专利名称：羊胎多肽核酸营养液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种以羊胎为原料，富多肽核酸的营养液的制备方法。
人和动物的胎盘为传统中药，含有多种具有免疫调节作用的生物活性物质，并富蛋白质、多肽、氨基酸及核酸。胎儿是一个完整的生命，除含有丰富的蛋白质、多肽、氨基酸及核酸外，还含有大量的卵磷质、不饱和脂肪酸、多种维生素和多种微量元素，更重要的是动物胚胎中含有大量的生物活性物质，对生物的生长发育、免疫调节、新陈代谢有十分重要的作用，并且胎儿中的营养物质和生物活性物质有易吸收、利用率高的优点。
在动物制品中，有些注重其生物活性，而只透析获得具有免疫活性胎盘肽，而没有利用胎盘中极为丰富的营养物质。较多的是采用高温灭菌后再提取营养成份，传统中医也是煮后用药，因而致使部分营养成分(如蛋白质、维生素等)的高温破坏和生物活性物质活性丧失。虽然有全胎盘低温冷冻干燥制品的出现，使生物活性物质和营养成分得以保留，但其吸收率和利用率不高，并且只能用于口服，而不能做成注射针剂和化妆品。同时，多数胎盘制品忽略了胎盘及胎儿中营养极高的核酸资源。
本发明的目的在于提供一种羊胎多肽核酸营养液的制备方法。它既能有效提取并保存胎盘中的生物活性物质，又能充分提取胎盘中营养丰富的蛋白质和核酸等营养物质。主要解决已有技术对有效组份和营养成份的提取不完全、损失多、吸收率少等缺点。同时，提供一种多肽基因滋补品及免疫制剂。
本发明的目的可以通过以下技术来实现营养液包括胎盘透析液、蛋白质水解液和核酸制备工艺流程如下包括生物活性物质的抽提和蛋白质水解及核酸抽提三大步骤。
1、活性物质的抽提。
(1)原料处理取1～3个月羊全胎盘(包括胎儿和胎盘)在-20℃～-40℃迅速冷冻、洗净、清理并去除结缔组织和脐带。
(2)碎胎盘组织将组织剪成小块，在匀浆器中匀浆，于-60℃～-80℃速冻，之后于15℃～30℃融化，反复冻融。
(3)活性物质的制备将上述冻融产物离心，取上述清液经透析或超滤，再用微孔滤膜过滤除菌即得含有丰富的生物活性物质胎盘转移因子。
2、蛋白水解液的制备，取上述离心所得的沉淀部分，采用酶-酸联合水解。
(1)酶水解，取沉淀加蒸馏水，煮沸消毒，无菌条件下调PH至7～8加胰酶，温度控制在36℃～42℃，酶解。
(2)上述水解物，加温煮沸后，调PH至3±0.5，高温高压水解，之后调PH值至6+0.5抽滤除去沉淀，收集清液即蛋白质水解液，其中含有各种大小的肽段及各种核酸。
3、进一步抽提核酸(1)在上述抽滤的沉淀中加入蒸馏水，充分混均，采用超声处理仪对剩余的基因组DNA进行剪切，50℃±5℃孵育，过滤去除残渣及油脂。
(2)饱和酚抽提，加同体积的饱和酚，混匀，离心分离。
(3)上述所得吸入另一干净窗口中，即得核酸溶液。
以上各提取液于低温储存待用。
本发明与现有技术相比具有的优点和积极效果1、获得的胎盘制剂，保留了胎盘中96％的天然活性成份。其中有与人体健康极为密切的SOD(见表1)2、酶-酸联合水解方法，大幅度提高了氨基酸、短肽等物质的含量，并且其中所含丰富的小分子营养物易被人体吸收。而且8种必需氨基酸占总量的百分比为42.48％(见表2)。并含有丰富的微量元素(见表3)。
3、本发获得的胎盘制剂，含有丰富的极利于吸收的核苷酸、各种大小核酸片段等核酸营养物质，是一种较好的基因营养保健品。(见表1)4、此方法科学合理，全部原料为天然物质，来源广泛，流程短，操作简单，适合于工业化生产，有较好的应用开发前景。
表1营养液的性质及主要成份项目含量性状棕色透明液体
PH值 6.8密度 1.21g/cm3氨基酸33.68mg/ml蛋白质27mg/ml超氧化物歧化酶639u/ml核酸 1.63mg/ml(1)用邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活力。
(2)定磷法测定核酸含量。
(3)蛋白质及多肽浓度测定采用Lowry法。
表2营养液各种氨基酸含量(mg/ml)氨基酸量 氨基酸量Ser 1.15Tyr 0.31ASP 3.69Ile 2.66Glu 4.36Phe 2.11Val 1.48Pro 2.69Ala 2.47Lys 3.43Met 0.90Trp 0.25Cys 0.32His 0.62Thr 1.54Leu 1.94Gly 2.23Arg 1.53氨基酸含量用Bechman 121MB氨基酸自动分析仪测定。
表3制剂中部分微量元素含量(ug/ml)元素 含量 元素 含量锰0.179 铁0.85钙0.92 铜0.18锌0.16 锗0.0047硒0.0052锂0.0016
钴 0.0067微量元素含量采用原子吸收法测定。
下面结合实施例进一步说明
1、活性物质的抽提。
(1)原料处理取1～3个月羊全胎盘(包括胎儿胎盘)在-40℃迅速冷冻，4℃生理盐水洗净、清理并去除结缔组织和脐带。
(2)碎胎盘组织将组织剪成小块，使用匀浆器，12000转5分钟匀浆5次；于-70℃速冻，之后于25℃融化，反复冻融9次。
(3)活性物质的制备将上述冻融产物在0～4℃10000rpm离心20分钟，取上清液经透析或超滤，再用0.22或0.3ul的微孔滤膜过滤除菌即得含有丰富的生物活性物质胎盘转移因子。
2、蛋白水解液的制备，取上述离心所得的沉淀部分，采用酶-酸联合水解。
(1)酶水解，取沉淀加6倍重量蒸馏水，煮沸10分钟消毒，无菌条件下调PH至7.5加胰酶(胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶)，酶用量为1∶250，温度控制在36℃左右，酶解6h。
(2)上述水解物，加温煮沸后，加HCI调PH至3左右条件下。高温高压水解3h，降至常温，之后再高温高压水解3h之后，用NaOH调ph至6左右。抽滤除去沉淀，收集清液即蛋白质水解液，其中亦含有各种大小的肽段及各种核酸。
3、进一步抽提核酸(1)在上述抽滤的沉淀中加入2倍体积的蒸馏水，充分混均，采用带有浸入尖头的超声处理仪对剩余的基因组DNA进行剪切，最大功率处理1分钟，重复5次，50℃孵育10分钟，过滤去除残渣及油脂。
(2)饱和酚抽提，加同体积的饱和酚，混匀，离心(12000rpm，4℃)15分钟。
(3)上清即得吸入另一干净窗口中，即得核酸溶液。
以上各提取液于-2℃储存待用。
本发明所得产品可用做保健品、化妆品及免疫调节剂。
权利要求
1.羊胎多肽核酸营养液的制备方法，其特征是由下述工艺步骤组成(1)活性物质抽提(a)原料处理取羊全胎，包括胎儿和胎盘，在-20℃-40℃迅速冷冻、洗净、清理并去除结缔组织和脐带。(b)破碎胎盘组织将组织在匀浆器中匀浆，于-60℃-80℃速冻，之后于15-30℃融化，反复冻融。(c)活性物质的制备将上述冻融产物离心分离，取上清液经透析或超滤，用微孔滤膜过滤除菌即得含有丰富的生物活性物质胎盘转移因子。(2)蛋白水解液的制备(a)酶水解，取上述离心所得的沉淀加水煮沸消毒，调PH值7-8加入胰酶36℃-42℃酶解；(b)上述水解物加温煮沸后，调PH值3±0.5，高温高压水解，之后调PH值至6±0.5抽滤去沉淀，收集清液即蛋白质水解液，其中含有各种肽段和核酸；(3)进一步抽提核酸(a)在上述抽滤的沉淀中加入水混均，采用超声处理仪对剩余的基因组DNA进行剪切，50℃±5℃孵育，过滤去除残渣及油脂。(b)饱和酚抽提，加入同体积的饱和酚，离心分离。上清液即得吸入另一干净窗口中，即得核酸溶液；以上各提取液于低温储存待用。
全文摘要
一种羊胎多肽核酸营养液的制备方法,将羊全胎速冻后清洗去除结缔组织和脐带;使用匀浆器匀浆后,在－60℃～－80℃速冻,于15～30℃融化,反复冻融多次,冻融物经离心,上清液经透析或超滤,除菌后得胎盘转移因子;将上述离心沉淀酶解后水解抽滤得蛋白质水解液,含有各种肽段和核酸;将上述抽滤沉淀物超声处理,经孵育后,去残渣及油脂,加入饱和酚离心,得到核酸溶液。该方法有效组份和营养提取完全,吸收率高,营养液可制成保健品,化妆品及免疫调节剂。
文档编号A61P37/00GK1298709SQ0013231
公开日2001年6月13日 申请日期2000年11月3日 优先权日2000年11月3日
发明者方武, 陈志强, 黄耀江 申请人:内蒙古草原兴发股份有限公司