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一种钟花报春花提取物及其制备方法和用途的制作方法
专利名称:一种钟花报春花提取物及其制备方法和用途的制作方法
技术领域:
本发明涉及一种钟花报春花提取物,属药物领域。
背景技术:
自由基,是外层电子轨道上含有不配对电子的原子、原子团和分子的总称,包括 (1)氧自由基,如超氧阴离子自由基、羟基自由基;O)脂性自由基,它是由氧自由基和多价不饱和脂肪酸作用后生成的中间代谢产物,如烷自由基、烷氧自由基和烷过氧自由基等; ⑶其他自由基,如氯自由基、甲基自由基和NO。自由基具有强氧化性,可损害机体的组织和细胞,进而引起慢性疾病及衰老反应。研究表明,炎症、肿瘤、衰老、血液病、以及心、肝、 肺、皮肤等各方面疑难疾病的发生机理与体内自由基产生过多或清除自由基能力下降有着密切的关系。因此,降低体内自由基的损害显得尤为重要。目前,多使用自由基清除剂(又称抗氧化剂)来降低体内自由基含量。自由基清除剂是具有清除自由基作用的物质,常见的有抗氧化酶SOD、维生素E、C、硒、辅酶Q、谷胱甘肽等单体活性物质。同时,研究人员也发现,中药在清除自由基中也发挥着重要作用,如人参、 三七、丹参、女贞子、黄精、首乌、灵芝、麦冬、虎杖等单味中药材,以及生脉饮等中药复方,均具是优异的自由基清除剂。钟花报春(Primula sikkmensis Hook)是一种常见的藏药材,属于报春花科报春花属植物,以花入药,是藏药“相相直吾”其中的一种原植物。花黄色,钟状,聚生于花葶顶端,主产于西藏东部及南部、青海东南部、四川西部、云南西北部;生于海拔3750-4500米的林缘湿草地、水沟边;分布于尼泊尔、锡金、不丹、缅甸。具有清热解毒,泻肝胆火、止血等作用,还能用于心脉瘀阻、血脉不畅,疗效确切,在甘孜藏族地区广泛使用,资源十分丰富。邱建平等利用正交试验研究了从钟花报春的花中提取总黄酮的优选工艺,指出以 60%乙醇,20倍溶媒用量,回流提取3次,每次1小时,提取得到的总黄酮含量较高,提取物中总黄酮含量可达到7%左右。(邱建平,等,正交设计优化钟花报春花总黄酮提取工艺,成都医学院学报,2009年4卷4期)。目前,还未见将钟花报春花总黄酮的用于清除自由基的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种钟花报春花提取物。本发明的另一目的是提供该提取物的制备方法和用途。本发明提供了一种钟花报春花提取物,该提取物中总黄酮的含量以芦丁计不得低于 50% w/w。其中,所述的钟花报春花提取物来源于报春花科报春花属植物钟花报春!Simula sikkimensis Hook的花的提取物。进一步地,该提取物中总黄酮的含量以芦丁计为50-60% w/w。更进一步地,该提取物中总黄酮的含量以芦丁计为50-55% Wi
本发明还提供了一种制备上述提取物的方法,它包括如下步骤(1)取钟花报春花,以50-95% V/V乙醇提取,合并提取液备用;(2)将步骤(1)中的提取液回收乙醇后,用正丁醇萃取,将正丁醇层回收正丁醇后,上大孔吸附树脂,先用水洗脱至不发生三氯化铁反应和盐酸镁粉反应,再用30% -95% 的乙醇洗脱,收集洗脱液,回收溶剂后,干燥,即得钟花报春花提取物。进一步地,步骤(1)中采用50-70% V/V乙醇提取;步骤O)中选用30-40% V/V 乙醇进行洗脱。进一步优选地,步骤⑴中采用60% V/V乙醇提取;步骤⑵中选用30% V/V乙醇进行洗脱。更进一步优选地,步骤⑴中采用60% V/V乙醇提取3次。步骤⑵中选用30% V/V乙醇进行洗脱,洗脱至不发生三氯化铁反应和盐酸镁粉反应。本发明还提供了上述钟花报春花提取物在制备自由基清除剂中的用途。进一步地,所述自由基清除剂为超氧阴离子自由基清除剂、羟基自由基清除剂、 DPPH自由基清除剂。本发明还提供了一种抗氧化的保健品或/和药物组合物,它是由上述的钟花报春花提取物为活性成分,加上药学上常用的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。本发明钟花报春花提取物对超氧阴离子自由基、羟自由基、DPPH自由基均具有良好的清除能力,表明钟花报春花提取物具有良好的抗氧化作用,为抗氧化的保健品或/和药物提供了一种新的选择。
具体实施例方式实施例1本发明钟花报春花提取物的制备取干燥的钟花报春花粗粉,加入20倍量60%乙醇浸泡后,加热回流提取3次,每次 lh,趁热抽滤,合并滤液,减压回收至无醇味后,加入适量蒸馏水后,用正丁醇萃取,减压回收正丁醇溶液至无正丁醇味后,加入适量蒸馏水溶解,过滤后,滤液上经预处理的DlOl大孔吸附树脂,先用蒸馏水洗脱至不发生三氯化铁反应和盐酸镁粉反应,然后用30%乙醇洗脱,收集洗脱液,直至不发生三氯化铁反应和盐酸镁粉反应,合并洗脱液,回收溶剂后,干燥即得钟花报春花提取物,其中,总黄酮以芦丁计含量为52. 5%。本发明钟花报春花提取物的制备方法不限于实施例中所述的方式,现有的黄酮提取方法均能用于对钟花报春花提取物的提取,如碱水提取等;对总黄酮的精制也可采用其他型号的大孔吸附树脂进行精制,洗脱溶剂除采用乙醇以外,也可以采用弱碱溶液进行洗脱,也可提高黄酮含量。实施例2钟花报春花提取物制备方法的筛选1.总黄酮含量测定方法1.1对照品溶液的制备取芦丁对照品0. 01006g,置于50ml容量瓶中,加60 %乙醇定容至刻度,制得浓度为0. 2012mg/ml的对照品溶液,备用。1.2样品溶液的制备按照各制备方法制备得到的浸膏转移至IOOml容量瓶中,并定容至刻度,从此溶液中精密移取IOml于IOOml容量瓶中,并用60%乙醇定容至刻度,即制得样品溶液,备用。1.3测定波长的确定精密移取对照品溶液7ml和供试品溶液2ml,分别置于2支25ml容量瓶中,均加入 60 %乙醇稀释至7ml,混勻,加5 %亚硝酸钠溶液Iml,摇勻,放置6min,再加10 %硝酸铝溶液 lml,摇勻,放置6min,加氢氧化钠溶液10ml,再加60%乙醇至刻度,摇勻,放置15min,以相应试剂为空白,照紫外可见分光光度法(《药典》05年版附录VA),在200-800nm进行扫描, 测得对照品溶液和样品溶液的最大吸收波长分别为506. 5Inm和498. 67nm。两者的最大吸收波长接近,因此确定506nm为测定波长。1.4标准曲线的制备精密量取对照品溶液(0.2012mg/ml) 0. 0ml, 1. Oml,2. Oml,3. Oml,4. Oml,5. Oml,
6.Oml,7. Oml,分别置于25ml容量瓶中,各加60 %乙醇至7. Oml,加5 %亚硝酸钠溶液 (0. 050g/ml) 1. 0ml,摇勻,放置 6min,再加 10%硝酸铝溶液(0. 09972g/ml) 1. 0ml,摇勻,放置6min.加氢氧化钠试液(0. 04308g/ml) 10ml,再加60%乙醇至刻度,摇勻,放置15min,以相应试剂为空白,找紫外可见分光光度法(《药典》05版附录VA),在506nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。求得的标准曲线方程为Y = 12. 785X-0. 001 R2 = 0. 9992。1.5样品液的测定从供试品溶液中精密移取細1于1支25ml容量瓶中,然后用60%乙醇溶液稀释至
7.0ml,然后按照对照品溶液的显色方法显色。精密量取60%乙醇細1,作为空白对照,后续显色处理同上述对照品。在506nm处测定吸光度A,由标准曲线的回归方程计算总黄酮含量。2、本发明钟花报春花提取物的提取方法考察2. 1单因素方法考察本实验以不同乙醇浓度为考察因素,以钟花报春中总黄酮得率为考察指标,筛选钟花报春中总黄酮的最佳提取工艺条件。2. 1. 1仪器与材料(1)仪器与试药UV-2500 型紫外-可见分光光度计 PerkinElmer Lambda 35UV/VISSpectrometer ; 热回流装置,超声仪,R-201旋转蒸发器(上海申顺生物科技有限公司),DZF-6021型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司),瑞士 PAG-160A电子天平,FAl 104电子天平(上海精天电子仪器厂),电子恒温不锈钢水浴锅(上海宏兴机械仪器实业制造公司),DGG-9140B电热恒温鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司),SHE-III循环水真空泵(上海亚荣生化仪器厂),芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用,批号为10080-200707), 95 %乙醇,90 %乙醇,80 %乙醇,70 %乙醇,60 %乙醇,5 %亚硝酸钠溶液;10 %硝酸铝溶液; 4. 3%氢氧化钠溶液以上试剂均为分析纯。实验用水系重蒸水。(2)实验药材钟花报春花由重庆中药研究所涂永勤博士鉴定为钟花报春!Simula sikkimensis Hook 的干燥花。2. 1. 2方法与结果
(1)总黄酮的提取取I号内钟花报春花适量于托盘内铺开,同时取II号内钟花报春花适量于另一托盘内铺开,一起放入烘箱中,30°C干燥过夜。将烘干的药材快速地用打粉机打成粗粉,然后平铺于托盘中,置于烘箱中30°C干燥一定时间(约2小时)然后用袋子封装好置于干燥器中保存备用。分别精密称取I号药材粉末5. 000g, 4. 998g,4. 998g,4. 996g,4. 997g,置于5 支250ml洁净的圆底烧瓶中,分别加入IOOml的95%,90%,80%,70%,60%乙醇浸泡药材 30分钟。分别精密称取II号药材粉末4. 997g,5. 000g, 4. 998g,4. 999g,5. 002g,置于5支 250ml洁净的圆底烧瓶中,然后同I号药材粉末一样处理。将I号和II号中每两个所用乙醇浓度相同的样品置于同一水浴锅中回流提取2小时,60 %,70 %,80 %,90 %,95 %乙醇的水浴温度分别为86°C,85°C,84. 5°C,83. 5°C,82. 5°C,然后分别趁热抽滤,滤渣再加IOOml 同第一次提取的溶剂回流提取2次,每次1小时,然后合并滤液备用。(配制不同浓度乙醇温度为18°C )。洗10个大小基本一致的蒸发皿,置减压干燥箱中减压60°C干燥过夜备用。 蒸发皿减压干燥后分别精密称重,重量如下所示表1不同乙浓度干燥后的重量
I 95% I 90% I 80%I 70% I 60%1195% 1190% II80% 1170% 1160%蒸发皿重(g)41. 991 38. 164 45.574 43. 516 41,.417 40. 902 45. 957 43. 518 45. 933 45. 178将各自合并的滤液分别减压浓缩(旋转蒸发仪浓缩是的水浴温度为50°C )到一定程度,然后转移至相应的蒸发皿中,60°C水浴挥干,然后将含浸膏的蒸发皿置减压干燥器中 60°C减压干燥过夜。含浸膏的蒸发皿经压干燥后,精密称定各含膏蒸发皿总重,结果如下表所示表 2
I 95%I 90%I 80%I 70%I 60%1195%1190%II80%1190%II60%蒸发皿重41.99138.16445.57443.51641.14740.90245.95743.51845.93345.178(g)含膏蒸发43.24239.60747.22945.20443.05842.45847.70145.46248.01747.302皿重(g)浸膏重(g)1.2511.4431.6551.6881.6411.5561.7441.9442.0842.124由上表数据经处理得“不同浓度乙醇提取浸膏情况”,结果表明60%乙醇提取的浸
膏量最多。各浸膏用各自的提取溶剂溶解并定容于IOOml容量瓶中,并超声处理,使其全部溶解,放冷至室温,备用。2. 1.3样品液的测定分别从供试品溶液I 95%,90%,80%, 70%,60%, 1195%,90%,80%, 70%,60% 中精密移取7ml, 5ml, 4ml, 4ml, 7ml, 5ml, 5ml, 4ml, 4ml于10支25ml容量瓶中,然后分别用各自相应浓度的乙醇溶液稀释至7ml,然后按照对照品溶液的显色方法显色。然后以各自试剂为空白对照,分别在500nm和506nm处测定吸光度A,结果如下表所示
表3各样品吸光度情况
权利要求
1.一种钟花报春花提取物,其特征在于该提取物中总黄酮的含量以芦丁计不得低于 50% w/w。
2.根据权利要求1所述的提取物,其特征在于该提取物中总黄酮的含量以芦丁计为 50-60% w/w。
3.根据权利要求2所述的提取物,其特征在于该提取物中总黄酮的含量以芦丁计为 50-55% w/w。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的提取物,其特征在于所述的钟花报春花提取物来源于报春花科报春花属植物钟花报春!Simula sikkimensis Hook的花的提取物。
5.一种制备权利要求1-4任意一项所述的提取物的方法,它包括如下步骤(1)取钟花报春花,以50-95%V/V乙醇提取,合并提取液备用;(2)将步骤(1)中的提取液回收乙醇后,用正丁醇萃取,将正丁醇层回收正丁醇后,上大孔吸附树脂,先用水洗脱至不发生三氯化铁反应和盐酸镁粉反应,再用30% -95%的乙醇洗脱,收集洗脱液,回收溶剂后,干燥,即得钟花报春花提取物。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于步骤⑴中采用50-70%V/V乙醇提取; 步骤O)中选用30-40% V/V乙醇进行洗脱。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于步骤⑴中采用60%V/V乙醇提取;步骤 ⑵中选用30% V/V乙醇进行洗脱。
8.权利要求1-4任意一项所述的钟花报春花提取物在制备自由基清除剂中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途,其特征在于所述自由基清除剂为超氧阴离子自由基清除剂、羟基自由基清除剂、DPPH自由基清除剂。
10.一种抗氧化的保健品或/和药物组合物,其特征在于它是由权利要求1-4任意一项所述的钟花报春花提取物为活性成分,加上药学上常用的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
全文摘要
本发明提供了一种钟花报春花提取物,该提取物中总黄酮的含量以芦丁计不得低于50%w/w。本发明钟花报春花提取物对超氧阴离子自由基、羟自由基、DPPH自由基均具有良好的清除能力,表明钟花报春花提取物具有良好的抗氧化作用,为抗氧化的保健品或/和药物提供了一种新的选择。
文档编号A61P39/06GK102423324SQ20111042861
公开日2012年4月25日 申请日期2011年12月20日 优先权日2010年12月20日
发明者张旭, 彭腾, 李鸿翔, 贺钢民, 邓赟, 邱建平 申请人:成都中医药大学
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