专利名称：：一种含有红花黄色素b的复方制剂及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种由活性成分a):红花黄色素B,和b):白藜芦醇或白藜芦醇苷组成的复方制剂及其在心脑血管中的应用。
背景技术：
：白黎芦醇(Resveratrol)，化学名称为芪三酚，属于多酚类化合物。广泛存在于葡萄、花生和多种药用植物中，目前至少已经在21个科、31个属的72种植物中发现了白黎芦醇。对白黎芦醇生理功能的认识源于WHO的一项流行病学调查，流行病学调査资料显示，法国人血管疾病的发病率明显低于其他国家，这与其红葡萄酒的摄入量较高有关，进一步研究证实，白黎芦醇是红葡萄酒中发挥心血管保护作用的主要物质。白黎芦醇具有广泛的生物学活性，如抗癌、抗动脉粥样硬化、抗凝血、抗氧化、抗菌、免疫调节及神经保护等。对心血管方面的作用，白黎芦醇主要通过以下方面加于调节(1)减少缺血-再灌注心肌细胞凋亡，保护缺血性心肌细胞免收损伤；(2)减少低密度脂蛋白的氧化，阻断氧化性低密度脂蛋白引起动脉粥样硬化病变早期标^中脂质条纹的形成，降低人血清脂质水平；(3)抑制血栓烷的形成，同时还可降低由二磷酸腺苷(ADP)、胶原和凝血酶诱导的血小板聚集率；(4)通过抑制巨噬细胞中LPS诱导的核因子-kB而减少胞质一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的稳定状态的mRNA水平，以达到抗氧化作用。红花黄色素B为红花中的有效成分之一，对其深入的研究目前尚且较少，中国专利CN1765357A公开了红花黄色素B在心血管疾病方面的应用。
发明内容本发明公开了一种由活性成分红花黄色素B和选自白藜芦醇或白藜芦醇苷中的任一种组成的复方制剂。本发明中的复方制剂中，每一个最小单位制剂中所含红花黄色素B的剂量为5-300mg，含白藜芦醇或白藜芦醇苷的剂量为5-300mg。本发明中的复方制剂中，每一个最小单位制剂中所含红花黄色素B的剂量优选为10-200mg，含白藜芦醇或白藜芦醇苷的剂量为10-200mg。本发明中所提到的"最小单位制剂"是至每种制剂的最小分包装，如制成胶囊剂是指一个胶囊，制成片剂是至一片片剂，制成水针是指一支水针，制成粉针是指一支粉针，制成滴丸是指一个滴丸，其它制剂诸如此类推。研究中发现，将白藜芦醇或白藜芦醇苷与红花黄色素B组合在一起，在治疗心脑血管疾病方面具有很强的作用，其效价强于任何一种单一成分单独使用。本发明复方制剂中除含有有效成分外，还含有药学上可接受的其它辅料，如稀释剂、润滑剂、崩解剂、润湿剂、助悬剂、乳化剂、防腐剂、助溶剂等。本发明活性成分所制成的制剂，可以是口服制剂，如口服固体制剂、口服液，也可以是非口服制剂，如注射剂，经皮吸收制剂，经直肠给药制剂等。具体实施例以下从红花黄色素B同,藜芦醇或白藜芦醇苷合用的体内外实验来说明本发明复方在心血管方面的协同治疗作用。1、对冠状动脉结扎诱导大鼠急性心肌缺血的保护作用50只wistar大鼠，雌雄不限，体重220-250g，随机分为5组，每组10只，分别为假手术组(A组)、对照组(B组)、红花黄色素B10mg/kg组(C组)、白藜芦醇或白藜戸醇苷组15mg/kg(D组)、红花黄色素B6mg/kg+白藜芦醇或白藜芦醇苷9mg/kg组(E组)。大鼠用3%己戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉，仰卧位固定，以心电图机记录n导联心电图监测心脏情况，分离一侧股静脉供给药用。用血管钳沿第4肋间，钝性分离肋问肌，开胸，撑开第4、5肋骨，剪开心包膜，暴露心脏。将心脏挤出胸腔。在左心耳与肺动脉圆锥之间找到与左冠状动脉伴行的大静脉并使之充分暴露，在左心耳下方2mm处用3号丝线穿线，连同心大静脉一齐结扎左冠状动脉前降支。结扎前于心大静脉处放一小段细硅胶管，引线润滑。结扎冠状动脉后迅速将心脏放人胸腔，轻挤胸腔排出胸腔气体及残留血液。胸部皮肤用血管钳闭合胸腔,引线尾端留在胸外。稳定10min(稳定后心电图不正常者弃去)，缺血10min后从股静脉缓慢注射给药，20min后剪断结扎线，使前降支再灌注30min。再灌后腹主动脉取血，离心取血清，以自动生化仪测定乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酶活性(CPK)。见表l。结扎3h后立即取下心脏称重，每组取5只冷冻。在冠脉结扎线下，平行于冠状沟，将心室横切成0.1cm厚的心肌片，生理盐水冲洗后，置于0.05%氯化硝基四氮唑蓝液(N—BT)37t:恒温水浴中染色30min，染色过程中不时振摇染色液，使之与心肌充分接触，染色后立即用水冲去多余染料。正常心肌染为暗蓝色，梗死区不着色。减去梗死心肌称重计算梗死区重占全心重的百分比。每组中的另5只将心肌希^成10%组织匀浆，3000r/min离心10min后取上清液-70°(:保存，待测丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)。测定时严格按照各试剂盒说明书进行。表l对心肌缺血大鼠CPK和LDH的影响G±s)组别剂量(mg/kg)CPK(U/mL)LDH(U/L)A—30.47±7.211617.15±187.64B——54.27±8.076781.47±218.21C1037.38±7.26*5475.39±247.65*D1536.20±7.58*5519.43±281.17*E6+931.47±8.13*5219.671257.37=*=与对照组相比，*P<0.01从上表中可知，心肌缺血组的CPK和LDH水平明显高于假手术组，各治疗组的CPK和LDH水平低于对照组，差别具有显著意义(PO.01),复方组与单一成分组相比，在剂量分别低于各自单独治疗的情况下，其CPK和LDH水平较单一成分组要低，说明两成分能协调降低CPK和LDH水平。表2对心肌缺血大鼠心肌梗死面积的影响(；±s)组别剂量(mg/kg)梗死百分比(°/(0A—0B一41.27±4.58C1034.56±3.47*D1530.24士3，E6+927.59±3.26*与对照组相比，*P<0.05研究结果显示，用TUNEL法染色的阳性心肌细胞具有形态变圆或不规则，与周围组织脱离、核固縮、染色质浓聚等典型的凋亡细胞的形态特征，主要位于心肌梗死区与非梗死区交界处，而在心肌梗死区和非梗死区仅见极少数凋亡细胞。与心肌缺血对照组相比，预先给予治疗药物后，凋亡指数有不同程度的降低，差异有显著性(P0.05)，其中尤为明显的是复方组。表3对心肌缺血大鼠SOD、MDA活性的影响(；±s)与假手术组相比，#P<0.01;与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01大鼠冠状动脉结扎后，模型组大鼠血清SOD含量显著降低，MDA含量显著升高，与假手术组相比，具有显著差异(PO.Ol)，预先给予药物处理后，其血清SOD含量较模型组升高，差别有显著性(P<0.05)，复方组差异更为明显(PO.Ol)，血mg/kgSOD(imol/L固AU/mL一268.5±40.3—142.6±37.5#10217.4±39.7*15228.3±41.3*6+9260.8±41.2**5.37±0.5110.14±1.04#8.62±0.81*8.13±0.57*7.06±0.54*且自ABcDE清MDA含量较模型组降低，各组差别均有显著性。2、对局灶性永久性脑缺血损伤的保护作用Wistar大鼠24只，雌雄不限。照文献(TamuraA，GrahamDI，McCullochJ，etal.Focalcerebralischaemiaintherat;1.Descriptionoftechniqueandearlyneuropathologicalconsequencesfollowingmiddlecerebralarteryocclusion[J].JCerebBloodFlowMetab,1981,1(1)53-60)方法进行造局灶性永久脑缺血模型。大鼠以12%水合氯醛麻醉(350mg/kg，ip)，侧卧位固定于手术台上，沿右外耳道与右眼外眦连线的中点垂直于连线切开皮肤约2cm，然后在手术显微镜下沿颞肌中线依次切断颞肌和咬肌，将这些肌肉向两侧分开，暴露颧骨弓，操作时注意保护面神经和腮腺。除去颧骨弓，并沿颅骨剪开筋膜，暴露出颞前窝。在颧骨和鳞状骨前联合的前下方约2mm处钻一直径2mm的颅窗，透过硬脑膜就可见一条较直且少分支的小血管，即为中动脉(MCA)。MCA几乎垂直经过嗅束上行。用电凝电灼凝固嗅束内lmm至大脑下静脉(inferiorcerebralvein)之间的MCA。电凝时，用细分针轻挑起与嗅束交界处的MCA，尽量减少血管内血量，避免电凝不完全引起的出血，同时用湿棉球保护周围组织避免烧伤。阻断MCA后，用小块肌肉组织轻敷于颅窗上，达到止血作用，术后同笼词养。以上过程均在恒定室温进行。将造好膜的大鼠随机分为4组，分别为阴性对照组(给予给药组等同体积的生理盐水)，红花黄色素B10mg/kg组、白藜芦醇15mg/kg、红花黄色素B6mg/kg+白黎芦醇9mg/kg组，尾静脉注射给药。结果见表4表4对局灶性永久性脑缺血损伤大鼠的保护作用(；土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>大鼠局灶性脑缺血给予药物治疗后，与对照组相比，脑坏死率明显减少(PO.05),其中复方组在较低剂量即可达到白藜芦醇或红花黄色素B单独治疗的效果。3、对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的保护作用Wistar大鼠24只，雌雄不限，找文献(徐叔云，卞如濂，等.药理实验方法[M]，北京人民卫生出版社，1991,945-947.)采用四动脉闭塞法建立模型。大鼠用12%水合氯醛麻醉，在枕后暴露第一颈椎横突孔，用电凝电灼凝固双侧椎动脉，在颅骨上钻孔安置皮层脑电极，用牙托粉固定。然后在颈部作一切口分离双侧颈动脉，用l号丝线缝合伤口。术后24h、大鼠清醒时，用带硅胶管的无损伤动脉夹将双侧颈动脉夹闭，即造成4根动脉闭塞引起全脑缺血，lh后松开动脉夹。缺血期与再灌期时间均为lh。用生理记录仪记录缺血后脑电图消欠时间和恢复再灌注后脑电图恢复时间。凡缺血期内脑电图未消失或未出现严重抑制者一律剔除。对造模成功的24只大鼠，分组，分组情况及给药方式同2项。给药时间在缺血前lmin。评价指标及相应数据见表5表5对大鼠全脑缺血-再灌注损伤的保护作用(；土s)组别剂量mg/kg脑电图消失时间/s脑电图恢复时间/s脑含水量/%对照组(生理盐水)红花黄色素B白黎戸醇红花黄素素B+白藜芦醇10156+9142±85310±127*267±103*321±131*621±227120土57**143±62**103±51**肌1±1.078.4±0.6*78.7土0.5*78.1±0.6*与对照组相比，*P<0.05，**P<0.01实验结果表明，各给药组与生理盐水组相比，均能延长全脑缺血-再灌注大鼠缺血后脑电图消失时间，明显縮短脑电图恢复时间，并能明显改善大鼠脑水肿情况(P0.05，PO.Ol)，但复方组较单一成分组作用效果更为明显。下文提到的是本发明制剂配方说明性而非限定性实例1)、白黎芦醇5g红花黄色素B300g2)、白藜芦醇300g红花黄色素B5g3)、白藜芦醇10g红花黄色素B200g4)、白藜芦醇200g红花黄色素B10g5)、白藜芦醇100g红花黄色素B150g6)、白藜芦醇苷150g红花黄色素B100g7)、白藜芦醇苷150g红花黄色素B150g8)、白藜芦醇50g红花黄色素B250g淀粉700g9)、白黎芦醇10g红花黄色素B15g甘露醇400g上述组合物通过适宜的制剂工艺，加上一些适宜的药用辅料，可制成口服、非肠道、直肠或透皮给药的固体、半固体、液体、半液体、粉末、颗粒或脂质体形式。上述处方为iooo个制剂单位的原料药处方。权利要求1、一种含有红花黄色素B的复方制剂，其特征是所述复方制剂由活性成分a)红花黄色素B，和；b)白藜芦醇或白藜芦醇苷；组成。2、如权利要求1所述的复方制剂，其中每一个最小单位制剂中含红花黄色素B剂量为5-300mg，含白藜芦醇或白藜芦醇苷剂量为5-300mg。3、如权利要求2所述的复方制剂，其中每一个最小单位制剂中含红花黄色素B剂量为10-200mg，含白藜芦醇或白藜芦醇苷剂量优选为10-200mg。4、如权利要求1、2或3所述的复方制剂在制备具有预防或治疗心脑血管疾病的药物中的应用。全文摘要本发明涉及一种由红花黄色素B和白藜芦醇或白藜芦醇苷组成的复方制剂，每个最小单位制剂中，含红花红色素B为5-300mg，含白藜芦醇或白藜芦醇苷为5-300mg。本发明复方制剂具有保护缺血性心肌细胞和缺血性脑细胞免受损伤的作用，可用以制备具有预防和治疗心脑血管疾病的药物。文档编号A61K31/045GK101352430SQ20071011945公开日2009年1月28日申请日期2007年7月25日优先权日2007年7月25日发明者熊国裕申请人:北京星昊医药股份有限公司