专利名称：茶色素在制备降低内皮素的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及茶色素的药物新用途，具体涉及茶色素在制备降低内皮素的药物中的应用，属于中药领域。
茶色素是从茶叶中提取的植物天然色素，是茶多酚中儿茶素经过氧化而成的一种活性色素复合物。茶色素由茶黄素、茶红素和茶褐素组成。对于茶色素的研究已有文献报道。CN1074618A公开了茶色素及其生产方法。该生产过程为，茶叶以煎煮取汁，碱化，浓缩，酸化，加入乙醇回流，乙醇回流液再碱化得到茶色素结晶品，经真空干燥，即得到该茶色素。用该方法制得的茶色素中茶黄素、茶红素和茶褐素三者有恒定的比例，可作为药用。对于茶色素的药用价值报道可以概括为降低血液粘滞度、降血脂、降胆固醇、预防和治疗心血管疾病。但到目前为止，尚未见有关茶色素用于降低内皮素的报道。
本发明的目的是提供茶色素的一种新的制药用途，即茶色素在制备降低内皮素的药物中的应用。
近年来，血清内皮素(ET)在心血管疾病的发生发展中的作用受到人们的广泛重视。已证实内皮素有强烈的收端血管作用，动物实验显示内皮素抗血清可使心肌梗死面积缩小。并且文献报道高血压冠心病患者血清内皮素升高，因此，寻找一种能够降低血清内皮素的药物，将有利于心血管疾病的治疗。茶色素具有明显降低血清内皮素的作用。
本发明茶色素的提取方法可以按照已知的提取工艺进行提取，优选是按照下述方法提取的茶色素(1)、将茶叶按1∶15-30倍比例加水后，经一次或一次以上的煎煮取汁，煎出液用在水溶液中能产生OH-离子的化合物进行碱化，调节PH8-10，然后在小于70℃下加热浓缩该碱化液至原体积量的1/4-1/10，得浓缩液；(2)浓缩液用酸调至PH3-6，酸化液加入乙醇1-10体积倍量，回流0,5-2小时，得醇回流液；(3)醇回流液用在水溶液能产生OH-离子的化合物调节PH7-10，沉淀后过滤，得茶色素结晶，茶色素结晶真空干燥，即得茶色素产品。
本发明的茶色素是一种药物活性成分，按照常规的制剂工艺，可以以茶色素为主活性组份，加入常规的赋性剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、、粘合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂等药物辅料，制成任何一种适合于临床上使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体制剂、注射剂等。
由于本发明首次公开了茶色素降低血清内皮素的药用作用，因此，将茶色素单独或与其他活性组份或辅料配合制成药剂，只要是该药剂用于降低内皮素，均属于本发明的保护范围。
本发明的茶色素在制成任何一种剂型时，均具有降低内皮素的作用。任何药剂，如果其组份中含有茶色素或仅以茶色素单一成分制备成药，在其包装或说明书等标识上或者在其他任何宣传品上只要注明或提示具有降低内皮素的作用，则落入本发明的保护范围之内。
本发明的茶色素是来源于药食两用的天然植物茶叶。因此，也可以将茶色素制成保健食品或保健药品。将茶色素制成的保健食品或保健药品，如果在其包装或说明书等标识上注明或提示有降低内皮素的作用，也落入本发明的保护范围之内。
实施例1配方茶色素125克药用淀粉 875克将上述组份入搅拌机，充分搅拌混匀，用胶囊机装胶囊，每粒装填1克，制得茶色素胶囊1000粒，每粒胶囊含茶色素125毫克。
实施例2茶色素 250克蒸馏水 2000毫升甜菊甙 1克将茶色素溶于蒸馏水中，充分混匀，加入甜菊甙，再次搅拌混匀，用罐装机装入玻璃瓶中，每瓶装10毫升，灭菌，制得茶色素口服液。
实验例1 茶色素对内皮素及钙相关激素的影响近年来，ET在心血管疾病的发生发展中的作用受到人们的广泛重视，已证实ET有强烈的收缩血管作用，动物实验显示ET抗血清可使心肌梗死面积缩小。
钙离子含量及代谢对于心血管系统有着重要的意义，有关钙相关激素在心血管系统的改变尚未见报道。
茶色素是从绿茶中提取的植物天然色素，经一系列药理，毒理研究及临床应用，证实其为一种防治心脑血管病的较为理想的新药。
本文应用茶色素治疗高血压，冠心病患者，观察其对内皮素及钙相关激素的影响，对其治疗机制进行探讨，有关这方面的研究尚未见报道。
资料与方法1、对象观察组32入，其中冠心病21人，高血压病11人，其中男性20人，女性12人，年龄45.6±5.8；对照组36人，均为身体健康查体人员，男性20人，女性16人，年龄41.6±4.8。
2、方法观察组口服茶色素胶囊每日3粒×4周，全部病人于治疗前后抽取静脉血测定并记录其内皮素及BGP、HCT、CGRP，采用放射免疫分析法。
3、数据处理实验数据采用均数±标准差(X±S)表示，显著性检验采用配对计量资料比较的T检验及两样本均数比较的T检验，以P＜0.05为显著性差异值。
结果一、对照组与观察组各指标比较见表1，从中可见除HCT外观察组各指标均高于对照组p＜0.001。
表1观察组与对照组各指标比较表例数 ET BGPhGT CGRP对照组 36 60.7±15.9 1.69±0.8 82.4±17.684.48±18.4观察组 32 180.09±50.04Δ18.8±17.3Δ 86.4±45.5241.67±90.7Δ＝P＜0.001二、观察组服药前后各指标比较见表2，可见服药后各指标均较前下降表2观察组服药前后各指标比较表ET BGP hCTCGRP治疗前 180.09±50.6418.8±17.3 86.4±45.5 241.67±90.7治疗后 96.6±30.54Δ 7.49±3.8Δ 41.77±14.5105±30.13ΔΔ＝P＜0.001讨论一、观察组ET的变化本文结果显示高血压冠心病患者ET升高，与文献报道相似。其机制为(1)动脉粥样硬化及自发痉挛使血管内皮细胞受损，受损的血管内皮细胞使ET的合成及释放发生异常，导致血管尤其是冠脉持续收缩，血管痉挛后内皮细胞进一步受损，形成恶性循环。ET是血管内皮细胞分泌的21肽血管收缩物质，对于血管的收缩效应，ET可能由两种细胞内传导系统所介导，即钙通道开放和磷酯醇活化，ET刺激磷脂酶活化后，促进三磷酸肌醇生成，后者促进钙从钙储备中释放至胞浆；活化的ET受体亦刺激电压依赖性钙通道和受体操作性钙通道，促进细胞外钙内流，增高细胞内游离钙导致血管收缩。ET激活磷脂酶A2后产生的TXA2等物质可进一步加强血管收缩效应。ET对体内不同血管的收缩强度不同，对冠脉最强，次为肢体动脉。
对于心肌，Kramer认为ET可能是哺乳类动物心脏最强的正性肌力物质，目前倾向于认为正性肌力的作用通过下述机制实现。(1)提高肌纤维对钙的敏感性，(2)促进细胞内碱化造成钠增加，进而激活钠、钙交换，导致钙增加和心肌收缩力增强，(3)促进心肌细胞肥大。但过高的ET可能增加血管阻力，并使心肌细胞内钙超负荷，从而损伤心肌细胞，诱发或加重心力衰竭。
Salvati等报告，ET可引起室速及室颤，其致心律失常作用不是继发于心肌缺血，而是对心肌的直接作用。总之，ET对于心血管系统疾病的发生、发展有极重要的作用。
二、本组测定的结果表示，服用茶色素后，ET的含量明显下降，茶色素使内皮细胞分泌，ET减少的机理可能是(1)茶色素能使缺血心肌氧自由基的生成减少，提高SOD的含量，从而减轻对内皮细胞损伤，(2)内皮细胞功能改替后，合成和释放内皮活性舒张因子(EDRF)增加，后者是ET的生理拮抗剂，可使ET合成减少。
本研究发现高血压、冠心病病人，三种钙相关激素含量均高于正常，提示存在钙代谢异常。高血压、冠心病病人ET含量明显高于正常，人体内降钙素基因相关肽含量代偿性增高，以抑制ET的mRNA表达，相应引起降钙素及骨钙素的增高。茶色素可通过多种机制降低ET含量，故也可相应降低降钙素基因相关肽及相应激素含量，其机制有待进一步探讨。
结论(1)心血管系统疾病患者ET含量明显升高，与文献报道大致相同。
(2)观察组钙相关激素含量明显升高，其机制有待进一步探讨。
(3)茶色素可使ET及钙相关激素降低，保护内皮组织，使其损伤减轻，功能恢复，从而证实茶色素明显有益于心血管疾病的恢复，值得临床推广应用。
实验例2 茶色素抗高血脂降低内皮素增强肿瘤免疫功能改善血流变的临床观察我们对茶色素的临床观察，发现茶色素对降低TC、TG、LDL-C、Apo-B、内皮素和增高HDL-C、Apo-A、HDL3-ch，改善血流变，调节微量元素，增强免疫功能，收到满意效果。
1对象方法
1.1病例选择 血脂异常者，指TC、TG、LDL-C、Apo-B四项中单项或多项升高者，或HDL-C、Apo-A降低者，共214例；对132例Apo-A、Apo-B的观察，对63例糖尿病HDL-ch亚组HDL2-ch、HDL3-ch、HDL2-ch/HDL3-ch观察，对76例心肌缺血心梗内皮素的观察，对30例肿瘤血Zn、Se及T细胞亚群观察，对98例冠心病或高脂血症血流变的观察，年龄45～84岁，性别男390人，女161人。
血脂正常值TC＜5.70MMol/L，TG＜1.60mmol/L，LDL＜3.1mmol/L，HDL男＞1.04，女＞1.17mmol/L。
1.2给药方法全部观察病历停用其它调脂剂，服用中外合资江西绿色制药有限公司提供的茶色素胶囊每次250mg(2粒)，每目3次，疗程30天。服药前后取血测所观察项目。受检者采血前一天晚餐不能进高脂饮食饮酒，晨起空腹取静脉血。采用自身对照方法。检测结果作统计学处理。
1.3疗效判定(1)显效达以下任何一项者，TC下降至正常或≥20％，TG下降至正常或≥40％，LDL-C下降至正常或≥20％，HDL-C上升至正常济颉菀.257mmol/L。(2)有效TC下降10％～20％，TG下降20％～40％，LDL下降10％～20％，HDL上升0.103～0.25mmol/L。(3)无效未达到有效标准者。(4)恶化达以下任何一项，TC上升≥10％，TG上升≥10％，HDL下降0.103～0.157mmol/L，LDL上升≥10％。
2结果2.1 214例高脂患者用茶色素治疗后TC、TG、HDL-C、LDL-C的疗效分析(表1)表1 茶色素治疗214例血脂异常的有效率(％)例数显效(n) 有效(n)无效(n) 恶化(n)总有效率(n)TC 11535.65(41) 31.30(36)29.56(34)3.47(4)66.95(77)TG 16535.15(58) 32.72(54)28.48(47)3.63(6)67.87(112)HDL 93 38.7(36)38.7(36) 18.27(17)4.3(4) 77.41(72)LDL 12845.31(58) 15.62(20)33.59(43)5.46(7)60.93(78)2.2 132例高脂血症患者服茶色素的结果(表2)表2用茶色素前后血脂及载脂蛋白的水平变化(X±s，mmol/L)组别 例数 TC TG LDL-C HDL-CApo-AApo-B服药前 132 5.97±0.251.82±0.18 3.78±0.161.26±0.270.47±0.19 0.81±0.16服药后 132 5.89±0.23** 1.77±0.16* 3.72±0.19** 1.34±0.12** 0.59±0.17*** 0.69±0.1***注*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.012.3 63例服用茶色素前后血清HDL-ch亚组的水平比较(表3)表3用茶色素前后血清HDL-ch亚组的水平比较(X±s(mg/dl)，n＝63)组别 HDL-chHDL2-ch HDL3-ch HDL2-ch/HDL3-ch用药前 47.91±9.45 17.10±7.03 30.81±6.14 0.56±1.14用药后 51.90±4.78 25.00±6.31 26.90±7.02 0.93±0.90P值 ＞0.05＜0.001 ＜0.01 ＜0.012.4 34例服用茶色素对血液流变学的影响(表4)表4用茶色素前后血流流变学的比较(X±s)服药前(n＝34)服药后(n＝34)全血比粘度高切 7.112±1.488 5.458±0.347*低切 13.151±3.247 7.357±1.234全血还原粘度高切 12.875±1.925 10.486±1.042*低切 23.97±4.148 14.852±2.081血浆比粘度 1.96±0.157 1.745±0.086血沉mm/h 21.232±14.87622.684±12.374红细胞压积％ 48.585±6.754 41.924±4.107*纤维蛋白原g/l 4.86±1.313.55±0.73*t检验*P＜0.0564例服用茶色素对血流变的影响(表5)
表5用茶色素治疗前后血流变学的变化X±s(mmol/L)项目 变化率(％) t值 P值给药前 给药后全血粘度高切率 5.22±1.42 4.73±1.169.38 2.14＜0.05全血粘度低切率 6.89±2.48 6.15±1.5410.74 2.03＜0.05血浆粘度 1.82±0.18 1.72±0.165.49 3.32＜0.01纤维蛋白原(g/l) 3.92±1.11 3.20±1.0218.36 3.82＜0.012.5 30例瘤病人服用茶色素后血锌、硒、T细胞亚群的变化(表6)表6服用茶色素前后肿瘤病人锌、硒与T细胞亚群变化的比较(X±s)T细胞亚群(％) 微量元素(mg/ml)血浆中 细胞内CD3CD4CD3CD4/CD3锌 硒 锌 硒服药前 51.00±1.57 35.75±1.93 26.98±1.23 1.33±0.10 0.91±0.28 0.0021±0.0019 8.21±2.47 0.021±0.001服药后 51.00±1.58 35.85±1.90 26.92±1.22 1.36±0.11 0.91±0.27 0.0022±0.0027 8.21±2.46 0.031±0.001P值 - ＜0.05＜0.05＜0.05 ＜0.05 -＜0.052.6 76例服用茶色素前后血清内皮素的观察(表7)表7 4组服茶色素前后血清内皮素浓度的测定例数 治疗前 治疗后 变化率(％)正常对照 30 26.20±3.4 20.38±2.7522.21老年无症状心肌缺血组 14 38.32±4.1332.60±3.9 16.02老年心绞痛组 20 67.61±9.0254.31±5.8 19.67老年心肌梗组 12 115.75±15.45 98.75±12.04 14.683讨论茶色素是从天然的绿茶中提取的一种以儿茶素为主的多元酚类特质，经过化学结构转变而成为一类水溶性色素。通过我们临床观察，证实茶色素有降低胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、载脂蛋白B(Apo-B)，升高高密度脂蛋白(HDL-C)，载脂蛋白A(Apo-A)的作用。统计学处理都有显著性，结果非常满意。HDL-C具有抗动脉粥样硬化作用，所以在降脂药的研究中，重要的是找出既能降低LDL-C和TG，同时又能升高HDL-C，并且升高其亚组HDL2-ch，降低HDL3-ch，使其比例增加。临床观察证实，茶色素符合这一要求。多年来许多调脂药问世，临床实践不能令人满意，如胆酸赘合物、苯氧芳酸类有调血脂作用，但副作用也较明显；潘特生副作用小但调脂作用也差；有些降脂药长期服用具有对肝肾损害的毒副作用。而茶色素通过临床观察没有发现任何副作用，是值得推广使用的药物。它具有延缓动脉粥样硬化，减少冠心病发病率的作用。对在我国占死亡第一位的心脑血管的预防，具有划时代的意义。
内皮素是一种多肽物质，以旁分泌和自分泌式调节局部血管紧张度，参与调节血压、促进血管平滑肌的增殖，调节心肌代谢和内分泌功能。生理状态下释放量很低，在心肌缺血，心肌梗塞等心肌缺氧状态下释放增加。据报道冠状脉内血栓形成与内皮素水平增高有关，我们对76例服用茶色素的临术观察发现，老年无症状心肌缺血组、老年心绞痛组、老年心肌梗塞组内皮素均有明显下降，特别是后两组均有显著性差异(P＜0.001)。
对98例血液流变学的观察，服茶色素前后对全血粘度高切率、全血粘度低切率、血浆粘度比、纤维蛋白原，均有明显降低，统计学处理(P＜0.05)。茶色素能有效的降低血液粘度，主要是通过降低纤维蛋白源，改善细胞膜的功能及血小板的流变性，改善血脂代谢，降低血脂有关。
对30例肿瘤病人观察，肿瘤患者由于多种因素使T细胞功能降低，免疫功能衰退，另外肿瘤患者对于组织坏死反应的白细胞内慢性调节物可使锌排泄增加，因而使患者缺锌。某些作者认为，硒的缺乏可能是癌的发病原因。硒可能通过选择性影响细胞糖酵解，抑制癌细胞的供能过程。它能促进和激活免疫反应。T细胞亚群是反应细胞免疫的，经服用茶色素后，与服前对比发现，抑制T细胞CD有上升趋势，高于对照组P＜0.01。服茶色素后血硒与T细胞CD8指标比服药前均有增高，这表明茶色素通过增加体内微量元素硒的含量而调节免疫功能，抑制了肿瘤的发展。
权利要求
1.茶色素在制备降低内皮素的药物中的应用。
2.茶色素在制备降低钙相关激素的药物中的应用。
3.根据权利要求2的应用，其中所说的钙相关激素包括骨钙素(BGP)、降钙素(HCT)及降钙素基因相关肽(CGRP)。
全文摘要
本发明公开了茶色素的新制药用途,即茶色素具有降低血清内皮素及钙相关激素的作用。
文档编号A61P5/00GK1208623SQ97115209
公开日1999年2月24日 申请日期1997年8月18日 优先权日1997年8月18日
发明者孙刘根, 田晓莉, 宋安齐, 冯鹤卿, 司亚元 申请人:江西省绿色工业集团公司