专利名称：大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物提取技术领域，具体涉及一种从大越豆芋花中同时制备皂苷和多糖的方法及其用途。
背景技术：
大越豆芋C^io1S americana Medikus)属多年生豆科植物，又称Potato bean、American ground nut,缠绕藤本,5_7片小叶一复叶，紫色小花,蝶形花冠，原产于美国西部，地下块茎作为无性繁殖或食用，是一种天然的高蛋白、高钙食品。由于具有其极高的营养和保健作用60年代被日本政府引进和开发，并被广泛应用于各种食品或食品配料中，已经成为日本家喻户晓的保健食品，主要对现代生活方式病(如高血压、糖尿病、肥胖、骨质疏松等)具有明显改善效果，并具有抗癌和抗HIV活性成分。目前，大越豆芋已成功引种至中国，在浙江省杭州地区、宁波地区、温州地区、金华地区均有栽培和利用。但目前，未发现有对大越豆芋皂苷和多糖的提取方法与用途的相关报道。此外，大越豆芋花目前基本处于废弃状态，未能开发利·用，造成了资源的浪费。目前在别的植物上有皂苷和多糖同时提取的工艺的报道，如中国专利(申请号201110029129. 1，申请公布号CN102178720A)公开了一种从绞股蓝中同时制备总皂营和多糖的方法，但存在纯度低等方面的不足。

发明内容
本发明的目的是提供一种成本低、原料综合利用，并且对环境污染小的同时制备豆芋花皂苷和多糖的方法，并提供用该方法制备的大越豆芋花皂苷和多糖在制备具有抗氧化、血糖调节作用的药物或功能食品中的应用。本发明的技术方案如下
大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于按以下步骤
1)采摘大越豆芋花，清洗，干燥，粉碎，过40目筛，得到大越豆芋花粉末；
2)大越豆芋花粉末，按照料液比1:10-1:20，加入浓度为70%-90%乙醇，在50-80°C回流提取1-3次，每次时间1-3小时，过滤，得上清液和滤渣；
3)上清液，挥干后用水溶解，石油醚脱脂，正丁醇萃取，取正丁醇部分经大孔吸附树脂吸附洗脱后，浓缩，干燥得到豆芋花皂苷粉；
4)滤渣，挥干溶媒，用其重量10-20倍的蒸馏水，于70-90°C回流提取1-3次，每次时间2-3小时，过滤，收集合并滤过液；
5)滤过液脱色、脱蛋白，浓缩，加入乙醇，静置过夜进行醇沉，收集沉淀，透析后，用DEAE-纤维素柱层析，分别用蒸馏水、0. 1M，0. 3M，0. 5M NaCl溶液洗脱液，收集0. 3M-0. 5MNaCl洗脱液，透析，浓缩，干燥，得豆芋花多糖。所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于步骤2)所述料液比为1:15-1:20，优选为1:20 ;乙醇浓度为80-90%，优选90% ；回流提取温度为60_70°C，优选700C ;回流提取2次，每次时间2小时。所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于步骤3)所述的大孔吸附树脂为DlOl或AB-8，洗脱所采用的洗脱液为质量浓度为60%-90%的乙醇。所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于步骤5)所述的脱色方法为活性炭脱色或过氧化氢脱色；所述的脱蛋白方法为sevage法、三氯乙酸法、氯化钠法或氯化钙法；所述的醇沉为加入乙醇使醇沉浓度为75-95% ;所述透析采用3KD透析膜。所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于步骤I)、步骤3)和步骤5)所述的干燥方法为冷冻干燥或真空干燥。所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于所述洗脱液为质量浓度75%的乙醇。所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于醇沉浓度为90-95%。上述方法同时制备了大越豆芋花总皂苷和多糖，制备得到的大越豆芋花皂苷和多糖可达到较高的提取率和纯度，其中大越豆芋花皂苷产量可达到2-3. 5%，纯度为90-97% ；大越豆芋花多糖产量可达到0. 5-2%，纯度为94-98%。制备得到的大越豆芋 花总皂苷可以作为制备抗氧化活性的药物或功能食品添加齐U，大越豆芋花多糖可以作为制备调节血糖的药物或功能食品添加剂，如大越豆芋花多糖用于制备治疗糖尿病等药物。上述制备方法提取的活性成分作为清除自由基、调节血糖、血脂等药品和功能食品配料使用，疗效好，应用范围广，安全无毒性，大越豆芋花活性成分作为一类天然药物、保健食品功能因子、膳食补充剂的绿色宝库，若能加以开发利用，可以为开发抗氧化剂，调节血糖紊乱提供新途径，也对发展我国的区域经济和人民的健康提供技术支持。综上所述，本发明具有步骤简单、得率高、成本低的优点，而且本发明从大越豆芋花中同时制备得到两类物质，原料利用率高，而且所制备的大越豆芋花总皂苷和多糖纯度高，活性强，用途广泛，不仅可单独使用还可以与其他天然药物配合使用。
具体实施例方式现结合本发明的实施例对本发明作进一步说明。实施例1 :
大越豆芋花总皂苷提取工艺优化
豆芋花去梗清杂后冷冻干燥，低温保存；提取前用快速水分测定仪测定花样中的实际水分含量，试样皂苷含量及抗氧化性能均折合成花干基计算。工艺流程豆芋花粉末一在一定条件下回流提取一趁热过滤一洗渣一定容一分析测试。总皂苷含量的测定方法如下
精密称取熊果酸对照品2. 5mg,加无水乙醇定容至IOmL,即得250 u g/mL熊果酸标准液。精密吸取对照品溶液0，100，150，200，250，300，350，400 U I分别置于5mL容量瓶中，挥干溶剂，分别加入新配制的5%香草醛-冰乙酸200 u 1，高氯酸800 Ul，摇匀，置60°C水浴15min，取出放置冰水中冷却，精密加入4ml冰乙酸，定容至刻度，混匀，20min后在548nm波长处测定吸收度A。以吸收度(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线，得标准曲线回归方程Y= 0. 0458X-0. 0002 (R2=O. 9998)。样品皂苷含量的测定按上述标准曲线制定方法测定吸收度，并根据标准曲线计算待测液的总皂苷含量。大越豆芋花总皂苷不同提取参数设定及分析结果见表I。
权利要求
1.大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于按以下步骤1)采摘大越豆芋花，清洗，干燥，粉碎，过40目筛，得到大越豆芋花粉末；2)大越豆芋花粉末，按照料液比1:10-1:20，加入浓度为70%-90%乙醇，在50_80°C回流提取1-3次，每次时间1-3小时，过滤，得上清液和滤渣；3)上清液，挥干后用水溶解，石油醚脱脂，正丁醇萃取，取正丁醇部分经大孔吸附树脂吸附洗脱后，浓缩，干燥得到豆芋花皂苷粉；4)滤渣，挥干溶媒，用其重量10-20倍的蒸馏水，于70-90°C回流提取1_3次，每次时间2-3小时，过滤，收集合并滤过液；5)滤过液脱色、脱蛋白，浓缩，加入乙醇，静置过夜进行醇沉，收集沉淀，透析后，用 DEAE-纤维素柱层析，分别用蒸馏水、O. 1M，0. 3M，0. 5M NaCl溶液洗脱液，收集O. 3M-0. 5M NaCl洗脱液，透析，浓缩，干燥，得豆芋花多糖。
2.根据权利要求1所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于步骤2)所述料液比为1:15-1:20，优选为1:20;乙醇浓度为80-90%，优选90%;回流提取温度为 60-70°C，优选70°C ;回流提取2次，每次时间2小时。
3.根据权利要求1所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于步骤3)所述的大孔吸附树脂为DlOl或AB-8，洗脱所采用的洗脱液为质量浓度为60%-90%的乙醇。
4.根据权利要求1所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于步骤 5)所述的脱色方法为活性炭脱色或过氧化氢脱色；所述的脱蛋白方法为sevage法、三氯乙酸法、氯化钠法或氯化钙法；所述的醇沉为加入乙醇使醇沉浓度为75-95% ;所述透析采用 3KD透析膜。
5.根据权利要求1所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于步骤I)、步骤3)和步骤5)所述的干燥方法为冷冻干燥或真空干燥。
6.根据权利要求3所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于所述洗脱液为质量浓度75%的乙醇。
7.根据权利要求1或4所述的大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，其特征在于醇沉浓度为90-95%。
8.根据权利要求1-7中任意一项权利要求所述方法制备得到的大越豆芋花总皂苷作为制备抗氧化活性的药物或功能食品添加剂的应用，大越豆芋花多糖作为制备调节血糖的药物或功能食品添加剂的应用。
9.根据权利要求1-7中任意一项权利要求所述方法制备得到的大越豆芋花总皂苷在清除DPPH自由基、ABTS+自由基、· OH自由基、02_ ·自由基上的应用。
10.大越豆芋花多糖作为制备治疗糖尿病药物的应用。
全文摘要
大越豆芋花总皂苷、多糖同时制备的方法，涉及植物提取技术领域，包括以下步骤1)原料采集、清洗、干燥；2)乙醇回流提，过滤，得上清液和滤渣；3)上清液，石油醚脱脂，正丁醇萃取，吸附洗脱后，浓缩，干燥得到豆芋花皂苷粉；4)滤渣，挥干溶媒，用水回流提取后，过滤，收集合并滤过液；5)滤过液脱色、脱蛋白，浓缩，醇沉，透析，浓缩，干燥，得豆芋花多糖。本发明具有步骤简单、得率高、成本低的优点，而且本发明从大越豆芋花中同时制备得到的总皂苷和多糖，纯度高，活性强，可以在制备具有抗氧化、血糖调节作用的药物或功能食品中得到广泛应用。
文档编号A61P3/10GK103040917SQ20121057401
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月26日 优先权日2012年12月26日
发明者倪勤学, 张有做, 舒恩成, 许光治, 高前欣, 杨冬冬 申请人:浙江农林大学