专利名称：A型肉毒毒素的液态产品的制作方法
技术领域：
本发明涉及A型肉毒毒素的液态产品和保存肉毒毒素效价的方法，更确切地说，涉及利用右旋糖溶液的A型肉毒毒素的新液态产品和保存A型肉毒毒素效价的方法。肉毒毒素(botulinumtoxin)是肉毒杆菌(Clostridum botulinum)病毒产生的一种蛋白质，非可逆地附在突触前神经终端，以抑制神经接合部分泌乙醢胆碱，从而阻止肌肉的收缩，即起肌肉松弛的效果。另外，肌肉被露在毒素后2天之内在其外侧开始造出附随的无髓鞘神经分支，这些神经分支在肌肉纤维的周围形成新的肌肉神经接合。基于这个理由，为了保持理想的临床效果，每隔3-6个月需要反复注射。基于这些药理性质，目前肉毒毒素的肌肉注射使用在各种神经肌肉疾病，且其应用范围正在逐步扩大。于免疫学上的特征，肉毒毒素存在八种(A，B，Cl，C2，D，E，F，G)血清型 (serotype)，据报道其中A型的效果最好，且本发明是涉及A型肉毒毒素的新液态产品和保存A型肉毒毒素效价的方法。背境技术肉毒毒素是人类知晓的最致命的自然生物学作用剂。肉毒毒素的定量注入，例如利用在以提供肌肉麻痹而治疗过于敏感的骨骼肌为特征的神经肌肉性障碍，并以A型肉毒毒素治疗的症状有面部痉挛、成人疾病痉挛性斜颈、肛裂、眼睑痉挛、脑性麻痹、颈部肌张力异常、偏头痛、斜视、颞颚关节障碍及各种肌肉痉挛等。近来使用在如皱纹、面部肌肉痉挛、收缩治疗及面部整形等。到现在为止，作为如皱纹、肌肉张力、偏头痛、汗液分泌过多、以及上述症状等的各种临床症状治疗剂的现有肉毒毒素，尤其为了长时间保持A型肉毒毒素产品的保存期限，添加白蛋白或明胶等的稳定剂后以冻干粉的形态上市销售。然而，上述粉末形态的现有产品在临床上必须以生理食盐水加以稀释后放入注射器才能使用。因此，上述现有产品的使用不只麻烦，在以生理食盐水稀释的过程中发生污染和误差的可能性高，并含有从人的血清中提取的白蛋白蛋白质或从牛中提取的明胶蛋白质而不能完全排除被爱滋病、疯牛病等病毒交叉感染的可能性，此外，蛋白质的含量越是增力口，发生抗体形成或过敏反应的可能性也随着增加而在临床对患者使用时，存在不能确保100%安全性的问题。此外，使用上述现有产品时，必须以生理食盐水稀释，但因稀释后其效价继续减少(稀释同时效价约减少50% )，必须在稀释后4小时内使用，更是因效价不稳定而存在其治疗结果不一致的问题。而且，改进上述现有技术问题的技术已经揭示在韩国专利申请第10-2008-0049914号，但在上述韩国专利申请第10-2008-0049914号揭示的“改进肉毒毒素稳定性的药物学液体构成”是由肉毒毒素、多乙氧基醚20 (polysorbate 20)、及蛋氨酸、依需要选择的异白氨酸组成，因其由多种成分组成，不只提高制造成本，且构成成分中还包含多乙氧基醚20环境荷尔蒙，由此确定实际广品很难上市。

发明内容
以解决上述现有技术问题，本发明的目的在于提供以右旋糖溶液为稳定剂及保存剂添加在A型肉毒毒素，使A型肉毒毒素的效价不会减少，且以100%的效价长期保存的方法。本发明的另一目的是不以白蛋白或明胶蛋白质作为稳定剂而完全排除被病毒交叉感染的可能性。此外，本发明的另一目的是提供不使用对人体有害的多乙氧基醚20环境荷尔蒙，而使用对人体无害的右旋糖溶液作为稳定剂及保存剂的A型肉毒毒素。

此外，本发明的另一目的是以右旋糖溶液作为天然防腐剂及稳定剂，使A型肉毒毒素在液态状态下效价没有任何减少，并在2-8 °C低温下可长期保管分销促成商业化。为了实现上述目的，本发明人经长久多次反复实验，使用对人体无害的右旋糖溶液作为稳定剂及保存剂，并确认能使A型肉毒毒素的效价能长期保存不变，从而完成本发明。本发明的主要特点是在A型肉毒毒素上添加右旋糖溶液。在本发明的特点是用作稳定剂及保存剂的右旋糖溶液浓度是6_12%，较佳是8-10%。根据本发明提供的A型肉毒毒素的液态产品是在A型肉毒毒素上添加右旋糖溶液，并以右旋糖溶液接触含有上述A型肉毒毒素的容器内壁一边慢慢添加，一边混合溶解来制造的。根据本发明提供的A型肉毒毒素的液态产品的特点是每A型肉毒毒素IOOunit含右旋糖溶液2-6ml，较佳是3 5ml。根据本发明提供的A型肉毒毒素的液态产品的特点是在治疗疾病时，为了缓和疼痛依需要可包含例如利多卡因、丁卡因、地布卡因、或普鲁哌卡因(provacaine)等麻醉剂。根据本发明，第一特点，在A型肉毒毒素的制造步骤中，添加右旋糖溶液可生产使用液态产品；第二特点，A型肉毒毒素和右旋糖溶液生产成套装产品，治疗时可混合溶解两种产品使用；第三特点，现有的A型肉毒毒素产品(保妥适)，以右旋糖溶液稀释使用，可避免效价的减少；尤其是稀释使用后的剩余产品，并不减少效价，可长期保管使用。据此，根据本发明的A型肉毒毒素的液态产品，因以右旋糖溶液作为稳定剂及保存剂添加于A型肉毒毒素，其效价不会减少且保持100%不变，具有长期(12-15个月)保管的优点。根据本发明，因为不以白蛋白或明胶等蛋白质作为稳定剂，具有制造时可完全排除被爱滋病、疯牛病等病毒交叉感染的可能性之优点。另外，根据本发明，A型肉毒毒素和右旋糖溶液以液态产品形式生产保存，治疗时无须借助生理食盐水可直接使用，不仅具有容易使用的优点，还具有可避免在现有技术上以生理食盐水稀释过程中减少效价的优点.在本发明使用的右旋糖溶液作为天然防腐剂及稳定剂，具有使A型肉毒毒素在液态状态下效价没有任何减少且在2-8°C低温下可长期(12-15个月)保管分销，且保持效价不变，治疗结果均无偏差保持一定的优点。根据本发明，A型肉毒毒素的液态产品不仅构成简单，且治疗时不须使用如生理食盐水的溶媒，其具有使用容易且生产成本便宜的优点。根据本发明具有在A型肉毒毒素的制造步骤中，添加右旋糖溶液可容易生产液态产品的优点；A型肉毒毒素和右旋糖溶液生产成套装产品，治疗时可混合两种产品使用的优点；及现有的A型肉毒毒素产品(保妥适)，以右旋糖溶液稀释使用，可避免效价的减少；尤其是稀释使用后的剩余产品，并不减少效价，可长期保管使用的优点。
具体实施例方式本发明涉及肉毒毒素的液态产品和保存肉毒毒素效价的方法，更确切地说，涉及利用右旋糖溶液的A型肉毒毒素的液态产品和保存A型肉毒毒素效价的方法。本发明的A型肉毒毒素的液态产品，以A型肉毒毒素和右旋糖溶液构成为特点，且 药物治疗时，根据疾病为了缓和疼痛可多包含例如利多卡因、丁卡因、地布卡因、或普鲁哌卡因(provacaine)等麻醉剂。本发明的A型肉毒毒素的液态产品包含的右旋糖是输液，对人体无害的成分，且以类似体液的渗透压浓度制造，使得注射时减少疼痛亦可防止肌肉组织的损伤。另外，右旋糖是自然防腐剂及保存剂，并具有稳定蛋白质的作用，使得A型肉毒毒素的液态产品的效价不会减少而可长期保管分销。此外，本发明不添加为了保持现有A型肉毒毒素产品的保存期限而使用的白蛋白或明胶等的稳定剂，不仅可完全排除交叉感染的可能性，并省略以现有生理食盐水稀释的过程，亦可完全避免稀释过程中发生的效价减少及污染。本发明的A型肉毒毒素的液态产品的特点是每A型肉毒毒素IOOunit含右旋糖溶液2-6ml，较佳是3-5ml，且右旋糖溶液的浓度是6_12 %，较佳是8_10 %。一般来讲，肉毒毒素以冻干的状态销售，在临床上使用A型肉毒毒素时，对能使用的期限制造商建议以0. 9%的生理食盐水稀释后4小时之内使用，其理由是时间过后A型肉毒毒素的效价会减少，不能取得期待的效果。可是A型肉毒毒素昂贵，对患者使用的量也不多，在实际临床上的实情是冷藏保管1-2周使用。因此，本发明考虑这些实情研究开发，结果了解了省略以生理食盐水稀释的现有技术过程，提供只有A型肉毒毒素和右旋糖溶液沟成本发明的液态产品，且效价保持100%不变且可长期保管一年以上(例如12个月至15个月)。根据本发明的实施例，详细说明于下文。实施例I(A型肉毒毒素液态产品的制造)在A型肉毒毒素添加右旋糖溶液，并均匀混合溶解，准备老鼠实验，在每A型肉毒毒素IOOunit添加10%右旋糖溶液5ml制造A型肉毒毒素的液态产品。(A型肉毒毒素液态产品的效价评价)对如上述制造根据本发明的A型肉毒毒素液态产品，经过一定时间后，评价了其效价。肉毒毒素的单位以unit表示,这是指腹腔注射老鼠的致死量(L/D 50)。Iunit表示以I老鼠单位(lmouse unit)重20g老鼠致死率50%的效价。
按80只实验动物每次10只，把根据本发明制造的A型肉毒毒素液态产品，依即时、2周后、4周后、8周后、16周后、24周后、48周后、60周后，分别在老鼠腹腔内注射2unit(0. 2ml)后评价效价的结果，发现各情况效价均没有减少且保持100%不变。此外，把用后剩余的本发明的液态产品，以上述相同的方法做实验评价效价的结果，发现效价一样的毫无减少。上述结果是由于本发明中以稳定剂及保存剂添加的右旋糖溶液的独特作用，是明确的重大发明。实施例2本实施例是显示本发明和现有技术效果的实验结果，本实验分成对照I群、实验I群(现有技术)、实验2群(本发明)及对照2群做如下实验，在各实验群10只老鼠中72小时后评价死亡的个数。(实验I、老鼠腹腔注射Iunit) 对照I群实例，在老鼠腹腔注射生理食盐水0. Iml,结果10只老鼠中72小时后死亡的个数是零(0);实验I群(现有技术)实例，注射以生理食盐水稀释的保妥适(botox) Iunit (0. Iml),结果死亡个数是零(0);实验2群(本发明)实例,注射以10%右旋糖溶液稀释的A型肉毒毒素Iunit (0. Iml)，结果死亡个数是4只；对照2群实例，注射10%右旋糖溶液0. 1ml，结果死亡个数是零(0)。(实验2、老鼠腹腔注射2unit)对照I群实例，在老鼠腹腔注射生理食盐水0. 2ml，结果10只老鼠中72小时后死亡的个数是零；实验I群实例，注射以生理食盐水稀释的保妥适2unit (0. 2ml)，结果死亡个数是4只；实验2群实例，注射以10%右旋糖溶液稀释的A型肉毒毒素2unit (0. 2ml)，结果死亡个数是10只；对照2群实例，注射10%右旋糖溶液0. 2ml，结果死亡个数是零。(实验3、把实验2中使用的溶液在4°C冷藏保管2周后，老鼠腹腔注射2unit)对照I群实例，在老鼠腹腔注射生理食盐水0. 2ml，结果10只老鼠中72小时后死亡的个数是零；实验I群实例，注射以生理食盐水稀释的保妥适2unit (0. 2ml)，结果死亡个数是零；实验2群实例，注射以10%右旋糖溶液稀释的A型肉毒毒素2unit (0. 2ml)，结果死亡个数是10只；对照2群实例，注射10%右旋糖溶液0. 2ml，结果死亡个数是零。实施例3(额头皱纹治疗效果的比较实验)适用部位现有产品(以生理食盐水2ml稀释现有保妥适的溶液)实例，在人的右眉毛内侧上眉角处上方2. 5cm的位置设定注射刺入点的部位及由此注射刺入点向外划延长线在距3cm的位置再设定一个注射刺入点的部位；本发明的产品(以10%右旋糖溶液4ml稀释A型肉毒毒素的溶液)实例，在人的左眉毛处以上述同样的方式在设定注射刺入点的部位。注射方法现有产品(以生理食盐水2ml稀释现有保妥适的溶液)实例，把上述溶液在上述右额头上设定的两个注射刺入点分别注射2. 5unit (0. 05ml)，且垂直于皮肤表面以2-3mm的深度实施注射；本发明的产品(以10%右旋糖溶液4ml稀释A型肉毒毒素的溶液)实例，以与上述现有产品的注射方法相同的方法，把上述本发明的产品在上述左额头上设定的两个注射刺入点分别注射I. 25unit(0. 05ml)(第I次注射)。然后，在治疗效果充分显示的2周后，比较左右额头皱纹的治疗效果，且第I次注射的实验结果如下表I。6个月后，把现有产品(以生理食盐水2ml重新稀释现有保妥适的溶液)在右额头上的上述两个注射刺入点分别注射2. 5unit(0. 05ml);把第I次注射使用剩余的本发明的产品，经6个月在4°C冷藏保管，在左额头上设定的上述两个注射刺入点分别注射
I.25unit (0. 05ml)(第2次注射)。然后，2周后比较左右额头皱纹减少的效果，且第2次注射(第I次注射后6个月)的实验结果如下表I。再过6个月后(即12个月后)，把现有产品(以生理食盐水2ml重新稀释现有保妥适的溶液)在右额头上的上述两个注射刺入点分别注射2. 5unit (0.05ml);把第I次注射使用剩余的本发明的产品，经12个月在4°C冷藏保管，在左额头上设定的上述两个注射刺入点分别注射I. 25unit (0. 05ml)(第3次注射)。然后，2周后比较左右额头皱纹减少的效果，且第3次注射(第I次注射后12个月)的实验结果如下表I。
表I
使用的溶液使用的溶液右侧(；现有左右侧治疗效__(右额头)__(左额头)产品)效果果比较
现有产品本发明的产品笛^ (以生理食盐水(以10%右旋糖溶皱纹减少效果^ ^ m 2ml稀释现有保液4ml稀释A型肉良好 @ #__妥适的溶液)毒毒素的溶液)___
^ ,第I次注射时皱纹减少效果
(兎I次汪射后同上/击m千,丨、片、亦^同等
使用剩余的裕攸良好 6个月)_____
^,第I次注射时皱纹减少效果
r±使用剩余的猶良好_
12个月)_____皱纹减少效果分类分类成无效果、效果不足、效果良好、效果过多4个等级。实验结果评价 I、左侧相对于右侧使用了 50 %的效价，但左右侧的临床治疗效果相同。通常，注射
I.25unit时效果不足但以10%右旋糖溶液稀释的本发明产品显出良好的临床效果。这就证明右旋糖溶液是保持A型肉毒毒素效价100%的强力稳定剂。2、以10%右旋糖溶液稀释的本发明产品经6个月、12个月后显出与初次同等的效果。这就证明右旋糖溶液不仅是稳定剂，而且也是保存剂，把这些结合到A型肉毒毒素的技术性构成及技术性思想是本发明的特点。3、以生理食盐水稀释的现有方法稀释时，做完稀释就立即减少50%的效价且再继续减少至经过2周后，在临床上不能使用。以上所述对本发明做了详细的说明，并非限制本发明于此，故举凡运用本发明的思想及范围所为之多种变形，均应同理包含于本发明之专利范围内。
权利要求
1.一种A型肉毒毒素的液态产品，在含有A型肉毒毒素的容器里添加右旋糖溶液，每A型肉毒毒素IOOunit以6-12%右旋糖溶液2-6ml的量接触上述容器的内壁一边添加，一边混合溶解，使A型肉毒毒素保持100%的效价不变，并具有12-15个月的保存期间。
2.如权利要求I所述的A型肉毒毒素的液态产品，还包含如利多卡因、丁卡因、布比卡因、普鲁哌卡因或地布卡因的麻醉剂。
3.如权利要求I所述的A型肉毒毒素的液态产品，其中，上述A型肉毒毒素和上述右旋糖溶液生产成套装产品，使用时混合溶解两种产品。
4.使用为A型肉毒毒素的稳定剂及保存剂的右旋糖溶液。
全文摘要
本发明涉及肉毒毒素的液态产品及保存肉毒毒素效价的方法，更确切地说，涉及利用右旋糖溶液的A型肉毒毒素的液态产品。根据本发明的A型肉毒毒素的液态产品与现有的A型肉毒毒素产品不同，其特点是为了保持保存期间不添加如白蛋白或明胶等的稳定剂而完全排除被爱滋病、疯牛病等病毒交叉感染的可能性；使用时省略了以生理食盐水稀释的过程而没有污染并保持100％的效价不变，使得治疗结果一致；且不含现有液态产品制造时所使用的环境荷尔蒙而非常安全。
文档编号A61K31/445GK102793661SQ20121012752
公开日2012年11月28日 申请日期2012年4月26日 优先权日2011年5月25日
发明者咸钟旭 申请人:咸钟旭