专利名称：使用1，1，2-三苯基丁-1-烯衍生物治疗阿尔茨海默病的制作方法
阿尔茨海默病(AD)是一种脑退化疾病，临床特征表现为渐进性丧失记忆、识别力、理性、判断力和情绪稳定性、逐渐导致严重精神失常以致最后死亡。AD是老年人渐进性精神失常(痴呆)的一个常见原因，AD被认为是美国第四位的最常见导致死亡的医学原因。在世界的各种人种和种族中均有AD病发生，并且成为现在和未来公众健康问题。该病目前估计大约折磨单独美国就约有2～3百万人。目前，AD证明为不治之症。
AD患者的大脑表现出神经元退化和特征性的损伤，后者指各种淀粉样变性的蚀斑、血管淀粉样变性血管病以及神经原纤维缠乱。大量的这类损伤，尤其是淀粉性变样的蚀斑和神经原纤维缠乱，一般在AD患者脑中的许多区域被发现，这些区域对记忆和识别功能很重要。在不患临床AD的多数老年人脑中，发现了较少数目的更受限制解剖分布的这种损伤。淀粉样变性蚀斑和血管淀粉样变性血管病的特征也表现为个体脑中具有Trisomy(三体性)21(Down综合症)和具有Dutch型(HCHWA-D)的淀粉样变性的遗传性大脑出血。目前，对AD的确诊需要在死于该病的病人脑组织中发现前述损伤，或者罕见地，在侵入性脑手术过程中取出的脑组织的小活体组织检查样品中发现。
许多证据表明，特定淀粉样变性蛋白，即β-淀粉样变性蛋白(βAP)，的渐进性大脑沉积，在AD的发病机理中具有种子的作用。参见Selkoe，(1991)，神经元(Neuror)6487。最近，已经表明βAP从培养物中生长的神经元细胞中释放出来，并且在正常人和AD患者的脑脊髓液中均存在。参见Seubert等人，(1992)自然(Nature)359325-327。
几组(试验)已证实蚀斑病理的一个可能相关因素是βAP对培养的神经元的直接神经毒性。最近已报道与TGF-β的共治疗可以减少βAP的神经毒性。(Chao等人，神经科学学会摘要(Soc.Neurosci.Abs.)，191251(1993))。
最近，除了直接神经毒性外，可能由βAP引起的AD脑中的炎症反应，也对该病的病理有作用。NSAID吲哚美辛的限制性临床试验表明了可减缓阿尔茨海默痴呆症的进程(Rogers等人，科学(Science)，2601719-1720(1993))。欧洲专利申请0659418 A1，公开了使用某些苯并噻吩抑制AD。
虽然对AD机理的研究有所进展，但仍需要开发治疗该病的组合物和方法。治疗方法应优选基于可以增加脑中TGF-β表达的药物，从而可以减轻与AD相关的β-淀粉样变性肽介导的神经毒性和炎症反应。
本发明涉及抑制阿尔茨海默病的方法，包括给予待治的个体有效量的式I化合物或其药物可接受的盐
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是当R1和R2相同时，每个均为甲基或乙基，和当R1和R2不同时，其中一个为甲基或乙基，另外一个为氢或苄基。优选的式I化合物中R1和R2为甲基。优选的盐为柠檬酸盐。
本发明涉及抑制阿尔茨海默病的方法，术语“抑制”定义为包含它的通常可接受的意义，包括预防性治疗一个病人以防止这些病症的一种或多种的发生，持续地检查该疾病的症状，和/或治疗这些症状。因此，合适地讲，本发明方法包括医学治疗和/或预防治疗两种。
本发明这一方法的实施包括给予待治的个体有效量的式I化合物或其药物可接受的盐
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是当R1和R2相同时，每个均为甲基或乙基，和当R1和R2不同时，其中一个为甲基或乙基，另一个为氢或苄基。
式I化合物为本领域已知的，通过美国专利5,047,431记载的方法基本上可以制备，该文献在此引入作为参考。
一个优选的式I化合物为其中R1和R2均为甲基。这个优选化合物已知为屈洛昔芬，(E)-1-[4′-(2-二甲氨基乙氧基)苯基]-1-(3-羟基苯基)-2-苯基丁-1-烯，它先前记载为一个抗雌激素剂，并且对治疗激素依赖性哺乳动物的肿瘤有用(美国专利5,047,431)，也对由于雌激素或类似物缺乏引起的骨病的减轻有用(美国专利5,254,594)。另外，与其它抗雌激素化合物例如它莫西芬相比，屈洛西芬已知为具有较小的子宫促进作用。
虽然式I化合物的自由碱形式可以用于本发明方法中，但是优选制备和使用一种药物可接受盐的形式。因此，本发明方法使用的化合物形成药物可接受的酸和碱的加成盐，酸为各种无机酸，优选有机酸，并且包括药物化学中常用的生理可接受盐。这些盐也是本发明的一部分。用于形成此盐的典型的无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、过磷酸等。也可使用由有机酸衍生的化合物，例如，脂肪族一元或二元羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸和羟基链烷二元酸、芳香酸、脂族和芳族的磺酸。因此这些药物可接受盐包括乙酸盐、苯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻-乙酰氧基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、溴化物、异丁酸盐、苯基丁酸盐、β-羟丁酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，4-二酸盐、癸酸盐、辛酸盐、氯化物、肉桂酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、富马酸盐、乙醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二甲酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯基丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磺酸盐、苯磺酸盐、对-溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、甲磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、对-甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、酒石酸盐等等。优选的盐为柠檬酸盐。
药物可接受的酸加成盐一般是通过式I化合物与等摩尔或过量的酸反应制备的。反应物通常在互溶剂例如乙醚或苯中结合。在一小时至10天内该盐一般从溶液中沉淀出来，并可以过滤分离或用常规方法除去溶剂。
与其母体化合物相比，式I化合物的药物可接受盐一般有较好的溶解性能，因此易于制成液体或乳液形式的制剂。
一旦制备完成，式I化合物的游离碱或盐形式即可采取此处所述方法给药于待冶个体。以下的非限制性试验实施例说明本发明的方法。
在本发明方法中，式I化合物连续给药或一天给药1至4次。
此处的术语“有效量”指可以抑制此处病理症状表现的本发明方法的化合物量。根据本发明，化合物的给药具体剂量应根据特定的病例情况加以确定，例如，给药化合物、给药方式、病人状态及待治病理症状的严重程度。通常的日剂量包含无毒的剂量水平，为本发明一种化合物约0.25mg～约100mg/天。优选的日剂量为约10mg～约40mg/天。
本发明化合物可经由各种途径给药，包括口服、直肠、透皮、皮下、静脉内、肌肉内和鼻腔内。这些化合物优选在给药前形成制剂，如何选择由临床医师决定。通常，式I化合物或其药物可接受盐与一种药物可接受的载体、稀释剂或赋形剂结合以形成药物制剂。
这样的制剂中总的活性成份占制剂总量的0.1％至99.9％。“药物可接受”指载体、稀释剂、赋形剂、和/或盐必须与制剂的其它成份配伍，并对病人无害。
采用本领域的公知技术方法和公知的易获得的成分，可以制备含式I化合物的药物制剂。例如，式I化合物可以与一般赋形剂、稀释剂或载体一起配制并制成片剂、胶囊剂、悬浮剂、粉剂等等。适于此制剂的载体、赋形剂和稀释剂的例子包括下述填充剂和增容剂，例如淀粉、蔗糖、甘露醇和硅酸衍生物粘合剂(如羧甲基纤维素和其它的纤维素衍生物)、藻酸盐、凝胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂例如甘油；分解剂例如碳酸钙和碳酸氢钠，延迟溶解剂如石蜡；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯、吸收载体例如高岭土和皂土；润滑剂例如滑石粉、硬脂酸钙和镁，以及固体聚乙二醇。
该化合物可以为方便口服做成酏剂或溶液制剂，或制成适于非肠道给药的溶液剂，例如用于肌肉内、皮下或静脉内给药。
另外，该化合物很适于制成缓释制剂等。这种制剂如此组成使之可以只释放活性成分或优选可能在一段延续时间内在某一特定生理部位释放。覆盖物、包容物和保护基质可由例如聚合物或蜡制得。
式I化合物一般以方便制剂给药。以下的制剂实施例只用于说明而非意在限制本发明的范围。
在下述制剂中，“活性成份”指式I的一种化合物或其盐。
制剂1明胶胶囊硬明胶胶囊制备如下成份 量(mg/胶囊)活性成份0.25-100淀粉，NF(国家药品集)0-650淀粉可流动粉0-50硅氧烷流体，350厘沲 0-15使用这些成份制备的一种片剂制剂如下制剂2片剂成份 量(mg/片)活性成份0.25-100纤维素，微晶200-650二氧化硅，泡沫化10-650硬脂酸 5-15将这些组分混合并压成片剂。
另外，每片含0.25-100mg活性成份的片剂制备如下制剂3片剂成份 量(mg/片剂)活性成份0.25-100淀粉45纤维素，微晶35聚乙烯吡咯烷酮 4(10％水溶液)羧甲基纤维素钠 4.5硬脂酸镁0.5滑石粉 1活性成份、淀粉和纤维素滤过编号45目美国筛(No.45 mesh U.S.sieve)并彻底混合。聚乙烯吡咯烷酮与所得粉末混合，然后滤过编号14目美国筛。如此所得的颗粒在50-60℃干燥并滤过编号18目美国筛。羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁和滑石粉滤过编号60目美国筛，然后加入颗粒中，混合后在压片机上压制成片剂。
每5毫升药剂含0.25-100mg活性成份的单位悬浮剂如下制备制剂4悬浮剂成份 量(mg/5ml)活性成份 0.25-100mg羧甲基纤维素钠 50mg糖浆 1.25mg苯甲酸溶液 0.10ml调味剂 足量着色剂 足量纯化水至5ml药剂滤过编号45目美国筛，并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合形成滑性糊状物。在搅拌下加入用水稀释的苯甲酸、调味剂和着色剂。然后加入足量的水至所需体积。制备含有下述成份的气溶胶制剂5气溶胶成份量(％重量)活性成份 0.25乙醇 25.75推进剂22(氯代二氟甲烷) 70活性成份与乙醇混合，将混合物加入一部分推进剂22中，冷却至30℃，并移至一个填充装置。然后将所需量加入一个不锈钢容器并用剩余推进剂稀释。然后将阀部件装入容器。
栓剂制备如下制剂6栓剂成份 量(mg/栓)活性成份 250饱和脂肪酸甘油酯 2000活性成份滤过编号60目美国筛，并悬浮于预先使用最低的必须热熔化的饱和脂肪酸甘油酯中。然后将混合物倾入一个通常为2克容量的栓模中并进行冷却。
静脉内用的制剂制备如下制剂7静脉内溶液成份 量活性成份 20mg等渗盐水 1,000ml上述组分的溶液以大约一分钟一毫升速率静脉内注入病人体内。
可以给药式I化合物以预防性和/或治疗性处理阿尔兹海默病。在治疗性应用中，将化合物给予已患病的宿主中。
在预防性应用中，化合物给予易于患阿尔兹海默病的、但不一定已患病的宿主中。可以由基因扫描和临床分析来确认该宿主，如医学文献中所述，参见如Goate，自然(Nature)，349704-706(1991)。无论预防性或治疗性原因，接收本发明化合物的优选组为闭经后妇女。(参见如，Paganini-Hill，神经科学协会摘要(Soc.Neurosci.Abs.，19，1046))。
根据本发明的式I化合物的给药具体剂量应根据待治病理症状的严重程度、给药方式以及其他的由主治医师决定的因素。通常，可接受的和有效的日剂量为约0.1mg～100mg/天，优选的日剂量约10mg～40mg/天。这些剂量以每天一至三次给予待治个体，或根据需要更频繁些，给药时间足以抑制阿尔兹海默病或其症状的影响。
经常地，将药物组合物直接或间接引入大脑是理想的或必要的。直接的技术一般涉及药物输送导管放置在宿主的室系统以便越过血脑屏障。间接技术一般是优选的，它包括将亲水性药物转化为脂溶性药物形成药物制剂以提供药物的潜化作用。潜化作用一般通过阻断药物上的羟基和氨基基团使药物更加脂溶化和易于穿越血脑屏障而实现。另外，通过动脉内注入可以暂时打开血脑屏障的高渗溶液可以改善亲水性药物的输送。
通常优选将式I化合物以酸加成盐的形式给药，这是具有碱性基团的药物给药的惯例。
检测EP 0659418 A1记载了对治疗AD有效的化合物的检测。
支链淀粉可购于Bachem Inc.(Torrance，加利福尼亚州)，半岛实验室公司(Peninsula Laboratories，Inc.(Belmont，加利福尼亚州))和西格玛化学品公司(Sigma Chemicals(St.Louis，密苏里州))。淀粉样蛋白-β(1-40)和反β-淀粉样肽(40-1)可购于Bachem.Inc.。β2-微球蛋白可购于SigmaChemicals(St.Louis，密苏里州)。
肽贮存液(1mM)在无热源无菌的水中新鲜制备并在要求的培养基中稀释至指示浓度。用肽或赋形剂处理鼠海马培养物(体外10-14天)四天。鼠皮质培养物的存活用相对比显微技术观察判断并以测量释放到培养基的乳酸脱氢酶(LDH)来定量。
检测1采用标准细胞培养技术体外培养原发鼠海马神经元。淀粉样蛋白-β(Aβ)肽以25μm的正常毒性浓度加入培养的细胞中。处理4天后，存活性由测量释放至培养基中的LDH来评价。用96孔板在标准340nm动力学的LDH检测(Sigma目录号#228-20)于20μl体积的条件确定的DMEM可分量中测量LDH。分析在37℃于PC-驱动EL 340微盘生物动力学(Microplate Biokinetics)盘读数仪(Bio-Tek仪器)上进行，数据分析用DeltaSoft II软件(3.30B版本，BioMetallics，Inc.)。每一检测均进行含标准和升高的血清LDH水平(如，Sigma酶对照组2N和2E)的质量对照标准。结果以LDH/升为单位表示，其中1个单位定义为在检测条件下，每分钟催化生成1微摩尔的辅酶I所需酶的量。对保护研究，在用Aβ处理之前和/或同时，式I的一种化合物加入到培养物中。
式I化合物的活性可用相对于对照组的释放入培养基(神经毒性指示剂)的LDH的减少来说明。
检测2对5～15只鼠进行15分钟的四条血管闭合以致全身性缺血。闭合后15分钟点的之前、同时和/或几小时之后给予实验动物和对照动物本发明的化合物。局部缺血性损害3天后处死动物，并以标准组织学方法观察评估海马和纹状体的神经元损伤。
式I化合物的活性以神经元损伤的减少来说明。
检测3选择5～15名妇女进行临床研究。妇女均为闭经后，即在研究开始前，已停止月经6～12个月，她们诊断患有早期AD，并预料在研究期间AD症状将恶化，但其它方面健康状态良好。研究有安慰剂对照组，即妇女分为两组，一个组接受本发明的化合物，另一组接受安慰剂。对病人的与AD相关的记忆力、识别力、推断力及其它症状进行基准点标记。实验组的妇女每天口服10～100mg的活性物质。她们持续治疗6～36个月。对两组的作基准点标记的症状均作准确记录，并在研究结束时将这些结果进行比较。研究开始前，结果不但在每组的成员间比较，并且每个病人的结果也与每个病人报告的症状相比较。被测药物的活性由与AD相关的典型识别力衰退和/或行为失常的减弱来说明。
以上检测的至少一项的活性可以证明式I化合物的实用性。
权利要求
1.一种抑制阿尔茨海默病的方法，包括给予待治的哺乳动物有效量的式I化合物或其药物可接受盐，
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是当R1和R2相同时，每个均为甲基或乙基，和当R1和R2不同时，其中一个为甲基或乙基，另外一个为氢或苄基。
2.权利要求1的方法，其中式I化合物为其中R1和R2为甲基的化合物或其药物可接受的盐。
3.权利要求2的方法，其中所述的盐为柠檬酸盐。
4.式I化合物或其药物可接受盐在制备抑制阿尔茨海默病的药物中的应用，
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是当R1和R2相同时，每个均为甲基或乙基，和当R1和R2不同时，其中一个为甲基或乙基，另外一个为氢或苄基。
5.权利要求4的应用，其中式I化合物为其中R1和R2为甲基的化合物或其药物可接受的盐。
6.权利要求5的应用，其中所述的盐为柠檬酸盐。
全文摘要
本发明提供一种新的抑制阿尔茨海默病的方法，包括给予待治的哺乳动物有效量的式I化合物或其药物可接受的盐，其中，R
文档编号A61P25/28GK1165650SQ97103410
公开日1997年11月26日 申请日期1997年2月28日 优先权日1996年2月28日
发明者戴维·B·麦克莱恩, 戴维·D·汤普森 申请人:美国辉瑞有限公司