专利名称：用于治疗心脑血管疾病的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗心脑血管疾病的药物组合物，具体地说是涉及包含银杏黄酮和三七总皂苷为活性成分的新颖药物组合物。
背景技术：
银杏及其提取物在心脑血管疾病的治疗中具有显著疗效(陈维洲等，中国新药与临床杂志，1999，18(5)315；郭海平等，天津药学，2001，13(3)62-64)。研究表明，银杏提取物可与其他活性物质联用，并呈现出一定的协同作用(黄雄伟等，中成药，2002，24(9)686-688；张水源，福建中医学院学报，2001，11(3)10-12)。近年来，银杏提取物联合三七提取物在治疗心脑血管疾病方面的应用引起了人们的关注(屈汉寅，中医研究，2001，14(5)24-25；陈小红，湖北中医杂志，2002，24(5)27)。
银杏提取物(EGb)中的主要活性物质为银杏黄酮(Ginkgo Flavone Glycosides)和银杏内酯(Ginkgolides)，而三七提取物的主要活性成分是三七总皂苷(Panax Notoginoside，PNS)。在一些已公开的技术文献中(例如，CN1240654A、CN1129118A或CN1262103A)，虽然涉及了同时包括这两类提取物以及其他活性成分的方案，但是针对多靶点复方制剂的复杂的整合调节作用规律并没有作出明确的教导，因此目前市场上并没有同时含有这两类提取物的产品。在临床实践中，通常是分别施用含有上述提取物的制剂。
上述状况与这两类提取物的自身理化特性有密切关系。银杏叶提取物制剂主要采用EGb761标准(DE2117429A)，其中还包含有机酸、烷基酚和烷基酚酸、甾体化合物及微量元素等复杂化学成分。此外，银杏黄酮本身理化性质给药用制剂的制备和质量控制带来了一定的难题。为此，制剂专家提出一些解决方案，例如，在注射剂中加入特定溶剂(CN1298738A)，或者制备银杏黄酮的包裹体等。然而，常规的银杏黄酮制剂均存在一定质量问题，例如溶解度差、稳定性不佳、溶剂刺激性以及色泽易变化等。
至于三七提取物，其有效成分三七总皂苷具有引湿性而易使胶囊剂受潮变软影响崩解效果，其口服剂型在水性介质中的溶解较慢，并且在溶解过程易发粘、结块，再溶解比较困难，很难在心脑血管疾病的治疗中取得理想效力，因此临床上主要是使用其注射剂(例如血塞通)，但是注射剂也存在一定的稳定性问题(例如变色、结晶沉淀和冬天易结冰等)。制剂专家也对此进行了一定的改良，例如将其制成软胶囊(CN1228960A)或粉针剂(CN1157720A)等。
鉴于两类提取物的上述理化特性差异，对于本领域普通技术人员而言，当银杏提取物与三七提取物联用时，其复方制剂的其他质量问题更是难于预料，而且在已有技术中也未发现相关解决方案的明确教导。另外，针对二者联用在治疗心脑血管疾病的不同病症中的最佳比例阈，以及特定比例下最终制剂的稳定性等问题，已有技术也未能为生产及应用提供科学的依据。
因此，非常需要将上述两种提取物制成具有良好稳定性和溶解性的药物组合物，它可提高所述药物的临床功效和/或效力，并使上述缺点最小化或受到抑制。

发明内容
本发明的一个目的是提供疗效显著、副作用低的药物组合物。所述组合物包括治疗有效量的活性成分——银杏黄酮和三七总皂苷。在以下描述中，所述“银杏黄酮”是指按国际标准制备的银杏黄酮，而“三七提取物”是指三七总皂苷。本领域技术人员可根据实际情况容易地确定活性成分的用量，例如约占组合物总重的1-85％，优选为20-65％。
本发明的另一个目的是提供上述药物组合物在制备用于治疗心脑血管疾病的药物中的应用。银杏黄酮与三七总皂苷具有相似的药理作用(但机制可能不同)，例如均可改善心肌缺血、对缺血性脑损伤有保护作用、抑制血小板聚集、增强红细胞的变形能力、抑制红细胞的聚集、降低血液粘度、改变血液流变学以及具有降血脂等功能。值得注意的是，银杏黄酮具有高度专属性抗血小板活化因子(PAF)的作用，另外它还具有明显的增强免疫功能的作用；而PNS作为选择性的慢钙通道阻滞剂，具有明显抗心律失常作用。它能降低增高的血压但对正常血压影响较小，能缓解小动脉的痉孪，这可能与其能减轻细胞内Ca2+过负荷有关。另外，银杏黄酮可使已聚集的血小板有解聚作用，因此还具有溶栓作用。上述机理为本发明药物组合物中两种活性成分所取得的协同作用提供了有力的生理学和药理学基础。先导性试验证实，本发明药物组合物的效力显著强于单味药物。同时，我们还惊奇地发现，二者不同配比(例如1∶10-10∶1)与效应之间的关系是非线性的，例如，在以银杏黄酮为主效应的范围内(例如流变学、抑制血小板聚集和粘性、改善心肌缺血等方面)，药效并不总是随着银杏黄酮的增加而表现出更强的态势，推测这可能与二者存在多靶点效应有关。经过深入研究，我们进一步确定了银杏黄酮与三七总皂苷的重量比例为1∶10-10∶1，优选为1∶5-8∶1，更优选为1∶1-5∶1。
在一方面，本发明提供具有良好稳定性和生物利用度的药物组合物，所述药物组合物可制成供口服给药的任何剂型，例如颗粒剂、片剂、胶囊剂、干凝胶剂、滴丸以及微丸等维持治疗时便于施用的剂型。
在制备药物颗粒的过程中，通常要加入有机溶剂、助溶剂或表面活性剂来促进药物的溶解。然而，已有技术中并未教导适于同时增溶并稳定这两类活性成分的药用赋形剂。在制备本发明颗粒剂的过程中，适宜的表面活性剂或药用高分子包括但不限于聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、吐温-80、吐温-20、1，2-丙二醇、丙三醇、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆、卵磷脂、氨基酸(例如精氨酸、组氨酸和赖氨酸的盐酸盐)或它们的混合物，优选为吐温-80、1，2-丙二醇、丙三醇、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆或它们的混合物。也可制成由磷脂复合物或环糊精包合物构成的颗粒。上述制得的颗粒也可进一步制成片剂、胶囊剂、微丸。
在制备片剂的过程中，可采用常规的制剂技术和药用辅料。另外，由于两种活性成分的理化特性明显不同，因此很容易出现活性成分在最终制剂中分散不均匀、尤其是分离的现象，这对于制备均匀片剂而言是不利的，同时也不利于获得适宜的口服生物利用度。本发明人发现，在最初混合物中加入特定辅料，在改善药物粒子的同时，显著地改善了活性成分的混合均匀性，降低了活性成分的分离。所述辅料包括但不限于微晶纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钙、碳酸钙、淀粉、十二烷基硫酸镁、聚乙二醇4000和聚乙二醇6000。有利地，所述片剂也可进一步做包衣处理。
为了减少用药次数并提高制剂的生物利用度，本发明还提供缓控释制剂。除了含有阻滞剂之外，本发明缓控释制剂还含有改善银杏黄酮溶解性能的药用赋形剂，例如卵磷脂、聚乙二醇(例如PEG4000或PEG6000)、聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基甲基纤维素、泊洛沙姆、β-环糊精、吐温-80、十二烷基硫酸钠、pH调节剂(例如磷酸盐、氨基酸盐、柠檬酸盐或酒石酸盐等)。所述阻滞剂包括但不限于羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、卡波普、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素或海藻酸钠等。
在一个实施方案中，将本发明药物组合物制成了分散片剂型。有利地，为了确保两种活性成分在适宜时间内迅速地均匀崩解，可采用特定崩解剂，例如羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素或它们的混合体系。适于本发明的稀释剂包括预胶化淀粉、微晶纤维素、乳糖、羟丙纤维素、甘露醇或它们的混合体系。有利地，本发明分散片中也可加入表面活性剂(例如吐温-80、十二烷基硫酸钠、磺基丁二酸二辛酯钠、泊洛沙姆)，以促进崩解作用。另外，还可加入助流剂(例如微晶纤维素、微粉硅胶)，它一方面可改善颗粒和粉末的流动性，另一方面也利于水分渗入片剂，促进片剂的崩解和药物的溶出。
在另一个实施方案中，将本发明药物组合物制成了利于老年人和吞咽困难患者的口服干凝胶剂。该干凝胶剂在使用无需加热，与定量水性溶液混合即可形成粥样凝胶。所用的胶凝剂应保证在低于40℃、优选室温的情况下加水迅速形成凝胶。所述胶凝剂包括但不限于预胶化淀粉、磷酸淀粉钠、卡波普、角叉菜胶、果胶、低取代羟丙纤维素、羧甲基纤维素钠、微晶纤维素等，优选采用预胶化淀粉或者羧甲基纤维素钠与微晶纤维素的混合物。任选地，所述干凝胶剂中还包括粘合剂、湿润剂、表面活性剂等药用辅料在制备胶囊剂、尤其是软胶囊剂的过程中，兼顾两种活性成分不同的溶解性，混悬介质或溶剂可选用液态聚乙二醇、吐温-80、液态石蜡油、植物油(例如大豆油、花生油、橄榄油、茶油等)或者它们的混合体系。有利地，还可加入表面活性物质(例如卵磷脂)或蜂蜡，它们一方面可使PNS混悬于其中，另外还可稳定银杏黄酮。在一个实施方案中，将提取物与环糊精混合，任选冻干后，混悬于(油性)基质中制成软胶囊。所述环糊精优选为β-环糊精、更优选为羟丙基β-环糊精。有利地，为了进一步改善银杏黄酮的溶解性，可向颗粒中加入具有增溶性能的聚山梨酯表面活性剂(例如吐温-80)、聚乙二醇类(例如聚乙二醇400)，以及能促进活性成分胃肠道吸收的多元醇类(例如木糖醇、肌醇、乳糖醇、甘油或丙二醇)或者它们的混合体系。
在本发明的另一方面，还可将所述药物组合物制成注射剂型，这包括注射液、大输液和冻干粉针剂。为了避免溶剂的不良影响，本发明制剂中尽量不采用药用有机溶剂，因此在这种情况下，要着重解决注射液的稳定性和溶解性问题，适于本发明的药用赋形剂包括但不限于吐温-20、吐温-80、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、1，2-丙二醇、丙三醇、羟丙基β-环糊精、低分子右旋糖苷、氨基酸(例如精氨酸、组氨酸和赖氨酸的盐酸盐)或它们组成的混合体系。优选为聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、羟丙基β-环糊精、吐温-80或它们的混合体系。本发明人惊奇地发现，在制备冻干粉针剂的过程中，向药物组合物中加入上述药用赋形剂，还可解决活性成分在重建过程中溶解不充分的问题，即可促进活性成分溶解而迅速重建成澄清溶液。
有利的是，注射剂中还可任选加入药用稳定剂和/或pH调节剂，以进一步改善活性成分的溶解度和稳定性。所述稳定剂包括但不限于L-半胱氨酸、烟酰胺、泊洛沙姆或它们的混合物。所述pH调节剂包括但不限于各种磷酸盐缓冲液、盐酸、氢氧化钠或它们的混合物。有利地，本发明冻干粉针剂中还可加入药用冻干赋形剂。优选地，所述赋形剂选自甘露醇、山梨醇、氯化钠、葡萄糖、果糖、蔗糖、木糖醇、乳糖、氨基酸或它们的混合物，优选为甘露醇。
药效学实验试验药品本发明复方冻干粉针剂；银杏黄酮注射液(德国威玛舒药厂)；三七注射液(昆明制药股份有限公司)。
上述药物以重蒸馏水溶解稀释，按1∶0.5的间距设置多个剂量组。
1.对兔离体血管环的舒张作用按龙超良等的方法(中国药理学通报.1997；13308-311)，对日本大耳白家兔(体重2.5-3.5kg)的胸主动脉进行处理。选择内皮完整的血管环，加入不同剂量的药物，观察药物对去甲肾上腺素(NE)预收缩后血管环的最大舒张作用及EC50值。以血管最大收缩为100％，计算药物对血管的舒张程度。
表1结果表明，本发明制剂对内皮完整的离体血管环具有剂量依赖性的舒张作用。本发明制剂通过协同作用使其舒张血管的作用得到增强。
表1 药物对离体血管环的舒张作用(n＝8 X±SD)


注a与银杏组比较p＜0.05，b与三七组比较p＜0.05，c与银杏黄酮组比较p＜0.05，d与三七总皂苷组比较p＜0.05。
表1结果表明，本发明制剂对内皮完整的离体血管环具有剂量依赖性的舒张作用。本发明制剂通过协同作用使其舒张血管的作用得到增强。
2.对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用取SD大鼠(体重280±38)，经结扎冠状动脉左前降支(LAD，10min)、再灌注(30min)处理(徐叔云等主编.药理实验方法学(第3版).人民卫生出版社.20011052)。其中假手术组冠状动脉LAD处穿一丝线，但不结扎；损伤对照组结扎冠状动脉LAD，造成心肌缺血再灌注损伤。于损伤时腹腔注射受试药物1g/kg。
于再灌注30min后的时相点，断头处死大鼠，取血并分离血清，测定磷酸肌酸激酶(CPK)及乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)含量。取血后迅速取出心脏并测定心肌梗死区面积(IS)。梗塞面积百分率＝心肌梗塞区面积/心肌总面积×％。结果如表2所示。
本发明制剂能使心肌缺血再灌注后心肌酶谱、SOD和IS显著降低，并且其对心肌缺血再灌注损伤的保护作用显著强于单独施用的银杏黄酮或三七总苷组。
表2 药物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响(n＝8，X±SD)

注*与模型组比较，p＜0.05，**与模型组比较，p＜0.01，与银杏内酯组比较，▲p＜0.05，▲▲p＜0.01，▲▲▲p＜0.001，与三七皂甙比较，Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01，ΔΔΔp＜0.001。
表2结果表明，本发明制剂能使心肌缺血再灌注后心肌酶谱、SOD和IS显著降低，并且其对心肌缺血再灌注损伤的保护作用显著强于单独施用的银杏内酯或三七总皂苷组。
3.对正常家兔血小板聚集性的影响取新西兰兔(体重2.5-3.5kg)耳缘静脉注射给药5天，颈总动脉放血，制备富血小板血浆(PRP)和贫血小板血浆(PPP)，以ADP诱导，采用比浊法测定血小板聚集率，按照下述公式计算血小板聚集抑制率聚集抑制率(％)＝(最大聚集率对照组-最大聚集率给药组)/最大聚集率对照组×100％表3 药物对正常家兔血浆血小板聚集性的影响(n＝8)

注*与对照组比较，p＜0.05，**与银杏组比较p＜0.05；▲与银杏内酯比较p＜0.05；△与三七总皂甙比较p＜0.05。
4.对正常小鼠非特异性和特异性免疫功能的影响按常规方法(徐叔云，药理实验方法学.人民卫生出版社，1991.286-288.)进行网状内皮系统吞噬功能试验，昆明系小鼠(体重18-22kg)均按0.5g/kg的剂量连续ip给药10天(对照组给予同体积生理盐水)。
按常规方法(李仪奎，中药药理实验方法.上海科技出版社，1991.155-160)进行溶血素含量试验，计算HC50并测OD值。
表4 药物对小鼠免疫功能的影响(n＝10)

注*与对照组相比p＜0.05，**与对照组相比p＜0.01制剂实施例实施例1片剂

工艺示例取活性成分、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和微粉硅胶，置于V型混合器中混合15-25分钟，过筛整粒。加入硬脂酸镁，充分混匀，压片。所得片剂可进一步包衣实施例2分散片

工艺示例取上述原辅料分别过100目筛，然后置于混合器中混合均匀，制粒并干燥，整粒后压片。也可取原辅料混合均匀后直接压片。
实施例3滴丸剂

工艺示例取PEG6000加热熔融，加入三七总皂苷、泊洛沙姆和硬脂酸，待完全熔融后，搅拌下加入银杏黄酮。将混合物滴入液体石蜡冷凝液中成丸。
实施例4口服干凝胶剂

工艺示例取预定量的活性成分、乳糖和预胶化淀粉，置于制粒机中。于约100rpm搅拌10分钟，再以200rpm搅拌10分钟。继续搅拌下加入粘合剂组合物，接着搅拌至颗粒完全形成。收集并干燥颗粒，获得本发明干凝胶剂。
实施例5软胶囊剂

工艺示例将蜂蜡溶解于聚乙二醇中，搅拌下加入三七总皂苷，加热至溶解，冷却至室温后加入银杏黄酮，注入胶体磨中研磨均匀，所得混悬液放置。取上述药液与胶皮溶液，压丸，干燥即得。
实施例6注射液

工艺示例将银杏黄酮加到含Na2HPO4的注射用水中，搅拌完全溶解。加入三七总皂苷、L-赖氨酸和烟酰胺，搅拌溶解，调节PH约为6.8-7.8，然后过滤除去不溶物。加入适量活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭、精滤、灌封、灭菌，即得。
实施例7粉针剂


工艺示例取银杏黄酮加到含精氨酸盐酸盐的注射用水中，加热溶解，加入三七总皂苷、木糖醇，充分搅拌使溶解，调节PH，冷却至室温后过滤除去不溶物。加入适量活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭、过滤，无菌分装于西林瓶中，送至冷冻干燥箱内冷冻干燥，在箱内压塞加铝盖。
权利要求
1.银杏黄酮和三七总皂苷的药物组合物在制备用于治疗心脑血管疾病的药物中的应用，其中活性成分银杏黄酮与三七总皂苷的重量比例为1∶10-10∶1。
2.如权利要求1的应用，其中银杏黄酮与三七总皂苷的重量比例为1∶5-8∶1。
3.如权利要求1的应用，所述银杏黄酮与三七总皂苷的重量比例为1∶1-5∶1。
4.一种复方药物组合物，包括银杏黄酮、三七总皂苷以及药用赋型剂，其中银杏黄酮与三七总皂苷的重量比例为1∶10-10∶1。
5.如权利要求4的复方药物组合物，其中银杏黄酮与三七总皂苷的重量比例为1∶5-8∶1。
6.如权利要求4的复方药物组合物，其中银杏黄酮与三七总皂苷的重量比例为1∶1-5∶1。
7.如权利要求4-6之一的复方药物组合物，所述的药用赋形剂选自至少一种以下物质卵磷脂、聚乙二醇、聚山梨酯表面活性剂、聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基甲基纤维素、泊洛沙姆、卡波姆、β-环糊精、十二烷基硫酸钠、pH值调节剂、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、多元醇、低分子右旋糖苷、氨基酸。
8.如权利要求7之一所述的复方药物组合物，为选自颗粒剂、普通片剂、缓释片剂、分散片、胶囊剂、微丸、口服干凝胶剂或滴丸的口服剂型。
9.如权利要求7所述的复方药物组合物，为选自注射液、大输液、粉针或冻干粉针剂的剂型。
全文摘要
本发明提供用于治疗心脑血管疾病的药物组合物，其中包括活性成分银杏黄酮和三七总皂苷。本发明还公开了采用所述药物组合物制成的多种剂型。
文档编号A61K9/48GK1742764SQ200510112969
公开日2006年3月8日 申请日期2005年10月18日 优先权日2005年10月18日
发明者闫彬, 吴磊 申请人:闫彬