专利名称：氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯化合物及其作为佐剂和免疫效应物的用途的制作方法
技术领域：
本发明一般涉及具有作为佐剂和免疫效应物的活性的氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGP)化合物和与之相关的方法和组合物。
疫苗将来自产生疾病的病原体的外源抗原传递给宿主，使得宿主可以增加保护性免疫反应。通常的疫苗抗原是导致疾病的微生物的灭活或减毒形式。在这些灭活或减毒疫苗中非必需的成分和抗原的存在对纯化包括使用化学和重组技术开发的充分明确的合成抗原在内的疫苗成分具有相当令人鼓舞的成就。然而，纯化和简化微生物疫苗已经伴随导致功效的丧失。尽管低分子量合成抗原可以避免潜在的有害污染物，但是它们自身并不是免疫原性的。这些观察结果使得研究人员有可能给疫苗组合物添加佐剂以便强化纯化疫苗成分的活性。
目前在美国允许用于人体的唯一佐剂是明矾，它是一组铝盐(例如氢氧化铝、磷酸铝)，其中配制了疫苗抗原。类似于明矾这样的微粒载体用于通过巨噬细胞促进吸收、加工和呈递可溶性抗原。然而明矾并非没有副作用且仅促进体液(抗体)免疫。
有效的佐剂可以强化预防接种动物体内的体液和细胞免疫反应。此外，佐剂必须提高宿主的天然免疫反应而不会使该宿主的系统恶化。不含体外物质的稳定且易于制备的充分明确的合成佐剂会提供这些特性。然而，已经制备并测试了佐剂性的化合物(Shimizu等1985，Bulusu等1992，Ikeda等1993，Shimizu等1994，Shimizu等1995，Miyajima等1996)通常显示出毒性特性、不稳定和/或基本上不具有免疫刺激作用。
发现和开发有效的佐剂对改善现存疫苗的功效和安全性来说是必不可少的。佐剂使得合成肽类和碳水化合物抗原具有足够的免疫原性以便确保合成疫苗成功进入。存在对具有有效免疫调节作用的新型化合物的需求。
发明概括本发明主题的化合物是属于佐剂和免疫效应物的氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯化合物(AGPs)。氨基烷基(糖苷配基)以糖苷键的方式与2-脱氧-2-氨基-α-D-吡喃葡萄糖(氨基葡糖苷)连接而形成所要求保护的分子的基础结构。这些化合物在氨基葡糖苷环的4位或6位碳上被磷酸化。此外，这些化合物带有3个3-烷酰氧基烷酰基残基。
本发明主题的化合物是可增加免疫动物体内抗体产生、刺激细胞因子产生和激活巨噬细胞的免疫效应物分子。根据本发明的主题，本文公开了这些化合物作为佐剂和免疫效应物的使用方法。发明详述本发明主题的化合物是属于氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGPs)的佐剂和免疫效应物分子。这些化合物包括以糖苷键与氨基烷基(糖苷配基)连接的2-脱氧-2-氨基-α-D-吡喃葡萄糖(氨基葡糖苷)。化合物在氨基葡糖苷环的4位或6位碳上被磷酸化且带有3个3-烷酰氧基烷酰基残基。本发明主题的化合物一般由下列通式I所描述 其中X代表直立或平伏(equitorial)位上的氧和硫原子；Y代表氧原子或NH基；“n”、“m”、“p”和“q”是0-6的整数；R1、R2和R3代表带有1-20个碳原子的正构脂肪酰基残基且其中R1、R2和R3之一可选是氢；R4和R5是H和甲基；R6和R7是氢、羟基、烷氧基、膦酰基、膦酰氧基、磺基、磺基氧基、氨基、巯基、氰基、硝基、甲酰基或羧基及其酯类和酰胺类；R8和R9是膦酰基或氢。与正构脂肪酰基残基连接的3’立体化学(stereogenic)中心的构型是R或S型，而优选R型。与R4或R5连接的碳原子的立体化学可以是R或S型。包括对映体和非对映体的所有立体异构体及其混合物均属于本发明主题的范围。
本发明主题的化合物中的杂原子X可以是氧或硫。在一个优选的实施方案中，X是氧且一般位于平伏位上。尽管该分子的稳定性可能受到X上取代的影响，但是预计具有这些取代的分子的免疫调节活性没有改变。
杂原子X与糖苷配基氮原子之间的碳原子数由变量″n″和″m″来决定。变量″n″和″m″可以是0-6的整数。在一个优选的实施方案中，杂原子X与糖苷配基氮原子之间碳原子的总数约为2-约6且最优选约为2-约4。
本发明主题的化合物是被磷酸化的氨基烷基氨基葡糖苷化合物。化合物可以在氨基葡糖苷环4或6位(R8或R9)上被磷酸化且如果至少在这些位置之一上被磷酸化则是最有效的。在一个优选的实施方案中，R8是膦酰基且R9是氢。
在一个实施方案中，本发明主题的化合物六酰化，即它们总计含有6个脂肪酸残基。氨基烷基氨基葡糖苷部分在氨基葡糖苷单元的2-氨基和3-羟基上和糖苷配基单元的氨基上被3-羟基烷酰基残基酰化。在通式I中，有3个位置被3-羟基十四酰基部分酰化。3-羟基十四酰基残基又被正构脂肪酸(R1-R3)取代，从而总计形成了3个3-正-烷酰氧基十四酰基残基或6个脂肪酸基。
在另一个实施方案中，本发明主题的化合物被五酰化，即它们总计含有5个脂肪酸残基。更具体地说，通式I的3-羟基十四酰基残基在R1、R2和R33个位置中的两个上被正构脂肪酸取代，而R1、R2和R3的第3个位置是氢。换句话说，-OR1、-OR2或-OR3中至少一个是羟基。
正构脂肪酸R1-R3的链长可以是1-约20个碳且一般约为7-约16个碳。优选R1-R3约为9-约14个碳。这些正构脂肪酸的链长可以相同或不同。尽管仅描述了正构脂肪酸，但是预计在本发明主题化合物R1-R3上取代的不饱和脂肪酸(即具有双键或三键的脂肪酸部分)可以产生生物活性分子。此外，预计在3-羟基烷酰基残基链长上的轻度修饰不会显著影响生物活性。
本发明主题的化合物是可促进免疫动物体内抗体生成、刺激细胞因子产生并刺激包括细胞毒性T-淋巴细胞反应在内的细胞介导的免疫反应的佐剂和免疫效应物。在用于引起个体免疫反应的方法中，可以用药物上可接受的注射或摄取用载体配制本发明主题的化合物。本文所用的″药物上可接受的载体″指的是不会干扰活性组分免疫调节活性且对所给予的患者而言是无毒性的介质。药物上可接受的载体包括水包油型或油包水型乳剂、含水组合物、脂质体、微珠和微粒体。例如，所述的载体可以是微球体或微粒，在该球体或颗粒基质内含有本发明的化合物或在该球体或颗粒表面上吸附有本发明的化合物。所述的载体还可以是含有三乙胺、三乙醇胺或使制品呈碱性的其它试剂的水溶液或胶束分散体或含有氢氧化铝、氢氧化钙、磷酸钙或酪氨酸吸附物的混悬液。
可以经非肠道即腹膜内、皮下或肌内给药的方式给予本发明主题的化合物制品包括下列优选的载体。皮下用的优选载体的实例包括磷酸缓冲盐水(PBS)溶液和0.01-0.1％三乙醇胺的USP注射用水溶液。合适的肌内注射用载体包括10％USP乙醇、40％丙二醇和诸如5％葡萄糖这样的平衡量可接受的等渗溶液。
静脉内用的优选载体的实例包括10％USP乙醇、40％USP丙二醇和平衡量USP注射用水。另一种可接受的载体包括10％USP乙醇和USP注射用水；另一种可接受的载体是0.01-0.1％三乙醇胺的USP注射用水的溶液。提供这样的药物上可接受的非肠道用溶剂，使得溶液或分散体可以通过5微米滤器过滤而不会除去活性组分。
通过粘膜表面给药的载体的实例取决于特定的途径。当口服给药时，使用药用级甘露糖醇、淀粉、乳糖、硬脂酸镁、糖精钠(sodiumsaccharide)、纤维素、碳酸镁等，其中优选甘露糖醇。当经鼻内给药时，可以使用聚乙二醇或二醇类、蔗糖、和/或甲基纤维素和诸如苯扎氯铵、EDTA这样的防腐剂，其中优选聚乙二醇；而当通过吸入给药时，合适的载体是聚乙二醇或二醇类、甲基纤维素、分散剂和防腐剂，其中优选聚乙二醇。
以″有效量″对个体给予本发明主题的化合物以提高所述个体的免疫反应。本文所用的″有效量″是表现出超过载体或阴性对照的反应的用量。对患者给予的本发明主题的化合物的精确剂量取决于所用的特定AGP、给药途径、药物组合物和患者。例如，当经皮下给药以提高抗体反应时，以对典型的70kg成人患者给药为基准，所用的AGP的量为1-约250微克、优选约25-约50微克。
在疫苗组合物中，将本发明主题的AGPs与抗原一起对包括人在内的温血动物给药。为引起所需反应而给予的抗原的用量可以由本领域技术人员方便地确定且根据所给予的抗原类型、给药途径和免疫方案的不同而改变。例如，在间隔21天对小鼠经皮下给予0.2μg破伤风类毒素和要求保护的化合物的两次免疫接种引起了对该抗原的体液免疫反应。
通过使N-酰氧基酰化或N-被护氨基链烷醇或氨基烷硫醇(糖苷配基单元)与合适的被护和/或3-O-酰氧基酰化的氨基葡糖苷单元偶联来合成本发明主题的化合物。在一种用于制备本发明主题的化合物的优选方法中(反应流程1)，在有汞或银盐存在的情况下使N-(2，2，2-三氯乙氧基羰基(Troc))-保护的糖基卤化物1(Z＝F、Cl、Br)与N-[(R)-3-n-烷酰氧基十四酰基]氨基链烷醇或硫醇2(具有合适被护形式的R5和R6)通过Koenigs-Knorr型反应偶联而生成苷中间体3。优选氨基葡糖苷单元1带有异头氯原子(Z＝Cl)且偶联催化剂是三氟甲磺酸银。还可以在有诸如醚合三氟化硼这样的路易斯酸存在的情况下通过使糖苷配基单元2与N-Troc-保护的乙酸糖酯(Z＝OAc)或相关的活化衍生物偶联来制备中间体3。所谓的″活化的″指的是带有与氨基葡糖苷单元端基异构中心连接的适宜可取代的离去基团″Z″。氨基葡糖苷单元1在3-位上带有(R)-3-n-烷酰氧基十四酰基残基，而合适的保护基位于6-羟基和4-磷酸酯基上。磷酸酯基的典型保护基包括但不限于苯基、苄基和邻-二甲苯基。所述的磷酸酯基优选被两个苯基保护。6-位可以被通常用于糖化学的保护基团暂时保护，诸如甲硅烷基、苄基或苄氧基甲基醚类或另一方面是碳酸烷基酯。优选6-羟基被保护为1，1-二甲基-2，2，2-三氯乙基碳酸酯(TCBOC)。
用锌除去Koenigs-Knorr偶联产物3中基于三氯乙基的保护基并在有合适偶合试剂存在的情况下用(R)-3-n-烷酰氧基十四酸4选择性地使氨基葡糖苷的氮酰化而生成六酰化衍生物5。然后通过在有钯或铂催化剂存在的情况下催化氢化或通过其它适宜方式使5中剩余的保护基裂解而生成通式(I)的化合物。
用于合成糖基供体1的合适原料是2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-氨基-2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-β-D-吡喃葡糖苷，可以使用公开的方法由商购的D-氨基葡糖苷盐酸盐来制备它。可以通过本领域公知的方法或本文所述的其改变方法将2-(三甲基甲硅烷基)乙基苷原料转化成糖基供体1。可以通过用适宜的(R)-3-n-烷酰氧基十四酸4使商购的原料N-酰氧基酰化或使可以通过化学文献中公知方法获得的原料N-乙酰基酰化来制备糖苷配基单元2。另一方面，2中的N-酰氧基酰基残基可以被适宜的胺保护基取代，所述的胺保护基在诸如下面第二个优选实施方案中所述的偶联反应之后被除去。
在用于制备本发明主题的化合物的第二种优选方法中(反应流程2)，在使用适合于对存在的氨基和羟基进行化学区分的N-和O-保护基进行糖基化(偶联)反应后将(R)-3-n-烷酰氧基十四酰基和磷酸酯基引入氨基葡糖苷和糖苷配基单元中。优选在适宜催化剂存在的情况下使N-Troc-保护的糖基供体6与N-烯丙氧基羰基(AOC)保护的氨基链烷醇或硫醇7偶联而生成氨基烷基β-苷8。最优选所述的糖基供体6带有异头乙酰氧基(Z＝OAc)且偶联催化剂是醚合三氟化硼。其它用于糖苷配基氨基的N-保护基包括但不限于对本领域技术人员而言显然是常用的氨基甲酸酯类，诸如叔丁基(t-BOC)、苄基(Cbz)、2，2，2-三氯乙基(Troc)和9-芴基甲基(Fmoc)。
在本领域中公知的标准条件下使偶联产物8和4，6-丙酮化物形成中的乙酸酯基进行碱诱导的裂解而生成中间体9。用(R)-3-n-烷酰氧基十四酸4使9进行3-O-酰化，随后以钯(O)为介体除去糖苷配基N-AOC基并用(R)-3-n-烷酰氧基十四酸进行酰化而得到中间体10。为制备糖基供体1对4-和6-位进行本文所述的丙酮化物水解和官能化而生成中间体3(Y＝O)，然后如反应流程1中所述进行处理而得到通式(I)的化合物。
通过下列仅用于解释目的的非限制性实施例和试验例来进一步描述本发明。重要的是应注意将(R)-3-n-烷酰氧基十四酰基和磷酸酯基引入氨基葡糖苷和糖苷配基单元中不一定必须按照反应流程1和2或如下述实施例中所述的顺序进行。 反应流程1 反应流程2
实施例1-43描述了本发明主题的AGP化合物的制备方法。试验例1-13描述了为测定这些化合物的免疫原性而进行的试验。表1列举了这些实施例中各化合物的化学组成和实验参考号。
表1实施例参考号 R1-R3n p R6q R71 - - - - - - -2B1*n-C13H27CO 0 1 OH 0 H3B2**n-C13H27CO 0 1 OH 0 H4B3 n-C11H23CO 0 1 OH 0 H5B4 n-C10H21CO 0 1 OH 0 H6B5 n-C9H19CO 0 1 OH 0 H7B6***n-C9H19CO 0 1 OH 0 H8B7 n-C8H17CO 0 1 OH 0 H9B8 n-C6H13CO 0 1 OH 0 H10 B9 n-C9H19CO 1 1 OH 0 H11 B10 n-C9H19CO 0 2 OH 0 H12 B11 n-C13H27CO 0 0 CO2H 0 H113 B12 n-C11H23CO 0 0 CO2H 0 H14 B13 n-C10H21CO 0 0 CO2H 0 H15 B14**n-C9H19CO 0 0 CO2H 0 H16 B15*n-C9H19CO 0 0 CO2H 0 H
实施例参考号 R1-R3n p R6q R717B16 n-C8H17CO 0 0CO2H 0 H18B17 n-C7H15CO 0 0CO2H 0 H19B18 n-C6H13CO 0 0CO2H 0 H20B19 n-C13H27CO 0 0 H0 H21B20 n-C9H19CO 0 0 H0 H22B21 2-C13H27CO 1 0 H0 H23B22 n-C13H27CO 2 0 H0 H24B23 n-C13H27CO 4 0 H0 H25B24 n-C13H27CO 0 0 CONH20 H26B25 n-C9H19CO 0 0 CONH20 H27B26 n-C13H27CO 0 0 CO2Me0 H28B27 n-C13H27CO 0 0 H1 CO2H29B28 n-C9H19CO 1 0 H1 CO2H30B29 n-C5H11CO 0 0 CONH20 H31B30 R1＝R3＝n-C9H19CO 0 0 CONH20 H1R2＝n-C5H11CO32B31 n-C5H11CO 0 0 H0 H33B32 R1＝n-C13H27CO0 0 H0 HR2＝n-C17H35COR3＝n-C15H31CO
实施例参考号 R1-R3n p R6q R734 B34 n-C5H11CO 0 0CO2H 0 H35 B35 R1＝n-C5H11CO0 0CO2H 0 HR2＝R3＝n-C9H19CO36 B36 R1＝R3＝n-C9H19CO 0 0CO2H 0 HR2＝n-C5H11CO37 B37 R1＝R2＝n-C9H19CO 0 0CO2H 0 HR3＝n-C5H11CO38 B38 R1＝n-C9H11CO 0 0CO2H 0 HR2＝R3＝n-C5H11CO39 B39 R1＝R3＝n-C5H11CO0 0CO2H 0 HR2＝n-C9H19CO40 B40 R1＝R2＝n-C5H11CO0 0CO2H 0 HR3＝n-C9H19CO41 B41 R1＝R3＝n-C9H19CO0 1 OH0 HR2＝n-C5H11CO42 B42 n-C9H11CO 0 2CO2H 0 H43 B43 R1＝n-C13H27CO 0 0CO2H 0 HR2＝n-C11H23COR3＝H就全部所示的实施例而言X＝Y＝O；R4＝R5＝H；m＝0；R8＝膦酰基；R9＝H*与R5连接的碳原子的立体化学是S。
**与R5连接的碳原子的立体化学是R。
***R8是H和R9是膦酰基。
实施例1(R)-3-N-烷酰氧基十四酸(4)的制备(1)通过喷射氩气(15分钟)使3-氧代十四酸甲酯(19g，0.074mol)溶于MeOH(100mL)所得到的溶液脱气。加入[(R)-Ru(Binap)Cl]2·NEt3催化剂(0.187g，0.111mmol)和2N HCl水溶液(0.5mL)并在60psig和40-50℃下使所得的混合物氢化18小时。将该反应体系用己烷(250mL)稀释、通过硅胶短柱过滤并浓缩。将粗产物溶于四氢呋喃(THF；200mL)、用2.4N LiOH水溶液(83mL，0.2mol)处理并在室温下剧烈搅拌4小时。使所得的淤浆在乙醚(200mL)和1N HCl水溶液(200mL)之间分配并分离各层。将水层用乙醚(100mL)提取并干燥合并的醚提取物(Na2SO4)且浓缩。将粗的羟酸溶于热乙腈(250mL)，用二环己胺(DCHA；17mL，0.085mol)处理并在60℃下搅拌1小时。收集冷却时结晶的产物并使之从乙腈(650mL)中重结晶而得到28.6g(91％)的(R)-3-羟基十四酸二环己基铵、为一种无色固体mp94-95℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(～t，3H，J～6.5Hz)，1.05-1.58(m，24H)，1.65(m，2H)，1.80(m，4H)，2.01(br d，4H)2.18(dd，1H，J＝15.7，9.4Hz)，2.36(dd，1H，J＝15.7，2.6Hz)，2.94(m，2H)，3.84(m，1H)(2)向上述(1)中制备的化合物(50g，0.117mol)和2，4’-二溴乙酰苯(39g，0.14mol)溶于EtOAc(2.3L)所得到的混合物中加入三乙胺(19.6mL，0.14mol)并在室温下将所得的溶液搅拌18小时。收集形成的大量沉淀并用温EtOAc(3×400mL)研制。用1M HCl水溶液、饱和NaCl水溶液洗涤合并的研制物和滤液并干燥(Na2SO4)。在减压条件下除去挥发性物质并使获得的粗产物从EtOAc-己烷中结晶而得到47.2g(91％)的(R)-3-羟基十四酸对溴苯甲酰甲酯、为一种无色固体mp109-109.5℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(～t，3H，J～6.5Hz)1.15-1.70(m，20H)，2.56(dd，1H，J＝15.1，9.1Hz)，2.69(dd，1H，J＝15.1，2.9Hz)，3.27(br s，1H)，4.12(m，1H)，5.31(d，1H，J＝16.5Hz)，5.42(d，1H，J＝16.5Hz)，7.65(d，2H，J＝8.5Hz)，7.78(d，2H，J＝8.5Hz).
(3)在室温下用肉豆蔻酰氯(3.1mL，11.4mmol)处理上述(2)中制备的化合物(4.6g，10.4mmol)溶于含有4-二甲氨基吡啶(0.12g，1.0mmol)和吡啶(5mL，62mmol)的CH2Cl2(50mL)所得到的溶液。在室温下搅拌5小时后，加入MeOH(0.5mL)并浓缩该反应混合物。使残余物在Et2O(150mL)与冷的10％HCl水溶液(50mL)之间分配并分离各层。干燥醚层(Na2SO4)并浓缩且在硅胶柱的短衬垫上用5％EtOAc-己烷纯化获得的残余物。将二酯溶于AcOH(42mL)并在60℃下用3个等份的锌粉(～6g，90mmol)处理1小时。在60℃下再经过1小时后，将冷却的反应混合物进行超声处理(5分钟)、通过Celite过滤并浓缩。通过使用10％EtOAc-己烷的硅胶快速硅胶色谱法纯化残余物而得到4.17g(82％)的(R)-3-十四酰氧基十四酸、为一种无色固体mp28-29℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(～t，6H)，1.15-1.40(m，38H)，1.50-1.70(m，4H)，2.28(t，2H，J＝7.4Hz)，2.56(dd，1H，J＝15.9，5.8Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.9，7.1Hz)，5.21(m，1H).
(4)按照与实施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(0.57mL，7.0mmol)存在的情况下于CH2Cl2(60mL)中用月桂酰氯(1.45mL，6.5mmol)酰化实施例1-(2)中制备的化合物(2.5g，5.68mmol)且然后在AcOH(40mL)中用锌(9.3g，142mmol)使之脱保护而得到(R)-3-十二酰氧基十四酸、为一种无色油状物1H NMR(CDCl3)δ0.90(t，6H，J＝6.5Hz)，1.0-1.75(m，46H)，2.30(m，2H)，2.62(m，2H)，5.22(m，1H).
(5)用十一酸(1.16g，6.25mmol)和EDC MeI(2.08g，7.0mmol)在CH2Cl2(60mL)中处理实施例1-(2)中制备的化合物溶液(2.5g，5.68mmol)且然后如实施例1-(3)中所述在AcOH(40mL)中用锌(9.3g，142mmol)使之脱保护而得到(R)-3-十一酰氧基十四酸、为一种无色油状物1H NMR(CDCl3)δ0.89(t，6H，J＝6.7Hz)，1.0-1.75(m，44H)，2.29(m，2H，2.61(m，2H)，5.22(m，1H).
(6)按照与实施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(1.2mL，15.0mmol)存在的情况下在CH2Cl2(100mL)中用癸酰基氯(2.3mL，11mmol)酰化实施例1-(2)中制备的化合物(4.4g，10mmol)且然后在AcOH(60mL)中用锌(16.4g，250mmol)使之脱保护而得到(R)-3-癸酰氧基十四酸、为一种无色油状物1H NMR(CDCl3)δ0.89(t，6H，J＝6.8Hz)，1.0-1.75(m，34H)，2.29(t，2H，J＝7.4Hz)，2.61(t，2H，J＝4.2Hz)，5.22(m，1H).
(7)按照与实施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(0.57mL，7.0mmol)存在的情况下在CH2Cl2(60mL)中用壬酰基氯(1.13mL，6.25mmol)酰化实施例1-(2)中制备的化合物(2.5g，5.68mmol)且然后在AcOH(40mL)中用锌(9.3g，142mmol)使之脱保护而得到(R)-3-壬酰氧基十四酸、为一种无色油状物1H NMR(CDCl3)δ0.89(t，6H，J＝6.9Hz)，1.0-1.75(m，32H)，2.29(t，2H，J＝7.5Hz)，2.61(m，2H)，5.22(m，1H).
(8)按照与实施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(0.57mL，7.0mmol)存在的情况下在CH2Cl2(60mL)中用辛酰基氯(1.07mL，6.25mmol)酰化实施例1-(2)中制备的化合物(2.5g，5.68mmol)且然后在AcOH(40mL)中用锌(9.3g，142mmol)使之脱保护而得到(R)-3-辛酰氧基十四酸、为一种无色油状物1H NMR(CDCl3)δ0.92(t，6H，J＝6.9Hz)，1.0-1.75(m，30H)，2.32(t，2H，J＝7.4Hz)，2.63(t，2H，J＝4.4Hz)，5.23(m，1H).
(9)按照与实施例1-(3)中所述相同的方式，在有吡啶(0.57mL，7.0mmol)存在的情况下在CH2Cl2(60mL)中用庚酰基氯(0.97mL，6.25mmol)酰化实施例1-(2)中制备的化合物(2.5g，5.68mmol)且然后在AcOH(40mL)中用锌(9.3g，142mmol)使之脱保护而得到(R)-3-辛酰氧基十四酸、为一种无色油状物1H NMR(CDCl3)δ0.89(t，6H，J＝6.8Hz)，1.0-1.75(m，28H)，2.29(t，2H，J＝7.4Hz)，2.61(d，2H，J＝5.8Hz)，5.22(m，1H).
实施例2(B1)3-羟基-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基-2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2).
(1)向2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-氨基-2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-β-D-吡喃葡糖苷(6.46g，20.2mmol)溶于CHCl3(300mL)所得到的溶液中加入1N NaHCO3水溶液(300mL)和氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(8.5g，40mmol)。在室温下将所得混合物剧烈搅拌3小时。将有机层分离、干燥(Na2SO4)并浓缩至得到一种无色糖浆状物。进行硅胶快速色谱法(梯度洗脱，30→40％EtOAc-己烷)而得到9.6g(96％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色固体mp 69-70℃；1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.94(m，2H)，1.44和1.52(2s，6H)，2.94(br s，1H)，3.23-3.37(m，2H)，3.48-3.62(m，2H)，3.79(t，1H，J＝～10.5Hz)，3.88-4.08(m，3H)，4.65(d，1H，J＝8.3Hz)，4.74(m，2H)，5.39(d，1H，J＝7.4Hz).
(2)用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺甲碘化物(EDC-MeI；4.94g，16.7mmol)处理上述(1)中制备的化合物(7.5g，15.2mmol)、(R)-3-十四酰氧基十四酸(7.58g，16.7mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(0.25g，1.7mmol)溶于CH2Cl2(95mL)所得到的溶液并在室温下搅拌16小时。将该反应混合物通过Celite短衬垫过滤、浓缩并在60℃下和90％AcOH水溶液(100mL)中将所得的残余物加热1小时。浓缩该混合物并通过与甲苯(2×150mL)共沸而除去残余的AcOH和水。通过硅胶快速色谱法纯化粗二醇(梯度洗脱，30→40％ EtOAc-己烷)而得到11.8g(83％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.9(m，8H)，1.1-1.7(m，42H)，2.30(t，2H，J＝7.4Hz)，2.52(m，2H)，3.36-3.72(m，4H)，3.78-4.03(m，3H)，4.57(d，1H，J＝8.3Hz)，4.65(d，1H，J＝11Hz)，4.77(d，1H，J＝11Hz)，5.0-5.15(m，2H)，5.20(d，1H，J＝7.4Hz).
(3)在0℃下和15分钟内用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(3.17g，13.2mmol)溶于CH2Cl2(25mL)所得到的溶液滴加处理上述(2)中制备的化合物(10.9g，12mmol)和吡啶(2mL，25mmol)溶于CH2Cl2(125mL)所得到的溶液。在3.5小时内将该反应混合物缓慢温至环境温度。依次加入4-吡咯烷子基吡啶(0.89g，6.0mmol)、N，N-二异丙基乙胺(10.5mL，60mmol)和氯磷酸二苯酯(3.7mL，18mmol)并将所得的混合物在室温下搅拌5小时。将该反应混合物用CH2Cl2(500mL)稀释、用冷7.5％HCl水溶液(2×250mL)、水(250mL)、饱和NaHCO3水溶液(250mL)洗涤、干燥(Na2SO4)且然后浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化获得的残余物，用12.5％EtOAc-己烷洗脱而得到15.1g(95％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种粘性油状物1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.8-1.0(m，8H)，1.1-1.65(m，42H)，1.83和1.90(2s，6H)，2.15-2.45(m，4H)，3.34(q，1H，J＝～8Hz)，3.37(m，1H)，3.81(m，1H)，3.95(m，1H)，4.27(dd，1H，J＝12，5Hz)，4.34(d，1H，J＝12Hz)，4.58(d，1H，J＝12Hz)，4.66(q，1H，J＝～9Hz)，4.86(d，1H，J＝12Hz)，5.03(d，1H，J＝7.9Hz)，5.21(m，1H)，5.54-5.70(m，2H)，7.2-7.8(m，10H).
(4)在0℃下，用三氟乙酸(TFA；6mL)滴加处理上述(3)中制备的化合物(1.87g，1.41mmol)溶于CH2Cl2(3mL)所得到的溶液且然后在0℃下搅拌4小时。将该反应混合物浓缩并通过与甲苯(2×5mL)共沸而除去残余的TFA。在0℃下和15分钟内用草酰溴(2.0M的CH2Cl2溶液；2.1mL，4.2mmol)逐滴处理内半缩醛(lactol)和二甲基甲酰胺溶于CH2Cl2(14mL)所得到的溶液并在0℃下将所得的混悬液搅拌24小时。使该反应混合物在冷饱和NaHCO3水溶液(25mL)与乙醚(50mL)之间分配并分离各层。将醚层用饱和NaCl水溶液洗涤、干燥(Na2SO4)并浓缩，得到1.85g(～100％)的2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基溴、为一种无色玻璃状物。
(5)用EDC·MeI(0.78g，2.79mmol)处理(R)-2-氨基-3-苄氧基-1-丙醇(0.46g，2.33mmol)和(R)-3-十四酰氧基十四酸(1.29g，2.83mmol)溶于CH2Cl2(20mL)所得到的溶液并在室温下搅拌16小时。将该反应混合物通过Celite短衬垫过滤并浓缩。使用45％EtOAc-己烷进行硅胶快速色谱法而得到1.1g(69％)的3-苄氧基-(R)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙醇、为一种无色固体mp42-44.5℃；1H NMRδ0.88(t，6H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，42H)，2.50(t，2H，J＝7.5Hz)，2.46(m，2H)，3.56(br s，1H，3.5-3.75(m，3H)，3.78(dd，1H，J＝11，4Hz)，4.08(m，1H)，4.51(s，2H)，5.17(m，1H)，6.36(d，1H，J＝7.8Hz)，7.2-7.4(m，5H).
(6)向上述(4)中制备的化合物(1.00g，0.776mmol)和上述(5)中制备的化合物(0.35g，0.57mmol)溶于二氯乙烷(4.5mL)所得到的溶液中加入粉状的4分子筛(1.25g)和硫酸钙(2.7g，20mmol)。在室温下搅拌10分钟后，将该混合物用氰化汞(1.0g，4.0mmol)处理且然后在避光条件下加热至回流12小时。将该反应混合物用CH2Cl2(25mL)稀释并通过Celite衬垫过滤。将滤液用1N KI水溶液(25mL)洗涤、干燥(Na2SO4)并浓缩。使用EtOAc-己烷-MeOH(80∶20∶0→70∶30∶1，梯度洗脱)对残余物进行硅胶层析而得到0.66g(63％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰-3-O-[(R)-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMRδ0.88(t，12H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.65(m，84H)，1.79和1.86(2s，6H)，2.1-2.5(m，8H)，3.35-3.55(m，3H)，3.65-3.8(m，3H)，4.1-4.75(m，9H)，5.05-5.3(m，2H)，5.3-5.5(m，2H)，6.04(d，1H，J＝8.4Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(7)在55℃下和1小时内用锌粉(1.1g，16mmol)分3等份处理上述(6)中制备的化合物(0.60g，0.328mmol)溶于AcOH(9mL)所得到的搅拌溶液。将冷却的反应混合物进行超声处理、通过一层Celite过滤并浓缩。使所得的残余物在CH2Cl2(60mL)与冷的1N HCl水溶液(35mL)之间分配并分离各层。将有机层用5％NaHCO3水溶液洗涤、干燥(Na2SO4)并浓缩。在室温下将获得的残余物和(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.18g，0.39mmol)溶于CH2Cl2(3.5mL)所得到的混合物与4分子筛(0.1g)一起搅拌30分钟且然后用2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ；0.12g，0.49mmol)处理。在室温下将所得的混合物搅拌6小时、通过Celite过滤且然后浓缩。进行硅胶层析(梯度洗脱，0.5→1％MeOH-CHCl3)得到0.31g(50％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氧基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.8(m，126H)，2.1-2.5(m，12H)，3.35-3.75(m，6H)，3.80(m，2H)，4.23(m，1H)，4.46(d，1H，J＝12Hz)，4.51(d，1H，J＝12Hz)，4.65(q，1H，J＝～9.5Hz)，4.82(d，1H，J＝8.1Hz)，5.05-5.25(m，3H)，5.47(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.16(d，1H，J＝8.1Hz)，6.31(d，1H，J＝8.4Hz)，7.1-7.4(m，15H).
(8)在室温和大气压下以及有5％钯/碳(50mg)存在的情况下，使上述(7)中制备的化合物(0.26g，0.138mmol)溶于THF(25mL)所得到的溶液氢化16小时。在通过过滤除去催化剂后，加入AcOH(3mL)和氧化铂(0.14g)并在室温和75psig下继续氢化24小时。将所得的乳白色反应混合物用2∶1 CHCl3-MeOH(20mL)稀释并简短进行超声处理而得到一种澄清溶液。收集催化剂、用2∶1 CHCl3-MeOH(2×5mL)洗涤并将合并的滤液和洗涤物浓缩。通过在35℃下超声处理5分钟而将残余物溶于1％三乙胺水溶液并将所得的溶液冻干。使用氯仿-甲醇-水-三乙胺(94∶6∶0.5∶0.5→88∶12∶1.0∶1.0，梯度洗脱)进行的硅胶快速色谱法得到0.20g(84％)的产物、为一种无色粉末。将部分层析产物(0.166g)溶于冷的2∶1 CHCl3-MeOH(33mL)并用冷的0.1N HCl水溶液(14mL)洗涤。将下部的有机层过滤并浓缩且将获得的游离酸从1％三乙胺水溶液(不含致热原，15mL)中冻干而得到0.160g的3-羟基-(S)-2-[(R)-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种无色固体mp178-180℃(分解)；IR(膜)3293，3103，2959，2924，2855，1732，1654，1640，1553，1467，1377，1259，1175，1106，1086，1050，803，720cm-1；HMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～7Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.15-2.75(m，12H)，3.02(q，6H，J＝7Hz)，3.35-4.1(m，7H)，4.22(q，1H，J＝～9.5Hz)，4.77(d，1H，J＝8Hz)，5.05-5.35(m，4H)，6.58(d，1H，J＝6Hz)，6.73(d，1H，J＝7.5Hz，NH)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.2，170.7，170.5，170.0，100.7，75.9，72.7，71.2，71.0，70.8，70.6，67.9，61.7，60.5，55.0，50.4，45.6，41.4，39.5，34.5，34.4，32.0，31.8，30.3，29.8，29.4，29.3，25.3，25.1，22.7，14.2，8.6.
对C19H192N3O18P·5H2O的计算分析值C，64.84；H，11.10；N，2.29；P，1.69。测定值C，64.69；H，11.24；N，1.93；P，1.44。
实施例3(B2)3-羟基-(R)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2)(1)用吡啶(0.4mL，5mmol)、4-二甲氨基吡啶(催化)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(0.307g，1.23mmol)依次处理实施例2-(5)中制备的化合物(0.63g，1.02mmol)溶于CH2Cl2(7mL)所得到的溶液并在室温下搅拌16小时。将该反应混合物用CH2Cl2(25mL)稀释、用饱和NaHCO3水溶液(25mL)洗涤并干燥(Na2SO4)。在真空中除去挥发性物质而得到残余物，将其溶于THF-AcOH(10mL，9∶1)并在室温和大气压以及有5％钯/碳(150mg)存在的情况下氢化24小时。在通过过滤除去催化剂并浓缩滤液后，通过使用35％EtOAc-己烷的硅胶快速色谱法纯化残余物而得到0.536g(72％)的3-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基氧基)-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙醇、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝～6.5Hz)，1.1-1.7(m，42H)，1.94(s，6H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.47(d，2H，J＝6Hz)，3.50(br s，1H)，3.72(m，2H)，4.15-4.35(m，3H)，5.15(m，1H)，6.18(d，1H，J＝7.2Hz).
(2)按照与实施例2-(6)中所述相同的方式在有氰化汞(0.43g，1.7mmol)存在的情况下偶联上述(1)中制备的化合物(0.310g，0.426mmol)和实施例2-(4)中制备的化合物(0.961g，0.745mmol)而得到0.644g(78％)的3-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基氧基)-(S)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，84H)，1.81和1.89(2s，6H)，1.93(s，6H)，2.15-2.55(m，8H)，3.45-3.7(m，2H)，3.80(br d，1H，J＝9Hz)，3.9-4.45(m，6H)，4.6-4.8(m，3H)，4.87(d，1H，J＝8.1Hz)，5.0-5.25(m，2H)，5.48(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.1-6.3(m，2H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式用锌(1.5g，23mmol)使上述(2)中制备的化合物(0.602g，0.310mmol)脱保护并在有EEDQ(0.115g，0.467mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.17g，0.37mmol)使之酰化而得到0.365g(66％)的3-羟基-(R)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体
1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，126H)，2.15-2.55(m，12H)，3.18(brs，1H)，3.45-3.8(m，8H)，3.85-4.05(m，2H)，4.69(q，1H，J＝～9.5Hz)，5.05-5.25(m，3H)，5.42(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.42(d，1H，J＝7.8Hz)，6.59(d，1H，J＝7.2Hz)，7.1-7.4(m，10H).
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化铂(175mg)存在的情况下使上述(3)中制备的化合物(0.355g，0.196mmol)氢化而得到0.265g(77％)的3-羟基-(R)-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种无色固体mp159-160℃；IR(膜)3291，2956，2922，2853，1738，1732，1716，1650，1643，1556，1468，1171，1109，1083，1051cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.15-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7Hz)，3.25-3.45(m，2H)，3.5-4.05(m，12H)，4.19(q，1H，J＝～9.5Hz)，4.48(d，1H，J＝8.4Hz)，5.04-5.26(m，4H)，7.18(d，1H，J＝7.8Hz)，7.27(d，1H，J＝8.7Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.4，170.7，170.6，170.1，101.0，76.0，72.6，71.4，71.0，70.8，70.6，68.7，61.8，60.5，55.3，50.5，45.6，41.5，41.4，39.5，34.6，34.4，34.3，32.0，29.8，29.4，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
对C99H192N3O18P H2O的计算分析值C，67.50；H，11.10；N，2.39；P，1.76.。测定值C，67.40；H，11.22；N，2.34；P，2.11。
实施例4(B3)3-羟基-(S)-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C11H23CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2)(1)用饱和NaHCO3水溶液(250mL)和氯甲酸2，2，2-三氯乙基酯(14.05mL，102mmol)处理D-氨基葡糖苷盐酸盐(20g，92.8mmol)溶于H2O(250mL)所得到的溶液并剧烈搅拌18小时。在多孔漏斗上收集形成的白色固体并在真空中干燥24小时。将该固体溶于吡啶(100mL)所得到的溶液冷却至0℃并通过经漏斗添加乙酐(100mL)来处理。在室温下将该溶液搅拌18小时、倾入1L的H2O并用CHCl3(3×500mL)提取。在真空中除去溶剂而得到45g(定量)的N-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷，其可不经过进一步纯化使用1H NMR(CDCl3)δ2.06(s，6H)，2.12(s，3H)，2.22(s，3H)，4.03(m，1H)，4.07(d，1H，J＝12.4Hz)，4.22(dt，1H，J＝9.9，3.6Hz)，4.30(dd，1H，J＝12.4，4.0Hz)，4.64(d，1H，J＝9.6Hz)，5.28(dt，1H，J＝10.2，9.9Hz)，6.25(d，1H，J＝3.6Hz).
(2)将(R)-2-氨基-3-苄氧基-1-丙醇(5g，27.6mmol)溶于CH2Cl2(250mL)所得到的溶液用氯甲酸烯丙酯(3.2mL，30mmol)和饱和NaHCO3水溶液(250mL)处理18小时。分离有机层并在真空中浓缩。通过使用30％EtOAc/己烷洗脱的层析法进行纯化而得到6.9g(94％)的(R)-2-(烯丙氧基羰基氨基)-3-苄氧基-1-丙醇、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ2.56(brs，1H)，3.69(m，3H)，388(m，2H)，4.54(s，2H)，4.58(d，2H，J＝5.6Hz)，5.23(dd，1H，J＝10.4，1.1Hz)，5.33(dd，1H，J＝17.1，1.1Hz)，5.42(m，1H)，5.93(m，1H)，7.35(m，5H).
(3)在室温下将上述(1)和(2)中制备的化合物(分别为8.9g、17mmol和3.6g、10mmol)溶于CH2Cl2所得到的溶液用醚合三氟化硼(4.3mL，34mmol)处理16小时。用饱和NaHCO3水溶液(100mL)处理该反应混合物并用EtOAc(3×100mL)提取。干燥(Na2SO4)并浓缩合并的EtOAc提取物。使用20％EtOAc/己烷对获得的残余物进行层析而得到6.03g(83％)的3-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脱氧-3，4，6-三-O-乙酰基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ2.02(s，3H)，2.03(s，3H)，2.08(s，3H)，3.45(m，1H)，3.54(m，1H)，3.64(m，1H)，3.76(d，1H，J＝7.2Hz)，3.91(m，2H)，4.12(d，1H，J＝12.2Hz)，4.26(dd，1H，J＝12.4，4.7Hz)，4.37(d，1H，J＝8.2Hz)，4.43(d，1H，J＝12.1Hz，4.55(m，2H)，4.68(m，2H)，4.87(d，1H，J＝8.0Hz)，5.07(m，2H)，5.21(d，1H，J＝9.7Hz)，5.29(d，1H，J＝17.3Hz)，5.91(m，1H)，7.36(m，5H).
(4)在室温下将上述(3)中制备的化合物(6.0g，8.3mmol)溶于甲醇(83mL)所得到的溶液用氢氧化铵(8.3mL)处理2小时。在真空中除去溶剂并用2，2-二甲氧基丙烷(50mL)置换且加入樟脑磺酸(100mg)。将该反应体系搅拌18小时、用固体NaHCO3(1g)中和、过滤并在真空中浓缩。通过使用50％EtOAc/己烷的层析进行纯化而得到4.58g(86％)的3-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷1H NMR(CDCl3)δ1.46(s，3H)，1.53(s，3H)，2.94(m，1H)，3.25(m，1H)，3.55(m，4H)，3.83(m，3H)，3.93(m，3H)，4.52(m，5H)，4.68(d，1H，J＝12.1Hz)，4.77(d，1H，J＝12.1Hz)，5.07(m，1H)，5.26(m，2H)，5.92(m，1H)，7.37(m，5H).
(5)在有EDC MeI(560mg，1.87mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)存在的情况下用(R)-3-十二酰氧基十四酸(730mg，1.71mmol)处理上述(4)中制备的化合物(1.0g，1.56mmol)溶于CH2Cl2(20mL)所得到的溶液。在室温下将该反应体系搅拌18小时并通过使用20％EtOAc/己烷作为洗脱剂的6×8cm硅胶塞过滤而得到1.33g(82％)的3-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.8Hz)，1.1-1.6(m，38H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.28(t，2H，J＝7.4Hz)，2.49(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.61(dd，1H，J＝15.1，6.6Hz)，3.25-4.0(m，9H)，4.38(m，2H)，4.54(m，2H)，4.65(m，2H)，4.97(m，2H)，5.25(m，5H)，5.88(m，1H)，7.34(m，5H).
(6)向上述(5)中制备的化合物(1.31g，1.25mmol)溶于THF(20mL)所得到的溶液中加入丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)并在氩气流中将该溶液脱气30分钟。加入四(三苯膦)钯(O)(200mg)并在室温下将该反应体系搅拌2小时且然后在真空中浓缩。将所得的残余物进行硅胶层析，使用5-10％EtOAc/CHCl3洗脱。在有EEDQ(370mg，1.5mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液存在的情况下用(R)-3-十二酰氧基十四酸(560mg，1.38mmol)使获得的游离胺酰化。在室温下搅拌18小时后，在真空中除去溶剂并使所得的油状物进行硅胶层析，使用20％EtOAc/己烷洗脱，从而得到1.02g(63％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为-种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，78H)，1.38(s，3H)，1.46(s，3H)，2.26(m，4H)，2.49(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.61(dd，1H，J＝15.1，6.6Hz)，3.25-4.0(m，9H)，5.01(m，2H)，6.02(d，1H，J＝8.4Hz)，7.34(m，5H).
(7)在60℃下，用90％AcOH水溶液(20mL)将上述(6)中制备的化合物(1.0g，0.78mmol)处理1小时。将该溶液在真空中浓缩并通过与甲苯共沸(10mL)而除去残余的AcOH和H2O。将残余物溶于CH2Cl2、冷却至0℃并用吡啶(0.076mL，0.94mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(205mg，0.86mmol)溶于CH2Cl2(5mL)所得到的溶液处理。然后将该反应混合物温热并在室温下搅拌18小时。将所得的淡黄色溶液用氯磷酸二苯酯(0.24mL，1.17mmol)、三乙胺(0.22mL，1.56mmol)和催化剂4-吡咯烷子基吡啶(50mg)处理且然后在室温下再搅拌24小时。将该反应混合物用Et2O(100mL)稀释并用10％HCl水溶液(50mL)洗涤。分离有机层、用Na2SO4干燥并在真空中浓缩。使用10％EtOAc/己烷进行硅胶层析而得到1.13g(85％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.6(m，78H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.6Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.23(m，15H).
(8)按照于实施例2-(7)相同的方式用锌(2.1g，32mmol)使上述(7)中制备的化合物(1.1g，0.65mmol)脱保护并在有EEDQ(230mg，0.94mmol)存在的情况下用(R)-3-十二酰氧基十四酸(330mg，0.78mmol)使之酰化而得到399mg(37％)的3-苄氧基-(S)-2[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体。
(9)按照于实施例2-(8)相同的方式在有氢氧化钯(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化铂(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情况下使上述(8)中制备的化合物(399mg，0.24mmol)氢化而得到65mg(16％)的3-羟基-(S)-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色粉末mp181-184℃(分解)IR(膜)3306，2956，2922，2852，1732，1644，1549，1467，1377，1164，1106，1051，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，123H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.3-4.0(m，13H)，4.23(m，1H)，4.44(d，1H，J＝7.7Hz)，5.0-5.3(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，173.5，173.3，170.8，170.5，170.1，101.0，75.5，73.0，71.1，70.9，70.6，67.9，61.6，60.7，54.4，50.4，45.8，41.6，41.4，39.6，34.6，31.9，29.7，29.4，29.3，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.
对C93H180N3O18P·H2O的计算分析值C，66.59；H，10.94；N，2.50；P，1.85。测定值C，66.79；H，10.65；N，2.36；P，1.70。
实施例5(B4)3-羟基-(S)-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C10H21CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例4-(5)中所述相同的方式在有EDC·MeI(560mg，1.87mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的CH2Cl2(20mL)溶液存在的情况下用(R)-3-十一酰氧基十四酸(705mg，1.71mmol)酰化实施例4-(4)中制备的化合物(1.0g，1.56mmol)而得到1.23g(77％)的3-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，＝6.9Hz)，1.1-1.6(m，36H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.28(m，2H)，2.52(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.61(dd，1H，＝15.5，6.8Hz)，3.25(m，1H)，3.35-4.0(m，9H)，4.31(m，2H)，4.54(m，2H)，4.64(m，2H)，5.02(m，2H)，5.18(m，2H)，5.25(m，1H)，5.86(m，1H)，7.34(m，5H).
(2)按照于实施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)钯(O)(200mg)存在的情况下在THF(20mL)中使上述(1)中制备的化合物(1.21g，1.17mmol)脱保护且然后在有EEDQ(370mg，1.5mmol)存在的情况下用(R)-3-十一酰氧基十四酸(540mg，1.30mmol)使之酰化而得到921mg(61％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，72H)，1.38(s，3H)，1.46(s，3H)，2.26(m，3H)，2.38(m，5H)，2.49(dd，1H，J＝15.2，6.0Hz)，2.61(dd，1H，J＝15.0，6.5Hz)，3.25-4.0(m，9H)，4.30(m，2H)，4.59(m，3H)，6.03(d，1H，J＝8.2Hz)，7.34(m，5H).
(3)按照与实施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(2)中制备的化合物(910g，0.71mmol)脱保护且然后用吡啶(0.071mL，0.88mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(195mg，0.80mmol)的CH2Cl2溶液处理，随后用氯磷酸二苯酯(0.23mL，1.10mmol)、三乙胺(0.20mL，1.46mmol)和催化剂4-吡咯烷子基吡啶(50mg)处理而得到1.10g(89％)的3-苄氧基-(S)-2[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.7Hz)，1.1-1.6(m，72H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.7Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.6Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(4)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(2.0g，30mmol)使上述(3)中制备的化合物(1.0g，0.59mmol)脱保护并在有EEDQ(210mg，0.85mmol)存在的情况下用(R)-3-十一酰氧基十四酸(292mg，0.71mmol)使之酰化而得到388mg(40％)的3-苄氧基-(S)-2[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体。
(5)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化铂(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情况下，使上述(4)中制备的化合物(388mg，0.24mmol)氢化而得到65mg(17％)的3-羟基-(S)-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色粉末mp183-184℃；IR(膜)3306，2956，2922，2852，1732，1644，1550，1467，1377，1164，1106，1052，721cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，117H)，2.2-2.7(m，12H)，3.07(q，6H，J＝7.1Hz)，3.3-3.9(m，13H)，4.23(m，1H)，4.45(d，1H，J＝8.2Hz)，5.0-5.3(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.5，173.3，170.8，170.5，170.1，101.0，75.5，73.1，71.5，71.3，70.9，70.6，67.8，61.6，60.7，54.4，50.5，45.8，41.5，41.4，39.5，34.6，34.4，32.0，31.2，29.8，29.7，29.4，28.6，26.1，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
对C90H174N3O18P·H2O的计算分析值C，66.10；H，10.85；N，2.57；P，1.89。测定值C，66.34；H，10.69；N，2.32；P，1.99。
实施例6(B5)3-羟基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1 R8＝PO3H2)(1)按照与实施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC MeI(1.12g，3.74mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)的CH2Cl2(40mL)溶液存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(1.36g，3.42mmol)使实施例4-(4)中制备的化合物(2.0g，3.12mmol)酰化而得到2.49g(79％)的3-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.7Hz)，1.1-1.6(m，34H)，1.36(s，3H)，1.46(s，3H)，2.27(t，2H，J＝6.9Hz)，2.48(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.60(dd，1H，J＝15.1，6.7Hz)，3.25(m，1H)，3.35-4.0(m，9H)，4.23(m，1H)，4.42(m，1H)，4.52(m，4H)，4.95(m，2H)，5.17(m，3H)，5.88(m，1H)，7.36(m，5H).
(2)按照与实施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(2.0mL，1.75mmol)和四(三苯膦)钯(O)(400mg)存在的情况下在THF(40mL)中使上述(1)中制备的化合物(2.47g，2.42mmol)脱保护且然后在有EEDQ(740mg，3mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(1.06g，2.66mmol)使之酰化而得到1.86g(60％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体
1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，68H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.32(m，4H)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.62(dd，1H，J＝15.1，6.8Hz)，3.29(m，2H)，3.44(m，1H)，3.55(m，1H)，3.74(m，3H)，3.93(m，1H)，4.18(m，1H)，4.34(m，1H)，4.57(d，1H，J＝11.8Hz)，4.65(m，2H)，5.01(m，2H)，6.04(d，1H，J＝8.3Hz)，7.36(m，5H).
(3)按照与实施例4-(7)中所述相同的方式在90％AcOH水溶液(40mL)中使上述(2)中制备的化合物(900mg，0.72mmol)脱保护且然后用吡啶(0.071mL，0.88mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(195mg，0.80mmol)的CH2Cl2溶液处理，随后用氯甲酸二苯酯(0.23mL，1.10mmol)、三乙胺(0.20mL，1.46mmol)和催化剂4-吡咯烷子基吡啶(50mg)处理而得到1.05g(86％)的3-苄氧基-(S)-2[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.3Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.5Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(4)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(2.0g，30mmol)使上述(3)中制备的化合物(1.0g，0.60mmol)脱保护并在有EEDQ(210mg，0.86mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(285mg，0.72mmol)使之酰化而得到332mg(34％)的3-苄氧基-(S)-2[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体。
(5)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化铂(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情况下使上述(4)中制备的化合物(332mg，0.20mmol)氢化而得到173mg(55％)的3-羟基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色粉末mp179-181℃；IR(膜)3295，2956，2923，2853，1732，1650，1555，1467，1377，1320，1169，1134，1104，1051，979，801，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，12H)，3.07(q，6H，J＝6.5Hz)，3.3-4.3(m，14H)，4.45(d，1H，J＝8.0Hz)，5.0-5.3(m，4H)，7.39(m，1H)，7.53(d，1H，J＝9.1Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.4，173.2，170.7，170.5，170.1，101.0，75.4，73.1，71.6，71.1，70.8，70.5，67.8，61.4，60.8，54.3，50.4，45.8，41.3，39.5，34.5，31.9，29.8，29.7，29.4，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
对C87H168N3O18P·H2O的计算分析值C，65.58；H，10.75；N，2.64；P，1.94。测定值C，65.49；H，10.75；N，2.64；P，1.97。
实施例7(B6)3-羟基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-6-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R8＝H，R6＝OH，P＝1 R9＝PO3H2)(1)按照与实施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使在实施例6-(2)中制备的化合物(900mg，0.72mmol)脱保护。将残余物溶于CH2Cl2(20mL)、冷却至0℃并用三乙胺(0.14mL，1.0mmol)和氯磷酸二苯酯(0.17mL，0.8mmol)处理。将该混合物再搅拌6小时且然后用50mL的10％HCl处理。将产物用EtOAc(3×50mL)提取并用Na2SO4干燥。使用50％EtOAc/己烷进行硅胶层析而得到636mg(63％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-6-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.0Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.79(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.89(d，1H，J＝6.5Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.75(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.65(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(2)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(722mg，11mmol)使上述(1)中制备的化合物(620g，0.44mmol)脱保护并在有EEDQ(170mg，0.58mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(190mg，0.48mmol)使之酰化而得到254mg(36％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-6-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体。
(3)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化铂(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情况下使上述(2)中制备的化合物(254mg，0.16mmol)氢化而得到34mg(13％)的3-羟基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-6-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色粉末mp169-171℃；IR(膜)3306，2922，2853，1732，1644，1548，1467，1377，1316，1165，1106，1053，856，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，12H)，3.05(m，6H)，3.3-3.95(m，12H)，4.11(m，1H)，4.34(m，1H)，4.89(m，1H)，5.0-5.3(m，4H).13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.4，171.1，170.5，101.3，75.3，74.9，71.2，71.0，70.6，68.8，67.3，65.1，61.4，53.4，50.7，45.9，41.5，41.3，39.6，34.6，32.0，29.8，29.6，29.4，25.3，25.1，22.7，14.1，8.7.
对C87H168N3O18P·H2O的计算分析值C，65.58；H，10.75；N，2.64；P，1.94。测定值C，65.60；H，10.34；N，2.36；P，2.01。
实施例8(B7)3-羟基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C8H17CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1 R8＝PO3H2)(1)按照与实施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(560mg，1.87mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的CH2Cl2(20mL)溶液存在的情况下用(R)-3-壬酰氧基十四酸(660mg，1.71mmol)使实施例4-(4)中制备的化合物(1.0g，1.56mmol)酰化而得到1.31g(83％)的3-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，6H，J＝6.8Hz)，1.1-1.6(m，32H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.27(t，2H，J＝7.4Hz)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.1，6.8Hz)，3.26(m，1H)，3.35-4.0(m，9H)，4.32(d，1H，J＝7.8Hz)，4.41(d，1H，J＝12.0Hz)，4.51(m，4H)，4.95(m，2H)，5.18(m，2H)，5.29(d，1H，J＝17.2Hz)，5.88(m，1H)，7.36(m，5H).
(2)按照与实施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)钯(O)(200mg)存在的情况下，在THF(20mL)中使上述(1)中制备的化合物(1.29g，1.28mmol)脱保护且然后在有EEDQ(370mg，1.5mmol)存在的情况下用(R)-3-壬酰氧基十四酸(540mg，1.41mmol)使之酰化而得到1.02g(65％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.1Hz)，1.1-1.7(m，64H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.28(m，4H)，2.50(dd，1H，J＝15.5，6.0Hz)，2.62(dd，1H，J＝14.8，6.3Hz)，3.27(m，2H)，3.44(m，1H)，3.55(m，1H)，3.74(m，3H)，3.93(m，1H)，4.18(m，1H)，4.34(m，2H)，4.57(d，1H，J＝11.8Hz)，4.65(m，2H)，4.97(t，1H，J＝9.6Hz)，5.06(d，1H，J＝8.6Hz)，5.15(m，2H)，6.05(d，1H，J＝8.2Hz)，7.35(m，5H).
(3)按照与实施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(2)中制备的化合物(1.0g，0.81mmol)脱保护、用吡啶(0.080mL，0.98mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(215mg，0.89mmol)的CH2Cl2溶液处理，随后用氯磷酸二苯酯(0.25mL，1.22mmol)、三乙胺(0.21mL，1.52mmol)和催化剂4-吡咯烷子基吡啶(50mg)处理而得到1.17g(87％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.1Hz)，1.1-1.6(m，64H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.5Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41.(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(4)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式用锌(2.2g，33mmol)使上述(3)中制备的化合物(1.1g，0.66mmol)脱保护并在有EEDQ(235mg，0.95mmol)存在的情况下用(R)-3-壬酰氧基十四酸(305mg，0.79mmol)使之酰化而得到373mg(35％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体。
(5)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化铂(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情况下使上述(4)中制备的化合物(373mg，0.23mmol)氢化而得到43mg(12％)的3-羟基-(S)-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色粉末mp176-179℃；IR(膜)3298，2956，2923，2853，1733，1646，1551，1467，1337，1316，1254，1166，1106，1053，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.87(t，18H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，105H)，2.2-2.7(m，12H)，3.03(q，6H，J＝7.0Hz)，3.3-4.3(m，14H)，4.43(d，1H，J＝7.1Hz)，5.0-5.3(m，4H)，7.12(d，1H，J＝7.7Hz)，7.17(d，1H，J＝8.2Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，173.5，173.3，170.8，170.5，170.1，100.9，75.5，73.1，71.4，71.1，70.9，70.6，67.8，61.6，60.7，54.3，50.5，45.8，41.6，41.4，39.5，34.6，34.4，32.0，31.9，29.8，29.4，29.3，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
对C88H164N3O18P的计算分析值C，65.81；H，10.65；N，2.74；P，2.02。测定值C，66.14；H，10.46；N，2.58；P，1.84。
实施例9(B8)3-羟基-(S)-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C6H13CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1 R8＝PO3H2)(1)按照与实施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(560mg，1.87mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的CH2Cl2(20mL)溶液存在的情况下用(R)-3-庚酰氧基十四酸(610mg，1.71mmol)使实施例4-(4)中制备的化合物(1.0g，1.56mmol)酰化而得到1.24g(82％)的3-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.0Hz)，1.1-1.6(m，28H)，1.38(s，3H)，1.47(s，3H)，2.29(t，2H，J＝7.4Hz)，2.51(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.1，6.8Hz)，3.26(m，1H)，3.35-4.0(m，9H)，4.32(d，1H，J＝7.3Hz)，4.41(d，1H，J＝12.0Hz)，4.51(m，4H)，4.95(m，2H)，5.18(m，2H)，5.29(d，1H，J＝17.3Hz)，5.88(m，1H)，7.36(m，5H).
(2)按照与实施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)钯(O)(200mg)存在的情况下在THF(20mL)中使上述(1)中制备的化合物(1.22g，1.25mmol)脱保护且然后在有EEDQ(370mg，1.5mmol)存在的情况下用(R)-3-庚酰氧基十四酸(490mg，1.38mmol)使之酰化而得到925mg(62％)的3-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，56H)，1.37(s，3H)，1.46(s，3H)，2.32(m，4H)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.62(dd，1H，J＝15.1，6.8Hz)，3.29(m，2H)，3.44(m，1H)，3.55(m，1H)，3.74(m，3H)，3.93(m，1H)，4.18(m，1H)，4.34(m，1H)，4.57(d，1H，J＝11.8Hz)，4.65(m，2H)，5.01(m，2H)，6.04(d，1H，J＝8.3Hz)，7.36(m，5H).
(3)按照与实施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(2)中制备的化合物(920mg，0.76mmol)脱保护且然后用吡啶(0.075mL，0.92mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(200mg，0.84mmol)的CH2Cl2溶液处理，随后用氯磷酸二苯酯(0.24mL，1.14mmol)、三乙胺(0.21mL，1.52mmol)和催化剂4-吡咯烷子基吡啶(50mg)处理而得到1.03g(83％)的3-苄氧基-(S)-2[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.3Hz)，1.1-1.6(m，56H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.01(m，1H)，2.18(m，3H)，2.40(m，2H)，2.67(m，1H)，2.88(d，1H，J＝6.5Hz)，2.97(d，1H，J＝6.9Hz)，3.41(m，2H)，3.72(m，1H)，3.82(m，1H)，4.24(m，1H)，4.42(d，1H，J＝11.8Hz)，4.64(m，3H)，5.16(m，1H)，5.39(m，2H)，5.75(d，1H，J＝4.3Hz)，6.05(d，1H，J＝8.4Hz)，7.22(m，15H).
(4)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(2.0g，31mmol)使上述(3)中制备的化合物(1.0g，0.61mmol)脱保护并在有EEDQ(220mg，0.88mmol)存在的情况下用(R)-3-庚酰氧基十四酸(260mg，0.73mmol)使之酰化而得到203mg(21％)的3-苄氧基-(S)-2[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体。
(5)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯(100mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化铂(200mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情况下使上述(4)中制备的化合物(203mg，0.13mmol)氢化而得到39mg(21％)的3-羟基-(S)-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色粉末mp171-172℃；IR(膜)3305，2955，2924，2853，1734，1644，1553，1466，1377，1170，1102，1052，722cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.1-1.7(m，93H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.3-4.0(m，13H)，4.23(q，1H，J＝9.3Hz)，4.43(d，1H，J＝8.2Hz)，5.0-5.3(m，4H)，7.30(d，1H，J＝8.5Hz)，7.43(d，1H，J＝8.5Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.5，173.2，170.8，170.5，170.2，101.0，77.2，75.5，73.1，71.6，71.1，70.9，70.6，67.8，61.6，60.8，54.4，50.5，45.8，41.6，41.4，39.5，34.6，34.4，32.0，31.6，29.8，29.6，29.4，28.9，25.4，25.1，22.7，22.6，14.1，8.6.
对C78H150N3O18P·H2O的计算分析值C，63.86；H，10.44；N，2.86；P，2.11。测定值C，63.47；H，10.20；N，2.59；P，2.02。
实施例10(B9)4-羟基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]丁基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝P＝1，M＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例4-(3)中所述相同的方式，在有醚合三氟化硼(3.0mL，23.6mmol)存在的情况下使实施例4-(1)中制备的化合物(3.1g，5.9mmol)与(R)-3-(烯丙氧基羰基氨基)-4-苄氧基-1-丁醇(1.1g，3.94mmol)偶联而得到1.96g(67％)的4-苄氧基-(S)-3-(烯丙氧基羰基氨基)丁基2-脱氧-3，4，6-三O-乙酰基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体。按照与实施例4-(4)中所述相同的方式，在甲醇(25mL)中用氢氧化铵(5mL)使上述制备的化合物(1.8g，2.43mmol)脱去乙酰基且然后用2，2-二甲氧基丙烷(25mL)和樟脑磺酸(100mg)处理而得到1.34g(84％)of 4-苄氧基-(S)-3-(烯丙氧基羰基氨基)-丁基-2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷。
(2)按照与实施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(550mg，1.85mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的存在下于CH2Cl2(15mL)中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(670mg，1.68mmol)使上述(1)中制备的化合物(1.0g，1.53mmol)酰化而得到1.03g(65％)的4-苄氧基-(S)-3-(烯丙氧基羰基氨基)丁基-2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.6(m，34H)，1.37(s，3H)，1.47(s，3H)，1.85(m，2H)，2.28(t，2H，J＝7.6Hz)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.1，6.7Hz)，3.30(m，1H)，3.49(m，4H)，3.68(t，1H，J＝9.4Hz)，3.77(t，1H，J＝10.4Hz)，3.92(m，3H)，4.54(m，5H)，4.69(m，2H)，5.1-5.4(m，4H)，5.91(m，1H)，7.33(m，5H).
(3)按照与实施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)钯(O)(200mg)存在的情况下在THF(20mL)中使上述(2)中制备的化合物(1.0g，0.97mmol)脱保护且然后在有EEDQ(317mg，1.28mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(425mg，1.07mmol)使之酰化而得到660mg(51％)的4-苄氧基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，68H)，1.37(s，3H)，1.47(s，3H)，2.26(q，2H，J＝7.1Hz)，2.41(m，2H)，2.62(dd，1H，J＝14.9，6.4Hz)，3.29(m，1H)，3.48(m，3H)，3.71(m，2H)，3.92(m，2H)，4.18(m，1H)，4.49(m，2H)，4.68(q，2H，J＝11.5Hz)，5.15(m，2H)，5.55(d，1H，J＝8.8Hz)，6.17(d，1H，J＝7.2Hz)，7.32(m，5H).
(4)按照与实施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(3)中制备的化合物(640mg，0.48mmol)脱保护且然后用吡啶(0.047mL，0.58mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(127mg，0.53mmol)的CH2Cl2溶液处理，随后用氯磷酸二苯酯(0.15mL，0.72mmol)、三乙胺(0.13mL，0.96mmol)和催化剂4-吡咯烷子基吡啶(50mg)处理而得到389mg(47％)的4-苄氧基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.79(s，3H)，1.86(s，3H)，2.22(m，4H)，2.40(m，4H)，3.49(m，4H)，3.78(m，1H)，3.93(m，1H)，4.1-4.5(m，5H)，4.9-4.6(m，4H)，5.13(m，2H)，5.51(t，1H，J＝8.9Hz)，5.84(d，1H，J＝6.9Hz)，6.09(d，1H，J＝8.0Hz)，7.26(m，15H).
(5)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(752mg，11.5mmol)使上述(4)中制备的化合物(375g，0.23mmol)脱保护并在有EEDQ(70mg，0.28mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(101mg，0.25mmol)使之酰化而得到270mg(67％)的4-苄氧基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体。
(6)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯(150mg)/碳于EtOH(10mL)中和氧化铂(300mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情况下使上述(5)中制备的化合物(270mg，0.15mmol)氢化而得到93mg(39％)的4-羟基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色粉末mp179-181℃(分解)；IR(膜)3287，2956，2923，2853，1734，1654，1552，1466，1378，1246，1164，1106，1085，1052，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，14H)，3.06(q，6H，J＝6.9Hz)，3.2-4.0(m，13H)，4.21(m，1H)，4.50(d，1H，J＝7.7Hz)，5.0-5.3(m，4H)，7.11(m，2H)；13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.5，173.3，170.9，170.5，170.1，101.1，77.2，75.5，72.8，71.3，71.0，70.6，66.4，64.0，60.7，54.8，50.2，45.8，41.6，39.5，34.6，34.5，34.4，32.0，30.6，29.8，29.7，29.6，29.5，29.4，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.
对C88H170N3O18P的计算分析值C，66.65；H，10.78；N，2.64；P，1.95。测定值C，66.65；H，10.68；N，2.50；P，1.94。
实施例11(B10)4-羟基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]丁基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，p＝2，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例4-(3)中所述相同的方式，在有醚合三氟化硼(4.9mL，38.0mmol)存在的情况下使实施例4-(1)中制备的化合物(5.1g，9.7mmol)与(R)-3-(烯丙氧基羰基氨基)-4-苄氧基-1-丁醇(1.8g，6.45mmol)偶联而得到2.92g(61％)的4-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丙基2-脱氧-3，4，6-三-O-乙酰基-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体。按照与实施例4-(4)中所述相同的方式(100mg)在甲醇(35mL)中用氢氧化铵(7mL)使上述制备的化合物(2.6g，3.51mmol)脱去乙酰基且然后用2，2-二甲氧基丙烷(35mL)和樟脑磺酸(100mg)处理而得到1.9g(72％)的4-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丁基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷。
(2)按照与实施例4-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(550mg，1.85mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(50mg)的存在下于CH2Cl2(15mL)中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(670mg，1.68mmol)使上述(1)中制备的化合物(1.0g，1.53mmol)酰化而得到1.28g(81％)的4-苄氧基-(S)-2-(烯丙氧基羰基氨基)丁基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，34H)，1.37(s，3H)，1.47(s，3H)，1.82(m，2H)，2.28(t，2H，J＝7.7Hz)，2.50(dd，1H，J＝15.3，6.0Hz)，2.63(dd，1H，J＝15.2，6.7Hz)，3.16(m，1H)，3.56(m，3H)，3.65(t，1H，J＝9.6Hz)，3.75(t，1H，J＝10.4Hz)，3.88(m，4H)，4.32(d，1H，J＝8.5Hz)，4.46(s，2H)，4.54(m，2H)，4.67(m，2H)，4.90(m，1H)，5.26(m，3H)，5.89(m，1H)，7.33(m，5H).
(3)按照与实施例4-(6)中所述相同的方式，在有丙二酸二甲酯(1.0mL，0.88mmol)和四(三苯膦)钯(O)(200mg)存在的情况下在THF(20mL)中使上述(2)中制备的化合物(1.25g，1.21mmol)脱保护且然后在有EEDQ(362mg，1.46mmol)在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(530mg，1.33mmol)使之酰化而得到1.16g(72％)的4-苄氧基-(S)-3-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为-种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.4Hz)，1.1-1.7(m，68H)，1.37(s，3H)，1.45(s，3H)，2.26(q，2H，J＝7.4Hz)，2.34(m，1H)，2.50(dd，1H，J＝15.1，6.0Hz)，2.62(dd，1H，J＝15.4，6.3Hz)，3.12(m，1H)，3.5-3.95(m，7H)，4.14(m，1H)，4.29(d，1H，J＝8.0Hz)，4.67(m，2H)，4.86(t，1H，J＝9.6Hz)，5.15(m，2H)，6.16(d，1H，J＝8.3Hz)，7.35(m，5H).
(4)按照与实施例4-(7)中所述相同的方式，在90％AcOH水溶液(20mL)中使上述(3)中制备的化合物(1.1g，0.83mmol)脱保护且然后用吡啶(0.080mL，1.0mmol)和氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(220mg，0.91mmol)的CH2Cl2溶液处理，随后用氯磷酸二苯酯(0.15mL，0.72mmol)、三乙胺(0.26mL，1.25mmol)和催化剂4-吡咯烷子基吡啶(50mg)处理而得到802mg(56％)的4-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，12H，J＝6.8Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.79(s，3H)，1.88(s，3H)，2.23(m，4H)，2.37(m，4H)，3.57(m，4H)，3.83(m，1H)，4.29(m，3H)，4.44(m，2H)，4.69(m，4H)，5.14(m，4H)，5.62(d，1H，J＝7.6Hz)，6.15(d，1H，J＝8.3Hz)，7.25(m，15H).
(5)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.42g，21.7mmol)使上述(4)中制备的化合物(750mg，0.43mmol)脱保护并在有EEDQ(130mg，0.53mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(190mg，0.48mmol)使之酰化而得到483mg(64％)的4-苄氧基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色非晶固体。
(6)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯(150mg)/碳的EtOH(10mL)溶液和氧化铂(300mg)的EtOH/AcOH(10∶1)溶液存在的情况下使上述(5)中制备的化合物(483mg，0.27mmol)氢化而得到238mg(55％)的4-羟基-(S)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色粉末mp181-183℃(分解)；IR(膜)3294，2956，2923，2853，1732，1650，1556，1466，1377，1320，1246，1172，1108，1082，1058，859，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，14H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-4.0(m，13H)，4.21(m，1H)，4.46(d，1H，J＝8.3Hz)，5.0-5.3(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，173.4，173.2，171.2，170.7，101.0，77.2，75.4，73.1，71.4，71.3，71.1，70.9，70.6，60.7，58.4，54.7，46.3，45.9，41.6，41.1，39.7，34.8，34.6，34.4，31.9，29.8，29.6，29.5，29.3，25.4，25.3，25.1，22.7，14.1，8.6.
对C88H170N3O18P的计算分析值C，66.51；H，10.78；N，2.64；P，1.95。测定值C，66.81；H，10.68；N，2.53；P，1.79。
实施例12(B11)N-(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝ON＝M＝P＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2).
(1)按照与实施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(0.353g，1.19mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.541g，1.19mmol)使L-丝氨酸苄酯(0.212g，1.08mmol)酰化而得到0.642g(94％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-L-丝氨酸苄酯、为一种蜡状的固体mp56-61℃；1HNMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝～7Hz)，1.1-1.7(m，42H)，2.29(t，2H，J＝7.5Hz)，2.50(m，2H)，3.87(br t，1H)，3.95(m，2H)，4.65(m，1H)，5.1-5.25(m，3H)，6.69(d，1H，J＝7Hz)，7.34(br s，5H).
(2)按照与实施例2-(6)中所述相同的方式，在有氢化汞(0.3g，1.2mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(0.19g，0.30mmol)与实施例2-(4)中制备的化合物(0.635g，0.478mmol)偶联而得到0.425g(77％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯、为一种非晶固体。
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(0.72g，11mmol)使上述(2)中制备的化合物(0.405g，0.22mmol)脱保护并在有EEDQ(0.082g，0.33mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.12g，0.26mmol)使之酰化而得到0.277g(66％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)1.0-1.75(m，126H)，2.15-2.45(m，10H)，2.53(dd，1H，J＝14.7，6.0Hz)，2.67(dd，1H，J＝14，6.0Hz)，3.25(br t，1H，J＝7Hz)，3.35-3.75(m，4H)，3.88(dd，1H，J＝11.1Hz)，4.23dd，1H，J＝11.1，3Hz)，4.6-4.75(m，2H)；5.03(d，1H，J＝8.1Hz)，5.05-5.25(m，4H)，5.48(t，1H，J＝～10Hz)，6.40(d，1H，J＝7.5Hz)，7.01(d，1H，J＝8.1Hz)，7.1-7.4(m，15H).
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有5％钯/碳(50mg)和氧化铂(120mg)存在的情况下使上述(3)中制备的化合物(0.253g，0.133mmol)氢化而得到0.155g(62％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐、为一种无色固体mp180℃(分解)；IR(膜)3322，2956，2924，2852，1736，1732，1681，1673，1667，1660，1651，1467，1456，1247，1174，1110，1081cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～7Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.2-2.75(m，12H)，3.05(q，6H，J＝7Hz)，3.30(brs，13H)，3.7-3.9(m，3H)，3.96(d，1H，J＝12Hz)，4.05-4.3(m，2H)，4.34(m，1H)，4.53(d，1H，J＝7.8Hz)，5.05-5.3(m，4H)，7.25-7.35(m，2H)；13C NMR(CDCl3)δ173.4，173.2，171.0，170.3，170.2，169.9，169.8，100.8，75.1，73.4，71.1，70.7，70.4，70.3，60.2，54.3，45.6，41.2，41.1，39.2，34.6，34.4，34.2，32.0，29.8，29.5，25.4，25.2，22.7，14.2，8.6.
对C99H190N3O19P·5H2O的计算分析值C，64.35；H，10.91；N，2.27；P，1.68。测定值C，64.16；H，10.92；N，2.37；P，1.91.
实施例13(B12)N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C11H23CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2).
(1)按照与实施例2-5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(745mg，2.5mmol)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-十二酰氧基十四酸(935mg，2.2mmol)使L-丝氨酸苄酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到1.08g(90％)的N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-L-丝氨酸苄酯mp53-54℃.1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.5Hz)，1.1-1.6(m，46H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.50(d，2H，5.6Hz)，2.62(t，1H，J＝6.2Hz)，3.97(m，2H)，4.65(m，1H)，5.19(m，3H)，6.63(d，1H，J＝6.8Hz)，7.35(br s，5H).
(2)按照与实施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-十二酰氧基十四酸(946mg，2.22mmol)使实施例2-(1)中制备的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在AcOH水溶液(25mL)中脱保护而得到1.30g(81％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，28H)，1.59(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.6Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.2Hz)，4.71(m，2H)，5.07(m，2H)，5.27(d，1H，J＝8.8Hz).
(3)按照与实施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(398mg，1.66mmol)和吡啶(0.15mL，1.83mmol)于CH2Cl2(25mL)中处理上述(2)中制备的化合物(1.30g，1.51mmol)，随后用三乙胺(0.42mL，3.02mmol)、氯磷酸二苯酯(0.47mL，2.27mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)处理而得到1.39g(71％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体
1HNMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，46H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.23(m，6H)，3.34(m，1H)，3.59(m，1H)，3.80(m，1H)，3.96(m，1H)，4.32(m，2H)，4.63(m，2H)，4.83(d，1H，J＝11.9Hz)，5.02(d，1H，J＝8.2Hz)，5.20(m，1H)，5.65(m，2H)，7.29(m，10H).
(4)在0℃下，用TFA(5mL)处理上述(3)中制备的化合物(1.30g，1.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液且然后将该体系温至室温18小时。在真空中除去溶剂并通过与甲苯共沸而除去剩余的TFA。在0℃下，用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)于CH2Cl2(20mL)中制备的Vilsmeier试剂处理内半缩醛(lactol)。将该反应体系缓慢温至室温下过夜并使之在50mL饱和NaHCO3水溶液和乙醚(50mL)之间分配。分离各层并用Na2SO4干燥有机相且在真空中浓缩。通过使用10％EtOAc/己烷的硅胶快速色谱法进行纯化而得到1.09g(90％)的2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、为一种白色泡沫体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.8Hz)，1.2-1.70(m，46H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.43(m，2H)，4.30(m，4H)，4.72(m，3H)，5.09(m，1H)，5.50(t，1H，J＝9.5Hz)，5.79(d，1H，J＝8.0Hz)，6.27(d，1H，J＝3.6Hz)，7.19(m，10H).
(5)向(1)和(4)中制备的化合物(分别为540mg、0.90mmol和1.0g、0.82mmol)溶于1，2-二氯乙烷(20mL)所得到的溶液中加入粉状4分子筛(300mg)并将该混悬液搅拌30分钟。一次加入AgOTf(1.16g，4.5mmol)，30分钟后将淤浆通过硅胶过滤并用30％EtOAc/己烷洗脱而得到1.10g(75％)的N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.5Hz)，1.1-1.65(m，92H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.67(m，2H)，4.30(m，3H)，4.72(m，5H)，5.18(m，4H)，5.46(m，1H)，6.07(m，1H)，6.62(d，1H，J＝7.9Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.83g，28mmol)使上述(5)中制备的化合物(1.0g，0.56mmol)脱保护并在有EEDQ(185mg，0.74mmol)存在的情况下用(R)-3-十二酰氧基十四酸(285mg，0.67mmol)使之酰化而得到420mg(44％)的N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯、为一种非晶固体。
(7)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯/碳于EtOH(10mL)中和氧化铂(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情况下使上述(6)中制备的化合物(420mg，0.24mmol)氢化而得到240mg(60％)的N-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐、为一种白色粉末mp181-182℃；IR(膜)3289，2956，2920，2851，1731，1656，1557，1467，1378，1182，1108，1080，1052，852，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.7Hz)，1.1-1.7(m，123H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.35(m，1H)，3.70(m，6H)，3.88(m，2H)，4.20(m，1H)，4.56(d，1H，J＝8.1Hz)，4.59(br s，1H)，5.16(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ176.9，173.3，173.2，172.7，169.6，169.1，101.5，74.8，71.2，70.9，69.2，60.5，53.1，51.4，46.1，41.5，41.0，39.2，34.3，34.2，34.0，32.0，29.8，29.7，29.4，29.2，25.6，25.3，25.2，25.1，22.7，14.1，8.7.
对C93H178N3O19P H2O的计算分析值C，66.04；H，10.73；N，2.48；P，1.83。测定值C，66.04；H，10.73；N，2.48；P，1.86。
实施例14(B13)N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O
膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C10H21CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(745mg，2.5mmol)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-十一酰氧基十四酸(905mg，2.2mmol)使L-丝氨酸苄酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到1.08g(92％)的N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-L-丝氨酸苄酯mp53-54℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，44H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.49(d，2H，J＝5.8Hz)，3.99(m，2H)，4.65(m，1H)，5.19(m，3H)，6.58(d，1H，J＝6.9Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照与实施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-十一酰氧基十四酸(915mg，2.22mmol)使实施例2-(1)中制备的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化而得到1.41g(82％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，32H)，1.60(m，4H)，2.31(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.6Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.2Hz)，4.71(m，2H)，5.07(m，2H)，5.27(d，1H，J＝8.7Hz).
(3)按照与实施例2-(3)中所述相同的方式，用2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基氯甲酸酯(403mg，1.68mmol)和吡啶(0.15mL，1.85mmol)在CH2Cl2(25mL)中处理上述(2)中制备的化合物(1.30，1.53mmol)，随后用三乙胺(0.43mL，3.06mmol)、氯磷酸二苯酯(0.48mL，2.30mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)处理而得到1.37g(70％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1HNMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，44H)，1.80(s，3H)，1.89(s，3H)，2.23(m，6H)，3.58(m，3H)，4.32(m，1H)，4.71(m，2H)，4.83(d，1H，J＝12.1Hz)，5.01(d，1H，J＝8.1Hz)，5.20(m，1H)，5.62(m，2H)，7.25(m，10H).
(4)按照与实施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(4)中制备的化合物(1.28g，1.0mmol)脱保护且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)于CH2Cl2(20mL)中制备的Vilsmeier试剂处理而得到1.12g(93％)的2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、为-种白色泡沫体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.7Hz)，1.1-1.55(m，44H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(m，2H)，2.43(m，2H)，4.34(m，4H)，4.72(m，3H)，5.09(m，1H)，5.50(t，1H，J＝9.6Hz)，5.80(d，1H，J＝8.0Hz)，6.26(d，1H，J＝3.4Hz)，7.26(m，10H).
(5)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情况下使(1)和(4)中制备的化合物(分别为530mg、0.90mmol和1.0g、0.83mmol)偶联而得到1.11g(76％)的N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯1HNMR(CDCl3)δ0.88(m，12H)，1.0-1.65(m，88H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.37(m，1H)，3.64(m，1H)，3.85(m，1H)，4.30(m，3H)，4.78(m，5H)，5.18(m，4H)，5.46(m，1H)，6.07(m，1H)，6.62(d，1H，J＝7.7Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(2.0g，30.5mmol)使上述(5)中制备的化合物(1.0g，0.57mmol)脱保护并在有EEDQ(185mg，0.75mmol)存在的情况下用(R)-3-十一酰氧基十四酸(280mg，0.68mmol)使之酰化而得到470mg(50％)的N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯、为一种非晶固体。
(7)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯/碳于EtOH(10mL)中和氧化铂(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情况下使上述(6)中制备的化合物(470mg，0.27mmol)氢化而得到130mg(30％)的N-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-O-[2脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十一酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐、为一种白色粉末mp181-183℃；IR(膜)3294，2923，2853，1734，1655，1466，1377，1163，1080，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，117H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.4-3.2(m，5H)，3.6-3.9(m，4H)，4.20(d，1H，9.8Hz)，4.54(d，1H，J＝8.0Hz)，4.62(br.s，1H)，5.17(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.3，172.8，172.2，169.6，169.1，101.5，77.2，74.8，70.9，69.2，60.5，58.5，53.1，51.5，46.1，41.5，41.1，39.2，34.6，34.4，34.1，32.0，29.8，29.7，29.4，29.2，25.6，25.2，25.1，22.7，1 8.5，14.2，8.7.
对C90H172N3O19P的计算分析值C，66.26；H，10.63；N，2.58；P，1.90。测定值C，66.56；H，10.57；N，2.47；P，1.91。
实施例15(B14)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-D-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝0，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(745mg，2.5mmol)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(875mg，2.2mmol)使D-丝氨酸苄酯(390mg，2.2mmol)酰化而得到1.05g(91％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-D-丝氨酸苄酯mp51-52℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(m，6H)，1.1-1.7(m，34H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.50(m，2H)，3.68(s，1H)，3.93(d，2H，J＝3.1Hz)，4.62(m，1H)，5.22(m，3H)，6.63(d，1H，J＝6.9Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照与实施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(884mg，2.22mmol)使实施例2-(1)中制备的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在AcOH水溶液(25mL)中脱保护而得到1.30g(77％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，30H)，1.59(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.6Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.2Hz)，4.71(m，2H)，5.07(m，2H)，5.27(d，1H，J＝8.8Hz).
(3)按照与实施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(396mg，1.65mmol)和吡啶(0.15mL，1.81mmol)于CH2Cl2(25mL)中处理上述(2)中制备的化合物(1.25，1.50mmol)，随后用三乙胺(0.42mL，3.00mmol)、氯磷酸二苯酯(0.47mL，2.25mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)处理而得到1.31g(69％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.89(m，8H)，1.1-1.7(m，34H)，1.82(s，3H)，1.90(s，3H)，2.30(m，4H)，3.40(q，1H，J＝9.6Hz)，3.65(m，1H)，3.89(m，1H)，4.32(m，2H)，4.63(m，2H)，4.82(d，1H，J＝12.1Hz)，5.01(d，1H，J＝8.2Hz)，5.63(m，2H)，7.29(m，10H).
(4)按照与实施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(4)中制备的化合物(1.27g，1.0mmol)脱保护且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)的制备的Vilsmeier试剂处理而得到1.06g(89％)的2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、为一种白色泡沫体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.6Hz)，1.1-1.55(m，34H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.43(m，2H)，4.32(m，4H)，4.71(m，3H)，4.83(m，3H)，5.09(m，1H)，5.50(t，1H，J＝9.5Hz)，5.77(d，1H，J＝8.0Hz)，6.26(d，1H，J＝3.4Hz)，7.20(m，10H).
(5)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情况下使(1)和(4)中制备的化合物(分别为520mg、0.90mmol和1.0g、0.84mmol)偶联而得到1.13g(78％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-D-丝氨酸苄酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.65(m，68H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.2-2.6(m，8H)，3.40(m，1H)，3.64(m，1H)，4.01(m，2H)，4.27(m，2H)，4.44(d，1H，J＝7.1Hz)，4.60(m，2H)，4.77(m，2H)，5.19(m，6H)，6.61(d，1H，J＝8.3Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.9g，29mmol)使上述(5)中制备的化合物(1.0g，0.58mmol)脱保护并在有EEDQ(190mg，0.77mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(280mg，0.70mmol)使之酰化而得到420mg(44％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-D-丝氨酸苄酯、为一种非晶固体。
(7)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯/碳于EtOH(10mL)中和氧化铂(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情况下使上述(6)中制备的化合物(420mg，0.25mmol)氢化而得到118mg(30％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-D-丝氨酸三乙铵盐、为一种白色粉末mp179-181℃；IR(膜)3283，3100，2921，2852，1732，1660，1651，1564，1556，1464，1417，1378，1322，1181，1061，856，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，12H)，3.06(m，6H)，3.33(m，5H)，3.78(m，2H)，3.95(m，2H)，4.22(m，1H)，4.45(d，1H，J＝7.5Hz)，4.68(br.s，1H)，5.13(m，3H)，5.26(m，1H)；13C NMR(CDCl3)δδ173.7，173.5，173.1，171.1，169.9，100.3，75.1，73.9，71.9，71.1，70.9，70.2，60.9，53.9，52.7，46.0，41.3，40.8，39.4，34.6，34.4，31.9，29.8，29.7，29.5，29A，25.6，25.4，25.2，25.1，22.7，14.1，8.6.
对C87H166N3O19P的计算分析值C，65.75；H，10.53；N，2.64；P，1.95。测定值C，65.32；H，10.28；N，2.53；P，1.89。
实施例16(B15)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(357mg，1.2mmol)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(478mg，1.2mmol)使L-丝氨酸苄酯(250mg，1.08mmol)酰化而得到0.52g(84％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-L-丝氨酸苄酯mp52-53℃；1H NMR(CDCl3)δ0.87(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，34H)，2.29(t，2H，J＝7.5Hz)，2.49(d，2H，J＝5.8Hz)，3.67(s，1H)，3.97(m，2H)，4.63(m，1H)，5.19(m，3H)，6.61(d，1H，J＝7.1Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(500mg，0.87mmol)和实施例15-(4)中制备的化合物(1.08g，0.90mmol)偶联而得到1.35g(89％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.0-1.65(m，68H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.38(q，1H，J＝9.1Hz)，3.65(m，1H)，3.84(m，1H)，4.27(m，3H)，4.70(m，5H)，4.84(m，4H)，5.14(m，3H)，5.46(t，1H，J＝9.7Hz)，6.07(m，1H)，6.62(d，1H，J＝8.0Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.13g，17.2mmol)使上述(2)中制备的化合物(600mg，0.34mmol)脱保护并在有EEDQ(124mg，0.50mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(150mg，0.38mmol)使之酰化而得到362mg(60％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯、为一种非晶固体。
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有钯/碳(100mg)和氧化铂(200mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情况下使上述(3)中制备的化合物(300mg，0.17mmol氢化而得到120mg(44％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-D-丝氨酸三乙铵盐、为一种白色粉末mp175-176℃；IR(膜)
3304，2956，2923，2853，1733，1654，1541，1466，1377，1164，1107，1080，845，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.75(m，12H)，3.07(q，6H，J＝7.2Hz)，3.37(m，1H)，3.5-3.95(m，8H)，4.21(q，1H，11.0Hz)，4.54(d，1H，J＝8.9Hz)，4.61(br.s，1H)，5.17(m，4H)，7.10(d，1H，J＝9.0Hz)，7.43(d，1H，J＝7.9Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.3，173.4，173.2，172.8，172.0，169.6，169.2，101.4，74.7，70.9，69.3，60.4，53.2，51.6，46.1，41.4，41.0，39.1，34.5，34.3，34.2，34.1，31.9，29.8，29.7，29.6，29.4，29.3，29.2，25.5，25.1，25.0，22.7，14.1，8.6.
对C87H166N3O19P·H2O的计算分析值C，65.01；H，10.54；N，2.61；P，1.93。测定值C，64.92；H，10.38；N，2.58；P，2.06。
实施例17(B16)N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C8H17CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(845mg，2.5mmol)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-壬酰氧基十四酸(780mg，2.2mmol)使L-丝氨酸苄酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到1.0g(89％)的N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-L-丝氨酸苄酯mp52-53℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，32H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.51(d，2H，J＝5.8Hz)，2.62(t，1H，J＝6.0Hz)，3.98(m，2H)，4.65(m，1H)，5.19(m，3H)，6.58(d，1H，J＝6.8Hz)，7.35(br s，5H).
(2)按照与实施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-壬酰氧基十四酸(852mg，2.22mmol)使实施例2-(1)中制备的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在AcOH水溶液(25mL)中脱保护而得到1.31g(79％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，28H)，1.59(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.6Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.2Hz)，4.71(m，2H)，5.07(m，2H)，5.27(d，1H，J＝8.8Hz).
(3)按照与实施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(400mg，1.67mmol)和吡啶(0.15mL，1.84mmol)于CH2Cl2(25mL)中处理上述(2)中制备的化合物(1.25，1.52mmol)，随后用三乙胺(0.42mL，3.04mmol)、氯磷酸二苯酯(0.47mL，2.28mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)处理而得到1.30g(67％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，32H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.22(m，6H)，3.33(m，1H)，3.53(m，1H)，3.80(m，1H)，3.96(m，1H)，4.31(m，2H)，4.55(m，2H)，4.83(d，1H，J＝12.0Hz)，5.01(d，1H，J＝7.9Hz)，5.62(m，1H)，7.28(m，10H).
(4)按照与实施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(4)中制备的化合物(1.267g，1.0mmol)脱保护且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)制备的Vilsmeier试剂处理而得到1.07g(91％)的2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、为一种白色泡沫体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.25-1.55(m，32H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.43(m，2H)，4.34(m，4H)，4.70(m，3H)，4.83(m，3H)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝10.2Hz)，5.78(d，1H，J＝8.0Hz)，6.25(d，1H，J＝3.6Hz)，7.19(m，10H).
(5)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情况下使上述(1)和(4)中制备的化合物(分别为505mg、0.90mmol和1.0g、0.85mmol)偶联而得到1.03g(71％)的N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.0-1.65(m，64H)，1.78(s，3H)，1.82(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.38(m，1H)，3.64(m，1H)，3.83(m，1H)，4.25(m，3H)，4.73(m，5H)，5.18(m，5H)，6.07(m，1H)，6.60(d，1H，J＝7.8Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.93g，29.5mmol)使上述(5)中制备的化合物(1.0g，0.59mmol)脱保护并在有EEDQ(195mg，0.78mmol)存在的情况下用(R)-3-壬酰氧基十四酸(273mg，0.71mmol)使之酰化而得到405mg(42％)的N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯、为一种非晶固体。
(7)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯/碳于EtOH(10mL)中和氧化铂(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情况下使上述(6)中制备的化合物(405mg，0.25mmol)氢化而得到185mg(48％)的N-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐、为一种白色粉末mp177-179℃；IR(膜)3306，2955，2923，2853，1732，1660，1538，1467，1378，1252，1165，1106，1080，960，844，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，105H)，2.2-2.75(m，12H)，3.07(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-3.5(m，5H)，3.85(m，4H)，4.23(d，1H，10.2Hz)，4.51(d，1H，J＝8.0Hz)，4.64(br.s，1H)，5.18(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.3，172.8，172.2，169.6，169.1，101.5，74.8，70.9，70.8，69.3，60.5，53.2，51.5，46.1，41.5，41.0，39.2，34.5，34.3，34.1，32.0，31.9，29.8，29.6，29.4，29.3，25.6，25.2，25.1，22.7，14.1，8.7.
对C84H160N3O19P的计算分析值C，65.21；H，10.42；N，2.72；P，2.00。测定值C，65.48；H，10.32；N，2.62；P，2.12。
实施例18(B17)N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3壬酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C7H15CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(745mg，2.5mmol)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-辛酰氧基十四酸(815mg，2.2mmol)使L-丝氨酸苄酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到1.02g(93％)的N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-L-丝氨酸苄酯mp50-51℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.8Hz)，1.1-1.7(m，30H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.51(d，2H，J＝5.8Hz)，2.60(t，1H，J＝6.0Hz)，3.97(m，2H)，4.65(m，1H)，5.22(m，3H)，6.61(d，1H，J＝6.9Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照与实施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-辛酰氧基十四酸(821mg，2.22mmol)使实施例2-(1)中制备的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在90％AcOH水溶液(25mL)中脱保护而得到1.35g(83％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，26H)，1.60(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.53(m，2H)，3.42(m，1H)，3.53(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.8，4.4Hz)，3.94(m，2H)，4.56(d，1H，J＝8.3Hz)，4.64(d，1H，J＝11.8Hz)，4.77(d，1H，J＝11.8Hz)，5.08(m，2H)，5.30(br.s，1H).
(3)按照与实施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(425mg，1.77mmol)和吡啶(0.16mL，1.95mmol)于CH2Cl2(25mL)中处理上述(2)中制备的化合物(1.30，1.61mmol)，随后用三乙胺(0.45mL，3.22mmol)、氯磷酸二苯酯(0.50mL，2.42mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)处理而得到1.42g(71％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，30H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.23(m，6H)，3.37(m，1H)，3.65(m，1H)，3.83(m，1H)，3.96(m，1H)，4.55(m，2H)，4.83(d，1H，J＝11.8Hz)，5.01(d，1H，J＝8.2Hz)，5.20(m，1H)，7.29(m，10H).
(4)按照与实施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(3)中制备的化合物(1.24g，1.0mmol)脱保护且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)制备的Vilsmeier试剂处理而得到1.0g(87％)的2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、为一种白色泡沫体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.7Hz)，1.25-1.55(m，30H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.43(m，2H)，4.29(m，4H)，4.72(m，3H)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝9.9Hz)，5.79(d，1H，J＝7.9Hz)，6.25(d，1H，J＝3.5Hz)，7.29(m，10H).
(5)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情况下使上述(1)和(4)中制备的化合物(分别为490mg、0.90mmol和1.0g、0.86mmol)偶联而得到0.99g(69％)的N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯
1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.0-1.65(m，60H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.37(m，1H)，3.65(m，1H)，3.83(m，1H)，4.27(m，3H)，4.72(m，5H)，5.18(m，4H)，5.46(t，1H，J＝9.8Hz)，6.06(m，1H)，6.60(d，1H，J＝8.0Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.86g，28.5mmol)使上述(5)中制备的化合物(0.95g，0.57mmol)脱保护并在有EEDQ(185mg，0.75mmol)存在的情况下用(R)-3-辛酰氧基十四酸(252mg，0.68mmol)使之酰化而得到433mg(47％)的N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯、为一种非晶固体。
(7)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯/碳(250mg)于EtOH(10mL)中和氧化铂(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情况下使上述(6)中制备的化合物(433mg，0.27mmol)氢化而得到196mg(48％)的N-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-辛酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐、为一种白色粉末mp177-178℃；IR(膜)3296，2956，2923，2853，1732，1645，1546，1466，1378，1315，1170，1082，1056，961，846，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，99H)，2.2-2.75(m，12H)，3.08(q，6H，J＝7.1Hz)，3.39(d，1H，J＝8.8Hz)，3.6-4.0(m，8H)，4.22(q，1H，10.3Hz)，4.53(d，1H，J＝8.2Hz)，4.63(m，1H)，5.18(m，4H)，7.04(d，1H，J＝8.8Hz)，7.42(d，1H，J＝8.0Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.8，173.3，173.2，172.7，172.2，169.6，169.1，101.5，74.8，70.9，70.8，69.3，60.5，53.2，51.5，46.2，41.5，41.1，39.2，34.5，34.3，34.1，34.0，32.0，31.8，29.8，29.6，29.4，29.3，29.2，29.1，25.6，25.3，25.2，25.0，22.7，14.1，8.7.
对C81H154N3O19P·H2O的计算分析值C，63.87；H，10.32；N，2.76；P，2.03。测定值C，63.96；H，10.29；N，2.69；P，1.67。
实施例19(B18)N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C6H13CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(745mg，2.5mmol)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-庚酰氧基十四酸(780mg，2.2mmol)使L-丝氨酸苄酯(390mg，2.0mmol)酰化而得到0.97g(91％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-L-丝氨酸苄酯mp46-48℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，28H)，2.30(t，2H，J＝7.7Hz)，2.50(d，2H，J＝5.8Hz)，2.62(t，1H，J＝6.0Hz)，3.97(m，2H)，4.65(m，1H)，5.19(m，3H)，6.61(d，1H，J＝6.9Hz)，7.35(brs，5H).
(2)按照与实施例2-(2)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(720mg，2.4mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-庚酰氧基十四酸(790mg，2.22mmol)使实施例2-(1)中制备的化合物(1.0g，2.02mmol)酰化且然后在90％AcOH水溶液(25mL)中脱保护而得到1.30g(81％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.00(s，9H)，0.88(m，8H)，1.25(m，24H)，1.59(m，4H)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.52(m，2H)，3.42(m，1H)，3.55(m，1H)，3.66(m，1H)，3.83(dd，1H，J＝11.5，4.2Hz)，3.94(m，2H)，4.57(d，1H，J＝8.3Hz)，4.64(d，1H，J＝12.1Hz)，4.76(d，1H，J＝11.9Hz)，5.09(m，2H)，5.31(d，1H，J＝8.7Hz).
(3)按照与实施例2-(3)中所述相同的方式，用氯甲酸2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙基酯(417mg，1.74mmol)和吡啶(0.15mL，1.91mmol)在CH2Cl2(25mL)中处理上述(2)中制备的化合物(1.25，1.58mmol)，随后用三乙胺(0.44mL，3.16mmol)、氯磷酸二苯酯(0.49mL，2.37mmol)和4-吡咯烷子基吡啶(100mg)处理而得到1.34g(69％)的2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1HNMR(CDCl3)δ0.0(s，9H)，0.88(m，8H)，1.1-1.7(m，28H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.35(m，4H)，3.37(m，1H)，3.61(m，1H)，3.80(m，1H)，4.32(m，2H)，4.63(m，2H)，4.83(d，1H，J＝12.0Hz)，5.01(d，1H，J＝8.2Hz)，5.62(m，2H)，7.29(m，10H).
(4)按照与实施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(5mL)使上述(3)中制备的化合物(1.23g，1.0mmol)脱保护且然后用由DMF(0.39mL，5.0mmol)和草酰氯(0.22mL，2.5mmol)制备的Vilsmeier试剂处理而得到1.0g(87％)的2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、为一种白色泡沫体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.9Hz)，1.25-1.55(m，28H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.6Hz)，2.43(m，2H)，4.26(m，4H)，4.73(m，3H)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝10.2Hz)，5.77(d，1H，J＝8.0Hz)，6.25(d，1H，J＝3.3Hz)，7.19(m，10H).
(5)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情况下使上述(1)和(4)中制备的化合物(分别为480mg、0.90mmol和0.98g、0.86mmol)偶联而得到1.06g(75％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯1HNMR(CDCl3)δ0.88(m，12H)，1.0-1.65(m，56H)，1.77(s，3H)，1.85(s，3H)，2.1-2.5(m，8H)，3.38(m，1H)，3.64(m，1H)，3.83(m，1H)，4.25(m，3H)，4.78(m，5H)，5.16(m，4H)，5.46(t，1H，J＝9.9Hz)，6.06(m，1H)，6.60(d，1H，J＝7.7Hz)，7.05-7.45(m，15H).
(6)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(2.0g，30.5mmol)使上述(5)中制备的化合物(1.0g，0.61mmol)脱保护并在有EEDQ(200mg，0.80mmol)存在的情况下用(R)-3-庚酰氧基十四酸(260mg，0.73mmol)使之酰化而得到440mg(45％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯、为一种非晶固体。
(7)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯/碳(250mg)于EtOH(10mL)中和氧化铂(400mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情况下使上述(6)中制备的化合物(440mg，0.28mmol)氢化而得到208mg(51％)的N-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-庚酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐、为一种白色粉末mp176-177℃；IR(膜)3307，2956，2924，2854，1732，1650，1545，1466，1378，1316，1170，1080，956，841，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.1-1.7(m，93H)，2.2-2.75(m，12H)，3.08(q，6H，J＝7.2Hz)，3.40(d，1H，J＝10.2Hz)，3.6-4.0(m，7H)，4.24(m，2H)，4.52(d，1H，J＝8.0Hz)，4.63(m，1H)，5.19(m，4H)，7.04(d，1H，J＝8.6Hz)，7.40(d，1H，J＝8.4Hz)；13C NMR(CDCl3)δ177.1，173.2，173.1，172.7，172.3，169.5，168.9，101.5，75.0 74.8，71.2，70.9，69.1，60.5，53.1，51.4，46.1，41.5，41.0，39.2，34.5，34.3，34.1，34.0，31.9，31.6，31.5，29.8，29.6，29.4，29.0，28.9，28.8，25.6，25.3，25.1，25.0，22.7，22.6，14.1，8.7.
对C78H148N3O19P的计算分析值C，64.04；H，10.20；N，2.87；P，2.12。测定值C，63.77；H，10.11；N，2.85；P，2.02。
实施例20(B19)
2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)将2-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷(330mg，1.1mmol)和(R)-3-十四酰氧基十四酸(500mg，1.1mmol)溶于CH2Cl2(10mL)并用粉状4分子筛(500mg)处理。1小时后加入EEDQ(297mg，1.2mmol)并将该反应体系搅拌18小时、通过Celite过滤并在真空中浓缩。使用15％EtOAc/己烷将残余物进行硅胶层析而得到675mg(92％)的无色固体。通过在室温下搅拌2小时用TBAF(1M的THF溶液，1mL，1mmol)在THF(5mL)中使一部分该物质(500mg，0.68mmol)脱保护。将该反应混合物用Et2O(50mL)稀释并用盐水(2×50mL)洗涤。将该盐水重新用Et2O(2×50mL)提取并将合并的有机提取物用Na2SO4干燥并在真空中浓缩而得到338mg(62％)的2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]乙醇、为一种灰白色固体。
(2)按照与实施例2-(6)中所述相同的方式，在有氰化汞(770mg，3.05mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(338mg，0.68mmol)和实施例2-(4)中制备的化合物(786mg，0.61mmol)偶联而得到245mg(24％)的2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1HNMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.8(m，84H)，1.81(s，3H)，1.89(s，3H)，2.15-2.55(m，8H)，3.25(m，1H)，3.47(m，2H)，3.67(m，1H)，3.83(m，2H)，4.28(dd，1H，J＝12.2，4.9Hz)，4.36(d，1H，J＝11.0Hz)，4.68(m，2H)，4.78(d，1H，J＝11.6Hz)，4.94(d，1H，J＝11.6Hz)，5.16(m，2H)，5.53(t，1H，J＝10.0Hz)，6.06(d，1H，J＝4.9Hz)，6.19(m，1H)，7.25(m，10H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(980mg，15mmol)使上述(2)中制备的化合物(500mg，0.29mmol)脱保护并在有EEDQ(110mg，0.44mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(155mg，0.34mmol)使之酰化而得到315mg(62％)的2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体。
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化铂(100mg)存在的情况下使上述(3)中制备的化合物(200mg，0.113mmol)氢化而得到142mg(76％)的2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色固体mp175-176℃；IR(膜)3285，3098，2955，2919，2851，1731，1659，1642，1556，1468，1379，1250，1228，1174，1110，1083，1046，962，857cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.0Hz)，1.1-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，15H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-4.1(m，8H)，4.21(q，1H，J＝9.9Hz)，4.51(d，1H，J＝8.2Hz)，5.05-5.25(m，4H)，7.33(d，1H，J＝8.5Hz)，7.50(br t，1H，J＝4.8Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.3，170.6，170.3，169.9，100.9，75.8，73.0，71.3，71.1，70.9，70.6，68.3，60.6，55.1，45.7，41.6，41.2，39.5，34.6，34.5，34.4，32.0，29.8，29.4，29.3，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.
对C98H190N3O17P·2H2O的计算分析值C，67.28；H，11.18；N，2.40；P，1.77。测定值C，67.01；H，11.18；N，2.15；P，2.01.
实施例21(B20)2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3癸酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例20-(1)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(594mg，2.0mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(600mg，1.5mmol)使2-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷(450mg，1.5mmol)酰化且然后用TBAF(1.0M的THF溶液，2.5mL，2.5mmol)在THF(10mL)中使之脱保护而得到488mg(81％)的2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]乙醇、为一种灰白色固体。
(2)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式在有AgOTf(560mg，2.2mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(385g，0.87mmol)和实施例15-(4)中制备的化合物(1.05g，0.87mmol)偶联而得到1.04g(74％)的2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.6(m，68H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.7Hz)，2.44(m，2H)，4.34(m，5H)，4.72(m，2H)，4.83(q，1H，J＝9.3Hz)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝10.2Hz)，5.79(d，1H，J＝8.0Hz)，6.26(d，1H，J＝3.4Hz)，7.31(m，10H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.42g，21.7mmol)使上述(2)中制备的化合物(700mg，0.44mmol)脱保护且然后在有EEDQ(148mg，0.6mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(190mg，0.48mmol)使之酰化而得到432mg(62％)的2-[(R)-3-癸氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体。
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化铂(200mg)存在的情况下使上述(3)中制备的化合物(400mg，0.25mmol)氢化而得到200mg(52％)的2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色固体mp165-166℃；IR(膜)3289，3094，2956，2922，2853，1732，1658，1644，1556，1467，1379，1247，1164，1107，1081，1048cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，15H)，3.05(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-3.85(m，9H)，4.52(d，1H，J＝8.2Hz)，5.05-5.25(m，4H)，7.21(d，1H，J＝8.5Hz)，7.42(brt，1H)；13C NMR(CDCl3)δ173.8，173.3，170.7，170.3，170.0，100.9，75.6，73.0，71.3，70.9，70.6，68.3，60.7，55.0，45.8，41.6，41.2，39.5，34.5，34.4，34.1，31.9，29.8，29.6，29.5，29.4，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.对C86H166N3O17P·H2O的计算分析值C，66.08；H，10.83；N，2.69；P，1.98。测定值C，65.80；H，10.63；N，2.63；P，2.04。
实施例22(B21)3-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝1，M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例20-(1)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(595mg，2.0mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(680mg，1.5mmol)使3-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷(470mg，1.5mmol)酰化且然后用TBAF(1.0M的THF溶液，2.0mL，2.0mmol)在THF(10mL)中使之脱保护而得到698mg(91％)的3-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙醇、为一种灰白色固体。
(2)按照与实施例13-(4)中所述相同的方式，用TFA(10mL)使实施例2-(3)中制备的化合物(7.9g，5.88mmol)脱保护且然后用由DMF(1.8mL，23.5mmol)和草酰氯(1.03mL，11.76mmol)制备的Vilsmeier试剂处理而得到6.32g(85％)的2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氯化物、为一种白色泡沫体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝6.8Hz)，1.2-1.55(m，42H)，1.78(s，3H)，1.88(s，3H)，2.18(t，2H，J＝7.5Hz)，2.43(m，2H)，4.31(m，4H)，4.68(d，1H，J＝11.9Hz)，4.74(d，1H，J＝11.9Hz)，4.83(q，1H，J＝9.3Hz)，5.09(m，1H)，5.51(t，1H，J＝9.7Hz)，5.78(d，1H，J＝8.0Hz)，6.26(d，1H，J＝3.4Hz)，7.31(m，10H).
(3)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(642mg，2.5mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(613mg，1.2mmol)和上述(2)中制备的化合物(1.5g，1.2mmol)偶联而得到1.43g(68％)的3-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.8(m，86H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.20(t，2H，J＝7.6Hz)，2.29(t，2H，J＝7.7Hz)，2.44(m，4H)，3.21(m，1H)，3.42(m，1H)，3.54(m，2H)，3.80(m，1H)，3.94(m，1H)，4.28(dd，1H，J＝12.3，5.2Hz)，4.38(d，1H，J＝10.8Hz)，4.70(m，3H)，4.81(d，1H，J＝8.2Hz)，5.14(m，2H)，5.47(t，1H，J＝9.6Hz)，6.13(d，1H，J＝7.6Hz)，6.22(br.s，1H)，7.25(m，10H).
(4)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.32g，20.1mmol)使上述(3)中制备的化合物(700mg，0.40mmol)脱保护且然后在有EEDQ(125mg，0.5mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(200mg，0.44mmol)使之酰化而得到435mg(60％)的3-[(R)-3-十四氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体。
(5)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化铂(200mg)存在的情况下使上述(4)中制备的化合物(400mg，0.22mmol)氢化而得到170mg(45％)的3-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色固体mp171-172℃；IR(膜)3288，3094，2955，2919，2850，1731，1658，1344，1556，1468，1378，1320，1251，1226，1172，1106，1083，1044cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.0Hz)，1.1-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，15H)，3.06(q，6H，J＝7.1Hz)，3.2-4.1(m，8H)，4.21(q，1H，J＝9.9Hz)，4.51(d，1H，J＝8.3Hz)，5.05-5.25(m，4H)，7.23(t，1H，J＝5.3Hz)，7.33(d，1H，J＝8.6Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.4，170.6，170.2，169.9，100.6，75.8，71.5，70.9，70.5，66.8，60.4，55.3，45.6，41.4，39.4，36.3，34.6，34.5，34.2，31.9，29.7，29.4，29.3，29.1，25.4，25.1，22.7，14.1，8.5.
对C99H192N3O17P·2H2O的计算分析值C，67.42；H，11.20；N，2.38；P，1.76。测定值C，66.97；H，11.01；N，2.38；P，1.95。
实施例23(B22)4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝2，M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例20-(1)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(595mg，2.0mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(695mg，1.53mmol)使4-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)丁烷(500mg，1.53mmol)酰化且然后用TBAF(1.0M的THF溶液，2.5mL，2.5mmol)在THF(15mL)中使之脱保护而得到651mg(81％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-1-丁醇、为一种灰白色固体。
(2)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式在有AgOTf(1.16g，4.5mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(650mg，1.25mmol)和实施例22-(2)中制备的化合物(1.6g，1.25mmol)偶联而得到1.65g(75％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.8(m，88H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.15-2.55(m，8H)，3.24(m，2H)，3.50(m，2H)，3.83(m，2H)，4.27(dd，1H，J＝12.1，3.8Hz)，4.32(d，1H，J＝11.5Hz)，4.66(m，2H)，4.78(d，1H，J＝12.1Hz)，4.89(d，1H，J＝8.0Hz)，5.15(m，2H)，5.54(t，1H，J＝9.7Hz)，5.95(m，2H)，7.25(m，10H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.30g，19.8mmol)使上述(2)中制备的化合物(700mg，0.39mmol)脱保护且然后在有EEDQ(125mg，0.5mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(195mg，0.43mmol)使之酰化而得到421mg(60％)的4-[(R)-3-十四氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷、为-种非晶固体。
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化铂(200mg)存在的情况下使上述(3)中制备的化合物(400mg，0.22mmol)氢化而得到212mg(55％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]丁基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色固体mp171-172℃；IR(膜)3298，2955，2920，2851，1732，1645，1550，1467，1378，1181，1107，1083，1044，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，19H)，3.05(q，6H，J＝7.1Hz)，3.18(m，2H)，3.3-3.5(m，6H)，3.78(m，3H)，3.97(d，1H，J＝12.5Hz)，4.23(q，1H，J＝10.0Hz)，4.50(d，1H，J＝8.5Hz)，5.13(m，4H)，7.12(d，1H，J＝9.1Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.9，173.4，173.3，170.8，169.9，169.8，101.0，75.6，73.2，71.4，71.1，70.6，68.9，60.7，54.8，45.9，41.5，39.6，38.9，34.6，34.3，32.0，29.8，29.5，29.0，28.9，26.3，25.4，25.1，22.7，14.2，8.7.
对C100H194N3O17P H2O的计算分析值C，68.26；H，11.23；N，2.39；P，1.76。测定值C，68.21；H，11.03；N，2.26；P，1.73。
实施例24(B23)4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]己基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝4，M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例20-(1)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(1.35g，4.56mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(2.07g，4.56mmol)使6-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)己烷(1.48mg，4.15mmol)酰化且然后用TBAF(1.0M的THF溶液，1.53mL，1.53mmol)在THF(46mL)中使之脱保护而得到700mg(30％)的6-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-1-己醇、为一种灰白色固体。
(2)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.28g，5.0mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(689mg，1.20mmol)和实施例22-(2)中制备的化合物(1.25g，1.00mmol)偶联而得到1.59g(94％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]己基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1HNMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝6.6Hz)，1.1-1.8(m，92H)，1.82(s，3H)，1.89(s，3H)，2.22(t，2H，J＝7.6Hz)，2.29(t，2H，J＝7.4Hz)，2.45(m，4H)，3.22(m，1H)，3.46(m，2H)，3.83(m，2H)，3.94(m，1H)，4.31(m，2H)，4.64(m，2H)，4.83(d，1H，J＝12.1Hz)，4.97(d，1H，J＝7.8Hz)，5.17(m，2H)，5.59(t，1H，J＝8.8Hz)，5.75(m，1H)，5.84(d，1H，J＝7.6Hz)，7.25(m，10H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(2.88g，44.1mmol)使上述(2)中制备的化合物(1.57g，0.88mmol)脱保护且然后在有EEDQ(327mg，1.32mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(481mg，1.06mmol)使之酰化而得到1.57g(97％)的4-[(R)-3-十四氧基十四酰基氨基]己基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体。
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式在有氧化铂(157mg)存在的情况下使上述(3)中制备的化合物(1.57g，0.85mmol)氢化而得到130mg(10％)的4-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]己基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种白色固体mp150-152℃；IR(膜)3284，3099，2954，2920，2851，1731，1657，1637，1557，1467，1418，1378，1320，1249，1179，1108，1083，1044，856，721cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.89(t，18H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，23H)，3.05(q，6H，J＝7.1Hz)，3.18(m，2H)，3.39(d，1H，J＝8.2Hz)，3.49(q，1H，J＝7.5Hz)，3.82(m，2H)，3.99(d，1H，J＝11.9Hz)，4.25(q，1H，J＝8.9Hz)，4.59(m，2H)，5.18(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.3，170.6，169.7，169.4，100.6，75.5，73.1，71.3，70.9，70.6，69.2，60.6，55.2，45.8，41.7，41.4，39.5，39.4，34.6，34.3，34.2，34.1，31.9，29.7，29.4，29.2，26.5，25.5，25.3，25.1，22.7，14.1，8.6.
对C102H198N3O17P·H2O的计算分析值C，68.53；H，11.28；N，2.33；P，1.73。测定值C，68.63；H，11.12；N，2.26；P，1.66。
实施例25(B24)N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺(SERINAMIDE)三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CONH2，R8＝PO3H2)(1)用三乙胺(0.18mL，1.3mmol)处理L-丝氨酰胺(serinamide)盐酸盐(0.157g，1.18mmol)和(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.61g，1.34mmol)溶于CH2Cl2(6mL)所得到的混悬液并将所得溶液与4分子筛一起搅拌30分钟。然后加入EEDQ(0.437g，1.77mmol)并在室温下将该混合物搅拌16小时。收集沉淀的产物并用CH2Cl2(2×25mL)洗涤而得到0.455g(71％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-L-丝氨酰胺、为一种无色粉末mp126-130℃；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝～7Hz)，1.15-1.7(m，42H)，2.31(t，2H，J＝7.5Hz)，2.51(d，2H，J＝6.3Hz)，3.56(br s，1H)，3.65(dd，1H，J＝11.2，5.5Hz)，3.86(dd，1H，J＝11.2，4.5Hz)，4.21(s，2H)，4.40(m，1H)，5.22(m，1H).
(2)按照与实施例2-(6)中所述相同的方式，在有氰化汞(0.43g，1.7mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(0.23g，0.246mmol)和实施例2-(4)中制备的化合物(0.961g，0.745mmol)偶联而得到0.527g(71％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝～7H)，1.0-1.7(m，84H)，1.80和1.89(2s，6H)，2.21(t，2H，J＝7.5Hz)，2.30(t，2H，J＝7.5Hz)，2.37(m，2H)，2.47(m，2H)，3.54(m，1H)，3.68(dd，1H，J＝8，J＝11Hz)，3.86(br d，1H，J＝11Hz)，4.16(dd，1H，J＝11，4Hz)，4.24(dd，1H，J＝12，4.3Hz)，4.40(d，1H，J＝12Hz)，4.6-4.8(m，4H)，5.00(d，1H，J＝8Hz)，5.1-5.25(m，2H)，5.4-5.55(m，2H)，5.84(br s，1H)，6.61(br s，2H)，7.1-7.35(m，10H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(0.83g，13mmol)使上述(2)中制备的化合物(0.44g，0.254mmol)脱保护且然后在有EEDQ(0.095g，0.38mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.14g，0.31mmol)使之酰化而得到0.271g(59％)的N-[(R)-3-十四氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺、为一种非晶固体
1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，126H)，2.03(br s，1H)，2.15-2.55(m，12H)，3.5-4.05(m，5H)，4.14(dd，1H，J＝10，3.5Hz)，4.5-4.65(m，2H)，4.68(d，1H，J＝8.1Hz)，5.05-5.25(m，3H)，5.31(t，1H，J＝～10Hz)，5.58(br s，1H)，6.31(d，1H，J＝8Hz)，6.85-6.95(m，2H)，7.1-7.4(m，10H).
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化铂(0.125g)存在的情况下使上述(3)中制备的化合物(0.25g，0.14mmol)氢化而得到0.195(80％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺三乙铵盐、为一种无色固体mp190-191℃；(分解)；IR(膜)3418，3293，2921，2850，1732，1717，1651，1636，1557，1540，1458，1165，1033cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～7Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，12H)，3.05(q，6H，J＝7.2Hz)，3.2-3.45(m)，3.5-4.15(m，5H)，4.21(q，1H，J＝～10Hz)，4.53(d，1H，J＝8.1Hz)，4.58(m，1H)，5.0-5.3(m，4H)，7.25(d，1H，J＝8.4Hz)，7.40(d，1H，J＝7.2Hz)；13C NMR(CDCl3-CD3OD)δ173.7，173.5，172.5，170.7，170.5，170.4，101.4，75.5，73.4，71.1，70.9，70.2，68.6，60.0，53.9，52.2，45.6，41.2，41.0，38.9，34.4，34.2，31.8，29.6，29.5，29.3，29.1，25.2，24.9，22.6，14.0，8.3.
对C99H191N4O18P·2.5H2O的计算分析值C，66.00；H，10.97；N，3.11；P，1.72。测定值C，66.04；H，10.99；N，3.03；P，1.95。
实施例26(B25)N-(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CONH2，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例25-(1)中所述相同的方式，在有EEDQ(371mg，1.5mmol)存在的情况下在CH2Cl2中(R)-3-癸酰氧基十四酸(478mg，1.2mmol)使L-丝氨酰胺盐酸盐(169mg，1.2mmol)酰化而得到428mg(74％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-L-丝氨酰胺、为一种白色固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H)，1.1-1.7(m，34H)，2.33(t，2H，J＝7.5Hz)，2.54(d，2H，J＝6.6Hz)，3.35(s，2H)，3.72(dd，1H，J＝11.0，5.2Hz)，3.84(dd，1H，J＝11.3，5.0Hz)，4.20(t，1H，J＝5.1Hz)，5.26(t，1H，J＝6.4Hz).
(2)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(560mg，2.2mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(410mg，0.85mmol)和实施例15-(4)中制备的化合物(1.05g，0.87mmol)偶联而得到780g(56％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H)，1.1-1.6(m，68H)，1.80(s，3H)，1.89(s，3H)，2.30(m，8H)，3.53(m，1H，3.68(m，1H)，3.85(br.d，1H，J＝9.4Hz)，4.15(dd，1H，J＝10.8，3.7Hz)，4.24(dd，1H，J＝12.3，4.6Hz)，4.40(d，1H，J＝10.8)，4.65(m，4H)，5.00(d，1H，J＝8.2Hz)，5.18(m，2H)，5.46(m，2H)，5.83(m，1H)，6.60(m，2H)，7.30(m，10H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(1.19g，18.2mmol)使上述(2)中制备的化合物(600mg，0.36mmol)脱保护且然后在有EEDQ(124mg，0.50mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(160mg，0.4mmol)使之酰化而得到371mg(62％)的N-[(R)-3-癸氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺、为一种非晶固体。
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化铂(200mg)存在的情况下使上述(3)中制备的化合物(330mg，0.20mmol)氢化而得到120mg(44％)的N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺三乙铵盐、为一种白色粉末mp187-189℃；IR(膜)3419，3286，3220，3098，2955，2922，2852，1732，1680，1662，1644，1559，1467，1247，1167，1107，1080，1051，965，913cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.89(t，18H，J＝7.0Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.2-2.7(m，12H)，3.07(q，6H，J＝7.1Hz)，3.68(m，1H)，3.87(m，1H)，4.09(dd，1H，J＝10.8，3.6Hz)，4.22(m，1H)，4.53(d，1H，J＝8.2Hz)，4.58(m，1H)，5.13(m，3H)，5.28(m，1H)，7.53(d，1H，J＝9.0Hz)，7.56(d，1H，J＝7.7Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.2，170.2，169.8，102.3，75.7，73.5，71.3，70.7，70.1，68.8，60.8，53.9，51.7，45.8，41.5，41.1，39.1，34.6，34.5，34.2，32.0，29.7，29.6，29.5，29.4，25.7，25.4，25.1，22.7，14.1，8.6.
对C87H167N4O18P·H2O的计算分析值C，65.05；H，10.60；N，3.49；P，1.93。测定值C，65.06；H，10.40；N，3.31；P，2.00。
实施例27(B26)N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-1-丝氨酸甲酯三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2ME，R8＝PO3H2)(1)在室温和大气压以及有5％钯/碳(50mg)存在的情况下，使实施例12-(2)中制备的化合物(0.290g，0.157mmol)溶于THF(20mL)所得到的溶液氢化3小时。通过过滤除去催化剂并浓缩滤液。将在0℃下残余物溶于CHCl3(5mL)所得到的溶液用重氮甲烷(0.5mmol)溶于乙醚(5mL)所得到的溶液处理且然后在0℃下搅拌30分钟。加入AcOH(0.5mL)并将所得无色溶液用乙醚(50mL)处理、用饱和NaHCO3水溶液(25mL)洗涤、干燥(Na2SO4)并浓缩。进行硅胶快速色谱法纯化(梯度洗脱，20→25％EtOAcs-己烷)得到0.199g(72％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基甲氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸甲酯、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，12H，J＝～6.5Hz)，1.1-1.75(m，84H)，1.81和1.89(2s，6H)，2.36(t，2H，J＝7.5Hz)，2.25-2.6(m，6H)，3.48(q，1H，J＝～8Hz)，3.7-3.9(m，5H)，4.2-4.4(m，3H)，4.6-4.85(m，4H)，4.88(d，1H，J＝7.8Hz)，5.03-5.22(m，2H)，5.49(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.21(br s，1H)，6.59(d，1H，J＝7.8Hz)，7.1-7.4(m，10H).
(2)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(0.36g，5.5mmol)使上述(1)中制备的化合物(0.195g，0.111mmol)脱保护且然后在有EEDQ(0.041g，0.17mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.060g，0.13mmol)使之酰化而得到0.138g(69％)的N-[(R)-3-十四氧基十四酰基]-O-[(R)-4-O-二苯基膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸甲酯、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.75(m，126H)，2.15-2.45(m，10H)，2.52(dd，1H，J＝14.7，6Hz)，2.66(dd，1H，J＝14.7，6Hz)，3.35(brs，1H)，3.4-3.8(m，7H)，3.88(dd，1H，J＝11Hz)，4.18(dd，1H，J＝11Hz)，4.6-4.75(m，2H)，5.03(d，1H，J＝7.8Hz)，5.1-5.25(m，3H)，5.50(t，1H，J＝～9.5Hz)，6.50(d，1H，J＝7.2Hz)，6.97(d，1H，J＝7.8Hz)，7.1-7.4(m，10H).
(3)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化铂(50mg)存在的情况下使上述(2)制备的化合物(0.100g，0.055mmol)氢化而得到0.055g(57％)的N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸甲酯三乙铵盐、为一种无色固体mp142-143℃；IR(膜)
3289，2955，2921，2852，1733，1718，1699，1652，1558，1540，1521，1506，1469，1457，1375，1360，1259cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.7(m，135H)，2.2-2.7(m，12H)，3.05(q，6H，J＝7.5Hz)，3.31(d，1H，J＝9.3Hz)，3.37(s，1H)，3.55-3.9(m，10H)，3.97(d，1H，J＝12Hz)，4.1-4.25(m，2H)，4.55-4.65(m，2H)，5.05-5.25(m，3H)，7.23(d，1H，J＝8.1Hz)，7.47(d，1H，J＝7.2H)；13C NMR(CDCl3)δ173.6，173.4，170.5，170.4，170.1，100.7，75.9，72.8，71.2，70.8，70.6，68.5，60.3，55.3，52.7，52.4，47.7，41.5，40.9，39.7，34.6，34.5，34.3.32.0，29.8，29.4，25.4，25.1，22.7，14.2，8.5.
对C100H192N3O19P·H2O的计算分析值C，67.11；H，10.93；N，2.35；P，1.73。测定值C，66.91；H，10.93；N，2.31；P，2.11。
实施例28(B27)N-(羧甲基)-N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-氨基乙基2-脱氧-4-O-膦酰基(PHOPHONO)-2[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-d-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C13H27CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝O，R4＝R5＝R6＝R9＝H，R7＝CO2H，Q＝1，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC·MeI(0.466g，1.57mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.714g，1.57mmol)使N-(2-羟乙基)甘氨酸叔丁酯(0.25g，1.43mmol)酰化而得到0.46g(51％)的N-(2-羟乙基)-N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]甘氨酸叔丁酯、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，6H，J＝～6.5Hz)，1.15-1.7(m，51H)，2.26(t，2H，J＝7.5Hz)，2.60(dd，1H，J＝6.5，15Hz)，2.86(dd，1H，J＝6.7，15Hz)，3.40-4.15(m，7H)，5.25(m，1H).
(2)按照与13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(0.688g，2.68mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(0.21g，0.334mmol)与实施例22-(2)中制备的化合物(0.458g，0.368mmol)偶联而得到0.39g(64％)的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-[(R)-3十四酰氧基十四酰基]-2-氨基乙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体1H NMR(CDCl3)δ0.8g(t，12H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.95(m，99H)，2.1-2.6(m，7H)，2.84(dd，1H，J＝5，15Hz)，3.2-4.15(m，8H)，4.15-4.45(m，H)，4.55-4.9(m，3H)，5.00(d，1H，J＝8Hz)，5.13(m，2H)，5.4-5.65(m，1H)，6.16(d，1H，J＝7Hz)，7.05-7.4(m，10H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(0.36g，5.54mmol)使上述(2)中制备的化合物(0.339g，0.185mmol)脱保护且然后在有EEDQ(0.068g，0.276mmol)存在的情况下用(R)-3-十四酰氧基十四酸(0.100g，0.221mmol)使之酰化而得到0.25g(71％)的N-(叔丁氧基羰基甲基)-N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-氨基乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷、为一种无色固体。
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氧化铂(125mg)存在的情况下于9∶1 THF-AcOH(15mL)中使上述(3)中制备的化合物(0.25g，0.131mmol)氢化。将粗氢解产物溶于CH2Cl2(1mL)、冷却至0℃并用TFA(0.5mL)滴加处理。在0℃下搅拌2小时后，浓缩该反应混合物并通过与搅拌共沸而除去残余的TFA。将所得的残余物(0.23g)溶于1％三乙胺水溶液(12mL)并冻干。使用氯仿-甲醇-水-三乙胺(91∶8∶0.5∶0.5→85∶15∶0.5∶0.5，梯度洗脱)进行硅胶快速色谱纯化并通过实施例2-(8)中所述的酸提取而进一步纯化且从1％三乙胺水溶液(6mL)中冻干而得到99mg(43％)的N-(羧甲基)-N-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-2-氨基乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种无色固体mp162-163℃(分解)；IR(膜)3286，2922，2852，1732，1651，1556，1455，1434，1378，1260，1088，801cm-1；1H NMR(CDCl3)δ0.88(t，18H，J＝～6.5Hz)，1.0-1.75(m，135H)，2.2-3.0(m，14H)，3.04(q，6H，J＝7.2Hz)，3.25-3.8(m，5H)，3.85-4.3(m，5H)，4.55(d，1H，J＝7.5Hz)，4.68(d，1H，J＝8.1Hz)，5.05-5.35(m，4H).
对C100H192N3O19P·3H2O的计算分析值C，65.79；H，10.60；N，2.30；P，1.70。测定值C，65.82；H，10.44；N，2.40；P，1.79。
实施例29(B28)N-(羧甲基)-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-3-氨基丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基])-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-d-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝1，M＝P＝O，R4＝R5＝R6＝R9＝H，R7＝CO2H，Q＝1，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例2-(5)中所述相同的方式，在有EDC-MeI(900mg，3.0mmol)存在的情况下于CH2Cl2中用(R)-3-癸酰氧基十四酸(1.0g，2.5mmol)使N-(3-羟丙基)甘氨酸叔丁酯(450mg，2.0mmol)酰化而得到0.76g(63％)的N-(3-羟丙基)-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]甘氨酸苄酯、为一种无色油状物1H NMR(CDCl3)(1∶1旋转异构体混合物)δ0.88(t，6H，J＝6.6Hz)，1.1-1.7(m，35H)，1.78(m，1H)，2.26(q，2H，J＝7.6Hz)，2.37和2.54(2dd，1H，J＝14.9，6.9Hz)，2.60和2.89(2dd，1H，J＝14.8，6.0Hz)，3.51(m，4H)，3.70(m，1H)，3.95-4.25(m，2H)，5.1-5.25(m，3H)，7.35(m，5H).
(2)按照与13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.07g，4.15mmol)存在的情况下使上述(1)中制备的化合物(500mg，0.83mmol)与实施例15-(4)中制备的化合物(1.0g，0.83mmol)偶联而得到1.27g(72％)的N-(苄氧基羰基甲基)-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-3-氨基丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-β-D-吡喃葡糖苷苄酯1H NMR(CDCl3)(2∶1旋转异构体混合物)δ0.88(t，12H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，69H)，1.80(s，3H)，1.88(s，3H)，2.1-2.6(m，11H)，2.81(dd，1H，J＝14.8，6.2Hz)，3.37(m，1H)，3.52(m，2H)，3.76(m，1H)，3.87(m，1H)，4.05(m，2H)，4.28(m，3H)，4.62(m，3H)，4.77(m，1H)，4.93(d，1H，J＝8.2Hz)，5.15(m，4H)，5.46和5.61(2t，1H，J＝9.5Hz)，5.95和6.05(2d，1H，J＝7.5Hz)，7.1-7.4(m，15H).
(3)按照与实施例2-(7)中所述相同的方式，用锌(2.31g，3.53mmo1)使上述(2)中制备的化合物(1.25g，0.71mmol)脱保护且然后在有EEDQ(264mg，1.07mmol)存在的情况下用(R)-3-癸酰氧基十四酸(353mg，0.89mmol)使之酰化而得到670mg(54％)的N-苄氧基羰基甲基-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-3-氨基丙基2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基])-β-D-吡喃葡糖苷、为一种非晶固体。
(4)按照与实施例2-(8)中所述相同的方式，在有氢氧化钯/碳(270mg)和氧化铂(125mg)于EtOH/AcOH(10∶1)中的情况下使上述(3)中制备的化合物(670mg，0.38mmol)氢化而得到240mg(39％)的N-羧甲基-N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-3-氨基丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基])-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-β-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐、为一种无色粉末mp156-157℃；IR(膜)3284，2929，2853，2729，1732，1655，1628，1551，1466，1378，1314，1164，1108，1047，955，844，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.1-1.7(m，111H)，2.27(q，6H，J＝6.2Hz)，2.35-2.80(m，9H)，3.05(q，6H，J＝7.2Hz)，3.25-3.60(m，4H)，3.75-4.10(m，4H)，4.23(m，2H)，4.47(d，1H，J＝8.2Hz)，4.61(d，1H，J＝8.3Hz)，5.05-5.25(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.4，173.0，171.1，170.6，l70.3，169.6，100.5，74.5，73.9，71.4，71.2，70.7，70.2，67.0，65.8，60.7，54.6，54.3，51.4，49.2，46.0，45.4，42.1，41.2，39.4，38.0，37.7，34.5，34.3，34.2，31.9，29.8，29.7，29.6，29.5，29.2，28.1，25.4，25.3，25.1，22.7，14.1，11.1，8.6.
对C89H170N3O19P·H2O的计算分析值C，65.37；H，10.60；N，2.57；P，1.89。测定值C，65.35；H，10.42；N，2.43；P，2.05。
实施例30(B29)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺三乙铵盐(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CONH2，R8＝PO3H2)按照与实施例26和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-丝氨酰胺盐酸盐和(R)-3-己酰氧基十四酸来制备N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺三乙铵盐mp184-185℃；IR(膜)3416，3284，3210，3096，2954，2923，2853，1735，1721，1680，1664，1646，1560，1466，1246，1169，1080，1038cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.90(m，18H)，1.1-1.7(mH)，2.23-2.47(m，6H)，2.48-2.7(m，6H)，3.06(q，6H，J＝6Hz)，3.26-3.34(mH)，3.66(m，1H)，3.77(d，1H，J＝9.5Hz)，3.82-3.96(m，2H)，4.12(dd，1H，J＝2，8Hz)，4.21(q，1H，J＝8Hz)，4.56(d，1H，J＝7Hz)，4.61(m，1H)，5.05-5.18(m，3H)，5.24(m，1H)，7.26(d，1H，J＝6.5Hz)，7.40(d，1H，J＝5.7Hz).
对C75H143N4O18P·H2O的计算分析值C，62.65；H，10.16；N，3.90；P，2.15。测定值C，62.60；H，9.97；N，3.72；P，2.25。
实施例31(B30)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R3＝N-C9H19CO，R2＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CONH2，R8＝PO3H2)
按照与实施例26和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-丝氨酰胺盐酸盐和(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸来制备N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酰胺三乙铵盐mp200-201℃(分解)；IR(膜)3420，3286，2956，2923，2853，1733，1680，1663，1645，1556，1466，1418，1378，1248，1168，1106，1081，1051 859，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.0-1.7(m，103H)，2.15-2.71(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7Hz)，3.68(m，1H)，3.87(m，1H)，4.09(dd，1H，J＝10.8，3.6Hz)，3.35-4.0(mH)，4.15-4.3(m，2H)，4.57-4.7(m，2H)，5.05-5.3(m，4H)，7.42(m，1H)；13C NMR(CDCl3)δ173.5，173.1，170.2，169.8，102.2，75.8，73.7，71.3，70.7，70.2，69.0，60.7，53.9，51.7，45.8，41.3，41.1，39.1，34.6，34.5，34.2，32.0，29.7，32.0，31.4，29.8，29.6，29.5，29.4，25.6，25.4，25.1，24.7，22.7，22.4，13.9，8.6.
对C83H159N4O18P·H2O的计算分析值C，64.31；H，10.47；N，3.61。测定值C，64.31；H，10.27；N，3.41。
实施例32(B31)2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)按照与实施例21和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、2-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷和(R)-3-己酰氧基十四酸来制备2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐mp161-162℃；IR(膜)3288，3096，2956，2924，2854，1732，1657，1645，1557，1466，1378，1316，1245，1173，1080，1041cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.89(m，18H)，1.15-1.67(m，87H)，2.23-2.70(m，15H)，3.06(q，6H，J＝7.4Hz)，3.2-3.85(m，9H)，4.52(d，1H，J＝8.0Hz)，5.05-5.27(m，4H)，7.24(d，1H，J＝8.5Hz)，7.43(brt，1H)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.3，173.3，170.6，170.2，169.9，100.9，75.6，73.0，71.3，70.9，70.6，68.3，60.7，55.0，45.8，41.6，41.2，39.5，34.5，34.4，34.4，31.9，31.3，29.7，29.4，25.4，24.7，22.7，22.4，14.1，8.6.
对C74H142N3O17P·H2O的计算分析值C，63.72；H，10.40；N，3.01；P，2.2。测定值C，63.72；H，10.21；N，2.96；P，2.46。
实施例33(B32)2-[(R)-3-十六酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十八酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝C13H27CO，R2＝C17H35CO，R3＝N-C15H31CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R6＝R7＝R9＝H，R8＝PO3H2)按照与实施例21和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、2-氨基-1-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基)乙烷以及(R)-3-十四酰氧基十四酸、(R)-3-十八酰氧基十四酸和(R)-3-十六酰氧基十四酸来制备2-[(R)-3-十六酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十八酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐mp180-181℃；IR(膜) 3284，3097，2920，2851，1731，1657，1699，1683，1653，1558，1541，1521，1506，1467，1435，1418，1376，1258，1173，1033cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.8-1.75(mH)，2.2-2.7(mH)，3.08(q，6H，J＝7.2Hz)，3.2-3.5(m，5H)，3.55-4.05(mH)，4.24(q，1H，J＝7Hz)，4.53(d，1H，J＝8Hz)，5.05-5.3(m，4H)，7.32(d，1H，J＝9Hz)，7.49(br t，1H)；13CNMR(CDCl3)δ173.8，173.4，173.3，170.6，170.3，169.9，100.9，75.7，73.0，71.3，70.9，70.6，68.3，60.7，55.0，45.8，41.3，39.5，34.6，34.4，32.0，29.8，29.4，25.4，25.1，22.7，14.2，8.6.
对C104H202N3O17P·4H2O的计算分析值C，66.81；H，11.32；N，2.25。测定值C，66.52；H，10.80；N，2.19.。
实施例34(B33)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照与实施例16和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-丝氨酸苄酯和(R)-3-己酰氧基十四酸来制备N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐mp159-160℃；IR(膜)3317，2954，2924，2854，1734，1654，1540，1466，1377，1316，1245，1173，1082，846，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.08(q，6H，J＝7.2Hz)，3.40(d，1H，J＝9.9Hz)，3.55-3.95(mH)，4.15-4.3(m，1H)，4.51(d，1H，J＝8.0Hz)，4.63(br.s，1H)，5.1-5.3(m，4H)，7.01(d，1H，J＝9.1Hz)，7.37(d，1H，J＝8.8Hz)；13C NMR(CDCl3)δ177.0，173.2，173.2，172.7，172.3，169.6，169.0，101.5，75.0，71.2，70.9，70.8，69.1，60.5，53.1，51.4，46.1，41.4，41.0，39.1，34.5，34.2，34.1，34.0，31.9，31.4，31.3，29.8，29.6，29.4，25.6，25.3，25.1，24.7，24.7，22.7，22.5，22.4，14.1，14.0，8.7.
对C75H142N3O19P·2H2O的计算分析值C，61.83；H，10.10；N，2.88；P，2.13。测定值C，62.07；H，10.01；N，2.94；P，2.40。
实施例35(B35)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝N-C5H11CO，R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照与实施例16和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-丝氨酸苄酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸来制备N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐mp158-159℃；IR(膜)3304，2956，2923，2853，1732，1658，1547，1466，1378，1317，1246，1174，1082，960，846，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.3-3.63(mH)，3.66-3.98(m，4H)，4.1-4.3(m，2H)，4.54(d，1H，J＝8.0Hz)，4.6(m，1H)，5.05-5.27(m，4H)，7.15(d，1H，J＝8.7Hz)，7.46(d，1H，J＝8.2Hz)；13C NMR(CDCl3)δ173.6，173.3，172.8，172.1，169.6，169.2，101.5，74.8，70.9，70.8，69.3，60.5，53.2，51.5，46.1，41.9，41.5，41.0，39.2，34.5，34.3，34.1，31.9，31.4，29.8，29.6，29.4，25.6，25.3，25.1，25.1，25.0，24.8，22.7，22.5，14.1，11.1，8.7.
对C83H158N3O19P H2O的计算分析值C，64.27；H，10.40；N，2.71；P，2.00。测定值C，64.14；H，10.33；N，2.70；P，2.05。
实施例36(B36)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R3＝N-C9H19CO，R2＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照与实施例16和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-丝氨酸苄酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸来制备N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐mp157-158℃(分解)；IR(膜)3306，2955，2924，2853，1734，1657，1545，1466，1378，1245，1170，1081，954，842，722cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.36(d，1H，J＝9.8Hz)，3.43-3.63(mH)，3.68-3.95(m，4H)，4.13-4.27(m，2H)，4.54(d，1H，J＝8.3Hz)，4.6(m，1H)，5.08-5.27(m，4H)；13CNMR(CDCl3)δ176.9，173.4，173.2，172.8，172.2，169.5，169.1，101.4，74.8，71.1，70.9，70.8，69.3，53.2，51.6，46.1，41.8，41.4，41.0，39.2，34.5，34.4，34.3，34.1，34.0，32.0，31.4，29.8，29.6，29.4，29.3，25.6，25.3，25.2，25.1，24.8，22.7，22.4，14.1，14.0，8.7.
对C83H158N3O19P·H2O的计算分析值C，64.27；H，10.40；N，2.71；P，2.00。测定值C，64.09；H，10.31；N，2.70；P，2.06。
实施例37(B37)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝N-C9H19CO，R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)
按照与实施例16和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-丝氨酸苄酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸来制备N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐mp156-157℃(分解)；IR(膜)3306，2956，2923，2852，1732，1659，1545，1466，1378，1246，1173，1081，958，847，722cm-1；1HNMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.0-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，2.9-3.3(mH)，3.06(q，与前面的多重峰重叠，J＝7.2Hz)，3.36(d，1H，J＝9.6Hz)，3.43-3.63(mH)，3.63-3.95(m，4H)，4.21(m，2H)，4.53(d，1H，J＝8.0Hz)，4.6(brs，1H)，5.06-5.28(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ176.6，173.6，173.3，172.8，172.1，169.6，169.2，101.5，74.8，70.9，70.9，69.4，60.5，53.2，51.5，46.1，41.9，41.5，41.1，39.2，34.6，34.5，34.4，34.1，31.9，313，29.8，29.7，29.6，29.5，29.4，29.3，25.6，25.3，25.2，24.7，22.7，22.4，14.1，14.0，11.1，8.7.
对C83H158N3O19P·H2O的计算分析值C，64.27；H，10.40；N，2.71。测定值C，64.29；H，10.30；N，2.61。
实施例38(B38)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝N-C9H19CO，R2＝R3＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照与实施例16和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-丝氨酸苄酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸来制备N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐mp152-153℃(分解)；IR(膜)3307，2956，2924，2853，1734，1658，1544，1466，1378，1316，1245，1173，1081，955，843，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.28-3.55(mH)，3.67-3.97(m，4H)，4.13-4.27(m，2H)，4.55(d，2H，J＝7.2Hz)，4.60(m，1H)，5.08-5.28(m，4H)，7.11(d，1H，J＝8.7Hz)，7.42(d，1H，J＝8.0Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.9，173.5，173.2，172.8，172.2，169.5，169.1，101.4，74.8，71.1，70.9，70.8，69.3，60.5，53.2，51.5，46.1，41.8，41.4，41.1，39.2，34.5，34.3，34.2，34.1，34.0，3 1.9，3 1.7，31.4，31.3，29.8，29.6，29.4，29.3，25.6，25.3，25.2，24.7，22.7，22.4，14.1，14.0，11.1，8.7.
对C79H150N3O19P的计算分析值C，64.24；H，10.24；N，2.85。测定值C，64.06；H，10.35；N，2.88。
实施例39(B39)N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R3＝N-C5H11CO，R2＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照与实施例16和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-丝氨酸苄酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸来制备N-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐mp151-152℃(分解)；IR(膜)3308，2956，2924，2854，1732，1660，1544，1466，1378，1317，1246，1173，1081，957，843，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.0-1.7(mH)，2.18-2.72(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.4Hz)，3.23-3.51(mH)，3.66-3.98(m，4H)，4.12-4.28(m，2H)，4.55(d，1H，J＝7.4Hz)，4.60(m，1H)，5.05-5.28(m，4H)，7.10(d，1H，J＝8.2Hz)，7.43(d，1H，J＝8.5Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.9，173.6，173.2，172.7，172.2，169.5，169.0，101.5，75.0，74.8，71.2，70.9，70.8，69.2，60.5，53.1，51.5，46.1，41.8，41.5，41.1，39.1，34.6，34.5，34.2，34.0，32.0，31.4，31.3，29.8，29.7，29.6，29.4，29.3，25.6，25.3，25.1，24.8，24.7，22.7，22.5，22.4，14.1，14.0，11.1，8.7.
对C79H150N3O19P·H2O的计算分析值C，63.47；H，10.25；N，2.81。测定值C，63.63；H，10.35；N，2.84。
实施例40(B40)N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R3＝N-C5H11CO，R2＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)按照与实施例16和相关步骤中所述相同的方式，由2-(三甲基甲硅烷基)乙基2-脱氧-4，6-O-异亚丙基(isopropylidine)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖苷、L-丝氨酸苄酯以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸来制备N-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-己酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐mp158-159℃；IR(膜)3308，2956，2924，2854，1734，1659，1545，1466，1378，1316，1245，1173，1081，956，844，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.8-1.0(m，18H)，1.15-1.73(mH)，2.18-2.72(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.4Hz)，3.35(d，1H，J＝10Hz)，3.47-3.67(mH)，3.68-3.97(m，4H)，4.1-4.3(m，2H)，4.54(d，1H，J＝8.0Hz)，4.61(m，1H)，5.07-5.28(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ176.9，173.5，173.2，172.8，172.2，169.6，169.1，101.5，75.0，74.8，71.2，70.9，70.8，69.2，60.5，53.2，51.4，46.1，41.9，41.5，41.0，39.2，34.5，34.2，34.0，31.9，31.4，29.8，29.6，29.4，29.2，25.6，25.3，25.1，25.0，24.8，24.7，22.7，22.5，22.4，14.1，14.0，11.1，8.7.
对C79H150ON3O19P·H2O的计算分析值C，63.47；H，10.25；N，2.81；P，2.07。测定值C，63.43；H，10.22；N，2.83；P，2.13。
实施例41(B41)3-羟基-(R)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐的制备(化合物(1)，R1＝R3＝N-C9H19CO，R2＝N-C5H11CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝OH，P＝1，R8＝PO3H2)按照与实施例16和相关步骤中所述相同的方式，由N-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脱氧-α-D-吡喃葡糖苷、(S)-2-氨基-3-苄氧基-1-丙醇以及(R)-3-己酰氧基十四酸和(R)-3-癸酰氧基十四酸来制备3-羟基-(R)-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]丙基2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-己酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖苷三乙铵盐mp151-153℃；IR(膜) 3287，2956，2923，2853，1732，1643，1552，1466，1378，1318，1147，1176，1108，1082，1052，856，722cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝6.9Hz)，1.0-1.72(mH)，2.17-2.71(m，12H)，2.9-3.3(mH)，3.08(q，与前面的多重峰重叠，J＝7.2Hz)，3.31(d，1H，J＝9.6Hz)，3.5-4.02(m，8H)，4.20(d，1H，J＝9.5Hz)，4.60(d，1H，J＝8.0Hz)，5.05-5.25(m，4H)；13C NMR(CDCl3)δ173.7，173.5，173.4，170.6，170.1，101.1，75.5，73.0，71.6，71.3，70.8，70.5，68.2，61.4，60.7，54.8，50.5，45.8，41.4，39.4，34.6，34.5，34.2，31.9，31.4，29.8，29.7，29.5，29.4，29.3，25.4，25.1，22.7，22.4，14.1，14.0，8.6.
对C83H160N3O18P·H2O的计算分析值C，64.84；H，10.62；N，2.55。测定值C，65.01；H，10.50；N，2.55。
实施例42(B42)5-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基氧基]-(S)-4-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]戊酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝R2＝R3＝N-C9H19CO，X＝Y＝O，N＝M＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，P＝2，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(1.22g，4.77mmol)存在的情况下使(S)-4-(叔丁氧基羰基氨基)-5-羟基戊酸苄酯(0.338g，0.954mmol)和实施例15-(4)中制备的化合物(1.15g，0.954mmol)偶联而得到0.70g(50％)的(S)-4-(叔丁氧基羰基氨基)-5-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氧基]戊酸苄酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(m，6H)，1.0-2.05(m，55H)，2.12-2.5(m，6H)，3.28-3.90(m，5H)，4.26(dd，1H，J＝4.5，11.5Hz)，4.38(d，1H，J＝11.5Hz)，4.57-4.98(m，5H)，5.11(s，2H)，5.18(m，1H)，5.49(t，1H，J＝9Hz)，5.78(d，1H，J＝7.7Hz)，7.04-7.45(m，15H).
(2)将上述(1)中制备的化合物(0.67g，0.45mmol)溶于CH2Cl2(5mL)所得到的溶液冷却至0℃、用TFA(70μL)滴加处理并在室温下搅拌3小时。将该反应混合物用CH2Cl2(15mL)稀释、用饱和NaHCO3水溶液洗涤并干燥(Na2SO4)。加入(R)-3-癸酰氧基十四酸(0.20g，0.50mmol)和EDC·MeI(0.15g，0.5mmol)并将所得混合物在室温下搅拌16小时。将该反应混合物通过Celite衬垫过滤并浓缩。将获得的粗产物通过硅胶快速色谱法纯化(梯度洗脱，15→30％EtOAc-己烷)而得到0.36g(45％)的(S)-4-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-5-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基氧基]戊酸苄酯1H NMR(CDCl3)δ0.89(m，12H)，1.0-1.978(mH)，2.12-2.5(m，10H)，3.45-3.65(m，2H)，3.79(dd，2H，J＝3.8，10Hz)，4.06(m，1H)，4.27(dd，1H，J＝4.9，12Hz)，4.35(d，1H，J＝12Hz)，4.6-4.8(m，3H)，4.83(d，1H，J＝8.3Hz)，5.10(s，2H)，5.17(m，2H)，5.48(t，1H，J＝10Hz)，5.79(d，1H，J＝7.7Hz)，6.05，(d，1H，J＝8.8Hz)，7.07-7.42(m，15H).
(3)按照与由实施例15-(5)中制备的化合物制备化合物B14所述相同的方式，由上述(2)中制备的化合物制备5-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基氧基]-(S)-4-[(R)-3-癸酰氧基十四酰基氨基]戊酸三乙铵盐mp184-188℃；IR(膜)3284，2955，2919，2848，1730，1654，1548，1459，1374，1259，1165，1081，1032，800cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(t，18H，J＝7Hz)，1.0-2.0(mH)，2.18-2.75(m，12H)，3.08(q，6H，J＝7.4Hz)，3.33-4.42(mH)，4.44(d，1H，J＝8.5Hz)，5.02-5.31(m，4H)，7.54(d，1H，J＝8Hz)，)，7.61(d，1H，J＝7Hz)；13C NMR(CDCl3)δ176.8，173.6，173.3，170.8，170.2，101.1，75.1，73.7，71.7，71.1，70.8，70.1，60.8，54.1，48.8，45.9，41.4，41.2，39.4，34.5，34.4，34.1，31.9，31.3，29.8，29.7，29.6，29.5，29.4，26.9，25.5，25.3，25.1，22.7，14.1，8.6.
对[M-H]-计算的负FAB-MS为1514.0889；测定值1514.0816。
实施例43(B43)N-[(R)-3-羟基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐的制备(化合物(I)，R1＝N-C13H27CO，R2＝N-C11H23CO，R3＝H，X＝Y＝O，N＝M＝P＝Q＝O，R4＝R5＝R7＝R9＝H，R6＝CO2H，R8＝PO3H2)(1)按照与实施例13-(5)中所述相同的方式，在有AgOTf(0.828g，3.22mmol)存在的情况下使N-烯丙氧基羰基-L-丝氨酸苄酯(0.225g，0.806mmol)和实施例22-(2)中制备的化合物(1.104g，0.886mmol)偶联而得到1.01g(83％)的N-烯丙氧基羰基-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(m，6H)，1.0-1.7(m，42H)，1.78(s，3H)，1.86(s，3H)，2.12-2.48(m，4H)，3.26(m，1H)，3.66(m，1H)，3.80(dd，1H，J＝3，10Hz)，4.19-4.38(m，4H)，4.48-4.85(m，6H)，4.98(d，1H，J＝7.7Hz)，5.08-5.38(m，5H)，5.49(m，1H)，5.60-5.75(m，2H)，5.82-6.0(m，1H)，7.06-7.42(m，15H).
(2)在氩气环境中将上述(1)中制备的化合物(1.01g，0.68mmol)和丙二酸二乙酯(1.50g，9.48mmol)溶于THF所得到的溶液脱气(1小时)、用四(三苯膦)钯(O)(0.10g，0.09mmol)处理并在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用2％MeOH-CHCl3通过硅胶垫过滤并浓缩滤液。将获得的粗胺溶于CH2Cl2(20mL)所得到的溶液用(R)-3-羟基十四酸(0.18g，0.75mmol)和EDC·MeI(0.66g，1.02mmol)处理、在室温下搅拌过夜且然后浓缩。将获得的粗产物通过硅胶快速色谱法纯化(梯度洗脱，30→40％EtOAc-己烷)而得到0.506g(46％)的N-[(R)-3-羟基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-二苯基膦酰基-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-6-O-(2，2，2-三氯-1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-(2，2，2-三氯乙氧基羰基氨基)-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸苄酯1H NMR(CDCl3)δ0.88(m，9H)，1.0-1.7(m，62H)，1.79(s，3H)，1.87(s，3H)，2.19(t，2H，J＝7Hz)，2.3-2.5(m，4H)，3.1(br s，1H)，3.55(q，1H，J＝9Hz)，4.0-4.43(m，5H)，4.56-4.85(m，4H)，5.13-5.32(m，4H)，6.59(d，1H，J＝7.4Hz)，6.83(br s，1H)，7.17-7.41(m，15H).
(3)按照与由实施例13-(5)中制备的化合物制备化合物B12所述相同的方式，由上述(2)中制备的化合物制备N-[(R)-3-羟基十四酰基]-O-[2-脱氧-4-O-膦酰基-2-[(R)-3-十二酰氧基十四酰基氨基]-3-O-[(R)-3-十四酰氧基十四酰基]-α-D-吡喃葡糖基]-L-丝氨酸三乙铵盐mp170-173℃(分解)；IR(膜)3313，2955，2923，2853，1734，1662，1655，1558，1541，1467，1458，1376，1248，1166，1108，1078，1049，953，942，842cm-1；1H NMR(CDCl3-CD3OD)δ0.88(m，18H)，1.15-1.7(mH)，2.2-2.75(m，12H)，3.06(q，6H，J＝7.2Hz)，3.3-3.63(mH)，3.66-3.98(m，4H)，4.1-4.3(m，2H)，4.54(d，1H，J＝8.0Hz)，4.6(m，1H)，5.05-5.27(m，4H)，7.15(d，1H，J＝8.7Hz)，7.46(d，1H，J＝8.2Hz)；13C NMR(CDCl3)δ177.0，173.3，172.8，172.3，171.9，169.2，101.2，74.9，74.8，74.3，70.8，70.6，69.3，68.4，59.9，53.1，51.5，42.5，41.5，39.2，37.1，34.6，34.4，34.3，34.1，32.0，29.8，29.4，25.6，25.2，22.7，22.5，14.5，8.7.
对C83H160N3O18P·2H2O的计算分析值C，64.10；H，10.63；N，2.70；P，1.99。测定值C，64.28；H，10.42；N，2.70；P，1.84。
试验例1对抗-破伤风类毒素抗体产生的刺激本发明主题的AGPs可促进针对鼠模型中纯化破伤风类毒素的抗体的产生。将10mg的各AGP样品加入到1ml含有角鲨烯油+12％卵磷脂的油-卵磷脂混合物中。将该混合物在56℃的水浴中加热并超声处理而获得澄清溶液。将五十(50)μl的各溶液通过在2ml含有1.0μg破伤风类毒素抗原/ml的无菌、预温热的0.1％Tween80盐水中涡旋而乳化。在对小鼠给药前对制剂再次进行涡旋。通过将制成0.1ml的合适制剂经皮下注入各小鼠的腹侧来处理雌性C57BL/6×DBA/2F小鼠(8只/组)。小鼠破伤风类毒素和AGP化合物最终的剂量分别为0.2μg和50μg。对照组小鼠接受破伤风类毒素的载体溶液(油-Tween盐水)。将全部小鼠在第0天时进行处理，随后在第21天时进行第二次免疫接种。第二次免疫接种后14天对小鼠取血并通过离心分离血清。
通过使用破伤风类毒素包被的微量滴定板的酶免疫测定(EIA)分析对来自各小鼠的血清进行抗破伤风类毒素抗体评价。估计IgM、总Ig以及IgG1、IgG2a和IgG2b同型的抗破伤风抗体滴度。将最初按1∶200稀释的血清的11份稀释液中的每份血清样品稀释2倍。结果如表2-4中所示。
表2经处理的小鼠的抗破伤风类毒素抗体滴度物质 总IgGIgG1IgG2aIgG2bIgMT/C*滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度B11 3.623,200 1.86 400,000 2.06 10,4500.93 26,800 4.75 7,600B23.84 24,800 2.16 464,000 4.28 21,7001.57 45,200 4.50 7,200B13.97 25,600 3.42 736,000 3.78 19,2002.45 70,400 2.38 3,800B25 8.93 57,600 2.68 576,000 1.67 8,500 3.28 94,400 2.0 3,200B21 4.71 30,400 2.23 480,000 5.83 29,6006.07 174,400 5.50 8,800B15 18.85 121,6004.17 896,000 6.80 34,5002.79 80,256 4.0 6,400载体 6,450215,000 5,075 28,750 1,600*T/C比＝实验测试滴度÷载体对照滴度表3经处理的小鼠的抗破伤风类毒素抗体滴度物质 T/C*IgM T/C IgG2aT/C IgG2bB123.14800139.4 2370 149 9840B161.6256066.81135 104 6880B133.96080220 3740 ＞208 ＞13,760B113.35120347 5900 127.3 8400载体- 1760 - 25 - 98*T/C比＝实验测试滴度÷载体对照滴度表4经处理的小鼠的抗破伤风类毒素抗体滴度物质 总Ig IgM IgG1IgG2aIgG2bT/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度B26 10.5 2,490 1.1 600 16.9 25,20029.3 440 42.6 2,260B15 144.5 34,400 2.7 1,520 118.3 176,000 259.3 3,890603.8 32,000B22 60.0 19,050 0.8 440 18.4 27,400345.8 5,18759.6 3,160B28 228.6 54,500 3.7 2,080 92.5 137,600 664.7 9,970519.2 27,520载体238 560 1,48815 53*T/C比＝实验测试滴度÷载体对照滴度本发明主题的化合物在与破伤风类毒素共同给药时显示出剂量反应。给BFD1(C57B1/6 X DBA/2)雌性小鼠(8只/组)免疫接种0.2ml含有AGP+0.2μg破伤风类毒素的乳剂。在初次免疫接种后21天给予第二次免疫接种。在第二次注射后21天对各小鼠取血。结果如表5和6中所示。
表5免疫接种破伤风类毒素的小鼠的AGPs剂量反应物质 总IgIgMIgG1IgG2aIgG2bT/C 滴度 T/C 滴度 T/C 滴度 T/C 滴度 T/C 滴度比*比 比 比 比B15 50μg3.3 7,000 13.4 37,6004.1 26,300 150.0 11,2253.2 2500B15 25μg5.8 12,4002.1 6,000 4.5 28,800 52.0 3900 7.0 5400B15 10μg5.3 11,4501.4 4,000 5.5 35,100 33.8 2538 9.9 7650B27 50μg3.2 6,800 4.0 11,2001.6 10,400 12.0 900 11.6 9,000载体 21502800 6350 75 775*T/C比＝实验测试滴度÷载体对照滴度表6免疫接种破伤风类毒素的小鼠的AGPs剂量反应物质 IgM 总Ig IgG1IgG2aIgG2bT/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度T/C滴度B12 50μg 5.43 869 368.55 47,543141.22 259,429nd 499.35 12,983B12 25μg 3.14 503 403.98 52,114145.21 266,743 16.86 354 196.92 5,120B12 10μg 3.71 594 248.06 32,00081.12 149,029 6.81 143 181.12 4,709B12 5μg3.43 549 489.92 63,20084.11 154,514 34.14 717 352.54 9,166B12 1μg1.71 274 326.02 42,05790.08 165,486 73.71 1,548175.81 4,571B15 50μg 3.14 503 233.88 30,17190.08 165,486 50.05 1,051235.62 6,126B15 25μg 2.29 366 181.91 23,467106.14 194,971 10.43 219 158.23 4,114B15 10μg 2.86 457 170.10 21,94339.07 71,771 2.57 54 84.38 2,194B15 5μg1.71 274 248.06 32,000103.15 189,486 3.00 63 210.88 5,483B15 1μg1.57 251 166.56 21,48672.04 132,343 7.62 160 114.27 2,971载体 1601291837 21 26*T/C＝实验测试滴度÷载体对照滴度nd-未进行实验测试试验例2对抗卵清蛋白抗体产生的刺激给BDF1雌性小鼠(8只/组)免疫接种0.2ml含有50μg AGPs+50μg卵清蛋白的乳剂。在初次免疫接种后21天给予第二次免疫接种。在第二次注射后14天对各小鼠取血。将显示出总IgG和IgM的免疫接种小鼠的抗体滴度以及包括IgG、IgG2a和IgG2b在内的IgG亚型的滴度列在表7中。
表7免疫接种卵清蛋白的BDF1小鼠体内的佐剂活性物质 总Ig IgMT/C*滴度 T/C 滴度B110.7 1501.3 250B2 2.5 5630.9 175B1 0.5 1190.8 150B251.9 4380.8 150B210.5 1131.3 250B154.1 9252.3 438B270.6 1381.6 300载体 225 188*T/C比＝实验测试滴度÷载体对照滴度表7续物质IgG1IgG2a IgG2bT/C*滴度T/C滴度-T/C滴度B11 1.62650 1.7 5501.6375B2 5.08300 2.5 8252.3550B1 0.5763 0.2 56 0.8188B25 5.28500 0.5 1635.01188B21 0.61000 0.1 25 0.8200B15 0.6950 0.3 11316.7 3963B27 0.81275 0.1 38 0.5113载体1650 - 325 - 238*T/C比＝实验测试滴度÷载体对照滴度本发明主题的AGP化合物在与抗原卵清蛋白一起对温血动物给药时刺激了针对该抗原的抗体的产生。
试验例3对传染性流感的保护性免疫反应的产生接种了福尔马林灭活的流感疫苗和本发明主题的AGP化合物的小鼠对流感攻击的保护性免疫反应提高并产生了针对该抗原的抗体。给动物接种该抗原和AGP化合物的不同载体的溶液。通过鼻内(IN)给予约10 LD50的传染性流感A/HK/68对小鼠进行攻击来测定保护程度。在攻击后21天评价死亡率。在攻击剂量下存活的小鼠数量是对疫苗功效的直接评价。就提供的实验而言，该数据与产生抗体的量没有必然的联系。
1)用含有1个血凝单位(HAU)的福尔马林灭活的流感A/HK/68(FI-Flu)和50μg不含载体对照疫苗的AGP的0.2％三乙醇胺(TEoA)/水溶液配制疫苗，其中所述的载体对照疫苗不含AGP。仅给ICR小鼠(10只/组)接种一次疫苗。通过在接近腹股沟淋巴结的2个不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的总计0.2ml的疫苗/小鼠来给予疫苗。在接种疫苗后14天从眼眶丛中对小鼠(仅5只小鼠/组)取血。收集血清并在-20℃下冻干至用于酶联免疫吸附测定(ELISA)。在接种疫苗后30天通过鼻内(IN)给予约10LD50的传染性流感A/HK/68对全部小鼠进行攻击。在攻击后21天评价死亡率。获自接种TEoA制品的抗流感抗体滴度和相应的接种该制品小鼠的存活率如表8中所示。
表8经处理小鼠的抗流感抗体滴度和存活率物质 滴度-1存活百分率总IgG未免疫＜1000载体 ＜1000B96400 44B10 1600 40B7200 33B31600 33B14 6400 44B15 6400 502)用含有1个血凝单位(HAU)的福尔马林灭活的流感A/HK/68(FI-Flu)和25μg不含盐水和不含AGP的载体对照疫苗的AGP的2％角鲨烯溶液配制疫苗。仅给BALB/c小鼠(10只/组)接种一次疫苗。通过在接近腹股沟淋巴结的2个不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的总计0.2ml的疫苗/小鼠来给予疫苗。在接种疫苗后14天从眼眶丛中对小鼠(仅5只小鼠/组)取血。收集血清并在-20℃下冻干至用于酶联免疫吸附测定(ELISA)。在接种疫苗后35天通过鼻内(IN)给予约10LD50的传染性流感A/HK/68对全部小鼠进行攻击。在攻击后21天评价死亡率。获自接种角鲨烯制品的抗流感抗体滴度和相应的接种该制品动物的存活率如表9中所示。
表9经处理小鼠的抗流感抗体滴度和存活率滴度-1物质总IgGIgG1IgG2aIgG2b存活百分率未免疫 ＜100＜100 ＜100＜100 0盐水800 100 800 100 62.5载体1600 16001600 1600 100B25 3200 16006400 1600 100B15 1600 32003200 400 100B9 1600 16003200 800 87.5B10 400 400 400 400 62.5B3 3200 32006400 800 87.5B6 800 800 400 1600 75B14 3200 64003200 6400 87.5B28 800 400 400 100 503)在初次、然后是二次接种后将接种疫苗的小鼠的抗体滴度和存活率进行比较。用含有1个血凝单位(HAU)的福尔马林灭活的流感A/HK/68(FI-Flu)、25μg AGP、但不包括不含AGP的载体对照疫苗的0.2％TEoA/水溶液配制疫苗。通过在接近腹股沟淋巴结的2个不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的总计0.2ml的疫苗/小鼠来对ICR小鼠(20只/组)给予疫苗。在初次接种疫苗后35天将各组分成2个亚组。此时对各亚组之一进行攻击，剩余的亚组接受第二次接种。在接种疫苗(初次和二次)后14天从眼眶丛中对小鼠(仅5只小鼠/组)取血。收集血清并在-20℃下冻干至用于ELISA。在初次或二次接种疫苗后35天通过鼻内(IN)分别给予约10LD50或40LD50的传染性流感A/HK/68对小鼠进行攻击。在攻击后21天评价死亡率。初次接种和二次接种后小鼠的抗流感抗体滴度和存活率如表10中所示。第二次接种的小鼠的抗体滴度和存活率较高。
表10经处理小鼠的抗体滴度和存活率IgG 滴度-1存活百分率物质 初次接种后 二次接种后 初次接种后二次接种后未免疫200 100 0 0载体 800 102,400 2040B96400 12,8008050B10 1600 25,6006090B73200 ＞102,400 6060B4800 25,6005070B33200 102,400 7060B51600 ＞102,400 6090B61600 102,400 8070B14 800 51,2003370试验例4脂肪酸链长对佐剂性的作用测试脂肪酸链长R1-R3对活性的作用。用含有1个血凝单位(HAU)的福尔马林灭活的流感A/HK/68以及25μg AGP、但不包括不含AGP的载体对照疫苗的0.2％TEoA/水溶液配制疫苗。仅给ICR小鼠(10只/组)接种一次疫苗。通过在接近腹股沟淋巴结的2个不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的总计0.2ml的疫苗/小鼠来给予疫苗。在接种疫苗后14天从眼眶丛中对小鼠(仅5只小鼠/组)取血。收集血清并在-20℃下冻干至用于ELISA。在接种疫苗后35天通过鼻内给予约10LD50的传染性流感A/HK/68对全部小鼠进行攻击。在攻击后21天评价死亡率。看起来脂肪酸链的长度可适度地影响生物活性。结果如表11和12中所示。
表11经处理小鼠的抗体滴度和存活率滴度-1物质链长 总IgG IgG1IgG2aIgG2b存活百分率未免疫 … 200100 100 800 0载体 … 200100 100 200 11B18 7800800 800 400 20B17 86400 3200 3200 1600 40B16 98001600 100 800 40B15 10 3200 200 3200 6400 70B14 10 8001600 100 400 30B13 11 1600 800 400 800 50B12 12 200200 100 200 0B11 14 1600 200 1600 400 30
表12经处理小鼠的抗体滴度和存活率滴度-1物质链长总IgGIgG1IgG2aIgG2b存活百分率未免疫 …100 100 50 800 0载体 …100 200 50 100 30B8 7 64003200 400 1600 80B7 9 32003200 100 1600 70B5 10 800 200 50 400 44B4 11 3200400 100 1600 60B3 12 16001600 50 800 0B1 14 12,800 6400 1600 1560040
试验例5杂原子X与糖苷配基氮原子之间的碳链长度的变化对佐剂性的作用X与糖苷配基氮原子之间的碳链长度通过单原子逐步延伸。研究使这两种组成之间的链延长对佐剂性的作用。用含有1个血凝单位(HAU)的福尔马林灭活的流感A/HK/68(FI-Flu)以及25μg AGP、但不包括不含AGP的载体对照疫苗的0.2％TEoA/水溶液配制疫苗。仅给ICR小鼠(10只/组)接种一次疫苗。通过在接近腹股沟淋巴结的2个不同部位上皮下(SQ)注射0.1ml/部位的总计0.2ml的疫苗/小鼠来给予疫苗。在接种疫苗后14天从眼眶丛中对小鼠(仅5只小鼠/组)取血。收集血清并在-20℃下冻干至用于ELISA。在接种疫苗后35天通过鼻内给予约10LD50的传染性流感A/HK/68对全部小鼠进行攻击。在攻击后21天评价死亡率。看起来佐剂活性随着杂原子X与糖苷配基氮原子之间的碳链长度增加而降低。然而，取决于与该碳链连接的残基的不同，所述分子的生物和代谢稳定性可能受到影响。结果如表13中所示。
表13经处理小鼠的抗体滴度和存活率滴度-1物质碳链总IgGIgG1IgG2bIgG2b存活百分率未免疫 …＜50＜50 ＜50 ＜500载体 …200 200 50 200 25B19 2 12,800 100 800 640050B21 3 6400800 100 160040B22 4 3200100 3200 200 40
试验例6通过AGP化合物进行的细胞因子诱导本发明主题的AGP化合物诱导人全血离体培养试验中的细胞因子。将AGP化合物溶于10％EtOH-水中并稀释成不同浓度。将50μl的各稀释液加入到450μl的人全血中。将对照组用培养基(RPMI)处理。在37℃下通过在旋转器上恒定混合而将该反应混合物保温4小时。将无菌PBS(1.5ml)加入到该反应混合物中、将细胞离心并取出上清液用于细胞因子测试。使用来自R&D Systems的免疫测定ELISA试剂盒测定各上清液中TNF-α和IL-1β的浓度。来自这些研究的结果如表14-19中所示。
表14离体实验中对细胞因子分泌的刺激物质剂量TNF-αIL-1β(μg)(pg/ml) (pg/ml)B26 20 498.90 33.2510 254.94 25.345 75.62 9.891 38.85 3.90B2 20 1338.42155.0710 817.67 114.415 235.32 34.721 105.52 14.53RPMI - 2 0
表15离体实验中对细胞因子分泌的刺激物质剂量 TNF-αIL-1β(ng/ml)(pg/ml) (pg/ml)B16 10,000 29155500027753100015539B13 10,000 775 THTC*50007161871000740177B9 10,000 44996500024784100014553B1010,000 20743500012761100073 17B7 10,000 83 16500057 14100026 6RPMI - 2 0*THTC-过高而无法统计表16离体实验中对细胞因子分泌的刺激物质 剂量 TNF-αIL-1β(ng/ml) (pg/ml) (pg/ml)B4 10,000 4322135000205164100094 70B3 10,000 56726950003903421000189204B5 10,000 169795000143162100043 36B6 10,000 94 52500059 29100030 13B14 10,000 24991500012071100056 46RPMI - 2 0
表17离体实验中对细胞因子分泌的刺激物质剂量TNF-αIL-1β(ng/ml) (pg/ml) (pg/ml)B1110,000181 62.35000 139 61.71000 115 54.5500 125 55.8100 127 59.8B1310,000583 2825000 592 3901000 478 327500 411 352100 302 261B1510,000320 1535000 280 1261000 209 94.4500 183 104100 133 51.6B1610,000121 41.05000 114 34.01000 7219.5500 5517.1B1410,000114 24.65000 8719.01000 5110.0500 4919.9RPMI-2 0
表18离体实验中对细胞因子分泌的刺激物质 剂量 TNF-αIL-1β(ng/ml)(pg/ml) (pg/ml)B2 10,000 100 22.25000 7514.01000 389.0500 288.3100 6.1 3.5B1 10,000 2010.05000 115.51000 2.8 4.0500 1.10100 0 0B7 10,000 6114.75000 448.31000 304.3500 273.8100 105.1B4 10,000 232 66.95000 173 66.51000 130 32.0500 116 19.3100 8965.2B3 10,000 433 151.95000 316 200.41000 229 75.1500 212 67.9100 130 35.9B5 10,000 142 24.15000 9923.01000 9610.5500 5916.9100 335.4RPMI - 2 0
表19离体实验中对细胞因子分泌的刺激物质 剂量 TNF-αIL-1β(ng/ml)(pg/ml) (pg/ml)B17 10,000 2.8 05000 2.2 01000 2.6 0.2B8 10,000 2.8 05000 0.7 0.51000 1.5 0.1B22 10,000 287 175000 111.91000 2.2 0.1B28 10,000 198 135000 197 131000 139 8B12 10,000 1017 1355000 957 1531000 863 175RPMI - 3.9 0
试验例7细胞毒性T-淋巴细胞反应的刺激通过细胞毒性试验检测给予本发明主题的AGP化合物和蛋白质抗原后对细胞毒性T-淋巴细胞反应的诱导作用。对各组C57BL/6小鼠经皮下(腹股沟区)初次免疫接种25μg配制成AGP制剂的卵清蛋白(OVA)。注射体积为200μl。21天后将每个实验组中的3只小鼠处死并取出脾且收集为单细胞混悬液并计数。
将来自实验组的脾细胞(75X106个细胞/3-4ml培养基)置于25cm2T-烧瓶中。接下来向该烧瓶中加入1.0ml、5×106/ml经照射的(20,000拉德)E.G7(OVA)细胞。使体积达到10ml。通过将所述T-烧瓶竖直地置于37℃和5％CO2的培养箱中而将培养物维持4天。在第4天时从烧瓶中回收存活的细胞、用新鲜培养基洗涤1X、重新悬浮于5.0ml中并计数。
将回收的效应细胞调整至5×106个活细胞/ml并以一式三份的形式将100μl体积连续稀释入96孔圆底平板(Corning25850)的各孔中、使用100μl/孔培养基作为稀释剂。接下来以1×105个细胞/ml将100μl体积的51Cr-标记的(参见下文)靶物[E.G7(OVA)-卵清蛋白基因转染的EL-4细胞系]加入到各孔中。自发释放(SR)的孔中含有100μl的靶物和100μl的培养基。释放最多(MR)的孔中含有100μl的靶物和100μl的洗涤剂(2％Tween20)。效应物/靶物(E/T)比为50∶1、25∶1、12.5∶1以400Xg离心平板并在37℃和5％CO2下保温4小时。在保温后使用Skatron Supernatant Collection System收集孔中的上清液。 如下用51Cr(铬酸钠)标记靶细胞E.G7(OVA)。在15ml锥形管内的1.0ml总体积中混合了5×106个靶细胞和250μCi51Cr。在37℃下的水浴中将细胞混悬液保温90分钟，同时每隔15分钟缓慢搅拌一次。在保温后通过离心和用15ml体积的培养基滗析来洗涤标记的细胞。在第三次离心后将细胞重新悬浮于10ml新鲜培养基中并使之在室温下放置30分钟且然后离心。最终将细胞以1×105个细胞/ml重新悬浮于培养基中。
按照上述步骤免疫接种本发明主题AGPs的小鼠对OVA抗原表现出如表20中所示的细胞毒性T-淋巴细胞反应。
表20经处理的细胞的细胞毒性T-淋巴细胞反应％细胞毒性E∶T物质50∶1 25∶112.5∶1B11 14 8 5B12 13 7 4B13 28 1510B15 58 4930B16 42 2920B17 39 2615B18 36 2015B14 45 3625B28 28 159B27 17 9 5
％细胞毒性E∶T物质 50∶125∶1 12.5∶1B13424 15B36554 42B47266 60B52818 11B75744 29B83620 15B10 6556 38B96555 36B65441 37B22112 6B25 6555 43B26 1484B22 5842 31B21 3826 15B19 5942 33B20 3625 13B29 1695B31 1911 7B35 9 52B36 1374B37 1286B38 3825 16B39 3321 13B40 2012 8B43 1912 6载体对照 ＜10
试验例8针对破伤风类毒素的血清和粘膜抗体滴度的产生本发明主题的AGPs在通过鼻内给药时引起了对纯化破伤风类毒素的血清和粘膜免疫反应。对各组BALB/c小鼠经鼻内初次免疫接种(1°)10μg破伤风类毒素(TT)+20μg配制成20ul体积的含水制剂(AF)的AGP。14天后给予第二次免疫接种(2°)且在14天后给予与第一次和第二次相同组成的第三次免疫接种(3°)。在第21天(2°后第7天)和第28天(3°后第10天)以及第48天(3°后第20天)对小鼠取血。在2°后第7天和3°后第7天取阴道洗涤物/粪便提取物样品。通过标准ELISA方法对血清和洗涤样品测试抗-TT抗体。这些试验结果如下面的表21和22中所示。
所述的含水制剂包括本发明主题的AGPs和一种或多种表面活性剂。用于含水组合物的表面活性剂包括糖脱氧胆酸盐、脱氧胆酸盐、鞘磷脂、鞘氨醇、磷脂酰胆碱、1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、L-α-磷脂酰乙醇胺和1，2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸或其混合物。用于本实施例的含水制剂包括表面活性剂1，2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(DPPC)且如下制备简单地说，用乙醇制备4mg/ml的DPPC溶液。将该乙醇溶液的等分部分加入到干燥的AGPs中并缓慢涡旋至使AGP湿润。通过缓慢向小瓶中吹入过滤的氮气流而除去乙醇。加入注射用水并在60℃下将混悬液超声处理10分钟至澄清。所得的含水制剂含有约118μg/ml DPPC、具有约70nm的颗粒并将其进行无菌过滤。
表21经处理小鼠的抗破伤风类毒素抗体滴度抗破伤风类毒素滴度-1阴道洗涤物 粪便提取物IgG IgA IgG IgA物质2° 3° 2° 3° 2° 3° 2° 3°B258006400 6400 64005020032006400B154008006 400640050100640012,800B192004001600 32002525 32006400B4 1600 4001600 64002550 320012,800B5 3200 8003200 32005010032006400B3 1600 1600 6400 64005010032006400B2240080080032002550 16006400PBS＜25 ＜25 ＜5＜25 ＜25 ＜25＜25＜25正常 ＜25 ＜25 ＜25 ＜25 ＜25 ＜25＜25＜25血清表22经处理动物的血清抗破伤风类毒素抗体滴度抗破伤风类毒素滴度-1血清收集物IgG1IgG2aIgAd21 d38 d48 d21 d38d48d21 d38 d48B251M*8M 8M 512K4M 4M 12.8K 102.4K102.4KB152M 8M 8M 512K1M 2M 12.8K 51.2K 25.6KB192M 4M 4M 64K#256K 128K 6.4K 25.6K 12.8KB4 1M 8M 8M 1M 2M 2M 25.6K 102.4K102.4KB5 2M 8M 8M 512K2M 2M 25.6K 102.4K102.4KB3 512K4M 8M 512K2M 2M 12.8K 51.2K 51.2KB221M 2M 4M 64K 256K 256K 6.4K 25.6K 25.6K
抗破伤风类毒素滴度-1血清收集物IgG1IgG2aIgAd21 d38d48d21 d38 d48 d21 d38d48PBS 1,000 16K16K1,000 1,000 1,000 200 200200C 200200200100 100 100 200 200200*M＝106，#K＝103，C＝正常血清鼻内给予用AGP-AF配制的TT诱发了针对该抗原的抗原特异性免疫反应(表22)和粘膜免疫反应(表21)。
试验例9通过鼻内给药刺激对乙型肝炎表面抗原的免疫反应经鼻内给予了乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与本发明主题的化合物的小鼠产生了针对该抗原的血清IgG和IgA滴度。在阴道洗涤物中检测到了分泌的IgA且通过细胞毒性试验检测了对细胞毒性T-淋巴细胞反应的诱导作用。
对各组BALB/c小鼠经鼻内初次免疫接种(1°)2.5μg HBsAg+10μgAGP-AF的20ul体积溶液。AGP-AF如试验例8中所述制备。21天后对小鼠经鼻内第二次免疫接种(2°)7.5μg HBsAg+10μg AGP-AF的20ul体积溶液。在第二次免疫接种后28天给予与第二次免疫接种相同组成的第三次免疫接种(3°)。在第二次免疫接种后16天(2°后第16天)和第三次免疫接种后8天(3°后第8天)进行试验以便检测细胞毒性T-淋巴细胞活性。在第二次免疫接种后22天(2°后第22天)和第三次免疫接种后21天(3°后第21天)评价血清和粘膜抗体滴度。通过标准ELISA方法进行抗体测定。如试验例7中所述进行细胞毒性测定。来自本实验的结果如表23-26中所示。
表23经处理的细胞的细胞毒性T-淋巴细胞反应％细胞毒性(2°后第16天)E/T物质 50∶1 25∶1 12.5∶1 6.25∶1B2536 20 13 9B1513 544B1926 20 11 9B4 28 17 97B3 43 26 17 11B5 43 30 20 11B2233 21 15 8载体 3200正常细胞 3300表24经处理的细胞的细胞毒性T-淋巴细胞反应％细胞毒性(3°后第8天)E/T物质 50∶1 25∶1 12.5∶16.25∶1B25 30 19 13 8B15 56 42 25 16Bl9 71 54 33 24B4 23 15 9 5B3 54 45 32 20B5 44 30 19 12
％细胞毒性(3°后第8天)E/T物质 50∶1 25∶1 12.5∶1 6.25∶1B22 22 13 75载体5 2 11正常细胞 7 5 33表25经处理小鼠的抗肝炎抗体滴度抗HBsAg滴度-1*物质IgG1IgG2aIgAB25 256K#500K 3,200B15 256K 500K 6,400B19 500K 64K 1,600B4 500K 1000K 6,400B3 1000K500K 6,400B5 256K 500K 3,200B22 256K 64K 1,600载体＜2K ＜2K ＜200*2°后第22天，#K＝103表26经处理小鼠的抗肝炎抗体滴度抗HBsAg滴度-1*物质 IgG1IgG2aIgAB25 1000K#1000K 25,600B15 2000K 2000K 25,600B19 2000K 500K 12,800
抗HBsAg滴度-1*物质 IgG1IgG2aIgAB4 1000K 2000K 25,600B3 1000K 1000K 25,600B5 500K 1000K 12,800B22500K 500K 12,800载体 ＜2K ＜2K ＜200*3°后第21天，#K＝103对各组BALB/c小鼠经鼻内免疫接种2.μg HBsAg+10μg AGP-AF并在21天后经鼻内加强接种7.μg HBsAg+10μg AGP-AF。在加强接种后10天收集阴道样品并检测抗-HBsAg抗体。本试验的结果如表27中所示。
表27阴道洗涤物抗HBsAg滴度-1物质IgGIgAB25 100800B15 50 3200B19 ＜50 400B4 1600 6400B3 8001600B5 1600 1600B22 100800载体＜50 ＜50鼻内给予HBsAg与本发明主题的化合物刺激了针对该抗原的体液和细胞免疫反应。鼻内免疫接种用AGP-AF配制的抗原诱发了细胞毒性T-淋巴细胞反应(表23-24)和抗原特异性体液(表25和26)和粘膜(表27)免疫反应。
试验例10对流感的保护性免疫反应的产生经鼻内免疫接种含有血凝素抗原和本发明主题的AGPs的FLUSHIELD流感疫苗的小鼠产生了可在阴道洗涤物中回收的IgG和IgA。另外防止了免疫接种小鼠随后受到流感的攻击。
以21天间隔经鼻内对ICR小鼠免疫接种3次含有0.3μg血凝素抗原(HA)+10μg AGP-AF或重组大肠杆菌热不稳定肠毒素(LT)的FLUSHIELD流感疫苗(Wyeth-Lederle)。如试验例8中所述制备AGP-AF。以1μg/ml将LT溶于盐水。在第二次和第三次免疫接种后14天收集阴道洗涤物。在第三次免疫接种后14天收集血清样品。在最后的免疫接种后35天用10LD50(致死剂量50)的传染性流感A/HK/68攻击小鼠并监测死亡率。表28和29给出了通过用于检测阴道洗涤物和血清中抗流感抗体滴度的标准ELISA方法进行试验的结果。
表28阴道洗涤物样品物质 IgA IgG 预防百分比第二次 第三次 第二次 第三次未免疫 ＜20 ＜20 ＜20＜20 22载体 80 160 160 160 50B25 1280 1280 640 2560 100B19 320 5120 12801280 70B3 1280 2560 12801280 100B22 640 2560 320 640 75LT 2560 2560 2560640 100
表29物质血清滴度 预防百分比总IgG IgG1IgG2aIgG2b未免疫 ＜400 ＜400 ＜400 ＜40022载体 102,400 256,00012,800 102,400 50B25≥819,200 102,400819,200≥819,200100B19819,200 51,200 102,400819,200 70B3 ≥819,200 51,200 819,200≥819,200100B22819,200 51,200 102,400819,200 75LT ≥819,200 ≥819,200 ≥819,200 ≥819,200100这些数据证明当经鼻内给予AGPs的AF溶液时，它可起粘膜佐剂的作用，从而导致在粘膜部位产生IgA。还诱使对通过粘膜入侵的上呼吸道病原体的预防作用增加。
试验例11由稳定的乳剂制剂产生免疫反应本发明主题的AGP化合物在以稳定乳剂(SE)的形式给药时刺激了体液和细胞毒性T-淋巴细胞反应。以25μg的剂量水平测试AGPs以便辅助乙型肝炎表面抗原(HBsAg)诱发CTL和抗体反应。在第0天和第21天时经皮下给BALB/c小鼠免疫接种2.0μg HBsAg+25μg的AGP/SE。如试验例7中所述进行CTL测定。将AGPs配制成稳定的乳剂(SE)并将该组合物命名为AGP-SE。含有10％v/v角鲨烯、0.091％w/vPLURONIC-F68嵌段共聚物、1.909％w/v卵磷脂酰胆碱、1.8％v/v甘油、0.05％w/vα生育酚、10％磷酸铵缓冲液和78.2％v/v注射用水的稳定乳剂的制备方法对本领域技术人员而言应是显而易见的。将该乳剂匀化至颗粒大小≥0.2μm。表30表明本发明主题的AGPs诱发了对HBsAg的细胞毒性T-淋巴细胞反应。
表30经处理的细胞的细胞毒性T-淋巴细胞反应％细胞毒性E∶T物质 天 50∶125∶1 12.5∶1 6.25∶1B25 1°后第17天 27 12 95B19 74 48 34 24B3 28 15 95B22 42 24 17 7载体-SE 32 16 962°后第16天B25 49 28 20 13B19 73 62 42 31B3 81 47 32 22B22 78 69 58 39载体-SE 38 23 14 8对HBsAg的抗体滴度的结果如表31中所示。在用HBsAg或在HBsAgS-抗原区残基110-137中发现的B-细胞表位的28个氨基酸肽(p72)包被的ELISA平板上滴定来自2°后第28天所取血的血清。
表31经处理小鼠的抗HBsAg滴度抗HBsAg滴度-1HBsAgp72-肽物质IgG1IgG2aIgG1IgG2aB252048K*2048K128K 64KB191024K 1024K64K 128KB3 512K 1024K16K 128KB221024K 1024K128K 128K载体-SE1024K 64K 64K 4K
AGP-SE处理的小鼠表现出对乙型肝炎表面抗原的体液(表31)和细胞毒性T-淋巴细胞(表30)反应。有意义的是AGP-SE处理的小鼠在血清中显示出通过两种抗原检测的强烈的IgG2a特异性抗体滴度，而载体-SE仅诱发了一种适当的IgG2a反应。
试验例12对血清抗体滴度的刺激如试验例3中所述评价AGP化合物B31提高对流感病毒疫苗的血清抗体滴度的能力。简单地说，对ICR小鼠(10只/组)给予含有1HAU福尔马林灭活流感A/HK/68+或-25μg用0.2％TEoA/水溶液配制的RC-523。此外，用致死剂量的传染性流感病毒攻击小鼠以便评价预防保护作用。将本实验的结果列在表32中。
表32

试验例13诱导型氧化氮合成活性对本发明相应AGP化合物的筛选包括对与巨噬细胞活化相关的诱导型氧化氮合成酶或iNOS活性(NOS ED50)的评价，且由此可以将其作为免疫刺激的量度来观察。就本试验而言，收集小鼠腹膜流出物细胞并分离粘着的细胞群。使粘着的细胞与不同浓度的可溶性AGP化合物接触并测定产生的诱导和分泌的亚硝酸盐。NOS ED50值代表刺激半数亚硝酸盐释放最高量所需的AGP浓度且相当于刺激巨噬细胞所需的浓度。
还评价了AGP化合物诱发家兔体内发热反应的倾向。用10％(v/v)乙醇/水溶液将各化合物配制成100mg/ml，然后用D5W将它们稀释成所需的浓度。以3ml/kg体重将该物质注入家兔。记录家兔体核温度的升高值。将诱导3只家兔累计升高大于或等于1.5度的化合物看作是致热性的。
将这些实验的结果列在表33中。
表33


可以理解的是上述实施例仅用于解释本发明。可以对所用的组合物和/或方法做一定程度的修改且仍然可以实现本发明的目的。认为这类修改属于本发明要求保护的范围。
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权利要求
1.一种具有下列结构的免疫效应物化合物 其中X选自由直立或平伏位上的O和S组成的组；Y选自由O和NH组成的组；n、m、p和q是0-6的整数；R1、R2和R3相同或不同且是带有1-约20个碳原子的正构脂肪酰基残基且其中R1、R2和R3之一可选是氢；R4和R5相同或不同且选自H和甲基组成的组；R6和R7相同或不同且选自H、羟基、烷氧基、膦酰基、膦酰氧基、磺基、磺基氧基、氨基、巯基、氰基、硝基、甲酰基和羧基及其酯类和酰胺类组成的组；且R8和R9相同或不同且选自膦酰基和H组成的组，且R8和R9中至少一个是膦酰基。
2.权利要求1所述的化合物，其中R6是羧基。
3.权利要求2所述的化合物，其中X是O；Y是O；n、m、p和q是0；R1、R2和R3是带有10个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；且R5与具有S构型的立体化学中心连接。
4.权利要求2所述的化合物，其中X是O；Y是O；n、m、p和q为0；R1、R2和R3是带有12个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有S构型的立体化学中心连接。
5.权利要求2所述的化合物，其中X是O；Y是O；n、m、p和q为0；R1、R2和R3是带有10个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有R构型的立体化学中心连接。
6.权利要求2所述的化合物，其中X是O；Y是O；n、m、p和q为0；R1、R2和R3是带有8个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有S构型的立体化学中心连接。
7.权利要求1所述的化合物，其中R6是H。
8.权利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；n是2；m、p和q为0；R1、R2和R3是带有14个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接。
9.权利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；n是1；m和p为0；q为1；R1、R2和R3是带有10个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4和R5是H；R7是羧基；R8是膦酰基；R9是H；且R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接。
10.权利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n、p和q为0；R1、R2和R3是带有14个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；且R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接。
11.权利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n、p和q为0；R1、R2和R3是带有10个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；且R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接。
12.权利要求7所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、p和q为0；n是1；R1、R2和R3是带有14个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；且R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接。
13.权利要求1所述的化合物，其中R6是羟基。
14.权利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q为0；p是1；R1、R2和R3是带有12个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4和R5是H；R7是H；R8是膦酰基；且R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有S构型的立体化学中心连接。
15.权利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m和q为0；n和p为1；R1、R2和R3是带有10个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有S构型的立体化学中心连接。
16.权利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q为0；p是2；R1、R2和R3是带有10个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有S构型的立体化学中心连接。
17.权利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q为0；p是1；R1、R2和R3是带有14个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有R构型的立体化学中心连接。
18.权利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q为0；p是1；R1、R2和R3是带有14个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有S构型的立体化学中心连接。
19.权利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q为0；p是1；R1、R2和R3是带有11个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有S构型的立体化学中心连接。
20.权利要求13所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n和q为0；p是1；R1、R2和R3是带有10个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4、R5和R7是H；R8是膦酰基；R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有S构型的立体化学中心连接。
21.权利要求1所述的化合物，其中X是O；Y是O；m、n、p和q为0；R1、R2和R3是带有10个碳原子的正构脂肪酰基残基；R4和R5是H；R6是氨基羰基；R7是H；R8是膦酰基；且R9是H；R1、R2和R3各自与具有R构型的立体化学中心连接；而R5与具有S构型的立体化学中心连接。
22.权利要求1所述的化合物，其中R1是氢。
23.权利要求1所述的化合物，其中R2是氢。
24.权利要求1所述的化合物，其中R3是氢。
25.一种用于提高哺乳动物免疫反应的方法，该方法包括对所述的哺乳动物给予有效量的权利要求1的化合物的步骤。
26.一种包括权利要求1的化合物、抗原和合适的载体的疫苗组合物。
27.一种包括权利要求1的化合物和药物上可接受的载体的药物组合物。
28.权利要求27所述的组合物，其中所述的药物上可接受的载体是一种含水组合物，它包括水和一种或多种表面活性剂，该表面活性剂选自糖脱氧胆酸盐、脱氧胆酸盐、鞘磷脂、鞘氨醇、磷脂酰胆碱、1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺、L-α-磷脂酰乙醇胺和1，2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸或其混合物组成的组。
29.权利要求28所述的组合物，其中所述的一种或多种表面活性剂是1，2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-胆碱磷酸。
30.权利要求28所述的组合物，其中所述化合物与表面活性剂的摩尔比约为10∶1-约1∶25。
31.权利要求28所述的组合物，其中所述化合物与表面活性剂的摩尔比约为4∶1-约1∶9。
32.权利要求27所述的组合物，其中所述的载体是稳定的乳剂，它包括可代谢的油、一种或多种表面活性剂、抗氧化剂和使该乳剂等渗的成分。
33.权利要求32所述的组合物，其中所述的稳定的乳剂包括1-10％v/v角鲨烯、0.9％w/v PLURONIC-F68嵌段共聚物、1.9％w/v卵磷脂酰胆碱、1.75％v/v甘油和0.05％w/vα生育酚。
34.权利要求27所述的组合物，其中所述的载体是包括氢氧化铝、氢氧化钙、磷酸钙或酪氨酸吸附物的混悬液。
35.权利要求27所述的组合物，其中所述的载体是包括三乙胺或三乙醇胺的水溶液或含水的胶束分散体。
36.权利要求27所述的组合物，其中所述的载体包括微球体或微粒且权利要求1所述的化合物位于该微球体或微粒基质内或被吸附在其上。
全文摘要
本发明描述并要求保护属于佐剂和免疫效应物的氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGP)化合物。这些化合物在含有氨基烷基(糖苷配基)基团的糖苷键上带有2－脱氧－2－氨基葡萄糖。化合物在氨基葡糖苷环上的4或6位碳上被磷酸化且包括3个3－烷酰氧基烷酰基残基。这些化合物可使免疫动物体内的抗体产生增加并刺激细胞因子产生和激活巨噬细胞。本发明还公开了这些化合物作为佐剂和免疫效应物的使用方法。
文档编号A61K31/7028GK1409720SQ00816859
公开日2003年4月9日 申请日期2000年11月13日 优先权日1999年11月12日
发明者D·A·约翰逊, C·G·索厄尔 申请人:科里克萨有限公司