专利名称：南湖菱壳提取物在制备保肝护肝药物方面的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于制药领域，涉及一种南湖菱壳提取物及其提取方法，该南湖菱壳提取物具有保肝护肝作用。可用于制备保护急性肝损伤类药物。
背景技术：
肝损伤是由多种病因引起且有多种因素参与的复杂过程。肝损伤引发的肝脏疾病已成为常见病、多发病，更为严重的是其引发的肝功能衰竭和肝性脑病等，发病率和死亡率高，极大地威胁着人类的健康。很多因素可引起肝损伤，体内模型特别是化学性肝损伤模型，在形态学、病理生理学的某些方面与人慢性肝病较为相似。腹腔注射CCl4植物油溶液是目前常用的肝炎模型。CCl4引起肝损伤的机制是CCl4在肝微粒体细胞色素P450激活下生成自由基CC13·及Cl·，这些自由基可与肝细胞内大分子发生共价结合，也可攻击膜下不饱和脂质，引起脂质过氧化，使肝细胞损伤，细胞质内GPT、GOT渗入血液，结果血清中GPT、 GOT的活性升高，SOD活性及MDA含量常可反映体内脂质过氧化反应程度，间接反映机体组织、细胞损伤的程度。通过检测小鼠肝勻浆中的SOD活性及MDA含量可反映出药物对肝细胞的保护作用。因此本申请以血清GPT、GOT、肝组织SOD活性及MDA含量作为指标来探讨南湖菱壳提取物对肝损伤的保护作用。目前，肝损伤的治疗方法有很多，虽然均有一定的疗效，但也存在着明显的不足。 首先，西药具有较大的毒副作用，且疗效并不确切。其次，实验和临床研究证实，中药在抗菌抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循环、调节免疫功能以及抗肝纤维化等方面显示出良好的疗效，安全、可靠、有效，进一步显示出中医辨证论治的合理性，突显了中药在治疗肝损伤，尤其是内毒素性急性肝损伤方面的良好前景。国内外尚未见到有关于南湖菱壳对急性肝损伤小鼠保护作用的报道。南湖菱(7 ^ acorais Nakano)为菱科菱属植物，是我国特产水生蔬菜，因产在浙江嘉兴南湖而得名。南湖菱不同于其它菱角，具有无棱角、壳薄、质嫩、水分多等特点，其味甘甜多汁，清凉解渴，含有多种氨基酸、维生素和矿物质。国内外对南湖菱同属菱角的研究较多，而针对南湖菱的研究甚少。国内主要集中于生物学、资源学及园艺等方面的研究。有文献以邻苯二酚为底物，用分光光度法研究了南湖菱鲜果多酚氧化酶的动力学特性。有文献报道菱角壳水提物有抗衰老的作用，然未见关于南湖菱壳有保护肝损伤作用的研究。

发明内容
本发明目的在于提供一种南湖菱壳提取物，该提取物具有保肝护肝作用，可用来制备保护急性肝损伤类药物。本发明还提供了该提取物的提取方法。为实现上述目的，本发明采取如下技术方案
一种南湖菱壳提取物，其选自南湖菱壳醇提物的乙酸乙酯部位和/或正丁醇部位；所述南湖菱壳提取物由下述方法提取获得取干燥的南湖菱壳，粉碎后用甲醇水溶液浸提，浸液浓缩得浸膏，将浸膏分散于蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对浸膏进行萃取，各萃取三次，挥干溶剂，即得南湖菱壳的石油醚部位(TAPE)、乙酸乙酯部位 (TAEA)和正丁醇部位(TABU)。具体的，所述南湖菱壳粉碎后用60 80V%的甲醇水溶液浸泡2 4次，每次3天， 合并浸液并浓缩成浸膏。所述南湖菱壳提取物在制备保肝护肝药物方面的应用，尤其是在制备保护急性肝损伤药物方面的应用。本发明所采用的南湖菱壳提取物来源于菱科菱属植物，分布于浙江嘉兴南湖水域。为证实上述提取物的保肝护肝作用，本发明以联苯双酯为阳性对照，分别考察了南湖菱壳三种不同部位的提取物对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的治疗作用。小鼠体内实验结果表明，南湖菱壳的乙酸乙酯部位(TAEA)和正丁醇部位(TABU)对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠有较好的治疗作用，但是石油醚部位(TAPE)却不具有该作用。
具体实施例方式实施例1
一种南湖菱壳提取物，其选自南湖菱壳醇提物的乙酸乙酯部位和/或正丁醇部位；所述南湖菱壳提取物由下述方法提取获得取1000 g干燥的南湖菱壳，粉碎后室温下用80V% 的甲醇水溶液(甲醇水溶液的添加量为南湖菱壳粉末重量的3 - 5倍)浸泡3次，每次3天， 合并三次所得浸液并浓缩成浸膏；将浸膏分散于IOOOml蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚 (3000ml)、乙酸乙酯(3000ml)和正丁醇(3000ml)对浸膏进行萃取，各萃取三次；挥干溶剂后即分别得到固态的石油醚部位(TAPE)37.36 g、乙酸乙酯部位(TAEA) 198.72g和正丁醇部位(TABU) 142. 25g，对应的提取率分别为3. 74 %、19· 87 %和14. 23 %。具体萃取过程为先用石油醚萃取三次，萃取液分层，取上层石油醚部分(挥干后即为石油醚部位)，下层为水层；水层再用乙酸乙酯萃取三次，萃取液分层，取上层乙酸乙酯部分(挥干后即为乙酸乙酯部位)，下层为水层；水层最后用正丁醇萃取三次，萃取液分层， 取上层正丁醇部分(挥干后即为正丁醇部位)。这样操作的目的在于将浸膏中的有效成分按极性从小到大的顺序依次萃取出来，因溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇极性是递增的。效果试验
以下给出了实施例1制备得到的南湖菱壳乙酸乙酯部位(TAEA)和正丁醇部位(TABU) 的试验结果。因石油醚部位(TAPE)对四氯化碳引起小鼠体内急性肝损伤试验无保护作用， 故试验数据中未给出。(一)主要试剂与仪器
四氯化碳(分析纯)购自天津市红岩化学试剂厂；橄榄油购自上海卫辉化学试剂厂；联苯双酯滴丸购自浙江万邦药业有限公司，批号090205 ；考马斯亮蓝G250购自上海化学试剂公司分装厂，批号20050115;牛清蛋白购自北京奥博星生物技术有限责任公司，批号 20100526 ；其它试剂均为分析纯。谷草转氨酶(GOT)试剂盒(20110613)、谷丙转氨酶(GPT)试剂盒(20110808)、丙二醛(MDA)试剂盒(20110803)、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(20110802)均购于南京建成生物工程研究所。
0. 4V%CC14油溶液取四氯化碳分散到橄榄油中，用磁力搅拌器强力搅拌2 h ；现用现配。UV 2000型紫外可见分光光度计(尤尼可上海仪器有限公司)；Multiskan MK3酶标仪(Thermo Electron) ；LRH-150恒温培养箱(上海一恒科技有限公司)。(二)实验方法
取健康的成年雄性昆明小鼠(4 6周龄，体重20 士 2 g) 90只，随机分为9组，每组 10只。分别为空白组、模型组、联苯双酯阳性对照组(70 mg/kg)、南湖菱壳乙酸乙酯部位 (TAEA)高、中、低剂量组(400、200、100 mg/kg)和南湖菱壳正丁醇部位(TABU)高、中、低剂量组(300、150、75mg/kg)。除模型组外，空白组用0. 5%的羟甲基纤维素钠水溶液(CMC-Na)灌胃，其它试验组用0. 5%CMC-Na分别配制成相应浓度灌胃给药，1次/天，连续给药8天。于末次给药2 h后对小鼠进行造模(空白组除外)。禁食不禁水12 h后，摘除小鼠眼球取血， 血浆室温静置30min，待血清分离后离心得到血清，置于冰箱0_3°C保存，测GPT和GOT。快速分离肝脏，制备10%和1%的肝脏组织勻浆液，离心取上清液0-3°C保存测MDA和S0D，并用考马斯亮蓝法测定10%和1%组织勻浆液的蛋白含量。(三)实验结果
从表1可以看出，模型组与空白组相比，血清中⑶P和GOT含量升高，且具有极显著性差异(P<0. 001)，说明造模成功。南湖菱壳乙酸乙酯部位(TAEA)高、中、低剂量组均能够显著的降低急性肝损伤小鼠血清中的GPT和GOT含量(p<0. 001)。正丁醇部位(TABU)高、中、 低剂量组也能显著降低GPT和GOT含量(p<0. 01或者p<0. 001)。由此表明南湖菱壳乙酸乙酯和正丁醇部位提取物对化学性肝损伤有很强的保护作用。
表1南湖菱壳提取物对急性肝损伤小鼠GPT和GOT的影响
权利要求
1.一种南湖菱壳提取物，其特征在于选自南湖菱壳醇提物的乙酸乙酯部位和/或正丁醇部位；所述南湖菱壳提取物由下述方法提取获得取干燥的南湖菱壳，粉碎后用甲醇水溶液浸提，浸液浓缩得浸膏，将浸膏分散于蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对浸膏进行萃取，各萃取三次，挥干溶剂，即得南湖菱壳的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
2.如权利要求1所述的南湖菱壳提取物，其特征在于南湖菱壳粉碎后用60 80￥%的甲醇水溶液浸泡2 4次，每次3天，合并浸液并浓缩成浸膏。
3.权利要求1所述南湖菱壳提取物在制备保肝护肝药物方面的应用。
4.权利要求1所述南湖菱壳提取物在制备保护急性肝损伤药物方面的应用。
全文摘要
本发明涉及一种南湖菱壳提取物，其选自南湖菱壳醇提物的乙酸乙酯部位和/或正丁醇部位；所述南湖菱壳提取物由下述方法提取获得取干燥的南湖菱壳，粉碎后用甲醇水溶液浸提，浸液浓缩得浸膏，将浸膏分散于蒸馏水中，然后依次用溶剂石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对浸膏进行萃取，各萃取三次，挥干溶剂，即得南湖菱壳的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。实验证明，南湖菱壳的乙酸乙酯部位和正丁醇部位提取物均能显著降低急性肝损伤小鼠血清中的GPT、GOT的含量以及小鼠肝组织中的MDA含量，并能显著升高SOD活力，可用来制备保肝护肝药物，尤其是制备具有保护急性肝损伤的药物。
文档编号A61K36/185GK102319276SQ20111029726
公开日2012年1月18日 申请日期2011年9月28日 优先权日2011年9月28日
发明者康文艺, 李园园, 黄嬛 申请人:河南大学