专利名称：一种小花棘豆黄酮的制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药和保健品技术领域，涉及一种小花棘豆黄酮的制备方法及其应用。
背景技术：
小花棘豆(Oxytropisglabra DC)是豆科(Leguminosae)棘豆属(Oxytropis)植物，在新疆分布广泛。据蒙药典记载，小花棘豆是一种重要的中蒙药原料，具有麻醉、镇静和止痛作用，主治牙痛、关节痛、失眠、健忘、神经衰弱及皮肤瘙痒。如小花棘豆4.5g、北五加皮6g及地枸叶9g,水煎服,可治关节痛。黄酮类化合物是小花棘豆的有效成分之一。目前，已从小花棘豆中分离得到了 7种黄酮类化合物，均以黄酮苷的形式存在，且均为氧苷。苷元主要为山柰酚、槲皮素、鼠李素和异鼠李素等，糖取代基有D-葡萄糖、L-鼠李糖和D-芸香糖等。并且发现小花棘豆的黄酮含量高于传统藏药“达夏”(镰形棘豆)，表明小花棘豆黄酮具有较好的开发利用前景。国内外研究认为黄酮类化合物除具有抗菌、抗炎、抗突变、降压、清热解毒、镇静、利尿等作用，在抗氧化、抗癌、抑制脂肪酶等方面有显著效果，同时也是大多数氧自由基的清除剂，对冠心病、心绞痛等疾病的治疗效果显著；而且黄酮类化合物安全性好、毒性小。而到目前为止，并未有小花棘豆黄酮保肝和抗氧化作用的研究报道和专利申请。

发明内容
本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种小花棘豆黄酮的制备方法及其应用，提取得到新疆小花棘豆黄酮类成分，通过体外抗脂质氧化试验、体外自由基清除试验、肝损伤小鼠体内自由基清除试验，小鼠饲喂安全性试验等，发现小花棘豆黄酮具有保肝和抗氧化作用，可以用于制备保肝和抗氧化药物及保健食品。。其具体技术方案 为:一种小花棘豆黄酮的制备方法，包括以下步骤:(I)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，阴干、粉碎、过20目筛后备用；(2)超声波协助法提取小花棘豆总提取物:称取小花棘豆样品，按照物料比I: 10 1: 20g/mL的比例加入体积分数60% 100%的甲醇超声波提取45 90min，超声波功率800W，温度45°C，提取完成后过滤，滤液采用旋转蒸发仪浓缩，恒温干燥箱干燥，即得到小花棘豆总提取物；(3)小花棘豆黄酮的分离:将小花棘豆总提取物用水充分溶解；向层析柱中加入1/3体积的去离子水，然后将D-101型大孔吸附树脂用去离子水转移至层析柱中，加入70%的乙醇溶液(V/V)，体积为树脂体积的2倍，流速为I倍树脂体积/min，然后用去离子水洗至无醇味后进行小花棘豆总提取物水溶液的梯度洗脱，用10% 100%的乙醇洗脱，收集50% 85%的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥仪干燥，得到棕黄色粉末；(4)小花棘豆黄酮的定性检测:通过显色反应和纸层析法鉴定，显色反应包括盐酸-镁试验、碱液试验和荧光试验；纸层析反应条件为:取待测液10 μ L点在滤纸上，用正丁醇:冰乙酸:水体积比=4: I: 5为展开剂，上行展开5h，取出晾干，喷1%氯化铝乙醇溶液，吹干后紫外灯下观察，结果表明得到棕黄色粉末为黄酮类物质；(5)小花棘豆黄酮含量的测定:采用NaNO2-Al (N03) 3_NaOH显色方法操作，在500nm或者274nm波长处测定吸光度,结果表明小花棘豆样品中黄酮含量为16.54mg/kg。本发明所述的小花棘豆黄酮在制备保肝和抗氧化药物及保健食品中的应用。与现有技术相比，本发明的有益效果为:(I)本发明建立了小花棘豆黄酮保肝和抗氧化作用的新用途，为进一步开发小花棘豆资源提供了新的思路。(2)本发明中的制备工艺简单，成本较低。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。小花棘豆提取试验:为了综合考察小花棘豆黄酮提取的影响因素，利用正交法“均衡分散”的特点，选取超声时间、甲醇浓度、物料比作为考察因素，并结合多次提取的经验每因素又选取3个水平安排试验，以黄酮的得率为衡量提取效率的客观指标，优选最佳提取工艺。表I正交试验设 计
权利要求
1.一种小花棘豆黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，阴干、粉碎、过20目筛后备用； (2)超声波协助法提取小花棘豆总提取物:称取小花棘豆样品，按照物料比1: 10 I: 20g/mL的比例加入体积分数60% 100%的甲醇超声波提取45 90min，超声波功率800W，温度45°C，提取完成后过滤，滤液采用旋转蒸发仪浓缩，恒温干燥箱干燥，即得到小花棘 总提取物； (3)小花棘豆黄酮的分离:将小花棘豆总提取物用水充分溶解；向层析柱中加入1/3体积的去离子水，然后将D-101型大孔吸附树脂用去离子水转移至层析柱中，加入70%的乙醇溶液，体积为树脂体积的2倍，流速为I倍树脂体积/min，然后用去离子水洗至无醇味后进行小花棘豆总提取物水溶液的梯度洗脱，用10% 100%的乙醇洗脱，收集50% 85%的乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥仪干燥，得到棕黄色粉末； (4)小花棘豆黄酮的定性检测:通过显色反应和纸层析法鉴定，显色反应包括盐酸-镁试验、碱液试验和荧光试验；纸层析反应条件为:取待测液10 μ L点在滤纸上，用正丁醇:冰乙酸:水体积比=4: I: 5为展开剂，上行展开5h，取出晾干，喷1%氯化铝乙醇溶液，吹干后紫外灯下观察，结果表明得到棕黄色粉末为黄酮类物质； (5)小花棘豆黄酮含量的测定:采用NaN02-Al(N03) 3-NaOH显色方法操作，在500nm或者274nm波长处测定吸光度,结果表明小花棘豆样品中黄酮含量为16.54mg/kg。
2.权利要求1所述的小花 棘豆黄酮在制备保肝和抗氧化药物及保健食品中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种小花棘豆黄酮的制备方法及其应用，包括以下步骤(1)小花棘豆粉碎；(2)超声波协助法提取小花棘豆总提取物；(3)小花棘豆黄酮的分离；(4)小花棘豆黄酮的定性检测；(5)小花棘豆黄酮含量的测定。本发明具有制备工艺简单，成本较低的特点，适合推广和应用。
文档编号A61P1/16GK103202872SQ201310132590
公开日2013年7月17日 申请日期2013年4月8日 优先权日2013年4月8日
发明者王帅, 马春晖, 胡建军, 贾琦珍, 陈根元, 杨丽娟 申请人:塔里木大学