专利名称：一种降压片的制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种降压片的制备方法及应用。
背景技术：
降压片记载于卫生部标准WS3-B-0760-91，由黄芩200g、决明子150g、山楂150g、 槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙IOOg作为原料药制成，能降压。用于高血压。
现有技术中，尚未有降压片在提取制备方面采用超临界和微波技术的报道，而采用打粉和水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。发明内容
发明目的为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种降压片的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种降压片在制备抑制人肺腺癌801-D细胞增殖药物中的应用。·
技术方案本发明的目的是通过如下的方案实现的
—种降压片的制备方法，由黄岑200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙IOOg作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成取黄芩、地龙，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50。。，C02流量l_3ml/g生药· min,萃取时间 150-180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次48分钟，合并萃取液，浓缩，加到 DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒,干燥,压片，制成1000片，每片重O. 5g。
上述一种降压片的制备方法，所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
上述一种降压片的制备方法，所述微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。
上述一种降压片的制备方法，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C， CO2流量2ml/g生药· min,萃取时间160min。
上述降压片在制备抑制人肺腺癌801-D细胞增殖药物中的应用。
现有技术中，降压片每片O. 5g，每次2-4片，一日2次，采用本发明制备成的降压片每片O. 5g，每次仅需I片，一日服用2次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。
试验一、不同方法制备的降压片中黄芩素含量的比较
1、仪器及试药本发明降压片按实施例3方法制备，使用1150g原料药，经提取制成1000片，每片重O. 5g。原降压片，按部颁标准方法制备，使用1150g原料药，经提取制成 1000片，每片重O. 5g。Agilent 1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平；黄芩素对照品(中国药品生物制品检定所)。
2、方法
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸(40 60 :0. 2)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩素峰计算，应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取在60°C减压干燥4小时的黄芩素对照品适量，加甲醇制成每Iml含18 μ g的溶液，即得。
供试品溶液的制备取本发明降压片和原降压片，研细，混匀，取lg，精密称定，精密加入70%乙醇20ml，密塞，超声处理10分钟，离心，取上清液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
3、结果
结果表明，本发明降压片中黄芩素的含量为1. 36mg/片；而原降压片中黄芩素的含量为O. 15mg/片，在服用量减少的情况下，黄芩素含量有很大提高。
上述研究表明，采用本发明制备的降压片，有效成分含量高于部颁标准法制备的降压片。
具体实施方式
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围 仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、 地龙100g，将黄芩、地龙，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30°C，C02流量lml/g生药· min，萃取时间150min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次4分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥,压片，制成1000片，每片重O. 5g。
经检测，成品中黄芩素的含量为1. 35mg/片。
实施例2
取黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、 地龙100g，将黄芩、地龙，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50°C，CO2流量3ml/g生药· min，萃取时间 180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次8分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥,压片，制成1000片，每片重O. 5g。
经检测，成品中黄芩素的含量为1. 4Img/片。
实施例3
取黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮IOOg, 地龙100g，将黄芩、地龙，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药· min，萃取时间 160min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥,压片，制成1000片，每片重O. 5g。
经检测，成品中黄芩素的含量为1. 36mg/片。
实施例4 降压片抑制801-D细胞增殖的实验研究资料
I实验材料
1.1实验用细胞株
人肺腺癌801-D细胞，南京正宽医药科技有限公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
1. 2实验药物
研究药物本发明降压片按实施例3方法制备。
药液储液称取IOOmg降压片，溶于5ml无水乙醇中，O. 2 μ m滤器过滤,500 μ I doff管分装，-20°C存储，同时O. 2 μ m滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1. 3实验试剂
DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419);NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat. No. 11810-033 Lot. No. 1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批号2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批号:2009/10); Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批号2010242)；Streptomycin SulfateCAMRESCO 公司批号2010382);无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号080310182);MTT(Biosharp批号:0793) ;PBS (实验室自配)；
1. 4实验器材
莱卡倒置显微镜(德国Leica型号DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD 公司型号SPECTRAMAX 190) ;C02培养箱(FORMA型号3111);超净台(苏净集团安泰公司制造型号SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号S/N 020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANK)公司型号MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号 DHG9123A);冰箱(西门子公司型号KG18V21TI);液氮罐(CBS型号:2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号ΚΑ-1000) ;0. 2μπι滤器(MILLIP0RE型号SLGP033RB) ;10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
2实验方法
I) 801-D 细胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 进行常规培养(IOcm 培养皿)， 当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml O. 25%胰蛋白酶-O. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，IOOOrpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。
2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ I,培养板放入细胞培养箱中(37 °C，5%C02 )常规培养。
3)根据细胞生长情况，一般长至50%_70%，加入降压片溶液，继续培养24h。
4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 O. 5%MTT)，继续培养 4h。
5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。
7)结果以药物对细胞的抑制率表示
细胞增值抑制率(％)=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。
3统计处理
采用Microsoft Excel 2003软件中的相关 分析和Student t检验，数据以 mean + S. D.表不。
4实验结果
MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对801-D细胞增殖抑制有差异(p〈0. 05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P〈0. 01)，当剂量达到 15-20mg/ml时有极显著性差异(Ρ〈0· 001)。
表I降压片对801-D细胞增殖抑制影响研究(XiSD)
111 Wl,1! mg/nil1J-P-1r·· Ψ'· * 1,;* )OClI/I' 1ΠI I, H:..、 2 L 屮 t I L It·；1 IJi1: .‘.1fci a*, -1LH::1 丄;-ηφψ
注与对照组比较，*P〈0.01 ;**Ρ〈0· 001
5实验结论
降压片可以抑制801-D细胞增殖，减少801-D细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
权利要求
1.一种降压片的制备方法，由黄岑200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙IOOg作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成 取黄芩、地龙，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50。。，CO2流量l_3ml/g生药· min，萃取时间 150-180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到 DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒,干燥,压片，制成1000片，每片重O. 5g。
2.根据权利要求1所述一种降压片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
3.根据权利要求1所述一种降压片的制备方法，其特征在于所述微波萃取功率500W， 每次萃取6分钟。
4.根据权利要求1所述一种降压片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa,温度40。。, CO2流量2ml/g生药· min,萃取时间160min。
5.根据权利要求1所述一种降压片在制备抑制人巨细胞性肺癌细胞801-D细胞增殖药物中的应用。
全文摘要
本发明提供一种降压片的制备方法，由黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙100g作为原料药制成，采用超临界萃取和微波萃取制备而成，使得黄芩素含量有很大提高，本发明还提供了降压片在制备抑制人巨细胞性肺癌细胞801-D细胞增殖药物中的应用。
文档编号A61K36/855GK102988611SQ201210378258
公开日2013年3月27日 申请日期2012年10月8日 优先权日2012年10月8日
发明者不公告发明人 申请人:卞毓平