专利名称：梓醇在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明公开了一种梓醇的新用途，具体是梓醇在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤药物中的应用，以及在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤神经功能缺损症状药物中的应用，属医药技术领域。
背景技术：
缺血性脑卒中后遗症是指患者急性脑梗塞发作经治疗存活后而遗留不同程度的偏瘫、失语、意识轻度障碍等局灶性症状。脑卒中是危害人类生命和健康的常见病和多发病，全球每年约有1500万脑卒中患者，其中缺血性脑卒中占有相当大的比例(75%-85%)。而现在认为，缺血性脑卒中发生过程中，实质上是缺血再灌注造成的损伤。脑缺血再灌注损伤病理生理机制包括许多方面，其中氧化损伤和过度的炎症反应不仅影响局部的血液供
应，而且可以直接破坏组织结构。大量实验研究表明，缺血后再灌注早期产生的黏附因子和细胞因子构成了缺血性损伤向炎症性损伤转变的基础，大脑炎症系统的激活，促炎因子与抑炎因子之间的平衡失调，促进了炎症过程的发生发展，可导致神经细胞进一步损害；并可使自由基的连锁反应激化，破坏组织结构而加重组织损伤，引起迟发性神经功能损害。脑缺血再灌注早期，产生大量自由基，远远超过机体的清除能力，如果氧自由基得不到及时清除，将引起脂质过氧化反应，形成脂质过氧化产物。SOD是体内重要的抗氧化酶，可清除自由基，保护受损细胞，常作为清除氧自由基能力的主要指标。丙二醛是氧自由基攻击脂质导致过氧化的代谢产物，其含量反映体内氧自由基的生产水平及对组织的损伤程度。在既往报道的大量缺血性脑卒中病例中，仅少数患者完全恢复，大多数患者残留有不同程度的神经功能障碍即后遗症状，主要表现为肢体运动感觉功能障碍。缺血性脑卒中后遗症状可伴随患者持续加重直到死亡，给患者带来了很大的痛苦，也给家庭造成了很大的经济负担。但是，迄今为止，缺血性脑卒中后遗症尚无特殊的良效药物治疗，相对而言，中药具有毒副作用小，适合长期服用，成本低的优点。因此，发掘中医药宝库，创新缺血性脑卒中后遗症治疗理论，寻找治疗缺血性脑卒中后遗症更为有效的中药制剂，已经倍受国内外的关注。
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梓醇化学结构式梓醇是一种环烯醚萜单糖苷类化合物，分子式C15H22010。梓醇广泛分布于合瓣花亚纲、马钱科醉鱼草属、玄参科泡梧属及地黄属、柴葳科樟属、列当科肉苁蓉属、车前科车前属等植物中，来源及其丰富。

发明内容
本发明的目的是提供一种梓醇的新用途，即梓醇在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤药物中的应用。本发明所说的梓醇的新用途，是梓醇在制备改善缺血性脑卒中再灌注损伤神经功能缺损症状药物中的应用。根据上述的梓醇在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤药物、以及改善缺血性脑卒中再灌注损伤神经功能缺损症状药物中的应用，梓醇具有改善缺血性脑卒中再灌注损伤能量代谢障碍的作用。根据上述的梓醇在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤药物、以及改善缺血性脑卒 中再灌注损伤神经功能缺损症状药物中的应用，梓醇具有抗缺血性脑卒中再灌注损伤氧化应激的作用。根据上述的梓醇在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤药物、以及改善缺血性脑卒中再灌注损伤神经功能缺损症状药物中的应用，梓醇具有抑制缺血性脑卒中再灌注损伤炎症反应的作用。根据上述的梓醇在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤药物、以及改善缺血性脑卒中再灌注损伤神经功能缺损症状药物中的应用，其特征是梓醇在药物中的含量为O. 1-99%。本发明在现有的脑缺血再灌注损伤认识的基础上，采用线栓法脑缺血再灌注损伤大鼠模型，观察梓醇对脑缺血再灌注损伤大鼠神经缺损功能的影响、对脑缺血损伤大鼠脑能量代谢紊乱的影响、对脑缺血损伤大鼠脑皮层氧化应激的影响，以及对脑缺血损伤大鼠脑皮层炎症因子及其转录因子的影响。结果表明(I)对神经功能缺损症状的影响梓醇给药组可明显的改善神经缺损症状，明显改善横木行走能力、提高抓握力量(同模型组相比较，P < O. 05，P < O. 01)，且作用明显好于阳性对照药天保宁，表明梓醇对脑缺血再灌注损伤大鼠恢复早期具有神经保护作用，能明显的改善脑缺血神经功能缺损症状，促进受损的肢体运动感觉功能恢复。(2)对能量代谢障碍的影响梓醇组能显著降低脑组织中乳酸的含量，明显提高丙酮酸、Na+, K+-ATPase和Ca2+，Mg2+_ATPase的含量(同模型组相比较，P < O. 05，p
<0.01)，上述作用与阳性对照药天保宁，表明梓醇可以促进脑缺血再灌注损伤大鼠恢复早期能量代谢障碍的改善，增强能量及改善乳酸酸中毒症状。(3)对氧化应激的影响梓醇组能显著提高脑皮质中SOD活力、减少MDA含量(同模型组相比较，P < O. 05，P < O. 01)，上述作用与阳性对照药丁苯酞相似，表明梓醇可以促进脑缺血再灌注损伤大鼠恢复早期脑皮质SOD的活性，减少脂质过氧化，具有抗氧化应激作用。
具体实施例方式实施例I对神经功能缺损症状的影响
1.1 目的采用线栓法脑缺血再灌注损伤大鼠模型，观察梓醇对脑缺血再灌注损伤大鼠神经缺损功能的影响，以确定其是否具有促进缺血性脑卒中后遗症状恢复的作用。I. 2试验材料I. 2. I 动物健康SD雄性大鼠，体重240_280g。I. 2. 2 药物I. 2. 2. I 受试药 梓醇，白色或无色粉末，称O. 3g粉末，用去离子水溶至100ml，灌胃给药lml/100g体重。I. 2. 2. 2 阳性药天保宁浙江康恩贝制药股份有限公司生产，临床每日用量为6片。配制方法取片剂7片，研磨成粉后用去离子水溶解定溶至100ml，灌胃给药lml/100g体重。丁苯酞石药集团恩必普药业有限公司生产，临床每日用量为O. 6g。配制方法用注射器抽取7粒胶囊内容物，用食用油稀释成20ml，灌胃给药O. 2ml/100g体重。I. 2. 3主要实验仪器YLS-12A大小鼠抓力测试仪，山东科学技术设备站生产。I. 3方法与结果I. 3. I大鼠脑缺血再灌注(MCAO)模型的制备参照文献方法制作MCAO模型。大鼠用10%水合氯醛O. 35g/kg腹腔注射麻醉，分离右侧颈总动脉、颈内动脉及颈外动脉，于颈外动脉与颈内动脉分叉处作一切口，从切口处插入头端成圆球形的光滑钓鱼尼龙线，插入深度18-19mm左右，实现大脑中动脉阻塞导致脑缺血。结扎切口处，固定尼龙线，逐层缝合肌肉和皮肤。2h后将尼龙线头端轻轻拔出到近切口处，实现再灌注。假手术组大鼠除不栓塞大脑中动脉外，余处理同缺血组。I. 3. 2分组与给药将神经症状1-3分的大鼠分成模型组；梓醇15mg/kg,30mg/kg,60mg/kg给药组；天保宁O. 7片/kg阳性对照组；依达拉奉7mg/kg阳性对照组。以及假手术组。缺血后3d至14d灌胃给药，依达拉奉组腹腔注射给药，假手术组与模型组给予等量食用油灌胃和相应生理盐水腹腔注射，每天一次。I. 3. 3 方法I. 3. 3. I横木行走实验横木行走实验评价运动的协调和整合缺损。横木宽2. Ocm,长120cm,厚I. Ocm,距地面80cm水平悬空放置，横木一端连接一个暗盒，用噪音刺激大鼠通过横木走进暗盒。评分标准不能呆在横木上，O分；能呆在横木上但不能动，I分；试图通过，但从横木上摔下，2分；走上横木，但损伤的后肢滑落次数超过50%，3分；超过I次但不到50%，4分；仅滑落I次，5分；顺利通过，6分。术前训练5d，每天一次，让所有大鼠评到6分为止。以缺血3、6、9、12、14d为观察时间点进行检测。I. 3. 3. 2抓握力量测试抓握力量测试评价抓握力量的大小。大鼠两前肢抓住拉力测试仪的拉力横杆，测试者左手先固定拉力板，右手向后拉住鼠尾，松开左手，右手加力向后拉拽大鼠身体，大鼠为了不从横杆滑脱会抓握横杆不放，直至滑脱，读取使大鼠滑脱的最大拉力值，每只测2次，取最大值。以缺血3、6、9、12、14d为观察时间点进行检测。I. 4.结果见表 1_1、1_2、1_3，表 1_4、1_5、1_6。表1-1梓醇对MCAO模型大鼠神经症状评分的影响(^ ±s)
组另|J~ ~木后3天 木后6夫 η 木后9天 η 木后12关 η 木居14天假手术 9 0±0**9 0±0 林 9 0±0林9 0±0**9 0±0**
模型 11 1.54±0.82 10 1.20±0.42 10 1.30±0.95 9 1.00±0.00 8 1.00±0.00梓醇 9 1.44土0.73 9 I. 11±0.33 9 0·44±0·53* 9 0.44±0.53林 9 0.44±0.53林天保宁 9 1·44±0.73 9 1.22±0.44 9 0.67±0· 50* 8 0.63±0.52* 8 0.63±0.52*注与模型组比较*p < O. 05，林p < O. 01。从表1-1可见，假手术组大鼠没有神经功能缺损表现，各缺血组大鼠神经症状表现明显，但随着时间的延长而逐渐的自行恢复，而给药组大鼠的神经缺损的恢复速度明显快于模型组，但从术后9天开始其恢复速度逐渐减慢，在观察期内仍然有部分大鼠未能完全恢复到正常水平。术后9、12、14d各给药组与模型组比较均具有显著性差异。表1-2梓醇对MCAO模型大鼠横木行走能力的影响(;士s)
组别 η术后3天 η 术后6天 η 术后9天 n 术后12天 η术后14天手术 9 6 土 O**9 6 土 O**9 6 土 O**9 6 士 O**9 6 士 O**
模型 11 2.00±1.48 10 3·00±1.56 10 3·00±2.05 9 3.33±1.94 8 3.88±1.73梓醇 9 2.33±2, 18 9 3·67±1.66 9 4·56±1.81* 9 4.89±1.76* 9 5.22土 1.20*天保宁 9 2.33±2.40 9 3.67±1.50 9 4. 11±1.62 8 5. 13±0.84* 8 5.25±0·89*注与模型组比较*ρ < O. 05，**ρ < O. 01。从表1-2可见，假手术组大鼠横木行走能力没有变化，各缺血组大鼠横木行走能力随着时间的延长而明显改善，而给药组大鼠的横木行走能力的恢复速度明显快于模型组，但在观察期内仍然有个别大鼠未完全恢复到正常水平。在术后9、12、14山梓醇301^/kg、60mg/kg组，均能够促进大鼠行走能力的恢复，与模型组比较行走评分显著提高，(P
<O. 05);天保宁组分别在术后9d和12d促进大鼠行走能力的恢复，与模型组比较具有显著性差异，且在术后14d均表现出明显的促进横木行走能力恢复的作用。表1-3梓醇对MCAO模型大鼠抓握力量的影响(—x 士s)
组别 η术后3天_η 术后6夭 η 术后9天 η 术后12天 η 术后14天
假手术 9 699. 8±63. 7** 9 780. 4±71. I** 9 750. 0±86. 3** 9 840. 9±87· 8* 9 960. 8±84. O**模型 11 550. 5± 108. 9 10 608.9 土 88.0 10 555. 6± 155. 3 9 692. 3 土 161. 5 8 718. 1±92. O梓醇 9 552.3 土 118.8 9 642.7±45.8 9 668. 3± 102. 2* 9 786. 2 土 87. O 9 831. I ± 123. I*天保宁 9 531.6±83.4 9 647, 2土 105. 7 9 703·7±107. I* 8 786. 8±108. 5 8 810.4±98. 9*注与模型组比较*p < O. 05，林P < O. 01。从表1-3可见，脑缺血后大鼠前肢的抓握力量显著降低，缺血9d，各给药组与模型组比较，均能明显增加大鼠的前肢抓握力量，P < O. 05，P < O. 01 ;缺血14d，与模型组比较，梓醇30mg/kg、60mg/kg组,天保宁组能明显增加大鼠的前肢抓握力量，p < O. 05。表1-4梓醇对MCAO模型大鼠神经症状评分的影响(;±s)
权利要求
1.梓醇在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤药物中的应用。
2.根据权利要求I所述，梓醇在制备改善缺血性脑卒中再灌注损伤神经功能缺损症状药物中的应用。
3.根据权利要求I或2所述，梓醇具有改善缺血性脑卒中再灌注损伤能量代谢障碍的作用。
4.根据权利要求I或2所述，梓醇具有抗缺血性脑卒中再灌注损伤氧化应激的作用。
5.根据权利要求I或2所述的梓醇新用途，其特征是梓醇在药物中的含量为10-99%。
全文摘要
本发明公开了一种梓醇的新用途，属医药技术领域。具体是梓醇在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤药物中的应用，以及在制备治疗缺血性脑卒中再灌注损伤神经功能缺损症状药物中的应用。
文档编号A61P9/10GK102885838SQ20111020281
公开日2013年1月23日 申请日期2011年7月20日 优先权日2011年7月20日
发明者玄振玉, 黄孝春, 蔡垠, 魏惠华, 陈叶明 申请人:苏州玉森新药开发有限公司