专利名称：一种螺旋藻多糖滴眼液的制作方法
一种螺旋藻多糖滴眼液技术领域
本发明属于滴眼液技术领域，具体涉及一种螺旋藻多糖滴眼液，即一种预防和治疗细菌性角膜炎的滴眼液。
背景技术：
细菌是角膜炎的最常见病因，细菌性角膜炎是主要的致盲眼病之一，治疗不当可以导致永久性视力下降，甚至失明。目前针对角膜炎的治疗最有效的途径就是局部应用抗生素。但是抗生素容易产生耐药性，因此，寻找安全有效的具有抗菌活性的生物活性物质对于预防和治疗眼细菌性角膜炎相关疾病是非常必要的，近年来开始受到各国学者的重视， 但是尚没有相关的应用报导。发明内容
本发明的目的是提供一种螺旋藻多糖滴眼液，以弥补现有细菌性角膜炎治疗及预防药物的缺乏。
本发明的滴眼液，为包含有效活性浓度的螺旋藻多糖的眼用缓冲液。
其中的螺旋藻多糖浓度优选为100 μ g/ml ；
所述缓冲液为眼用滴眼液中常用溶液体系，例如人工泪液或氯化钠滴眼液。
本发明所用到的螺旋藻多糖,是以钝顶螺旋藻(Spirulina platensis)藻粉为原材料，提取制备而得。
本发明的螺旋藻多糖滴眼液应用于眼部角膜炎疾病的治疗。
本发明首次将螺旋藻多糖制成滴眼液应用到防治眼细菌性角膜炎疾病。本发明的滴眼液制备方法简单，便于实施，对于眼新生血管的防治效果显著，具有广阔的应用开发前旦-5^ O具体实施方式
螺旋藻是最古老的多 细胞原始海藻。据报导螺旋藻具有显著的降血糖、降血压、降血脂等功效。螺旋藻化学成分中仅占2-3%的螺旋藻多糖，具有广泛而复杂的生物活性，在抗肿瘤及抗辐射上存在有药用疗效，是一种安全有效的生物活性物质。但目前螺旋藻仅用于保健品及食品当中，申请人长期研究发现螺旋藻多糖不但能够有效的抑制细菌的生长， 还可以控制眼部新生血管的生成，从而促成了本发明。
本发明所用的螺旋藻多糖(Spriulina polysacchrides),又称为藻多糖,从螺旋藻提取出的生理活性多糖，无毒；为无色的或淡黄色粉末。溶于水，不溶于醇和油脂。本发明所用的滴眼液可选用任一款医药食品领域应用的螺旋藻多糖商品化产品。
本发明将螺旋藻多糖溶于眼用缓冲液中完成产品的制备，其中眼用缓冲液可以为人工泪液，人工泪液就是模仿人体泪液的成分做出的一种替代品。它是一种眼药水，可以起到滋润眼睛的作用。本发明可选用任一款的人工泪液。
作为一个具体的实施，本发明所用到的螺旋藻多糖以钝顶螺旋藻藻粉(山东富施特生物技术有限公司生产)为原材料，提取制备了螺旋藻多糖，然后用人工泪液稀释成一种以生物活性物质为主要成分的眼用滴眼液，用于治疗细菌性角膜炎。其中的螺旋藻多糖浓度可以根据病人的情况选择，优选为100yg/ml。
具体的制备方法如下
步骤一、螺旋藻多糖的制备以如下工艺制备本发明所需的螺旋藻多糖。
(I)取钝顶螺旋藻干粉加95%乙醇，浸泡过夜；
(2)离心37°C烘干，按质量比I 12比例加双蒸水；
(3)用 NaOH 调 pH 至 10. 0，80°C水浴 4 6h ；
(4)离心，将沉淀中加质量体积比为5%三氯乙酸沉淀，4°C过夜；
(5)离心，取上清液，再加质量体积比为5%三氯乙酸沉淀3h ；
(6)离心，取上清液，加5倍体积乙醇沉淀，4°C过夜；
(7)以纯丙酮清洗沉淀2次，真空冷冻干燥；
(8)将上述沉淀物置于_20°C保存3日以上，以确保丙酮完全挥发；
(9)加入生理盐水充分溶解沉淀，离心，去除未能溶解的物质；
(10)使用0.22 ym滤膜过滤除菌，得到了无菌的螺旋藻多糖溶液。
步骤二、将上述的螺旋藻多糖溶液使用人工泪液稀释到螺旋藻多糖含量100 μ g/ ml,即得到本发明的螺旋藻多糖滴眼液。本发明所用的人工泪液为不加防腐剂的人工泪液如O. 1%透明质酸钠和羟丙基甲基纤维素。
上述人工泪液可以用氯化钠滴眼液来替代(如替若复方氯化钠滴眼液)。
下面对于本发明制备的滴眼液的效果进行描述
首先建立兔细菌性角膜炎动物模型模型动物选用2. 5-3kg新西兰大白兔，兔全身麻醉，盐酸丙美卡因滴眼液点眼，用基质注射针头在角膜中央进行基质注射5μ I浓度为 2X104CFU/ml的菌液(即100个菌)，造成兔角膜细菌性角膜炎感染。
对上述建立的兔细菌性·角膜炎动物模型，分为3组，每组12只动物，于角膜基质注射菌液8小时后，开始点眼给药，分别给予本发明制备的螺旋藻多糖滴眼液、左氧氟沙星和生理盐水。滴眼方案如下先是15min/次，连续滴眼5次，然后30min/次，连续滴眼14次， 于最后一次滴眼结束后的Ih观察兔实验眼并按如下评分标准给分，统计学分析。
病变评分标准见下表
裂隙灯评分标准
权利要求
1.一种滴眼液，其特征在于，所述的滴眼液为包含有效活性浓度的螺旋藻多糖的眼用缓冲液。
2.如权利要求1所述的滴眼液，其特征在于所述的螺旋藻多糖在滴眼液中的浓度为100 μ g/mlο
3.如权利要求1或2所述的滴眼液，其特征在于，所述的螺旋藻多糖的制备包括如下步骤(1)取钝顶螺旋藻干粉加95%乙醇，浸泡过夜；(2)离心37°C烘干，按质量比1:12比例加双蒸水；(3 )用 NaOH 调 pH 至 10. O，80 V 水浴 4 6h ；(4)离心，将沉淀中加质量体积比为5%三氯乙酸沉淀，4°C过夜；(5)离心，取上清液，再加质量体积比为5%三氯乙酸沉淀3h；(6)离心，取上清液，加5倍体积乙醇沉淀，4°C过夜；(7)以纯丙酮清洗沉淀2次，真空冷冻干燥；(8)将上述沉淀物置于_20°C保存3日以上，以确保丙酮完全挥发；(9)加入生理盐水充分溶解沉淀，离心，去除未能溶解的物质；(10)使用O.22 μ m滤膜过滤除菌，得到了无菌的螺旋藻多糖溶液。
4.如权利要求1所述的滴眼液，其特征在于所述的眼用缓冲液为人工泪液或氯化钠滴眼液。
5.权利要求1所述的滴眼液应用于眼部角膜炎疾病的治疗。
全文摘要
本发明涉及一种螺旋藻多糖滴眼液，为包含有效活性浓度的螺旋藻多糖的眼用缓冲液。本发明首次将螺旋藻多糖制成滴眼液应用到防治眼细菌性角膜炎疾病。本发明的滴眼液制备方法简单，便于实施，对于眼角膜炎的防治效果显著，具有广阔的应用开发前景。
文档编号A61K31/715GK103040735SQ20121059454
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月31日 优先权日2012年12月31日
发明者杨玲玲, 吴祥根, 王瑶, 周庆军 申请人:山东省眼科研究所