专利名称：环磷酰胺和人参皂甙在制备治疗尖锐湿疣药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗尖锐湿疣的药物，具体地说涉及环磷酰胺联合人参皂苷在制备治 疗尖锐湿疣药物中的应用。
背景技术：
尖锐湿疣主要是由人乳头瘤病毒(HPV)6型和11型感染所致的一类极为常见的性 传播性疾病，目前常用的C02激光治疗、冷冻治疗、手术切除等治疗方法均不能有效清除残 余病毒并控制复发。这是由于人乳头瘤病毒对人体而言属于完全异己的生物体，机体免疫 系统对其可产生很强的免疫排斥反应，而过强的免疫排斥反应会造成对自身组织的攻击， 从而导致自身免疫性疾病。因此，为了避免这种情况，机体免疫系统进化出一套对免疫排 斥反应进行调节的机制，其核心是免疫系统产生了一类被称为调节性T细胞的免疫细胞亚 群。调节性T细胞亚群能够强烈地抑制机体排斥异己生物体的免疫排斥反应。现已知道，人 乳头瘤病毒HPV感染可诱导调节性T细胞在尖锐湿疣部位聚集，受其免疫抑制作用的影响， 使得机体免疫系统不能有效清除感染的HPV，从而导致尖锐湿疣的发生及治疗后的复发。为 此，中国专利申请“环磷酰胺在治疗尖锐湿疣中的应用”(申请号200910272393.0)公开了 一种将抗肿瘤化学药物环磷酰胺用于治疗尖锐湿疣的方法，在低剂量通过调动机体的免疫 功能，对尖锐湿疣产生良好的治疗效果，显示出良好的应用前景，但单一的环磷酰胺仍然不 能完全控制尖锐湿疣的复发。

发明内容
本发明的目的是提供一种环磷酰胺和人参皂苷在制备治疗尖锐湿疣药物中的应用。本发明所述治疗尖锐湿疣药物为含有环磷酰胺和人参皂苷及制药学上可接受的 辅料制成的药物制剂。上述药物制剂为片剂。上述药物制剂的每制剂单位中的环磷酰胺和人参皂苷的含量分别为50mg和 50mgo上述含有环磷酰胺和人参皂苷及制药学上可接受的辅料的药物制剂采用常规的 制备方法制成片剂。上述含有环磷酰胺和人参皂苷的片剂以口服方式给尖锐湿疣患者服用，具体为 每天一次，每次一片(每片含环磷酰胺和人参皂甙各50mg)，连续7天；或者每天一次，每 次一片，连续7天，间隔7天后，再连续服用7天。如前所述，调节性T细胞在尖锐湿疣组织中大量聚集，从而抑制裂解HPV病毒的免 疫细胞的活性。但是，解除调节性τ细胞的抑制作用并不意味着针对HPV病毒的免疫细胞 可以被充分激活。因此，采用联合方式，即消除尖锐湿疣组织中聚集的调节性T细胞并同时 活化针对抗HPV病毒的免疫细胞，将能充分调动机体的免疫功能，从而可有效杀伤HPV病毒感染的细胞，并清除病毒。由于机体细胞本身具有对少量的环磷酰胺进行生物转化，使之变 为无毒物质的功能，而高剂量使用环磷酰胺则会克服细胞的这种解毒功能，并通过与细胞 的DNA交联，从而诱发细胞死亡。因此，作为临床常用的抗肿瘤化学药物，在高剂量(200mg) 使用环磷酰胺时即可杀伤机体免疫细胞从而诱导免疫抑制。研究证实，低剂量的环磷酰胺 仅对调节性T细胞进行杀伤，对其它免疫细胞则无作用，即低剂量(50mg)使用环磷酰胺时 可增强免疫。人参在我国传统医学作为药材使用已有2000多年历史，作为人参主要活性成 分的人参皂甙，其一个重要作用机理就是对机体免疫细胞具有激活作用。本发明正是据此 提出，将环磷酰胺联合人参皂苷应用在制备治疗尖锐湿疣药物中，即给尖锐湿疣患者服用 含低剂量环磷酰胺和人参皂甙的药物，不但可消除尖锐湿疣组织中聚集的调节性T细胞， 并且可同时增强针对抗HPV病毒的免疫细胞的活性，从而有效调动机体产生有效抗人乳头 瘤病毒HPV的免疫应答。本发明发现，低剂量的环磷酰胺联合人参皂苷可有效清除尖锐湿 疣患者所感染的人乳头瘤病毒，对尖锐湿疣产生良好治疗作用，并可防止其复发，而且对尖 锐湿疣患者肝肾功能均不产生影响，无明显的毒副作用，显示环磷酰胺联合人参皂甙在治 疗尖锐湿疣中所具有的独特优势。


图1人参皂甙不影响低剂量环磷酰胺对小鼠体内调节性T细胞的清除。图2人参皂甙增强低剂量环磷酰胺对小鼠体内效应性T细胞的活化作用。图3人参皂甙增强低剂量环磷酰胺对小鼠体内自然杀伤NK细胞的活化作用。图4联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙不影响小鼠的肝肾功能。图5联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙显著降低尖锐湿疣患者外周血调节性T 细胞数量。图6联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙不影响尖锐湿疣患者外周血总T细胞数量。图7联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙不影响尖锐湿疣患者外周血外周血NK 细胞数量。图8联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙增强尖锐湿疣患者T细胞非特异性增殖。图9联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙增强尖锐湿疣患者HPV特异性T细胞增殖。图10联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙增强尖锐湿疣患者NK细胞对HPV感染 细胞的杀伤。图11与单独低剂量环磷酰胺相比，联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙对尖锐 湿疣具有更好的治疗效果。图12联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙服用低剂量环磷酰胺不影响尖锐湿疣 患者的肝肾功能。
具体实施例方式为了证实环磷酰胺联合人参皂甙对尖锐湿疣具有治疗作用，并可防止其复发，且无明显的毒副作用，下面结合附图和实施例进一步说明本发明。实施例1 见图1，人参皂甙不影响低剂量环磷酰胺对小鼠体内调节性T细胞的清 除。给小鼠腹腔注射生理盐水或0. 5mg环磷酰胺或0. 5mg的环磷酰胺和人参皂甙，每天一 次，共7天。解剖小鼠，研磨脾组织，制备单个脾细胞，进行流式细胞术测定调节性T细胞数 量，结果显示，人参皂甙不影响低剂量环磷酰胺对调节性T细胞清除(见图中上部分所示)； 另外，取少量脾细胞进行RT-PCR检测调节性T细胞特异性标志Foxp3和内参GAPDH(见图 中下部分所示)。实施例2 见图2-3，人参皂甙增强低剂量环磷酰胺对小鼠体内效应性T细胞和自 然杀伤NK细胞的活化作用。给小鼠腹腔注射生理盐水或0. 5mg环磷酰胺或0. 5mg的环磷 酰胺和人参皂甙，每天一次，共7天。解剖小鼠，研磨脾组织，制备单个脾细胞，进行T细胞 增殖试验和NK细胞活化试验。图2对培养的脾细胞中加入抗CD3和CD28的抗体，60小时 后，进行氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)标记检测T细胞的增殖。与安慰剂和低剂量环磷酰 胺组相比，人参皂甙联合环磷酰胺显著增强T细胞增殖(p*<0.05)。图3采用抗DX5(泛 NK细胞标志)抗体磁珠分离的方法，分离并体外加入白介素_2培养NK细胞。24小时后， ELISA检测培养上清Y-干扰素的水平。实施例3 见图4，低剂量环磷酰胺联合人参皂甙不影响小鼠的肝肾功能。给小鼠 腹腔注射一周低剂量环磷酰胺和人参皂甙。于服用后第1、7、14、30天，检测小鼠血中谷丙 转氨酶和肌酐含量。与对照组比较，环磷酰胺联合人参皂甙组血中谷丙转氨酶和肌酐含量 没有变化。图4显示为第7天所检测结果，其中实验组η = 18，对照组η = 18。实施例4 见图5-7，联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙选择性清除尖锐湿疣 患者调节性T细胞。尖锐湿疣患者联合服用50mg低剂量环磷酰胺和50mg人参皂甙(η = 18)或者服用安慰剂(η =18)。7天后，取患者外周血进行流式细胞术分析。与安慰剂组 相比，低剂量和高剂量环磷酰胺组均能显著降低患者外周血调节性T细胞的数目(图5，ρ* < 0. 05)，但对总T细胞(图6)和NK细胞(图7)的水平不产生影响。实施例5 见图8-10，联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙增强尖锐湿疣患者抗 HPV病毒免疫反应。尖锐湿疣患者联合服用50mg低剂量环磷酰胺和50mg人参皂甙7天。 第8天取其外周血并分离单个核细胞(PBMCs)，进行T细胞增殖试验、和NK细胞对HPV感 染细胞的杀伤试验。图8对培养的PBMCs中加入抗CD3和CD28的抗体，72小时后，进行氚 标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)标记检测T细胞的增殖。与安慰剂组相比，治疗组的T细胞增 殖显著增强(P* < 0. 05)。图9对培养的PBMCs中加入尖锐湿疣的裂解物，96小时后，进行 3H-TdR标记检测病毒特异性T细胞的增殖。与安慰剂组相比，治疗组的特异性T细胞增殖 显著增强(P* < 0. 05)。图10采用NK细胞分离试剂盒从PBMCs中分离NK细胞。分别进行 NK细胞对NK细胞敏感的K526白血病细胞和所分离的疣体细胞的杀伤试验。与安慰剂组相 比，治疗组具有更强的杀伤作用(P* < 0. 05)。实施例6 见图11，联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙低剂量环磷酰胺防止尖 锐湿疣的复发。对大的多发性尖锐湿疣组织进行二氧化碳激光治疗后，给患者联合服用低 剂量环磷酰胺和人参皂甙(η = 24)、单独服用低剂量环磷酰胺(η = 24)、安慰剂(η = 18)。 随访28周，安慰剂组复发率为94. 4%，联合服用组复发率为16. 7%，而单独服用组复发率 为33. 3%。比较联合组和单独组，Kaplan-Meier统计学分析P < 0. 05，表明低剂量环磷酰胺和人参皂甙联合治疗具有更好的疗效。实施例7 见图12，联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙不影响尖锐湿疣患者的 肝肾功能。尖锐湿疣患者联合服用一周的低剂量环磷酰胺和人参皂甙。于服用后第1、7、 14、30天，检测患者血中谷丙转氨酶和肌酐含量。与安慰剂组比较，治疗组血中谷丙转氨酶 和肌酐含量没有变化。图13显示为第7天所检测结果，其中低剂量组η = 18，安慰剂组η =18。实施例8 联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙对小的尖锐湿疣的治疗作用。小 的尖锐湿疣患者联合服用50mg低剂量环磷酰胺和50mg人参皂甙7天。结果显示，小的尖 锐湿疣显著消退。实施例9 联合服用低剂量环磷酰胺和人参皂甙防止大的尖锐湿疣的复发。对大 的多发性尖锐湿疣组织进行二氧化碳激光治疗后，给患者联合服用50mg低剂量环磷酰胺 和50mg人参皂甙，服用一周，能够有效防止复发。实施例10 药物制剂的制备，所用环磷酰胺和人参皂甙可为商品购买，辅料可采 用β _环糊精作为包裹物，并加入蔗糖或淀粉，按照常规的制备方法制备片剂，其中，每片 含环磷酰胺和人参皂甙各50mg。口服上述制得的含有低剂量环磷酰胺和人参皂甙的片剂时，每天一次，每次一片， 连续7天；或者每天一次，每次一片，连续7天，间隔7天后，再连续服用7天。
权利要求
环磷酰胺和人参皂甙在制备治疗尖锐湿疣药物中的应用。
2.一种治疗尖锐湿疣的药物制剂，其特征在于它含有环磷酰胺和人参皂甙及制药学 上可接受的辅料。
3.按权利要求2所述的治疗尖锐湿疣的药物制剂，其特征在于所述药物制剂是片剂。
4.按权利要求2或3所述的治疗尖锐湿疣的药物制剂，其特征在于所述药物制剂的 每制剂单位中的环磷酰胺和人参皂苷的含量分别为50mg和50mg。
全文摘要
本发明公开了环磷酰胺和人参皂甙在制备治疗尖锐湿疣药物中的应用。将环磷酰胺联合人参皂苷应用在制备治疗尖锐湿疣药物中，即给尖锐湿疣患者服用含低剂量环磷酰胺和人参皂甙的药物，可有效调动机体产生有效抗人乳头瘤病毒HPV的免疫应答，清除尖锐湿疣患者所感染的人乳头瘤病毒，对尖锐湿疣产生良好治疗作用，并可防止其复发，而且对尖锐湿疣患者肝肾功能均不产生影响，无明显的毒副作用，显示环磷酰胺联合人参皂甙在治疗尖锐湿疣中所具有的独特优势。
文档编号A61K31/704GK101919871SQ201010251788
公开日2010年12月22日 申请日期2010年8月10日 优先权日2010年8月10日
发明者黄波 申请人:黄波;湖北盛齐安生物科技有限公司