专利名称：乌金片在制备抑制pc-3细胞增殖药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中成药的新用途，尤其涉及乌金片在制备抑制PC-3细胞增殖药物中的应用。
背景技术：
前列腺癌就是发生于男性前列腺组织中的恶性肿瘤，是前列腺腺泡细胞异常无序生长的结果。前列腺癌的发病率具有明显的地理和种族差异。在欧美等发达国家和地区，它是男性最常见的恶性肿瘤，其死亡率居各种癌症的第二位；在亚洲，其发病率低于西方国 家，但近年来呈迅速上升趋势。乌金片是云南永孜堂制药有限公司的独家产品，目前还没有其抑制前列腺癌(PC-3)细胞增殖的文献报道。

发明内容
发明目的本发明的目的在于提供乌金片在制备抑制PC-3细胞增殖药物中的应用。技术方案乌金片在制备抑制PC-3细胞增殖药物中的应用。乌金片处方为蒲黄、百草霜、益母草、熟地黄、艾叶(炭)、三棱、延胡索、香附、白芍、补骨脂、吴茱萸、川芎、莪术、木香、当归、小茴香油，调经化瘀，用于气郁结滞，胸胁刺痛，产后瘀血，小腹疼痛，五心烦热，面黄肌瘦，规格为每片O. 6g，口服，一次4片，一日2次，现发现其能抑制PC-3细胞增殖。有益效果乌金片抑制PC-3细胞增殖，效果良好。
具体实施例方式乌金片抑制PC-3细胞增殖的实验研究资料I实验材料I. I实验用细胞株前列腺癌(PC-3)，来自本公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。I. 2实验药物研究药物乌金片，云南永孜堂制药有限公司，批号20110423药液储液称取IOOmg乌金片粉碎，溶于5ml无水乙醇中，O. 2 μ m滤器过滤，500 μ Idoff管分装，-20°C存储，同时O. 2 μ m滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。I. 3实验试剂DMEM (GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ；NaHC03 (上海久亿化学试剂有限公司Cat.No. 11810-033Lot. No. 1088387) ;Trypsin (AMRESC0 公司批号2010/04) ；EDTA (AMRESCO公司批号2009/10) ；Penicillin G Sodium Salt (AMRESCO 公司批号2010242)；Streptomycin Sulfate (AMRESCO公司批号2010382);无水乙醇(南京化学试剂有限公司批号:080310182) ;MTT(Biosharp 批号0793) ;PBS (实验室自配)；I. 4实验器材莱卡倒置显微镜(德国Leica型号DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号SPECTRAMAX 190) ;C02培养箱(FORMA型号3111);超净台(苏净集团安泰公司制造型号SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号S/N 020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANK)公司型号MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号DHG9123A);冰箱(西门子公司型号KG18V21TI);液氮罐(CBS型号2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号ΚΑ-1000) ;0. 2μπι滤器(MILLIP0RE型号SLGP033RB) ;10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。2实验方法
I) PC-3细胞用DMEM+10%FBS于37 °C、5%C02进行常规培养(IOcm培养皿)，当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml O. 25%胰蛋白酶-O. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，IOOOrpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ 1，培养板放入细胞培养箱中(37 °C，5%C02 )常规培养。3)根据细胞生长情况，一般长至50%_70%，加入乌金片溶液，继续培养24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 O. 5%MTT)，继续培养 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)，每组设定6个复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示细胞增值抑制率(％)=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。3统计处理采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean+ S. D.表不。4实验结果MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对PC-3细胞增殖抑制有差异(p〈0. 05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P〈0. 01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(Ρ〈0· 001)。表I乌金片对PC-3细胞增殖抑制影响研究(XfSD)纖 11药狗浓μ): (mg.iiil >|!plvri
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.I2 ■!；'.. H^ ty.注与对照组比较，*Ρ〈0·01 ;#Ρ〈0· 0015实验结论
乌金片可以抑制PC-3细胞增殖，减少PC-3细胞的细胞生长数目，该作用呈时间和剂量依赖性。
权利要求
1.乌金片在制备抑制PC-3细胞增殖药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了乌金片在制备抑制PC-3细胞增殖药物中的应用，乌金片处方为蒲黄、百草霜、益母草、熟地黄、艾叶(炭)、三棱、延胡索、香附、白芍、补骨脂、吴茱萸、川芎、莪术、木香、当归、小茴香油，调经化瘀，用于气郁结滞，胸胁刺痛，产后瘀血，小腹疼痛，五心烦热，面黄肌瘦，规格为每片0.6g，口服，一次4片，一日2次，现发现其能抑制PC-3细胞增殖。
文档编号A61P35/00GK102824614SQ201210351540
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月20日 优先权日2012年9月20日
发明者不公告发明人 申请人:南京正亮医药科技有限公司