专利名称：鞣酸苦参碱在制备预防和治疗皮肤黏膜感染药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及鞣酸苦参碱盐或其组合物在制备抗皮肤黏膜感染药物中的应用。具体来说是涉及鞣酸及其与苦参碱形成的盐和/或其组合物用于制备治疗人和动物皮肤黏膜人乳头瘤病毒感染药物的应用。
背景技术：
皮肤黏膜感染细菌、真菌和病毒是常见病、多发病，目前多用抗生素治疗，但是常常引起耐药，使皮肤黏膜感染经久不愈。同时能治疗细菌、真菌和病毒皮肤黏膜感染中药制剂，在市面上和文献上尚未见到。
尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(HPV)引起的皮肤黏膜病变。中医认为尖锐湿疣的病因病机是由于房事不洁或间接接触污秽之品，湿热淫毒从外侵入阴皮肤粘膜，导致肝经郁势，气血不和，湿热毒邪搏结而成疣。由于湿毒为阴邪，其性粘滞，缠绵难去，容易耗伤正气，正虚邪恋以致容易复发，难以根治。在治疗上多采用扶正固本、清热解毒、活血化瘀、软坚散结等法。尖锐湿疣以局部病变为主，故外治法在治疗中占重要地位。鞣酸已被证明对艾滋病HIV病毒有抑制作用(Biochem.J 1992；288717-9；J.Nat.Prod.1990；53134-40)。但至今尚无有关文献记载单独用鞣酸和/或本发明公开的组合物、和/或其盐用于制备治疗皮肤黏膜病毒感染的药物。虽然，美国专利US4381296公开了鞣酸用于疱疹病毒HSV感染的治疗，但未涉及尖锐湿疣HPV的治疗，就如已知的许多药物抗病毒药物一样。在研究确认药物是否对某种类型病毒有效和药理学基础之前，并不能预测其的效果，不同的病毒感染引起不同的疾患，每一种药物相对应一定的病毒种类，因此，不同的病毒感染，需要针对该病毒的抗病毒药物治疗才能有效。目前，治疗尖锐湿疣的药物有鬼臼毒素d，属于化学疗法，优点是疗程短，但存在刺激性、毒副作用大的问题。具体表现是疼痛、水肿、糜烂等。
市面上现有鞣酸软膏作为收敛药，用于新生儿和婴儿防治臀红。
鞣酸苦参碱为豆杆植物苦参的根提取的总生物碱与五倍子提取的鞣酸经反应而得的一种有机鞣酸弱碱盐，其中鞣酸苦参碱含量为8-20％，经口服后，在胃液的酸性条件下溶解，游离出苦参总生物碱和鞣质而发挥药理活性，现用于治疗肠道感染，腹泻。
中国专利CN 1327827公开了一种治疗皮肤病的外用药，它是由吲哚美辛，扑尔敏，度米芬，鞣酸苦参碱，甘草组成，用于止痒、消肿、消炎、杀菌、防光和止痛等，用于日光性皮炎、痤疮、脂溢性皮炎、接触性皮炎、丘疹性寻麻疹、湿疹、神经性皮炎等常见皮肤病。
中国专利CN1058909提供了一种宫颈糜烂栓配方及制造方法，它由五倍子、黄柏、苦参等组成，用于于宫颈炎，宫颈糜烂。
中国专利CN1456194公开了一种抗人乳头瘤病毒软膏的配方，它由砒石、鸦胆子、铅丹、五倍子、黄柏、冰片、蒸馏水、单甘酯、甘油、凡士林、硬质酸、三乙醇胺组成，用于治疗外阴、阴道、宫颈部疣及外阴黑色病变。
中国专利CN1193526涉及一种治疗妇科病的中药散剂妇康洁阴散及制备方法，它是由中药苦参、百部、蛇床子、三七、黄芩、土茯芩、五倍子、冰片等中药配伍而成，防治妇科病中的滴虫、阴痒、阴道炎、宫颈炎、宫颈糜烂、带下、尖锐、湿疹等病。
中国专利CN1187358公开了一种复方溃疡糜烂散，主治口腔溃疡疾病，同时对烧烫伤、褥疮、宫颈糜烂、外生殖器溃疡糜烂等疾病也有显著疗效，由冰片、儿茶、枯矾、珍珠、人中白、五倍子按规定比例制成散剂。
中国专利CN1116949公开了一种妇科外用中药，由珍珠、麝香、黄连、苦参、杏仁、蓖麻仁、白癣皮、五倍子、枯矾、蛇床子、冰片、硼砂等十几种中药配制而成，用于宫颈糜烂、滴虫或霉菌性阴道炎、盆腔炎、子宫脱垂、外阴白色病变，外阴搔痒及女性生殖系统炎症等。
以上专利和文献存在处方复杂，成分多，未明确其有效成分，不易进行质量控制的缺点，并且没有用于抗HPV病毒，也没有实验数据证实可以杀灭病毒。
王峥屹等对用鞣酸苦参碱杀精栓剂和及体外抑制淋病奈瑟菌和霉菌进行了报道(王峥屹等，中华男科学，2001，7(4)275-278)。但没有涉及本发明所述病毒感染。

发明内容
本发明为鞣酸(又名鞣质)和苦参碱盐和/或其组合物作为活性成分，鞣酸苦参碱可以在市面上购买，也可以按中国专利申请专利号91105164.3和申请专利号02128785.6制备，其中含鞣酸苦参碱为5-30％，鞣酸为30-90％。鞣酸优选由五倍子提取，苦参碱优选由苦参或山豆根提取。鞣酸和苦参碱按一定比例生成盐，其中鞣酸为6-100重量份，苦参碱为1-70重量份，优选为鞣酸7-90重量份，苦参碱为1-20重量份。
近年研究结果表明(陈富强等，肿瘤防治杂志，2001，8(4)342-344；徐成康，中山医科大学学报，1998，19(3)223-226)，29.3％的宫颈糜烂患者HPV阳性，而正常宫颈阳性率只为11.1％。据报道(Ahn ws et al，J Cell BiochemSuppl，1997；28-29133-139)，慢性宫颈炎中高危HPV(16、18)型表达率为69％。HPV与多种疾病有关，它分为许多亚型，根据其对组织恶性转化程度的大小，将HPV分为高、中、低危型，其中高危型包括HPV16、18，宫颈糜烂及宫颈癌中HPV16是最常见的亚型，高危型HPV16、18检出率随宫颈糜烂程度的增加呈现递增趋势，颗粒型或乳突型糜烂HPV16、18检出率与正常宫颈比较差异显著，表明宫颈癌与HPV密切相关，与宫颈糜烂密切相关。用PCR可测得85％-90％的宫颈癌中有高危型HPV，宫颈癌中HPV16、18阳性率达83.33％，高危型HPV DNA整合到宿主细胞染色体，可产生E6、E7肿瘤蛋白，它们分别抑制抑癌基因p53和Rb，使细胞逃脱p53和Rb的控制，导致细胞周期控制失常，使通常处于静止状态的细胞增生活跃、肿瘤生长。虽有多数生育年龄妇女主要通过性传播感染，但只有少数发展成宫颈癌，若HPV16持续存在，就可使宫颈病变进展。宫颈HPV感染与外阴感染不同，宫中以HPV16/18型为主，常不发生湿疣改变，而是以隐性感染长期存在，先引起不典型增生，当有其他因子参与时而导致癌变。上述鞣酸苦参碱盐和/或组合物能有效地杀灭和抑制HPV6/11、16/18型，可用于制备治疗HPV的病毒感染和的药物，治疗尖锐湿疣、阴道、宫颈炎及宫颈糜烂和辅助治疗子宫颈癌。
本发明通过实时荧光定量PCR检测HPV病毒的量的改变来观察活性成分和产品效果，该方法已在数篇公开发表的文献中应用(蔡有龄等，中国性病艾滋病防治，2002，82，108；吴元胜、范瑞强等，实用中西医结合临床，2003，32，1)。
结果表明，尖锐湿疣的组织匀浆在加入鞣酸和/或其盐后24小时，FQ-POVR不能再检出病毒，而空白对照管及对照品管却具有很高浓度的HPV病毒量，说明本发明的药物及其有效成分具有能快速有效地灭HPV病毒的能力。
实验证明，单独使用鞣酸药液对金葡球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌有抑制，但对白色念珠菌没有抑菌作用。而本发明鞣酸苦参碱则对金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌都有抑制。
本发明所述鞣酸苦参碱在制备能同时预防和治疗人和动物皮肤黏膜细菌、真菌和病毒性疾病药物的用途，包括尖锐湿疣、细菌性、霉菌性、病毒性阴道、宫颈炎及宫颈糜烂和辅助治疗子宫颈癌，特别是治疗人和动物皮肤黏膜HPV病毒性疾病药物的用途。
本发明鞣酸苦参碱盐和/或其组合物以及含有作为活性成分有效量的鞣酸苦参碱，与皮肤黏膜用药的各种辅料配伍在制备各种制剂中的应用，可以是膏剂、凝胶剂、洗剂、片剂、栓剂、膜剂、喷剂。
制剂中鞣酸苦参碱的浓度为1-70％，优选为2-20％。
在用于制备药用制剂时，可以与不同的药物和可接受的载体组合，以利于制剂的形成，这些载体可以是淀粉、糊精、吐温-80、卡波姆、纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、甘油、丙二醇、聚乙二醇、月桂氮唑酮、异丙醇、三乙醇胺、司盘60，但不限于此。
以下结合实施例，来进一步说明本发明，但本发明并不局限于这些实施例，任何在本发明基本精神上的改进或替代，仍属于本发明权利要求书中所要求的保护范围。
具体实施例方式
试验用原料和药品来源鞣酸 陕西昂盛生物医药科技有限公司鞣酸苦参碱 陕西昂盛生物医药科技有限公司妇炎净胶囊内容物(本品为苦玄参、地胆草、当归、鸡血藤、两面针等药味经加工制成的胶囊) 广西梧州制药集团股份有限公司实施例1鞣酸苦参碱抗HPV病毒泡腾片的制备鞣酸苦参碱1.00克酒石酸0.45克碳酸氢钠 0.65克糊精 0.02克PEG6000 0.01克制备方法取鞣酸苦参碱、酒石酸分别过80目筛，以95％乙醇制成软材，过12目筛制湿粒，于50℃干燥，备用。另取碳酸氢钠加无菌蒸馏水制软材，过12目筛制湿粒，于50℃干燥，然后与上述干粒混合，整粒，加适量灭菌蒸馏水，烘片刻，加PEG6000、糊精。混匀，压片。
实施例2鞣酸苦参碱消毒液的制备鞣酸苦参碱10克1，2-丙二醇 15毫升吐温-80 15毫升氮酮 3毫升HCl或NaOH调节pH至5.5
灭菌蒸馏水加至100毫升实施例3复方鞣酸苦参碱凝胶剂的制备鞣酸苦参碱 10克卡波姆 10克甘油 100克灭菌蒸馏水加至1000毫升制备方法取卡波姆分次撒入适量灭菌蒸馏水中，使其缓慢溶胀，加入甘油调匀后，滴加三乙醇胺搅拌成透明基质，pH调至6.5-7.5。取鞣酸苦参碱10克加入适量热灭菌蒸馏水中，溶解冷却后，再边加入边搅拌于凝胶基质中，最后加入灭菌蒸馏水至1000毫升，搅匀分装即可。
实施例4荧光定量PCR检测HPV病毒药敏实验药物样品配制1号鞣酸5克加入1，2-丙二醇10毫升，吐温-8010毫升，最后加灭菌蒸馏水至100，配制成5％的溶液。
2号鞣酸苦参碱5克加入1，2-丙二醇10毫升，吐温-80 10毫升，最后加灭菌蒸馏水至100，配制成鞣酸苦参碱溶液。
HPV病毒来源来自多位病人临床标准的尖锐湿疣标本，切取后，用生理盐水洗去血液，在无菌条件下，将标本剪碎，加入3倍体积生理盐水混匀、研磨成匀浆备用。
主要仪器PE7700型荧光定量PCR仪(包括电脑及软件)。
引物及荧光探针达安基因临床诊断中心提供的HPV6，11和16，18型FQ-PCR诊断试剂盒。
试验方法取尖锐湿疣组织匀浆50微升，按设定分组分别加入各种待测样品50微升。
37℃温育24小时，然后按达安基因诊断中心HPV6，11和16，18型FQ-PCR诊断试剂盒提供的操作步骤进行检测FQ-PCR反应步骤采用常规碱裂解法提取DNA0.2ml入薄壁反应管中，同时加入一定浓度的引物、F-PROBE、DNTP、DNA聚合酶及缓冲液等，用PE7700荧光PCR仪，93℃2min予变性后，按93℃45s，55℃120s，反复进行40个循环，定量结果由电脑软件自动分析计算出初始拷贝数的定量结果。

尖锐湿疣的组织匀浆在加入鞣酸和鞣酸苦参碱后24小时，FQ-POVR不能再检出病毒，而而空白对照管及妇炎净胶囊内容物管具有很高浓度的HPV病毒量，说明本发明的鞣酸和鞣酸苦参碱具有能快速有效地灭尖锐疣病毒的作用。
实施例6细菌和真菌药敏实验体外抑菌试验实验材料菌株金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌和白色念珠菌。试剂营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、沙氏琼脂培养基。
药物样品配制原药液配制分别称量鞣酸和鞣酸苦参碱各0.01克，加入灭菌蒸馏水至10毫升为原药液。
①取原液2ml作为浓度1。
②取原液2ml+水2ml，混匀，取出2ml作为浓度2。
③取②操作中混匀后药液2ml+水2ml，混匀，取出2ml作为浓度3。
④取③操作中混匀后药液2ml+水2ml，混匀，取出2ml作为浓度4。
⑤取④操作中混匀后药液2ml+水2ml，混匀，取出2ml作为浓度5。
⑥取⑤操作中混匀后药液2ml+水2ml，混匀，取出2ml作为浓度6。
实验方法采用平皿二倍稀释法，将已配制好的药液分别加入冷却至55℃左右的灭菌营养琼脂培养基中，混匀，制成不同浓度的药物平板。
取金黄色葡萄菌，大肠杆菌，绿脓杆菌、白色念珠菌四种实验菌悬液，分别划种于不同浓度的含药平板，另外再取四个不含药液的平板也接种四种细菌)，37℃培养18h，观察记录最小抑菌浓度MIC。
鞣酸药液结果见下表1

鞣酸苦参碱药液结果见下表2

实验结果1、鞣酸组对实验的3种细菌(金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌)均有不同程度的抑制作用(见下表)。但对白色念珠菌无抑制。
表1鞣酸的抗菌作用

2、鞣酸苦参碱组对实验的4种细菌(金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌)均有不同程度的抑制作用(见下表)。
表2鞣酸苦参碱的抗菌作用

权利要求
1.鞣酸及其苦参碱盐或其组合物在制备预防和治疗皮肤黏膜病毒性感染药物中的应用，其特征在于主要含鞣酸或其苦参碱盐或其组合物，其中鞣酸为6-100重量份，苦参碱为1-70重量份。
2.根据权利要求1的制剂，其中鞣酸为7-90重量份，苦参碱为1-20重量份。
3.根据权利要求1，其中鞣酸优选自五倍子鞣酸或有效剂量的五倍子提取物，苦参碱优选从苦参、广豆根(广西产山豆根)、或山豆根提取，或使用有效剂量的苦参、山豆根和广豆根的苦参碱提取物。
4.根据权利要求1所述的鞣酸与苦参碱生成的盐或形成的组合物用于制备预防和治疗人和动物皮肤白色念珠菌和人乳头瘤病毒感染药物的用途。
5.根据权利要求1所述的鞣酸与苦参碱生成的盐或形成的组合物用于制备预防和治疗人和动物皮肤黏膜金葡球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和病毒感染药物的用途。
6.根据权利要求1所述的鞣酸与苦参碱生成的盐或形成的组合物用于制备预防和治疗人和动物皮肤黏膜病毒感染药物的用途。
7.根据权利要求1所述的鞣酸与苦参碱形成的组合物或生成的盐用于制备预防和治疗人和动物皮肤黏膜金色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白色念珠菌和人乳头瘤病毒感染药物的用途。
8.根据权利要求1所述的鞣酸或与苦参碱形成的组合物或生成的盐用于制备预防和治疗人和动物皮肤黏膜人乳头瘤病毒引起的疾病药物的用途，包括尖锐湿疣、阴道和宫颈炎、宫颈糜烂及辅助治疗宫颈癌。
9.根据权利要求1所述的鞣酸苦参碱盐或其组合物，与皮肤用药的各种辅料配伍在制备各种制剂中的应用，可以是膏剂、凝胶剂、洗剂、片剂、栓剂、膜剂、喷剂和药学能够接受的其他外用制剂。
10.根据权利要求1所述的鞣酸苦参碱盐或其组合物，与皮肤用药的辅料卡波姆在制备凝胶剂中的应用。
全文摘要
本发明涉及鞣酸及其苦参碱盐或其组合物在制备预防和治疗皮肤黏膜感染药物中的应用，尤其是在制备预防和治疗人乳头瘤病毒感染药物中的应用，该类病毒感染包括尖锐湿疣、阴道和宫颈炎及宫颈糜烂。所述应用是将鞣酸及其苦参碱盐或其组合物与皮肤用药的各种辅料配伍制备成不同药剂。
文档编号A61P17/12GK1935145SQ20051003731
公开日2007年3月28日 申请日期2005年9月19日 优先权日2005年9月19日
发明者秦卫华, 刘元 申请人:秦卫华