专利名称：从肝脏制取脂类抗癌药物的方法
技术领域：
本发明涉及一种药品的制备方法。
目前与其它抗肿瘤药物相比，脂类抗肿瘤药物的研制在国内外都相对落后。一种脂类抗肿瘤药物如〈化学文摘〉CA100109121Z介绍的日本专利JP58，213，716其系十二碳一烯酸制品，CA11291375W又介绍了台湾信息，王、李两人较为系统地研究了胡罗卜素及视黄酸类化合物，对大鼠C-6胶质癌细胞的生长抑制作用，它们发现作用最强的是视黄酸，其余是乙酰视黄酯、视黄醛、4.4-胡罗卜素、棕榈酰视黄酯、β胡罗卜素及藏花酸。国内脂类抗肿瘤药物有油酸脂质体、β榄香烯乳剂等，但它们各自都存在着缺陷，如油酸脂质体在到达靶器官之前多半被巨噬系统截留，而β榄香烯乳剂的应用范围有一定局限，而且它们都是单一成分用量大因而导致毒副作用相对也大。
鉴于上述现有技术中的不足之处，本发明的目的在于提供一种具有复合成分的毒副作用较小的脂类抗肿瘤药物。
本发明的目的是通过以下措施来实现的一种从肝脏制取脂类抗癌药物的方法，其特征在于(1)脂类提取物的制备按以下次序的步骤进行a将新鲜的动物肝脏立即进行X线照射，累计照射量在1000-4000拉德，b将被照射的肝脏立即制成匀浆，c将匀浆在30-50℃温度下放置2-4天，d将上述匀浆液再于50-80℃温度下放置3-5天，e将上述物质用约10倍体积的Folch分配液浸泡8-12小时并不时地摇振，f收集下层液体，以理论上层液洗涤下层液一次，取该下层液过滤后减压蒸馏，浓缩至干，将浓缩液以3～5倍体积的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，离心或过滤除去不溶物，再减压蒸干，趁热称重，加0.75～2%重量的维生素E，旋转混匀即得脂类提取物，(2)乳剂的制备取50-70克/升上述脂类提取物、大豆磷脂10-50克/升、及适量水混合，将它们乳化使之成为浓度为5-7%的乳剂。滤液是在40～60℃的水浴中减压旋转蒸馏。
本发明的方法主要包括有从动物肝脏获得脂类提取物及将它制成乳剂的两个过程。
脂类提取物的制备首先将动物的肝脏(包括家畜及鱼类)取出，趁新鲜立即进行大剂量X线照射，累计照射剂量在1000-4000拉德，使仍存活的肝组织发生辐射变化，可能引起DNA中的突变，酶构象及其催化活性的变化、肝组织中各组分由辐射引起的非酶促变化，然后将被照射的肝脏立即制成匀浆。再将匀浆在30-50℃温度下放置2-4天。之后再于50-80℃温度下放置3-5天。在上述两种温度条件下，肝组织自身会发生相应的生物化学变化，其中包括大分子的降解，生成各种降解产物。将它们用约十倍体积的Folch分配液(氯仿甲醇水＝2∶1∶0.6)浸泡8-12小时并不时振摇。收集下层液体过滤除去肝脏残渣，最好将肝脏残渣再如上重复浸泡一次，合并下层滤液，以理论上层液洗涤下层液一次，弃去上层液将下层液置于40～60℃的水浴中减压蒸馏，至不再有馏出液为止，再以3～5倍体积的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，离心或过滤除去不溶物，再减压蒸干，趁热称重，加0.75～2%重量的维生素E，旋转混匀，于是存留在蒸馏容器内的外观为浅棕色的液体在常温下又凝结成脂膏状的物体即是本发明的脂类提取物，趁热倒至消毒过的容器中，或立即制备乳剂，如不立即使用应充氮气避光0～5℃保存。
乳剂的制备其主要原料为脂类提取物，辅助原料有大豆磷脂和水。当制备一立升乳剂时取上述的脂类提取物50-70克，然后再加入辅助原料大豆磷脂(乳化剂)，用量为10-50克/升。将脂类提取物大豆磷脂和水混合在一起总体积为一立升，再用超声或乳匀机使之成为pH＝4.5-7.5、粒径≤15微米，其浓度5-7%。
本发明相比现有技术具有如下优点本发明制成的乳剂主要成分为脂类复合物，它们都是生理性组分易被人体吸收，多种组分复合作用的结果抗肿瘤效果好，由于使用量较化疗药物少，因而对造血系统没有特异的损伤。动物实验表明其药效显著。
例1
取新鲜牛肝8公斤立即进行X线照射，累积照射量为1000拉德，照射后立即将牛肝用电动组织绞切器制成粘稠浆状物，将其置于30-50℃温箱中2天，然后再置于50-80℃的温箱中3天，取出称重为2.5公斤。用20000mlFolch分配液(氯仿∶甲醇∶水＝2∶1∶0.6)浸泡过夜后吸出下层溶液约10000ml过滤除去肝脏残渣，再将肝残渣同样浸泡提取一次，合并下层滤液，以理论上层液洗涤下层一次，再取下层液将其在40～60℃水浴中减压旋转蒸馏，至不再有馏出液为止，此时再以3倍体积的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，离心或过滤除去不溶物，再减压蒸干趁热称重210克，产率约2.6%，加4.2克维生素E旋转混匀可得到外观为浅棕色的脂膏状脂类提取物。
取上述脂类提取物50克、大豆磷脂10克、加水至1000ml，用乳匀机将其制成1000ml乳剂，其PH＝4.5、粒径≤15微米、许可含量范围为5±0.75%。
例2取新鲜猪肝8公斤重复例1的操作，其中X线累积照射量为4000拉德。在30-50℃的温箱中4天，在50-80℃的温箱中5天，取出后称重为2.1公斤。第二次蒸馏前用5倍体积的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，蒸馏后产率约2.3%，加3.8克维生素E旋转混匀得190克脂类提取物。
取上述脂类提取物70克、大豆磷脂50克、加水至1000ml，用乳匀机将其制成1000ml乳剂，其pH＝7.5、粒径≤15微米、许可含量范围为7±1.05%。
经化学分析本原料药的成分如下酸值110-150碘价50-100皂化值150-200羟值125-145过氧化脂质＜1.5mEq/100g甘油三酯＜3.0%总磷脂30-35%总胆固醇5-8%总脂肪酸55-68%自由脂肪酸40-45%胆红素0.003-0.01%蛋白质未测出总唾液酸1.0-1.5%鞘氨醇0.16-0.18%其它(未定)9-19%
下面是应用本发明的乳剂进行抗肿瘤药效学试验的初步结果癌细胞种类方法生长抑制率U14子宫颈癌400ug/ml浓度88.8%细胞系(体外试验)200ug/ml浓度30.4%(体外试验)下面是应用本发明的乳剂进行小鼠体内试验的初步结果癌细胞种类方法抑瘤率荷移植性肿瘤5%、0.3ml/只×7天S180小鼠腹腔注射给药41.4%(皮下接种)瘤内注射给药42.6%瘤内注射给药43.2%
权利要求
1.一种从肝脏制取脂类抗癌药物的方法，其特征在于(1)脂类提取物的制备按以下次序的步骤进行a将新鲜的动物肝脏立即进行X线照射，累计照射量在1000-4000拉德，b将被照射的肝脏立即制成匀浆，c将匀浆在30-50℃温度下放置2-4天，d将上述匀浆液再于50-80℃温度下放置3-5天，e将上述物质用约10倍体积的Folch分配液浸泡8-12小时并不时地摇振，f收集下层液体以理论上层液洗涤下层液一次，取该下层液过滤后减压蒸馏，浓缩至干，将浓缩液以3～5倍体积的氯仿/甲醇(2∶1，V/V)混合液溶解蒸干物，离心或过滤除去不溶物，再减压蒸干，趁热称重加0.75～2%重量的维生素E，旋转混匀即得脂类提取物，(2)乳剂的制备取50-70克/升上述脂类提取物、大豆磷脂10-50克/升、及适量水混合，将它们乳化使之成为浓度为5-7%的乳剂。
2.根据权利要求1所述的从肝脏制取脂类抗癌药物的方法，其特征在于滤液是在40～60℃的水浴中减压旋转蒸馏。
全文摘要
一种从肝脏制取脂类抗癌药物的方法，它是将动物肝脏经X线照射后制成匀浆，于30—50℃温度下放置2—4天，再于50—80℃温度下放置3—5天。之后用Folch分配液提取并收集下层液过滤后减压蒸馏，得到脂类提取物，取该脂类提取物50—70克/升、大豆磷脂15—50克/升、及适量水混合，将它们乳化即成为浓度是5—7％的乳剂。本发明工艺方法简单、制得的抗癌药物抑癌效果明显，毒副作用较小。
文档编号A61K35/37GK1113763SQ9411266
公开日1995年12月27日 申请日期1994年12月6日 优先权日1994年12月6日
发明者崔肇春, 林肇辉, 王庆梅, 徐奇伟 申请人:大连医科大学