专利名称：一种增强免疫力的制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种增强免疫力的制剂及其制备方法，属于生物保健品技术领域。
背景技术：
免疫力是指人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，并处理自身衰老、损伤、死亡、变性的细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。现代免疫学认为，免疫力是人体识别和排除“异己”的生理反应。人体内执行这一功能的是免疫系统。长期以来，人们生活在一个既适合生存又充满危险的环境中，人类能够存续，是因为获得了非凡的免疫力。所以说免疫力是生物进化过程的产物。但随着社会的发展，人们的生活和工作节奏不断加快，压力也越来越大，加上生活环境的污染，导致身体机能下降，免疫力低下，极易招致细菌、病毒、真菌等感染。因此免疫力低下最直接的表现就是容易生病，因经常患病，又加重了机体的消耗，表现为体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等，生病、打针吃药便成了家常便饭，且每次生病都要很长时间才能恢复，而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。目前，市场上存在众多的增强免疫力的保健品，但大多数都效果不明显或见效比较迟缓，甚至因人体差异而无保健效果，满足不了众多消费者的需求。

发明内容
本发明的目的在于提供一种见效快且效果明显的能增强人体免疫力的制剂及其制备方法，以满足广大消费者的需求。本发明通 过下列技术方案实现:一种增强免疫力的制剂，其特征在于由下列质量份的组分组成:
铁皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份，
黄芪提取物I 1.5份，山茱萸提取物 0.2 0.5份，
丹参提取物0.1 0.4份，蜂蜜98 105份。所述铁皮石斛粉是将铁皮石斛粉碎至细度为1200目的超微粉。所述三七粉是将三七粉碎至细度为1200目的超微粉。所述黄芪提取物、山茱萸提取物、丹参提取物是市购产品，或者经过下列常规方法提取:
A、分别将所述黄芪、山茱萸、丹参各原料药粉碎后，水煎提取2 3次，每次用水量为药材总质量的8 12倍，每次水煎提取保持微沸0.5 1.5小时，合并各次提取液，过滤分离出滤液和滤渣；
B、将A步骤的滤液浓缩至Ig药材/ml，冷却、静置至室温，搅拌下缓慢加入乙醇至乙醇终浓度为60wt%，静置至沉淀完全，抽滤分离出滤液和滤渣；
C、将B步骤的滤渣用质量浓度为60%的乙醇洗涤，直至洗涤液无色，将洗涤液并入B步骤的滤液中，回收乙醇，干燥，粉碎，分别得黄芪、山茱萸、丹参的提取物一干浸膏粉。本发明的另一目的在于提供一种增强免疫力的制剂的制备方法，其特征在于经过下列各步骤:
(I)按下列质量份备料:
铁皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份，
黄芪提取物I 1.5份，山茱萸提取物 0.2 0.5份，
丹参提取物0.1 0.4份，蜂蜜98 105份。(2)将步骤(I)的细度为1200目的铁皮石斛超微粉、细度为1200目的三七超微粉，与黄芪提取物、山茱萸提取物和丹参提取物混合均匀，再加入蜂蜜搅拌均匀，即得到增强免疫力的制剂。将本发明提供的上述制剂通过常规成型工艺制备成具有增强免疫力作用的胶囊齐U、颗粒剂、片剂、散剂或丸药等口服制剂。其中，铁皮石斛:性味:味甘，性微寒；具有生津养胃、滋阴清热、润肺益肾、明目强腰之功效。三七:性味:味甘、微 苦、性温；归肝经、胃经、心经、肺经、大肠经；有止血、散血、定痛等功能。黄芪:性味:甘，性微温；归肝、脾、肺、肾经；有益气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿之功效。山茱萸:性味:酸、涩，微温；归肝、肾经；用于补益肝肾，收敛固涩、固精缩尿止带止崩、止汗，此外还有生津止渴的作用。丹参:性味:苦，微寒；归心、肝经；用于活血调经，祛瘀止痛，凉血消痈，清心除烦，养血安神。蜂蜜:性味:甘、性平；归脾、胃、肺、大肠经；用于调补脾胃、缓急止痛、润肺止咳、润肠通便、润肤生肌、解毒、主脘腹虚痛、肺燥咳嗽、肠燥便秘、目赤、口疮、溃疡不敛、风疹瘙痒、水火烫伤、手足裂。本发明提供的药物的药理作用:铁皮石斛具有增强免疫功能、促进消化、护肝利胆、抗风湿、降低血糖血脂、抗肿瘤、保护视力、滋养肌肤、抗衰老之功。三七具有良好的止血功效、显著的造血功能；能加强和改善冠脉微循环，扩张血管的作用；有较强的镇痛作用，具有抗疲劳、提高学习和记忆能力的作用；抗炎症作用；具有免疫调节剂的作用，能使过高或过低的免疫反应恢复到正常，但不干扰机体正常的免疫反应；抗肿瘤作用；抗衰老、抗氧化作用；降低血脂及胆固醇作用。黄芪有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用；能消除实验性肾炎蛋白尿，增强心肌收缩力，调节血糖含量；黄芪不仅能扩张冠状动脉，改善心肌供血，提高免疫功能，而且能够延缓细胞衰老的进程。山茱萸用于肝肾不足，头晕目眩，耳鸣，腰酸；能固经止血，可用治妇女体虚、月经过多等症；有抗糖尿病、抗菌的作用，对失血性休克、心功能及血液动力学的作用明显。丹参具有活血散淤、消肿止血、消炎止痛、调经止痛、扩张冠状动脉、改善心肌缺血状况、降低血压、安神静心、降血糖和抗菌等功效，对月经不调，经闭痛经，症瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠，肝脾肿大，心绞痛等病症有一定的疗效；丹参还具有抗血小板凝聚、降低血液黏度及调节内外凝血系统的功能。蜂蜜对创面有收敛、营养和促进愈合作用，有润滑性祛痰和轻泻作用。本发明的各成分均为国家药材公司市售产品。本发明具备的优点和效果:该制剂适宜于免疫力低下者，具有增强免疫力的功效。能促进抗体生成细胞增殖，提高血清溶血素水平，促进腹腔巨噬细胞的吞噬功能，对体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值及脾淋巴细胞增殖转化作用、单核-巨噬细胞碳廓清和NK细胞活性无明显影响。具有见效快、效果明显、安全性高、成本低且操作简便等优点。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步说明。实施例1
(O按下列质量份的组分进行备料:
细度为1200目的铁皮石斛超微粉 12份 细度为1200目的三七超微粉 6.9份 市购的黄芪提取物1.356份
市购的山茱萸提取物0.3份
市购的丹参提取物0.228份
蜂蜜101.76份；
(2 )将步骤(I)所备组分中的铁皮石斛超微粉、三七超微粉、黄芪提取物、山茱萸提取物和丹参提取物混合均匀，再加入蜂蜜搅拌均匀，按常规成型工艺制备成具有增强免疫力作用的散剂。实施例2
(I)按下列质量份的组分进行备
料:
细度为1200目的铁皮石斛超微粉10份细度为1200目的三七超·微粉4份
市购的黄芪提取物1.5份
市购的山茱萸提取物0.5份
市购的丹参提取物0.4份
蜂蜜100份；
(2 )将步骤(I)所备组分中的铁皮石斛超微粉、三七超微粉、黄芪提取物、山茱萸提取物和丹参提取物混合均匀，再加入蜂蜜搅拌均匀，按常规成型工艺制备成具有增强免疫力作用的胶囊剂。实施例3
(O按下列质量份的组分进行备料:
细度为1200目的铁皮石斛超微粉15份 细度为1200目的三七超微粉 10份 市购的黄芪提取物1.5份
市购的山茱萸提取物0.5份
市购的丹参提取物0.4份
蜂蜜105份；
(2 )将步骤(I)所备组分中的铁皮石斛超微粉、三七超微粉、黄芪提取物、山茱萸提取物和丹参提取物混合均匀，再加入蜂蜜搅拌均匀，按常规成型工艺制备成具有增强免疫力作用的片剂；其中:
黄芪提取物、山茱萸提取物、丹参提取物经过下列常规方法提取:
A、分别将所述黄芪、山茱萸、丹参各原料药粉碎后，水煎提取2次，每次用水量为药材总质量的12倍，每次水煎提取保持微沸1.5小时，合并各次提取液，过滤分离出滤液和滤渣；
B、将A步骤的滤液浓缩至Ig药材/ml，冷却、静置至室温，搅拌下缓慢加入乙醇至乙醇终浓度为60wt%，静置至沉淀完全，抽滤分离出滤液和滤渣；
C、将B步骤的滤渣用质量浓度为60%的乙醇洗涤，直至洗涤液无色，将洗涤液并入B步骤的滤液中，回收乙醇，干燥，粉碎，分别得黄芪、山茱萸、丹参的提取物——干浸膏粉。实施例4
(O按下列质量份的组分进行备料: 细度为1200目的铁皮石斛超微粉13份细度为1200目的三七超微粉8份
市购的黄芪提取物1.0份
市购的山茱萸提取物0.4份
市购的丹参提取物0.3份
蜂蜜101份；
(2 )将步骤(I)所备组分中的铁皮石斛超微粉、三七超微粉、黄芪提取物、山茱萸提取物和丹参提取物混合均匀，再加入蜂蜜搅拌均匀，按常规成型工艺制备成具有增强免疫力作用的丸药；其中:
黄芪提取物、山茱萸提取物、丹参提取物经过下列常规方法提取:
A、分别将所述黄芪、山茱萸、丹参各原料药粉碎后，水煎提取3次，每次用水量为药材总质量的8倍，每次水煎提取保持微沸0.5小时，合并各次提取液，过滤分离出滤液和滤渣；
B、将A步骤的滤液浓缩至Ig药材/ml，冷却、静置至室温，搅拌下缓慢加入乙醇至乙醇终浓度为60wt%，静置至沉淀完全，抽滤分离出滤液和滤渣；
C、将B步骤的滤渣用质量浓度为60%的乙醇洗涤，直至洗涤液无色，将洗涤液并入B步骤的滤液中，回收乙醇，干燥，粉碎，分别得黄芪、山茱萸、丹参的提取物——干浸膏粉。为了清楚说明本发明的效果，下面将增强免疫力功能实验简介如下:
I材料和方法
1.1样品:实施例1的增强免疫力的散剂，规格:120克/瓶，置阴凉干燥处保存。人口服推荐用量为每人(成人)每日2次，每次3克，成人体重按60kg计算，折合剂量为100 mg/kg BW。1.2实验动物与分组:SPF级健康昆明种雄性小鼠240只，体重为18 22克，由广西医科大学实验动物中心繁殖，实验动物生产许可证号=SCXK (桂)2009-0002，实验动物质量合格证号:0006030。每40只小鼠为一组,共6组。免疫I组,进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验；免疫II组，进行迟发型变态反应实验；免疫III组，进行脏/体比值测定，血清溶血素测定和抗体生成细胞数测定；免疫IV VI组，分别进行碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验和NK细胞活性测定。1.3实验动物房环境条件:动物实验室为屏障系统，使用许可证号:SYXK(桂)2011-0005。动物实验室温度:22 25°C，相对湿度:55 70%。1.4剂量选择与受试物给予方式:根据人口服推荐用量，设样品低、中、高剂量组分别为500、1000、2000 mg/kg BW (分别相当于人体推荐用量的5、10、20倍)，设一个阴性对照组，每组10只动物。分别称取样品2.5,5.0、10.0g，各加纯水至IOOmL,混匀，配成25、50、100mg/mL的溶液，按0.2mL/10g Bff的体积给予相应剂量组动物灌胃，阴性对照组予以等体
积的纯水，每天灌胃一次，连续灌胃30天。1.5主要仪器与试剂:动物天平、电子分析天平、离心机、洁净工作台、二氧化碳培养箱、恒温水浴箱、显微镜、半自动生化分析仪、酶标仪等。无菌手术器械、微量注射器、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、载玻片、试管、200目筛网、计时器、血色素吸管等。RPMI1640培养液、小牛血清、2-ME、青霉素、链霉素、ConA、lmol/L的HCL溶液、异丙醇、MTT、Hank，s 液(pH 7.2 7.4)、PBS 缓冲液(Ph7.2 7.4)、台酚蓝、DNFB、丙酮、硫化钡、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、印度墨汁、0.1 %的碳酸钠、鸡红细胞、甲醇、Gimsa染液、YAC-1细胞、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶1、0.2mol/L的Tris-HCL缓冲液、1%冰醋酸、1%的NP40等。1.6实验方法
1.6.1脏器/体重比值测定:称重后处死小鼠，取出胸腺和脾脏，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。1.6.2ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)
无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’ s液的平皿中，制成细胞悬液，经200目筛网过滤。用Hank’s液洗2次，每次离心IOmin (1000 r/min)。然后将细胞悬浮于ImL完全培养液中，计数活细胞数，用RPMI1640培养液调整细胞浓 度为3 X 106个/mL。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔ImL,在其中一孔加75PL ConA液(相当于7.5Pg/mL)，另一孔作为对照，置5 %C02，37°C二氧化碳孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT (5 mg/mL) 50μ /孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入ImL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3个平行孔，用酶标仪，以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。1.6.3 二硝基氟苯诱导的小鼠DTH实验(耳肿胀法)
实验结束前5天用硫化钡将小鼠腹部皮肤脱毛约3cmX 3cm范围，用50μ DNFB溶液均匀涂抹致敏，5天后将IOPL DNFB均匀涂抹于小鼠右耳两面进行攻击，24小时后颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下8_直径的耳片、称重，以左右耳重量之差值表示DTH的程度。1.6.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)
取脱纤维的羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心10min(2000r/min)，用生理盐水将压积SRBC配成2%(v/v)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2mL。将免疫后5天的小鼠处死，取脾脏置盛有Hank’ s液的平皿内，轻轻磨碎脾脏,制成细胞悬液,经200目筛网过滤,离心IOmin(2000 r/min)，用Hank’s液洗涤2遍，最后将细胞悬浮在8mL Hank’s液中。将表层培养基(Ig琼脂糖加双蒸水至IOOmL)加热溶解后，放45 50°C水浴保温，与等量Ph7.2 7.4、2倍浓度的Hank’ s液混合,分装小试管,每管0.5mL,再向管内加入50PL10%SRBC(v/v,用SA缓冲液配制)、25PL脾细胞悬液，迅速混匀后倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，用SA缓冲液稀释的补体(1:8)加入玻片架凹槽内，继续孵育1.5h，计数溶血空斑数。用空斑数/IO6脾细胞表示抗体生成细胞数。1.6.5血清溶血素的测定(血凝法)
取脱纤维的羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心10min(2000r/min)，用生理盐水将压积SRBC配成2%(v/v)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2mL。免疫5天后，摘除小鼠的眼球，取血于离心管内，放置约lh，2000r/min离心lOmin，分离、收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝板内，每孔100 μ L，再加入IOOyL0.5% (ν/ν)的SRBC悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37°C温箱孵育3h，观察血球凝集程度。按下式计算抗体积数:
抗体积数=(SJ2S2 +3Ss......nSn)
式中1、2、3……η为对倍稀释的指数，S为凝集程度的级别。1.6.6小鼠碳廓清实验
经尾静脉给小鼠注射用生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每IOg体重注射0.1 mL，墨汁注入后立即计时,于注入墨汁后第2、10min,分别从内目此静脉丛取血20yL,加入到2 mL 0.1%Na2CO3溶液中，摇匀。以Na2CO3溶液作空白对照，以600 nm波长测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、脾脏，称重。按下式计算吞噬指数a。a=K1/3·X体重/(肝重+脾重)
式中 K=GgOD1 — IgOD2)/ (t2-t!)。1.6.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)
给小鼠腹腔注射20%(v/v，用生理盐水配制)的压积鸡红细胞悬液，每鼠lmL，间隔30min，颈椎脱臼处死小鼠，正中剪开腹壁皮肤，腹腔注入2mL生理盐水，转动鼠板IminJl出腹腔洗液lmL，平均滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，置37°C孵箱温育30min。孵毕，取出玻片于生理盐水中漂洗后晾干，用甲醇:丙酮(1:1)溶液固定，4%(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色，再用纯水漂洗、晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数。吞噬率(％ )=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数X 100%
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数
1.6.8NK细胞活性测定(LDH测定法)
将小鼠颈椎脱白处死，无菌取脾，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心IOmin(1000r/min)。弃上清，将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌纯水20秒，裂解红细胞后再加入
0.5mL 2 倍 Hank，s 液及 8mL Hank，s 液，1000r/min 离心 IOmin,用 ImL 含 10% 小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用I %冰醋酸稀释后计数(活细胞数应在95%以上)，用台酚兰染色计数活细胞数，最后用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为2X107个/mL，此为效应细胞。取传代后24h生长良好的YAC-1细胞，用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4X IO5个/mL，此为靶细胞。取靶细胞和效应细胞各100 μ L(效靶比50:1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100 μ L，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1%NP40各100 μ L。上述各项各设3个平行孔，置5%C02、37°C二氧化碳孵箱中培养4h。然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100 μ L置平底96孔培养板中，同时加入LDH基质液100 μ L，反应8分钟，每孔加入lmol/L的HCL30 μ L，在酶标仪490nm处测定光密度(OD)值。按下式计算NK细胞活性:
NK细胞活性(%) = (反应孔OD -自然释放孔OD)/(最大释放孔OD -自然释放孔0D)X100%
1.7实验数据统计:应用SPSS统计软件进行方差分析统计处理。1.8结果判定:在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。2 结果
2.1样品对小鼠体重的影响
表I 铁皮石斛增强免疫力剂的功能实验小鼠体重(
权利要求
1.一种增强免疫力的制剂，其特征在于由下列质量份的组分组成 铁皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份， 黄芪提取物I I. 5份，山茱萸提取物 O. 2 O. 5份， 丹参提取物O. I O. 4份，蜂蜜98 105份。
2.根据权利要求I所述的增强免疫力的制剂，其特征在于所述铁皮石斛粉是将铁皮石斛粉碎至细度为1200目的超微粉。
3.根据权利要求I所述的增强免疫力的制剂，其特征在于所述三七粉是将三七粉碎至细度为1200目的超微粉。
4.一种增强免疫力的制剂的制备方法，其特征在于经过下列各步骤 (1)按下列质量份备料 铁皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份， 黄芪提取物I I. 5份，山茱萸提取物 O. 2 O. 5份， 丹参提取物O. I O. 4份，蜂蜜98 105份； (2)将步骤(I)的细度为1200目的铁皮石斛超微粉、细度为1200目的三七超微粉，与黄芪提取物、山茱萸提取物和丹参提取物混合，再加入蜂蜜搅拌均匀，即得到增强免疫力的制剂。
5.
根据权利要求4所述的增强免疫力的制剂的制备方法，其特征在于将步骤(2)所得制剂按常规成型工艺制备成具有增强免疫力作用的胶囊剂、颗粒剂、片剂、散剂或丸药制剂。
全文摘要
本发明提供一种增强免疫力的制剂及其制备方法，由下列质量份的组分组成铁皮石斛粉10～15份、三七粉4～10份、黄芪提取物1～1.5份、山茱萸提取物0.2～0.5份、丹参提取物0.1～0.4份、蜂蜜98～105份。将铁皮石斛粉、三七粉、黄芪提取物、山茱萸提取物和丹参提取物混合均匀，再加入蜂蜜搅拌均匀，即得到增强免疫力的制剂。该制剂适宜于免疫力低下者，能增强人体免疫力，具有见效快、效果明显、安全性高、成本低且操作简便等优点。
文档编号A61K35/64GK103251816SQ20131019779
公开日2013年8月21日 申请日期2013年5月25日 优先权日2013年5月25日
发明者许江 申请人:云南云尚生物技术有限公司