专利名称：淫羊藿苷的医药新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及淫羊藿苷在预防或治疗细菌感染所致损伤及增强抗生素疗效的药物中的应用，具体地涉及淫羊藿苷在预防或治疗细菌感染引起的败血症、内毒素血症、内毒素休克及增强抗生素疗效中的药物中的应用。
背景技术：
细菌毒素分为内毒素和外毒素，内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁中类脂多糖体，位于细胞壁的最外层，生物活性十分复杂，对机体作用广泛，可激活多种炎症细胞释放炎性介质，引起炎症反应，能使脏器发生严重、复杂的病理变化，可引起休克、弥漫性血管凝血(DIC)、成人呼吸窘迫综合症(ARDS)、全身性炎性反应综合征(SIRS)和多脏器功能失常综合征(MODS)等。目前在许多疾病过程中，均可出现革兰氏阴性菌感染，如急性梗阻化脓性胆管炎、急性出血坏死性胰腺炎、大面积烧伤、肠梗阻、肝梗化、肝炎等。且革兰氏阴性菌感染率逐年上升，故治疗革兰氏阴性菌所至的内毒素血症对避免许多危重症的发生有着重要的临床意义，从而成为当今医学研究的重要课题之一。
淫羊藿苷是从淫羊藿中提取分离的活性成分，文献报道其具有治疗骨质疏松、ED、抗自由基、稳定细胞膜及抗肝损伤作用。中国专利公开文本CN1282584A中公开了淫羊藿苷具有预防或治疗性功能障碍和血管收缩的作用，但关于淫羊藿苷具有治疗或预防细菌毒素感染所致损伤及增强抗生素疗效的药物中的作用未见报道；鉴于此，本发明人通过大量的实验研究，提供了淫羊藿苷在制备治疗或预防细菌感染所致损伤、增强抗生素疗效的药物中的应用。
淫羊藿苷分子式C33H40O15，分子量676.67，熔点225～230℃，化学结构式

发明内容
本发明提供了淫羊藿苷在制备治疗或预防细菌感染所致损伤中的应用。
本发明提供了淫羊藿苷在增强抗生素疗效的药物中的应用，本发明涉及的抗生素是具有抗革兰氏阴性杆菌的抗生素，可以为β内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类或喹诺酮类。
本发明提供了淫羊藿苷在预防或治疗细菌感染所致损伤引起的败血症内毒素血症内毒素休克中的应用。
本发明提供了以淫羊藿苷为活性成分的用于预防或治疗细菌感染所致损伤增强抗生素疗效的药物组合物该药物组合物可以通过口服、注射途径给药可以以片剂丸剂颗粒剂胶囊悬浮液溶液糖浆注射剂的形式存在，注射用制剂优选冻干粉针注射用静脉乳剂本发明所提供的各种药物剂型均可以以药学常规方法制备而成。
本发明所述的淫羊藿苷在用于上述任一用途时，其使用剂量范围为50～2000mg/天，优选剂量范围为100～500mg/天。
本发明人通过下列试验证实了淫羊藿苷在治疗或预防细菌感染所致损伤及增强抗生素疗效的药物中的应用，增强抗生素疗效的药物中的应用试验例中，本文以阿莫西林作为抗生素的代表进行研究，但不限于此试验所用的淫羊藿苷按文献辛钟成，Euy Kyung Kim，田贞姬，等.淫羊藿苷对阴茎海绵体的松弛效应及其作用机制.科学通报，2001，46(6)485～9中所述方法提取分离制备，含量≥90％。
具体实施例方式制备例1淫羊藿苷注射剂制备称取1.00g淫羊藿苷，加入20ml正丁醇和30ml的丙二醇使皂苷完全融解，将0.15g盐酸丁卡因0.02g的枸橼酸加入到40ml注射用水中，使完全溶解，并将上述水溶液加入到药物溶液中，混合均匀；以硼砂和硼酸调节pH值为5.5±1.0；加入0.1％的针用活性炭85℃保温30分钟，G3垂熔玻璃漏斗过滤，0.22um的微孔滤膜过滤；滤液分装于7ml西林瓶中，每支装量2ml。或经冻干机冻干制成冻干粉针。
制备例2制备注射用淫羊藿苷乳剂

将淫羊藿苷、豆磷脂、胆固醇用乙醇溶解后加入到精制大豆油中，混合至澄明，并通过旋转蒸发或通入氮气蒸发除去醇，得到含淫羊藿苷10mg/ml和50mg/ml胆固醇的大豆油溶液。将泊洛沙姆、甘油分散至注射用水中，在高速搅拌条件下，慢慢滴加含有淫羊藿苷的磷脂、胆固醇的油溶液到分散体系中，制成粗乳剂。将所得到的粗乳剂在压力100Mpa的条件下，通过乳匀机进一步乳化，乳化结束后于115℃，30min灭菌，分装即得。
实验例1淫羊藿苷对小鼠内毒素致死的影响试验1材料淫羊藿苷注射剂按制备例1制备。
内毒素上海第二军医大学微生物教研室，批号020412。
二级昆明种小鼠，体重19～21g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
地塞米松磷酸钠注射液天津药业涟水有限公司，规格5mg，批号030825。
2方法与结果小鼠随机分为空白对照组、地塞米松组、淫羊藿苷400mg/kg组、100mg/kg组、50mg/kg组、20mg/kg组、10mg/kg组，每组20只，雌雄各半。小鼠静脉注射内毒素20mg/kg后随即静脉给药，空白对照组给予同体积的溶剂。记录48h内小鼠死亡时间、数量并计算死亡率。组间进行X2检验。
结果显示静脉给予不同剂量淫羊藿苷(10～400mg/kg)均能明显降低内毒素所致小鼠死亡(与空白对照组比较，P＜0.05或P＜0.01)。
表1淫羊藿苷对小鼠内毒素致死的影响(n＝20)

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01
实验2淫羊藿苷对内毒素菌液致小鼠死亡的影响2.1材料二级昆明种小鼠，体重19～21g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
淫羊藿苷注射剂按制备例1制备。
内毒素菌液取Ecoil菌种，置于盛灭菌的蛋白牛肉胨溶液的锥形瓶中，共制备3000mL，37℃恒温水浴，摇床振摇48小时，取出，3500转/分离心10分钟，取沉淀的菌泥，加入NS 50mL，振摇混匀，3500转/分离心10分钟，弃去上清液，菌泥加入NS 50mL，细菌破碎仪破碎细菌，每次5分钟，进行4次，破碎完毕，3500转/分离心10分钟，取上清液，即得粗制的内毒素菌液，稀释备用。
2.2方法与结果小鼠随机分为空白对照组、地塞米松组、淫羊藿苷400mg/kg组、100mg/kg组、50mg/kg组、20mg/kg组、10mg/kg组，每组20只，雌雄各半。小鼠静脉注射稀释的内毒素菌液0.2mL后随即静脉给药，空白对照组给予同体积的溶剂，记录48h内小鼠死亡时间、数量并计算死亡率。组间进行X2检验。
结果显示，结果显示静脉给予不同剂量淫羊藿苷(10～400mg/kg)均能明显降低内毒素菌液所致小鼠死亡(与空白对照组比较，P＜0.05或P＜0.01)。
表2淫羊藿苷对内毒素菌液致小鼠死亡的影响(n＝20)

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01实验3淫羊藿苷对细菌致小鼠死亡的影响3.1材料淫羊藿苷注射剂按制备例2制备。
Ecoil菌液取Ecoil菌种，置于盛灭菌的蛋白牛肉胨溶液的锥形瓶中，共制备3000mL，37℃恒温水浴，摇床振摇48小时，取出，3500转/分离心10分钟，取沉淀的菌泥，加入NS50mL，振摇混匀，3500转/分离心10分钟，弃去上清液，菌泥加入NS 50mL，即得Ecoil菌液，稀释备用。
二级昆明种小鼠，体重19～21g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
3.2方法与结果小鼠随机分为空白对照组、地塞米松组、淫羊藿苷400mg/kg组、100mg/kg组、50mg/kg组、20mg/kg组、10mg/kg组，每组20只，雌雄各半。小鼠静脉注射稀释的Ecoil菌液0.2mL后随即静脉给药，空白对照组给予同体积的溶剂，记录48h内小鼠死亡时间、数量并计算死亡率。组间进行X2检验。
结果显示，结果显示静脉给予不同剂量淫羊藿苷(10～400mg/kg)均能明显降低Ecoil菌液所致小鼠死亡(与空白对照组比较，P＜0.05或P＜0.01)。
表3淫羊藿苷对Ecoil菌液致小鼠死亡的影响(n＝20)

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01实验4淫羊藿苷对内毒素致大鼠休克的影响4.1材料淫羊藿苷注射剂按制备例2制备。
PowerLab多导生理记录仪(澳大利亚ADI-Instrument公司生产)。
压力传感器(YP200型，河北高碑店新航机电设备有限公司，规格50g)。
内毒素上海第二军医大学微生物教研室，批号020412。
Wistar大鼠，雌雄各半，体重230-260g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证SYXK(鲁)20030020。
4.2方法与结果大鼠随机分为空白对照组、地塞米松组、淫羊藿苷50mg/kg组、25mg/kg组，10mg/kg组，每组10只，雌雄各半。动物称重后以3.5％戊巴比妥钠1.0ml/kg腹腔麻醉。分离一侧颈总动脉，作动脉插管，将动脉插管的另一端连接到装有三通阀的压力传感器上，压力信号经传感器输入PowerLab多导生理记录仪，记录正常的血压，随即静脉注射内毒素5mg/kg，10分钟后静脉给药，空白对照组给予同体积的溶剂，观察给药后240min内血压(平均动脉压)的变化，组间T检验。
结果显示，静脉给予不同剂量淫羊藿苷(10～50mg/kg)在不同的时间内能显著升高由内毒素所致休克大鼠的血压(与空白对照组比较，P＜0.05或P＜0.01)。
表4淫羊藿苷对内毒素休克大鼠血压的影响(n＝10)

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01实验5淫羊藿苷对内毒素血症大鼠的影响5.1材料淫羊藿苷注射剂按制备例1制备。
内毒素上海第二军医大学微生物教研室，批号020412。
D-半乳糖胺进口分装，5g/瓶，北京化学试剂公司，批号030412。
鲎试剂试剂盒福建省福州新北生化工业有限公司，批号040430。
Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-220g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证SYXK(鲁)20030020。
5.2方法与结果大鼠随机分为正常对照组、空白对照组、地塞米松组、淫羊藿苷50mg/kg组、25mg/kg组、10mg/kg组，每组10只，雌雄各半。实验前大鼠禁食16h，不禁水。实验时经尾静脉注射D-半乳糖胺(300mg/kg)，立即经胃内灌注内毒素(20mg/kg)进行造模，随即静脉给药，正常对照组静脉注射生理盐水但不造模，空白对照组给予同体积的溶剂，各组分别于给药24小时后取血以鲎试剂产色基质法测血浆中内毒素水平。组间T检验。
结果显示，静脉给予不同剂量淫羊藿苷(10～50mg/kg)能显著降低内毒素血症大鼠血浆中内毒素水平(与空白对照组比较，P＜0.05或P＜0.01)。
表5淫羊藿苷对内毒素血症大鼠血浆中内毒素水平影响(n＝10)

与正常对照组比较，**P＜0.01；与空白对照组比较△P＜0.05，△△P＜0.01实验6淫羊藿苷对重度烧伤引起损伤大鼠的影响6.1材料淫羊藿苷注射剂按制备例1制备。
鲎试剂试剂盒(福建省福州新北生化工业有限公司，批号040430)Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-220g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，动物合格证SYXK(鲁)20030020。
6.2方法与结果大鼠随机分为正常对照组、空白对照组、地塞米松组、淫羊藿苷50mg/kg组、25mg/kg组、10mg/kg组，每组10只，雌雄各半。除正常对照组外，其余各组动物腰部以下肢体去毛，80℃热水烫伤30s，造成深II度烧伤，制作大鼠重度烧伤休克模型。24小时后取血以鲎试剂产色基质法测血浆中内毒素水平。组间T检验。
结果显示，静脉给予不同剂量淫羊藿苷(10～50mg/kg)能显著降低重度烧伤大鼠血浆中内毒素水平(与空白对照组比较，P＜0.05或P＜0.01)。
表6淫羊藿苷对重度烧伤大鼠的血浆中内毒素水平影响(n＝10)

与正常对照组比较，**P＜0.01；与空白对照组比较△P＜0.05，△△P＜0.01
实验7淫羊藿苷对抗生素的增效试验7.1材料淫羊藿苷注射剂按制备例1制备。
Ecoil菌液取Ecoil菌种，置于盛灭菌的蛋白牛肉胨溶液的锥形瓶中，共制备3000mL，37℃恒温水浴，摇床振摇48小时，取出，3500转/分离心10分钟，取沉淀的菌泥，加入NS 50mL，振摇混匀，3500转/分离心10分钟，弃去上清液，菌泥加入NS 50mL，即得Ecoil菌液，稀释备用。
阿莫西林胶囊(齐鲁制药厂，规格0.25g/粒，批号030412)二级昆明种小鼠，体重19～21g，山东省天然药物工程技术研究中心实验动物中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
7.2方法与结果小鼠随机分为空白对照组、地塞米松组、阿莫西林15mg/kg组、阿莫西林30mg/kg组、阿莫西林15mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg组、阿莫西林30mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg组，每组20只，雌雄各半，静脉注射稀释的内毒素菌液0.2mL，随即各组给药，阿莫西林灌胃给药，淫羊藿苷静脉给药，空白对照组给予同体积的溶剂，记录48h内小鼠死亡时间、数量并计算死亡率。组间进行X2检验。
结果显示，阿莫西林15mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg组作用强度明显优于阿莫西林15mg/kg组；阿莫西林30mg/kg+淫羊藿苷10mg/kg组作用强度明显优于阿莫西林30mg/kg组；提示阿莫西林联用淫羊藿苷能更加明显降低由Ecoil菌液所致小鼠死亡率。
表7淫羊藿苷对Ecoil菌液致小鼠死亡的影响(n＝20)

与空白对照组比较，aP＜0.05，aaP＜0.01；与阿莫西林15mg/kg组比较bP＜0.05；与阿莫西林30mg/kg组比较cP＜0.05；与淫羊藿苷组比较dP＜0.05.
权利要求
1.淫羊藿苷在制备治疗或预防细菌感染所致损伤中的应用。
2.淫羊藿苷在预防或治疗细菌感染所致损伤引起的败血症、内毒素血症、内毒素休克中的应用。
3.淫羊藿苷在增强抗生素疗效的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，抗生素是指具有抗革兰氏阴性杆菌的抗生素，可以为β内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类或喹诺酮类。
5.淫羊藿苷在用于权利要求1-4任一所述用途时，其使用剂量范围为50～2000mg/天。
6.根据权利要求5所述的应用，其优选剂量范围为100～500mg/天。
7.以淫羊藿苷为活性成分的用于预防或治疗细菌感染所致损伤、增强抗生素疗效的药物组合物。
8.根据权利要求5所述的药物组合物，其可以以片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊、悬浮液、溶液、糖浆、注射剂的形式存在。
9.根据权利要求6所述的药物组合物，其优选以冻干粉针、注射用静脉乳剂形式存在。
全文摘要
本发明提供了淫羊藿苷在制备治疗或预防细菌感染所致损伤中的应用，具体地涉及其在预防或治疗细菌感染所致损伤引起的败血症、内毒素血症、内毒素休克中的应用。本发明还涉及其在增强抗生素疗效的药物中的应用。
文档编号A61P31/04GK1803139SQ20051004232
公开日2006年7月19日 申请日期2005年1月10日 优先权日2005年1月10日
发明者田京伟, 孙盛茂, 蒋王林, 徐本明 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司