专利名称：FcγRIIB(CD32B)和CD20特异性抗体的组合应用的制作方法
FcyRI IB(CD32B)和CD20特异性抗体的组合应用
背景技术：
本发明涉及防止抗体Fe结构域和细胞表面Fe Y RIIb之间结合的试剂(agent)。本发明还涉及包含所述试剂的组合物，所述组合物用于治疗具有诸如使用基于抗体的组合物治疗的癌细胞的靶细胞的患者。另外，本发明还涉及预测靶细胞对于基于抗体的治疗的响应的方法，特别是在抗体配体对Fe y RIIb介导的内化敏感的情况下预测靶细胞对于基于抗体的治疗的响应的方法，特别涉及Fe y RIIb表达水平和/或治疗性抗体通过Fe y RIIb介导的内化作为靶细胞对于所述治疗的响应的预后标志物的用途。单克隆抗体(mAb)可产生治疗效果的机制是通过招募诸如细胞毒性细胞(例如巨噬细胞)和酶(例如补体)的天然效应系统，然后所述效应系统靶向HiAb结合的细胞，而刺激除去癌细胞和其他不 想要的细胞。例如，I型抗⑶20mAb (例如当前的市场主导药利妥昔单抗)通过经mAb的抗原结合结构域结合B细胞表面上的CD20分子并清除这些靶B细胞而发挥作用。它们通过招募和激活通过在效应细胞的表面表达的Fe y受体(Fe Y R)而与mAb的Fe结构域相互作用的这些效应细胞来实现这点。抗⑶20单克隆抗体(mAb)利妥昔单抗改善了患有滤泡(FL)性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的患者的总体存活率(OS) (1-4)。在外套细胞淋巴瘤(MCL)中，仅观察到轻度响应(5)，而在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中，起始单剂利妥昔单抗试验所产生的响应没有在其他非何杰金淋巴瘤(NHL)中所产生的响应显著((6)中综述)。一部分淋巴瘤显示对利妥昔单抗具有原发抗性，或者最终对含有利妥昔单抗的联合治疗产生抗性(7)。该治疗抗性及所观察到的不同NHL亚型对利妥昔单抗治疗的敏感性背后的分子基础当前尚未知，但可能包括⑶20表达水平(8-10)、补体防御分子(⑶55和⑶59)的高表达(11、12)、凋亡抗性的形成(13)以及由于低亲和力等位基因表达导致的次佳的Fe Y受体(FcyR)相互作用(14)。非常期望在治疗不佳或抗性明显的情况下提高这些抗体的有效性。通常认为Fe:Fe Y R相互作用对于抗⑶_20mAb的功效至关重要(15_18)。与此相一致，在Fe Y RIIIa中携带较高亲和力的158V等位基因的淋巴瘤患者要比具有低亲和力的158F异型的淋巴瘤患者更好地响应利妥昔单抗(14)，导致许多研究者都集中于提高mAb与Fe y RIIIa的相互作用，例如通过去岩藻糖基化(19)。相比之下，对于抑制性Fe y RIIb则给予较少关注，Fe y RIIb用作诸如B细胞抗原受体(BCR)和激活性Fe Y R的携带ITAM的受体接收的刺激性活动的负调节剂。在B细胞中，该相互作用用于限制免疫复合物结合之后的B细胞增殖，而在巨噬细胞中，FcyRIIb的参与引起细胞毒性活性的抑制(15)。在B细胞恶性肿瘤中，Fe Y RIIb表达于CLL/SLL、MCL以及FL上，后者尤其在转化过程中有表达。在DLBCL中，FyRIIb表达较弱，由此解释了在其表达和对于利妥昔单抗-CHOP (R-CHOP)化疗之间未显示相关性的原因(20，21)。关于激活性Fe Y R，还发现影响Fe y RIIb活性的多形性，2321等位基因比232T等位基因更有效地抑制BCR介导的钙流(22，23)。然而，Weng和Levy未能在FL患者中确定这些多形性和对利妥昔单抗治疗的响应之间的相关性。可用于临床研究的抗⑶_20mAb数量越来越多。根据这些不同抗⑶20mAb在质膜中再分布CD20的能力及其在不同效应细胞测定中的活性将其分类为I型(例如，利妥昔单抗(rituximab)，奥法木单抗(ofatumumab))或 II 型(例如，托西莫单抗(tositumomab) (BI),GAlOl，11B8) (25-27)。发明人及其他人已经证明II型mAb在许多模型系统中均更高效地清除B细胞靶(18，19)。例如，在其中II型mAb引发溶酶体细胞死亡的较高能力不明显的人正常B细胞消耗的CD20转基因(Tg)模型(25，27)中，发明人证明了该效能与其对内化的抗性相关(28)。这与诸如利妥昔单抗的I型mAb形成对比，I型mAb在具有能量和温度依赖性并涉及肌动蛋白再分布的过程中与CD20—起从细胞表面快速内化(28)。在来自不同来源的细胞上的调变(modulation)速率显著不同(原发肿瘤对细胞系，CLL对FL)，但这点的分子基础仍未得到解释。WO 2008/002933描述了 Fe Y RIIb (CD32B)和CD20特异性抗体及使用这两种抗体的组合来治疗B细胞相关疾病或病症的方法。然而，没有识别和/或治疗患者亚组的教导或暗示，所述患者亚组即靶细胞Fe y RIIb表达水平升高的那些患者，或其抗体类型适于和Fe y RIIb抗体联合治疗的患者。出人意料地，发明人证明不管细胞亚型如何调变都与Fe y RIIb表面表达显著相关，过表达能够将Ramos细胞由慢调变细胞转化为快调变细胞。FcyRIIb的内化与⑶20 —起发生，并在其激活之前发生。所有这些数据为先前在不同NHL亚型内和不同NHL亚型之间观察到的调变速率的异质性提供了明确的分子理论。因此，发明人证明，决定抗体对诸如CD20的抗原的有效性的关键因素是与同一细胞表面的抑制性 Fe y RIIb (还已知为且包括 CD32、CD32B、CD32B1、CD32B2、FcRI1、Fe y RII或FcRIIB)的相互作用，这令人惊讶。该相互作用导致靶细胞对抗体的内化，由此去除其与效应细胞Fe受体相互作用的能力。发明人进一步证明,诸如抗CD32mAb的试剂能够阻断这种内化。发明人还证明这样的试剂可与抗体(例如利妥昔单抗)联合用于靶向细胞表面抗原并改善其体内清除正常B细胞或肿瘤细胞的活性。本发明提供了一种组合物，所述组合物包含:(i)特异性结合靶细胞的细胞表面抗原的抗体分子，所述抗体分子具有能够结合Fe y RIIb的Fe结构域;和(ii)抑制或减少Fe y RIIb与所述抗体分子的Fe结构域结合的试剂，其特征在于，所述组合物用于治疗具有Fe YRIIb表达水平升高的靶细胞的患者。根据另一方面，本发明提供了抑制或减少抗体分子的Fe结构域与靶细胞上的Fe Y RIIb之间结合的试剂的用途，其中所述抗体分子特异性结合靶细胞表面抗原，其特征在于，所述用途为在制备用于治疗具有Fe YRIIb表达水平升高的靶细胞的患者的药物中的用途。根据另一方面，本发明提供了一种治疗具有表达Fe Y RIIb的靶细胞的患者的方法，所述方法包括联合施用:(i)特异性结合所述靶细胞的表面抗原的抗体分子，所述抗体分子具有能够结合Fe y RIIb 的Fe结构域；和(ii)抑制或减少所述抗体分子的Fe结构域和Fe y RIIb之间结合的试剂，其特征在于，所述患者是基于靶细胞Fe y RIIb表达水平升高选择的。在本发明组合物、用途或方法的某些实施方式中，所述试剂抑制或减少靶细胞上存在的Fe y RIIb与所述抗体分子的Fe结构域的结合。根据另一方面，本发明提供靶细胞上的Fe YRIIb表达作为所述靶细胞对于使用特异性结合所述靶细胞表面抗原的抗体分子治疗的响应的预后标志物的用途，所述抗体分子具有能够结合Fe y RIIb的Fe结构域，由此Fe y RIIb水平升高提示对使用所述抗体分子治疗的响应减少或不响应。在一种实施方式中，靶细胞上的Fe Y RIIb表达作为预后标志物的用途不需要将靶细胞上的Fe y RIIc表达用作预后标志物。根据另一方面，本发明提供了一种用于预测患者靶细胞对于使用特异性结合靶细胞表面抗原并具有能够结合Fe YRIIb的Fe结构域的抗体分子治疗的响应的方法，其特征在于，所述方法包括测定靶细胞上的Fe y RIIb表达水平，由此Fe Y RIIb水平升高预示对使用所述抗体分子治疗的响应减少或不响应。在一种实施方式中，用于预测患者靶细胞响应的方法包括测定所述靶细胞上的Fe y RIIb表达水平，且不另外包括测定所述靶细胞上的Fe y RIIc表达水平。已经证明，尽管所有 抗体都具有Fe结合抗体恒定结构域和已知的Fe y受体结合能力，但并非所有抗体均以Fe YRIIb依赖性方式被内化，这使得合适抗体的鉴定对包含Fe Y RIIb功能调变剂的联合治疗的治疗成功以及避免无益于患者的治疗至关重要。在本发明组合物、用途或方法的某些实施方式中，特异性结合靶细胞的细胞表面抗原的抗体分子也能够以Fe YRIIb依赖性方式被内化至所述细胞中，其中所述抗体具有能够结合Fe y RIIb的Fe结构域。在本发明组合物、用途或方法的某些实施方式中，抑制或减少Fe YRIIb结合所述抗体分子的Fe结构域的试剂还抑制或减少所述抗体分子被进一步内化至所述细胞中。在本发明组合物、用途或方法的某些实施方式中，所述靶细胞是癌细胞。方便地，所述IE细胞是B细胞。有利地，根据本发明，其中所述靶细胞上的Fe YRIIb表达升高是相对于对照或参照而定的。优选地，所述对照是与靶细胞相同类型的细胞中Fe y RIIb的正常表达水平。“Fe Y RIIb表达水平升高”在下文的“定义”中有定义。Fe Y RIIb表达水平可计算为Fe Y RIIb的几何平均荧光强度(几何MFI或Geo MFI)与同种型对照之比。可选地，Fe y RIIb表达水平可通过肿瘤活组织检查的免疫组织化学来计算。本领域技术人员应理解，有多种用于测定Fe YRIIb表达水平的技术和方法。本发明还教导了如何鉴定适于与Fe Y RIIb抗体联合治疗的抗体，所述抗体即以FcYRIIb依赖性方式被靶细胞表面内化的那些抗体。本发明还提供了鉴定适于与Fe y RIIb抗体联合治疗的患者亚组。在另一方面，本发明提供了用于鉴定减少或抑制针对靶细胞表面抗原的抗体Fe结构域和靶细胞上的Fe YRIIb之间结合的试剂的测定方法，所述测定方法包括测定在存在和不存在试验试剂的情况下Fe结构域和Fe y RIIb之间的结合程度。如果试验试剂减少或抑制了 Fe结构域与Fe YRIIb的结合，则鉴定为有用的试剂。这样的测定方法还可用于鉴定何种试剂(例如抗体分子)适于与抗Fe Y RIIb抗体的联合治疗。在另一种优选的实施方式中，鉴定可用于本发明用途和方法实践中的试剂的测定方法包括筛选阻断Fe y RIIb刺激/信号传导的试剂，如通过蛋白质印迹检测细胞内ITIM基序中酪氨酸-293的磷酸化所提示的阻断Fe y RIIb刺激/信号传导的试剂。例如，在对磷酸化Fe y RIIb进行免疫印迹之前，在存在或不存在抗Fe y RIIb测试试剂的情况下，将Raji细胞与针对细胞表面抗原的抗体(例如，抗CD20mAb利妥昔单抗)一起温育。磷酸化Fe y RIIb的量在利妥昔单抗刺激的细胞中升高，并且，与图4A中所示使用ATlO作为阻断剂相似，应被添加试验试剂所抑制。另外，根据

图1A中所示的淬灭实验，这些试剂还应优选阻断利妥昔单抗的内化。图2B显示抗Fe Y RIIb阻断物(在此情况下为AT10)阻断的典型实例。这些测定方法还可用于鉴定何种试剂(例如抗体分子)适于与抗Fe Y RIIb抗体联合治疗。在一种优选的实施方式中，用于鉴定适于与Fe Y RIIb抗体联合治疗的试剂的测定方法计算了内化至表达Fe YRIIb的细胞中的试剂(例如，抗体分子)的百分率。该测定方法的特征在于，所述方法包括测定在表达试剂(例如，抗体分子)靶和表达Fe Y RIIb的细胞一起温育之后保留于细胞表面上的试剂(例如，抗体分子)的百分数，由此，细胞表面可及的试剂(例如，抗体分子)减少的百分数可预示对使用所述抗体分子的治疗的响应。通过引用并入本文的Neubig et al (2003)Pharmacol.Rev.55, 597-606 描述了可被筛选以鉴定本发明抑制或减少Fe Y RIIb与抗体分子Fe结构域结合的试剂的多种类型的配体。上述配体可为小的有机或无机物，但优选它们为肽或多肽。通常，当配体为小的有机或无机物时，其相对分子量(Mr)为50至2000，例如，100至1000，例如100至500。通常，配体以mM至pM的Kd结合Fe Y Rllb，例如在ii M(微摩尔)至nM范围。通常，优选具有最低Kd的配体。

所述配体可为拟肽、核酸、肽核酸(PNA)或适体。其还可为脂质或碳水化合物。所述配体可为结合Fe y RIIb的多肽。这样的多肽(包括寡肽)通常为Mr 500至Mr 50，000，但可以更大。所述多肽还可为基于模块框架(modular framework)的结合蛋白，例如锚肽重复序列蛋白、犹餘(armadillo)重复序列蛋白、富亮氨酸蛋白、三十四肽(tetartriopeptide)重复序列蛋白或设计的锚肽重复序列蛋白(DARPins)或基于脂质运载蛋白或纤连蛋白结构域或Affilin支架的蛋白。便利地，所述测试试剂为测试化合物文库，并且优选地，该文库为任何肽文库、蛋白文库、抗体文库、重组组合抗体文库或scFV或Fab噬菌体展示文库。优选地，在本发明的组合物、用途或方法中，所述试剂(ii)是特异性结合FcyRIIb的一种或多种抗体分子。便利地，所述一种或多种抗体分子不包括能够招募效应细胞的结构域。便利地，所述一种或多种抗体分子为一种或多种单克隆抗体分子。优选地，所述试剂抑制或减少Fe YRIIb信号传导。甚至更优选地，所述试剂抑制或减少祀细胞对所述抗体分子的内化。在下列实施方式中，SEQ ID NO是指在下文克隆1_13中所示的序列。
本领域技术人员应知道，在免疫球蛋白的重链和轻链可变区上存在三个互补决定区(CDR)。本文所述的氨基酸至各CDR的分配与Kabat EA et al.1991，" Sequences ofProteins of Immulogical Interest"，第 5 版，NIH 公布号 91-3242，第 xv_xvii 页中的定义相一致。本领域技术人员应知道，还有其他用于将氨基酸分配至各⑶R中的方法。例如，International ImMunoGeneTics 信息系统(IMGT (r；) (http:// www.1mgt.0rg/和 AcademicPress, 2001 出版的 Lefranc “The Immunoglobulin FactsBook”)。在一种实施方式中，所述试剂包含含有下列⑶R的重链可变区(VH):(i)SEQ ID N0:29 和 SEQ ID N0:30 和 SEQ ID N0:31 ;或(ii)SEQ ID N0:35 和 SEQ ID N0:36 和 SEQ ID N0:37;或(iii)SEQ ID NO:41和 SEQ ID NO:42 和 SEQ ID NO:43 ;或(iv) SEQ ID N0:47 和 SEQ ID N0:48 和 SEQ ID NO:49 ;或(v)SEQ ID NO:53 和 SEQ ID NO:54 和 SEQ ID NO: 55 ;或(vi)SEQ ID N0:59 和 SEQ ID N0:60 和 SEQ ID N0:61 ;或(vii)SEQ ID N0:65 和 SEQ ID N0:66 和 SEQ ID N0:67 ;或(viii)SEQ ID NO:71 和 SEQ ID NO:72 和 SEQ ID NO:73;或(ix)SEQ ID N0:77 和 SEQ ID N0:78 和 SEQ ID N0:79;或(x)SEQ ID NO:83 和 SEQ ID NO:84 和 SEQ ID NO:85 ;或(xi)SEQ ID N0:89 和 SEQ ID N0:90 和 SEQ ID N0:91 ;或(xii)SEQ ID N0:95 和 SEQ ID N0:96 和 SEQ ID N0:97 ;或(xiii)SEQ ID NO:101和 SEQ ID NO:102 和 SEQ ID NO:103。优选地，所述试剂包含含有下列⑶R的轻链可变区(VL):(i)SEQ ID N0:32 和 SEQ ID N0:33 和 SEQ ID N0:34;或(ii)SEQ ID N0:38 和 SEQ ID N0:39 和 SEQ ID NO:40 ;或(iii)SEQ ID N0:44 和 SEQ ID N0:45 和 SEQ ID NO:46 ;或(iv) SEQ ID NO: 50 和 SEQ ID NO: 51 和 SEQ ID NO: 52 ;或(v)SEQ ID NO:56 和 SEQ ID NO:57 和 SEQ ID NO:58 ;或(vi)SEQ ID N0:62 和 SEQ ID N0:63 和 SEQ ID NO:64 ;或(vii)SEQ ID N0:68 和 SEQ ID N0:69 和 SEQ ID N0:70;或(viii)SEQ ID N0:74 和 SEQ ID N0:75 和 SEQ ID N0:76;或(ix)SEQ ID N0:80 和 SEQ ID N0:81和 SEQ ID N0:82 ;或(x)SEQ ID N0:86 和 SEQ ID N0:87 和 SEQ ID NO:88 ;或(xi)SEQ ID N0:92 和 SEQ ID N0:93 和 SEQ ID NO:94 ;或

(xii)SEQ ID N0:98 和 SEQ ID N0:99 和 SEQ ID N0:100;或(xiii)SEQ ID NO:104 和 SEQ ID NO:105 和 SEQ ID NO:106。任选地，所述试剂包含选自以下氨基酸序列组成的组的重链可变区(VH)氨基酸序列:SEQ ID NO:3,SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5,SEQ ID N0:6、SEQ ID NO:7,SEQ ID N0:8、SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14和 SEQ ID NO:15。
权利要求
1.组合物，所述组合物包含: (i)抗体分子，所述抗体分子特异性结合靶细胞的细胞表面抗原，且具有能够结合Fe y RIIb的Fe结构域;和 (ii)试剂，所述试剂抑制或减少Fey RIIb与所述抗体分子的Fe结构域结合， 其特征在于，所述组合物用于治疗具有FcyRIIb表达水平升高的靶细胞的患者。
2.抑制或减少抗体分子Fe的结构域与靶细胞上的Fey RIIb之间结合的试剂的用途，其中所述抗体分子特异性结合所述靶细胞的表面抗原，并且其特征在于，所述用途为在制备用于治疗具有Fe y RIIb表达水平升高的靶细胞的患者的药物中的用途。
3.治疗具有表达FeY RIIb的靶细胞的患者的方法，所述方法包括联合施用:(i)特异性结合所述靶细胞的表面抗原的抗体分子，所述抗体分子具有能够结合Fe y RIIb的Fe结构域；和Qi)抑制或减少所述抗体分子的Fe结构域和Fe y RIIb之间结合的试剂,其特征在于，所述患者是基于其靶细胞的Fe YRIIb表达水平升高来选择的。
4.靶细胞上的Fey RIIb表达作为所述靶细胞对于使用抗体分子治疗的响应的预后标志物的用途，所述抗体分子特异性结合所述靶细胞的表面抗原，且所述抗体分子具有能够结合Fe y RIIb的Fe结构域，由此Fe y RIIb水平升高表明对使用所述抗体分子治疗的响应减少或不响应。
5.用于预测患者靶细胞对于使用抗体分子治疗的响应的方法，所述抗体分子特异性结合靶细胞表面抗原并具有能够结合Fe Y RIIb的Fe结构域，其特征在于，所述方法包括测定所述靶细胞上的Fe y RIIb表达水平，由此Fe y RIIb水平升高预示对使用所述抗体分子治疗的响应减少或不响应。
6.根据权利要 求1-3任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂抑制或减少所述革G细胞上的Fe y RIIb与所述抗体分子的Fe结构域结合。
7.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中特异性结合靶细胞表面抗原且具有能够结合Fe y RIIb的Fe结构域的所述抗体分子能够以Fe y RIIb依赖性方式被内化至所述靶细胞中。
8.根据权利要求1-3和6-7任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述抑制或减少Fe y RIIb与所述抗体分子Fe结构域的结合的试剂还抑制或减少所述抗体分子内化至所述靶细胞中。
9.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述靶细胞是癌细胞。
10.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述靶细胞是B细胞。
11.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中待治疗的所述患者为癌症患者，所述治疗为癌症治疗。
12.根据权利要求9-11任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述癌症选自非何杰金淋巴瘤，例如滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、外套细胞淋巴瘤或慢性淋巴细胞性白血病。
13.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂为下述任一者:多肽；anticalin ;肽；抗体；嵌合抗体；单链抗体；适体；darpin ;Fab、F(ab ' )2、Fv、ScFv或dAb抗体片段；小分子；天然产物；亲和体；拟肽；核酸；肽核酸分子；脂质；碳水化合物；基于模块框架的蛋白，包括锚蛋白重复序列蛋白、犰狳重复序列蛋白、富亮氨酸蛋白、三十四肽重复序列蛋白或设计的锚蛋白重复序列蛋白(DARPins)。
14.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂为特异性结合Fe y RIIb的一种或多种抗体分子。
15.根据权利要求14所述的组合物、用途或方法，其中所述一种或多种抗体分子不包含能够招募效应细胞的结构域。
16.根据权利要求15所述的组合物、用途或方法，其中所述一种或多种抗体分子为单克隆抗体分子。
17.根据权利要求1-3和6-16任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂包含含有下列⑶R的重链可变区(VH):(i)SEQID NO:29 和 SEQ ID NO:30 和 SEQ ID NO:31 ;或 (ii)SEQID NO:35 和 SEQ ID NO:36 和 SEQ ID NO:37;或(iii)SEQID NO:41 和 SEQ ID NO:42 和 SEQ ID NO:43 ;或(iv)SEQID NO:47 和 SEQ ID N0:48 和 SEQ ID N0:49 ;或(v)SEQID NO:53 和 SEQ ID NO:54 和 SEQ ID NO:55;或(vi)SEQID NO:59 和 SEQ ID NO:60 和 SEQ ID NO:61 ;或(vii)SEQID NO:65 和 SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 ;或(viii)SEQID NO:71 和 SEQ ID NO:72 和 SEQ ID NO:73;或(ix)SEQID NO:77 和 SEQ ID NO:78 和 SEQ ID NO:79;或(x)SEQID NO:83 和 SEQ ID NO:84 和 SEQ ID NO:85 ;或(xi)SEQID NO:89 和 SEQ ID NO:90 和 SEQ ID NO:91 ;或(xii)SEQID NO:95 和 SEQ ID NO:96 和 SEQ ID NO:97 ;或(xiii)SEQID NO:101 和 SEQ ID NO:102 和 SEQ ID NO:103。
18.根据权利要求1-3和6-17任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂包含含有下列CDR的轻链可变区(VL):(i)SEQID NO:32 和 SEQ ID NO:33 和 SEQ ID NO:34;或(ii)SEQID NO:38 和 SEQ ID NO:39 和 SEQ ID NO:40 ;或(iii)SEQID NO:44 和 SEQ ID NO:45 和 SEQ ID NO:46 ;或(iv)SEQ ID NO: 50 和 SEQ ID NO: 51 和 SEQ ID NO: 52;或(v)SEQID NO:56 和 SEQ ID NO:57 和 SEQ ID NO:58;或(vi)SEQID NO:62 和 SEQ ID NO:63 和 SEQ ID NO:64 ;或(vii)SEQID NO:68 和 SEQ ID NO:69 和 SEQ ID NO:70;或(viii)SEQID NO:74 和 SEQ ID NO:75 和 SEQ ID NO:76;或(ix)SEQID NO:80 和 SEQ ID NO:81 和 SEQ ID NO:82 ;或(x)SEQID NO:86 和 SEQ ID NO:87 和 SEQ ID NO:88 ;或(xi)SEQID NO:92 和 SEQ ID NO:93 和 SEQ ID NO:94 ;或(xii)SEQID NO:98 和 SEQ ID NO:99 和 SEQ ID NO: 100;或(xiii)SEQID NO:104 和 SEQ ID NO:105 和 SEQ ID NO:106。
19.根据权利要求1-3和6-18任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂包含选自以下氨基酸序列组成的组的重链可变区(VH)氨基酸序列:SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14 和 SEQ ID NO:15。
20.根据权利要求1-3和6-19任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂包含选自以下氨基酸序列组成的组的轻链可变区(VL)氨基酸序列:SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18,SEQ ID NO: 19,SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:2USEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27 和 SEQ ID NO:28。
21.根据权利要求1-3和6-20任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂包含以下⑶R氨基酸序列:(i)SEQID NO: 29 和 SEQ ID NO: 30和 SEQ ID NO: 31 和 SEQ ID NO: 32和 SEQ ID NO: 33和 SEQ ID NO:34 ;或(ii)SEQID NO:35和SEQ ID NO:36和SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:39和 SEQ ID NO:40 ;或(iii)SEQID NO:41 和 SEQ ID NO:42 和 SEQ ID NO:43 和 SEQ ID NO:44 和 SEQ IDNO:45 和 SEQ ID NO:46 ;或(iv)SEQID NO:47和SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51和 SEQ ID NO:52 ;或(v)SEQID NO: 53 和 SEQ ID NO: 54 和 SEQ ID NO: 55 和 SEQ ID NO: 56 和 SEQ ID NO: 57和 SEQ ID NO:58 ;或(vi)SEQID NO:59和SEQ ID NO:60和SEQ ID NO:61 和SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63和 SEQ ID NO:64 ;或 (vii)SEQID NO:65 和 SEQ ID NO:66 和 SEQ ID NO:67 和 SEQ ID NO:68 和 SEQ IDNO:69 和 SEQ ID NO:70 ;或(viii)SEQID NO:71 和 SEQ ID NO:72 和 SEQ ID NO:73 和 SEQ ID NO:74 和 SEQ IDNO:75 和 SEQ ID NO:76 ;或(ix)SEQID NO:77和SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:79和SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81和 SEQ ID NO:82 ;或(x)SEQID NO:83 和 SEQ ID NO:84和 SEQ ID NO:85 和 SEQ ID NO:86和 SEQ ID NO:87和 SEQ ID NO:88 ;或(xi)SEQID NO:89和SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91 和SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93和 SEQ ID NO:94 ;或(xii)SEQID NO:95 和 SEQ ID NO:96 和 SEQ ID NO:97 和 SEQ ID NO:98 和 SEQ IDNO:99 和 SEQ ID NO: 100 ;或(xiii)SEQID NO:101 和 SEQ ID NO:102 和 SEQ ID NO:103 和 SEQ ID NO:104 和 SEQID NO:105 和 SEQ ID NO:106。
22.根据权利要求1-3和6-21任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂包含以下氨基酸序列:(i)SEQID NO:3 和 SEQ ID NO: 16;或(ii)SEQIS NO:4 和 SEQ ID NO: 17;或(iii)SEQIS NO:5 和 SEQ ID NO: 18;或(iv)SEQ ID NO: 6 和 SEQ ID NO: 19;或(v)SEQID NO:7 和 SEQ ID NO:20;或(vi)SEQID NO:8 和 SEQ ID NO:21 ;或(vii)SEQID NO:9 和 SEQ ID NO:22;或(viii)SEQID NO: 10 和 SEQ ID NO:23;或(ix)SEQID NO: 11 和 SEQ ID NO:24;或(x)SEQID NO: 12 和 SEQ ID NO:25;或(xi)SEQID NO: 13 和 SEQ ID NO:26;或(xii)SEQID NO: 14 和 SEQ ID NO:27;或(xiii)SEQID NO:15 和 SEQ ID NO:28。
23.根据权利要求1-3和6-16任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂能够与权利要求17-22所述的试剂竞争，从而用于抑制或减少Fe y RIIb与所述抗体分子的Fe结构域的结合。
24.根据权利要求1-3和6-23任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂抑制或减少Fe Y RIIb信号传导。
25.根据权利要求1-3和6-24任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述试剂抑制或减少所述抗体分子被 所述靶细胞内化。
26.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述细胞表面抗原选自CD19、CD20 或 CD40。
27.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述特异性结合细胞表面抗原的抗体分子为CD20抗体。
28.根据权利要求27所述的组合物、用途或方法，其中所述CD20抗体为I型CD20抗体。
29.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述细胞表面抗原为CD20，所述特异性结合细胞表面抗原的抗体分子为I型抗体。
30.根据前述权利要求任一项所述的组合物、用途或方法，其中所述靶细胞上的Fe y RIIb表达升高是相对于对照而确定的，优选地，所述对照是Fe y RIIb在与所述靶细胞相同类型的细胞中的正常表达水平。
31.组合物，其基本上如本文说明书和附图所述。
32.用途，其基本上如本文说明书和附图所述。
33.方法，其基本上如本文说明书和附图所述。
全文摘要
本发明提供了一种治疗具有表达FcγRIIb的靶细胞的患者的方法，所述方法包括联合施用(i)特异性结合所述靶细胞的表面抗原的抗体分子，所述抗体分子具有能够结合FcγRIIb的Fc结构域；和(ii)抑制或减少所述抗体分子的Fc结构域和FcγRIIb之间结合的试剂，其特征在于，所述患者是基于其靶细胞的FcγRIIb表达水平升高来选择的。
文档编号A61P35/02GK103080131SQ201180040351
公开日2013年5月1日 申请日期2011年8月19日 优先权日2010年8月20日
发明者马克·克拉格, M·格兰尼, 阿里·鲁加尼安, 斯蒂芬·贝尔斯, P·约翰逊, 肖恩·林, 比约恩·弗伦多斯, 英格丽德·泰格 申请人:南安普敦大学