6、A6和A7、A7和A8、A7和A9、A8和A9、A8和A10、A9和A10、A9和A11、A10和A11、A11和A12、A1和A12、A2和A12中的任何一对或多对形成取代或非取代杂环基团，其中任何没有形成取代或非取代杂环的取代基，包括A13独立选自H、OH、O、SH、NH2、低级烷基、低级烯烃、低级炔烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基、低级醇基、低级烷硫基、低级烷氨基、低级烷基磺酰基、低级烷基亚磺酰基和低级烷基磺酰氧基；条件是C1和C2、C1和C15之间的键只有一个可为双键或环氧键，当C1和C2之间的键为双键或环氧键时，A7通过单键键合到C2上，当C1和C15之间的键为双键或环氧键时，A13通过单键键合到C15上，当C8和C9之间的键为双键或环氧键时，A1和A12分别通过单键键合到C9和C8上，并且当C11和C12之间的键为双键或环氧键时，A3和A4分别通过单键键合到C11和C12上；进一步的条件是所述化合物不是1(15)，8(9)-Trinervitadiene-2β，3α-二醇。
67.权利要求66的化合物，其中A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH、O、SH、NH2和OR，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
68.权利要求66或67的化合物，其中A4、A9和A13独立选自低级烷基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
69.权利要求68的化合物，其中A4和A13独立选自甲基、甲酸酯基和甲醇基团，A9选自甲醇和CH2OR基团，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
70.权利要求66至69中任一项的化合物，其中A12选自低级烷基、低级烯烃和低级炔烃。
71.权利要求70的化合物，其中A12选自甲基和CH2。
72.权利要求66至71中任一项的化合物，其中所述A1至A12中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
73.权利要求67至72中任一项的化合物，其中R为甲基或乙基。
74.权利要求66的化合物，其中所述化合物及其盐具有下式 其中取代基A1至A13独立选自H、OH、O、低级烷基、低级烯烃、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
75.权利要求74的化合物，其中A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH和OR，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
76.权利要求74或75的化合物，其中A4、A9和A13独立选自低级烷基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
77.权利要求76的化合物，其中A4和A13独立选自甲基、甲酸酯基和甲醇基团，A9选自甲醇和CH2OR基团，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
78.权利要求74至77中任一项的化合物，其中A12选自低级烷基、低级烯烃和低级炔烃。
79.权利要求78的化合物，其中A12选自甲基和CH2。
80.权利要求74至79中任一项的化合物，其中所述A1至A12中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
81.权利要求75至84中任一项的化合物，其中R为甲基或乙基。
82.权利要求66的方法，其中所述化合物及其盐具有下式 其中点划线表示单键或双键或环氧键，并且取代基A1至A13独立选自H、OH、O；甲基、乙基、丙基、丁基；亚甲基、亚乙基和亚丙基；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯基团；乙酰氧基、丙酰氧基和丁酰氧基以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团。
83.权利要求82的化合物，其中A1、A2、A3、A5、A6、A7、A8、A10和A11独立选自H、OH；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯基团；以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团。
84.权利要求82或83的化合物，其中A4、A9和A13独立选自甲基、乙基、丙基、丁基；亚甲基、亚乙基和亚丙基；甲醛、乙醛、丙醛、丁醛、甲酮、乙酮和丙酮基团；甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯和丁酸酯基团以及甲醇、乙醇、丙醇和丁醇基团。
85.权利要求82至84中任一项的化合物，其中A12选自甲基、乙基、丙基、丁基、亚甲基、亚乙基和亚丙基。
86.权利要求89的化合物，其中A12选自甲基和CH2。
87.权利要求82至86中任一项的化合物，其中所述A1至A12中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
88.权利要求87的化合物，其中R为甲基或乙基。
89.权利要求66的化合物，其中所述化合物及其盐具有下式 其中取代基A4、A7、A8、A9、A10和A13如权利要求66的定义。
90.权利要求66的化合物，其中所述化合物及其盐具有下式 其中取代基A4、A7、A8、A9、A10和A13如权利要求66的定义。
91.权利要求89或90的化合物，其中A4、A7、A8和A10独立选自H、OH、O、SH、NH2和OR，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
92.权利要求89至91中任一项的化合物，其中A9和A13独立选自低级烷基、低级烷氧基、低级羧基、低级醛基、低级酮基、低级酯基、低级酰氧基和低级醇基。
93.权利要求96的化合物，其中A9和A13独立选自甲醇和CH2OR基团，在OR基团中的R为低级烷基或低级酰基。
94.权利要求89至93中任一项的化合物，其中所述A4、A7、A8、A9、A10和A13中至少两个由OH或OR基团组成或包括OH或OR基团，在OR基团中的R为低级烷基。
95.权利要求89至94中任一项的化合物，其中所述R为甲基或乙基。
96.权利要求66的化合物，其中所述化合物选自1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇，1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α-二醇，1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇5-乙酸酯，和1(15)，8(19)-Trinervitadiene-3α，5α，18-三醇3，5，18-三乙酸酯。
97.权利要求66至96中任一项的化合物，其中所述化合物为基本纯的形式。
98.一种基本纯形式的抗微生物trinervitadiene化合物，所述化合物可得自象白蚁属的白蚁。
全文摘要
用于治疗患者的微生物感染或疾病的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的式(1)的化合物。式中点划线表示单键或双键或环氧化键，A
文档编号A61K31/22GK1443150SQ01813108
公开日2003年9月17日 申请日期2001年5月22日 优先权日2000年5月22日
发明者R·W·里卡兹, C·赵, S·C·特罗维尔 申请人:联邦科学及工业研究组织