专利名称：骨肽注射液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种注射液的制备方法，尤其涉及一种骨肽注射液的制备方法及由该制备方法得到的产品，属于药物领域。
背景技术：
骨肽注射液(骨宁注射液)提取自哺乳动物例如猪或牛的四肢骨，自1976年由南京生化药厂开发出来后，已在临床使用了近30年，主要用于治疗各种关节炎，能消炎止痛，疗效确切。近年来，所发现的骨肽注射液的治疗范围越来越广，如用于治疗骨质疏松(刘维润等，滨州医学院学报，第26卷第6期，2003，pp395)，也用于治疗四肢长骨骨折不愈合(薛云峰，河南外科学杂志，第10卷第2期，2004，pp16～17)。随着近年来分子药理学研究的深入，发现从哺乳动物例如猪或牛的四肢骨提取液中含有多种活性多肽物质，这些活性多肽能调节骨代谢，刺激成骨细胞增殖，促进新骨形成并调节钙、磷代谢，增加骨钙沉积，所以还可防治骨质疏松和骨折，其临床用途正在不断扩大。
骨肽注射液的传统制备方法除存在工艺复杂、步骤烦琐等缺陷外(参见《动物生化制药学》P283，人民卫生出版社出版，1981年版)，且其有效成分骨肽含量较低，杂质较多，限制了其有效应用。

发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种新的骨肽注射液，该骨肽注射液生产周期短、制备工艺简捷，有效成分骨肽含量高，且杂质含量少。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的本发明的骨肽注射液，可以由以下方法制备而成
1、将新鲜或冷冻保存的哺乳动物骨，洗净打碎称重，碎骨用盐水热压煮提一次或多次，离心过滤，合并煮提液，放至室温；将煮提液在在-4～8℃的低温下放置1～40小时，然后去除表层脂肪，将提取液温热后离心过滤，收集滤液备用；2、将滤液真空浓缩，搅拌下加入为滤液重量1～5倍的95％乙醇，静置沉淀完全后，虹吸出上层醇液，定容回收乙醇，水提液留用；3、将水提液直接或者加等体积蒸馏水，依次通过弱酸性阳离子树脂柱、弱碱性阴离子树脂柱、珠状壳聚糖柱和壳聚糖改性活性炭柱，去杂纯化，得纯净稀药液；4、将纯净稀药液浓缩后，加压过微孔滤膜，将滤液灌装、熔封、热压灭菌即得，或者，为了制备冻干粉针剂，可以将纯净稀药液经过常规方法冷冻干燥，得到冻干粉，制得骨肽注射液冻干粉针剂。
将药液进行冻干处理时，冻干方法没有限制，可以使用常规的冻干技术，例如冷冻冻干生产法，溶媒结晶生产法。
上述制备方法中，其中步骤1)中所述的哺乳动物骨优选猪或牛的四肢骨；碎骨用盐水热压煮提两次；所用盐水的浓度为0.15～0.2M；将煮提液在在-4～8℃的低温下优选放置8小时以上；步骤2)中优选搅拌下加入为滤液重量2～3倍的95％乙醇；步骤4)中优选将纯净稀药液浓缩至骨原料投料重的0.5～0.8倍，更优选为0.67倍(V/W)；步骤4)中将纯净稀药液浓缩后，加压过0.2um微孔滤膜。
本发明的优点本发明骨肽注射液其有效成分—骨肽含量高，杂质少，其制备工艺简捷，生产周期短，非常有利于大规模工业化生产。
以下通过实施例来进一步描述本发明的有益效果，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的范围。
具体实施例方式取新鲜猪四肢骨，洗净打碎，称50kg，加100L 0.15mol的NaCL溶液，于0.12兆帕，123℃热压提取2h，100目细布离心过滤，骨渣同样条件再提取一次过滤，合并两次滤液，得提取液200L；水提液先放至室温后，转放于冷藏室内4℃下存放过夜，次日除尽上层脂肪，下部提取液微温热后100目细布离心过滤；过滤液入真空浓缩罐，浓缩至35L时，放出降温，搅拌下加入70L95％的乙醇，搅拌10min，静置，待沉淀完全后，虹吸出上清醇液；将醇液回收乙醇至70L，余水药液约34L；向水药液中加入34L蒸馏水，搅匀后，依次通过弱酸性阳离子树脂柱(7kg)，弱碱性阴离子树脂柱(10kg)，珠状壳聚糖柱(3kg)，壳聚糖改性活性炭柱(3kg)，均控制流速5ml/min.cm2；将过柱后稀药液装入真空浓缩罐，浓缩至33.5L，用药液泵加压过0.2um微孔滤膜，将滤液灌装，2ml/支，熔封，115℃热压灭菌30min，得16750支。
经检测(检测方法参照国家药品标准WS1-XG-035-2000项下含量测定检验)，本实施例所制备的注射液中每毫升的骨肽含量为8mg；而采用现有技术所制备的骨肽注射液中，每毫升注射液中骨肽含量为6mg。
1、取冷冻保鲜的羊四肢骨，解冻后，洗净、打碎，称100kg，加200L 0.2mol的NaCL水，于0.122兆帕，125℃条件下热压提取1.5h，用100目滤布离心过滤。骨渣同样条件再提取一次，甩滤，合并两次滤液，得提取液400L。
2、水提液放至室温后，转移到冷藏室内-4℃下存放过夜。次日除去上层脂肪，下方提取液微温热后，用100目滤布离心甩滤。
3、过滤液装入真空浓缩罐，浓缩至70L时，放出药液降温，于搅拌下加入150L 95％的乙醇，搅拌10min，静置，待沉淀完全后，虹吸出上清醇液。
4、将醇液装入酒精回收塔，回收乙醇至150L，放出所余水药液约67L。
5、向水药液中加入67L蒸馏水，搅匀后，依次通过弱酸性阳离树脂柱(装量14kg)，弱碱性阴离子树脂柱(装量20kg)，珠状壳聚糖柱(装量6kg)，壳聚糖改性活性炭柱(装量6kg)，均控制流速为5ml/min.cm2。
6、将过柱后的稀药液转移至真空浓缩罐中，浓缩至67L，用药液泵加压通过0.2mm的微孔滤膜。
7、灌装，2ml/支，熔封，115℃热压灭菌30min，得产品33500支，含量2ml12mg。
经检测(检测方法参照国家药品标准WS1-XG-035-2000项下含量测定检验)，本实施例所制备的注射液中每毫升的骨肽含量为8mg；而采用现有技术所制备的骨肽注射液中，每毫升注射液中骨肽含量为6mg。
1、取冷冻保鲜的牛四肢骨，解冻后，洗净、打碎，称100kg，加200L 0.18mol的NaCL水，于0.122兆帕，125℃条件下热压提取1.5h，用100目滤布离心过滤。骨渣同样条件再提取一次，甩滤，合并两次滤液，得提取液400L。
2、水提液放至室温后，转移到冷藏室内8℃下存放过夜。次日除去上层脂肪，下方提取液微温热后，用100目滤布离心甩滤。
3、过滤液装入真空浓缩罐，浓缩至70L时，放出药液降温，于搅拌下加入200L 95％的乙醇，搅拌10min，静置，待沉淀完全后，虹吸出上清醇液。
4、将醇液装入酒精回收塔，回收乙醇至200L，放出所余水药液约67L。
5、向水药液中加入67L蒸馏水，搅匀后，依次通过弱酸性阳离树脂柱(装量14kg)，弱碱性阴离子树脂柱(装量20kg)，珠状壳聚糖柱(装量6kg)，壳聚糖改性活性炭柱(装量6kg)，均控制流速为5ml/min.cm2。
6、将过柱后的稀药液转移至真空浓缩罐中，浓缩至67L，用药液泵加压通过0.2mm的微孔滤膜。
7、灌装，2ml/支，熔封，115℃热压灭菌30min，得产品33500支。
经检测(检测方法参照国家药品标准WS1-XG-035-2000项下含量测定检验)，本实施例所制备的注射液中每毫升的骨肽含量为8mg；而采用现有技术所制备的骨肽注射液中，每毫升注射液中骨肽含量为6mg。
本发明骨肽注射液治疗膝关节骨性关节炎临床疗效观察试验将32例膝关节骨性关节患者随机分为两组，一组为治疗组，16人；另一组为对照组，16人；治疗组每天在关节腔内注射本发明实施例1所制备的骨肽注射液3ml，每周1次，对照组注射市售骨肽注射4ml，每周2次。治疗一个月，随访3个月，根据Goidberg VM及Legnesne MG的膝关节骨性关节炎临床评估指数分表进行评分，然后根据治疗前后的积分差，评定疗效。以治疗前后肌肤差大于50分为优，30～49分为良，10～29分为可，小9分为差，结果见表1。
表1 治疗的结果比较

由表1可见，本发明骨肽注射液与现有市售骨肽注射液相比，在用量较少的情况下，疗效更高。
权利要求
1.一种制备骨肽注射剂的方法，包括以下步骤1)、将哺乳动物骨用盐水热压煮提一次或多次，离心过滤，合并煮提液，在-4～8℃的低温下放置1～40小时，去除表层脂肪，将提取液温热后离心过滤，收集滤液备用；2)、将滤液真空浓缩，搅拌下加入为滤液重量1～5倍的95％乙醇，静置沉淀完全后，虹吸出上层醇液，水提液留用；3)、将水提液依次通过弱酸性阳离子树脂柱、弱碱性阴离子树脂柱、珠状壳聚糖柱和壳聚糖改性活性炭柱，得纯净稀药液；4)、将纯净稀药液浓缩后，加压过微孔滤膜，将滤液灌装、熔封、热压灭菌得到骨肽注射液；或者将纯净稀药液经冷冻干燥，得到冻干粉，得骨肽冻干粉针剂。
2.按照权利要求1的制备方法，其特征是步骤1)中所述哺乳动物骨为猪、牛或羊的四肢骨。
3.按照权利要求1的制备方法，其特征是步骤1)中所用盐水的浓度为0.15～0.2M。
4.按照权利要求1的制备方法，其特征是步骤1)中将哺乳动物骨用盐水热压煮提2次。
5.按照权利要求1的制备方法，其特征是步骤2)中将滤液真空浓缩，搅拌下加入为滤液重量2～3倍的95％乙醇。
6.按照权利要求1的制备方法，其特征是步骤4)中将纯净稀药液浓缩至骨原料投料重的0.5～0.8倍(V/W)。
7.按照权利要求6的制备方法，其特征是步骤4)中将纯净稀药液浓缩至骨原料投料重的0.67倍(V/W)。
8.按照权利要求1的制备方法，其特征是步骤4)中将纯净稀药液浓缩后，加压过0.2um微孔滤膜。
9.一种骨肽注射液，其特征是由权利要求1～8任一所述方法制备得到的产品。
全文摘要
本发明公开了一种新的骨肽注射液制备方法及由该方法得到的产品，其制备方法如下1).将哺乳动物骨用盐水热压煮提一次或多次，离心过滤，合并煮提液，在低温下放置1～40小时，将提取液温热后离心过滤，收集滤液备用；2).将滤液真空浓缩后加入乙醇，静置沉淀，吸出上层醇液，定容回收乙醇，得水提液；3).将水提液加等体积蒸馏水，依次通过弱酸性阳离子树脂柱、弱碱性阴离子树脂柱、珠状壳聚糖柱和壳聚糖改性活性炭柱，去杂纯化，得纯净稀药液；4).将纯净稀药液浓缩后，加压过微孔滤膜，将滤液灌装、熔封、热压灭菌，或将所得药液通过冷冻干燥，得到冻干粉针剂。本发明骨肽注射液含有较高的骨肽成分，制备工艺简捷，生产周期短。
文档编号A61K35/32GK1698655SQ20051007691
公开日2005年11月23日 申请日期2005年6月9日 优先权日2005年6月9日
发明者赵红梅 申请人:赵红梅