专利名称：抑制肝癌转移的中药制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种抑制肝癌转移的中药制剂，特别是抑制肝癌转移的中药制剂及其制备方法。
背景技术：
肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)是世界第6大肿瘤，近年来HCC发病率在欧洲和美国呈上升趋势，我国为高发区。中医药防治HCC是我国治疗HCC的特色和优势，近年来复方中药制剂对HCC细胞的直接抑制，对细胞凋亡的影响，以及在提高机体免疫力等方面的分子机制研究进展迅速；复方中药制剂预防和治疗HCC的临床疗效观察研究也取得了一定的进展，现将近5年中药复方制剂防治HCC的研究进展做一综述，为提高中医药治疗早中期肝癌提供参考。原发性肝癌是世界上第六位最常见的癌症和第三位最常见的癌症死因。发展中国 家的原发性肝癌发病率和死亡率更高，我国发生的原发性肝癌就占了世界上肝癌总病例的一半以上。目前认为，乙型肝炎病毒、食物污染黄曲霉毒素BI、污染的饮用水和大量饮酒等与原发性肝癌的发生密切相关。在工业文明发达的今天，人们时刻面对各种环境压力、环境污染，水、空气以及化肥、农药、汽车尾气，食品添加剂、饮食不洁和经常食用腌制熏烤的食品、吸烟、饮酒、噪音干扰及大气放射物质等因素影响。这些各种外源性毒素通过不同途径进入人的机体、危害健康，而机体新陈代谢功能的紊乱，极其容易把代谢中产生的各种废物堆积停滞在代谢管道中，堵塞正常排泄通道，构成内源性毒素，诱发人体产生各种病状。最终会造成机体的各种功能紊乱，如内分泌失调，脂肪代谢失调、免疫系统功能下降等，导致肿瘤的发生。由于肝癌是严重威胁人类健康的一类疾病，几乎极少能够治愈。因此，肝癌学一直是医学研究的重点，寻找有效的抗肿瘤药物与方法，彻底攻克肝癌是世界医学界的重要研究课题。研究表明许多中药具有抗肝癌作用，尤其是复方，具有多种作用成分和通过多种作用途径产生抗肿瘤作用。近年来一些医学机构和医务工作者发表了较多利用中草药治疗肝病或肝癌的公开文献报道，例如
I、中国专利，名称一种抗癌消瘤排毒汤申请(专利)号CN200410038090. X申请日2004. 05. 19，公开(公告)号CN1698684公开(公告)日2005.11.23申请(专利权)人钟伟地址广东省广州市林和西路89号广州市友谊医院门诊部发明(设计)人钟伟摘要一种抗癌消瘤排毒汤，采用具有清热解毒、活血化瘀、抗癌消瘤功效的中药，其中以蟾蜍、土鳖、水蛭、斑蝥、壁虎等动物药为主药，辅以黄芪、人参、灵芝、三七、白术、三棱、莪术、桃仁、红花、蛇舌草等中草药煎制而成。本发明既可直接杀灭肿瘤细胞，破坏病灶结合，又可抗病毒、消炎、破坏肿瘤血管防止细胞转移，抗细胞突变、改善细胞信息传递途径，逆转肿瘤细胞的耐药性，同时提高机体免疫功能，从而有效治疗各种良恶性肿瘤，尤其治疗肝癌、肺癌、乳腺癌效果最佳。主权项I. 一种抗癌消瘤排毒汤，采用具有清热解毒、活血化瘀、抗癌消瘤功效的中药煎成，其特征在于它以动物药为主药，辅以其它中草药煎成，各药物的具体用量为蟾蜍5g、土鳖10g、水蛭2g、斑蝥O. 04g、壁虎6g、黄芪30g、人参10g、灵芝15g、三七10g、白术20g、三棱8g、莪术8g、桃仁10g、红花6g、蛇舌草30g。
2、中国专利，名称一种抗癌中药散剂及其制备方法申请(专利)号CN02116298.0申请日2002. 04. 01，公开(公告)号CN1448164，公开(公告)日2003.10.15申请(专利权)人杨文秀，地址黑龙江省齐齐哈尔市铁锋区铁路北局宅北纺织路18 — 2楼3 —12号发明(设计)人杨文秀摘要一种抗癌中药散剂及其制备方法，其中药散剂是由饭前服用的组方I和饭后服用的组方II组成，其组方I的组分有乳香、没药、当归、陈皮、大黄、芒硝、赤芍、皂角、土虫、甲珠等21味纯中药。其组方II的组分有人参、白术、茯苓、甘草、当归、独活、羌活、黄芪、附子等13味纯中药。其制备方法是将组方I所需纯中药按配方分别进行精选(不含芒硝)用清水漂洗后，在100°C的条件下进行烘干，通过紫外线灭菌30分钟，冷却后按配方比例混合粉碎成120目细粉，再将芒硝组份研制成120目细粉，与上述组方I药物粉碎好的细粉混合搅拌均匀后，装入胶囊(0.5g/粒)，再装入瓶中密封。组方II无芒硝，其制备方法与组方I类似。本药物具有提高机体免疫力、促进代谢，抑制或溶解癌细胞功能，对肝癌等多种癌症有较好疗效，服用方便，无毒副作用。主权项I. 一·种抗癌中药散剂，其特征是它是由饭前服用的组方I和饭后服用的组方II组成，其组分配比(重量份)如下组方I (饭前服用)乳香2. 5-3%，没药2. 5-3%，当归I. 8_2%陈皮
2.5-3 %，大黄 6. 4-6. 8 %，芒硝 4. 5-5 %赤芍 4. 5-5%，皂角 4. 5-5%，土虫 5. 4-5. 8%甲珠8-10%，白芷O. 8-1%，花粉2. 5-3%藏红花4. 5-5%，双花8-10%，木香8-10%防风 1.8-2%，白芨 8-10%，柴胡 I. 3-1. 5%萎仁 4. 5-5%，萎皮 4. 5-5%，三七 4. 5-5% ；组方II (饭后服用)人参8-9%，白术11-12%，茯苓8-9%甘草3-4%，当归3_4%，独活 4-4.5%，羌活 3-4%，黄芪 17-18%，白芍 11-12%，附子 2. 5-3%，桂枝 11-12%，巴戟 5-6%，苡仁 8-9%。3、中国专利，名称一种治疗肝硬化病证的中药组合物及其制备方法，申请(专利)号CN200910309349. 2 申请日2009. 1L05 公开(公告)号CN101869686A，公开(公告)日2010.10.27申请(专利权)人泰一和浦(北京)中医药研究院有限公司，地址北京市丰台区丰管路16号9号楼2027B发明(设计)人王峰摘要一种治疗肝硬化病证的中药组合物及其制备方法，中药组合物主要由以下原料药组成血竭、穿山甲、川芎、赤芍、白芍、茯苓、白术、桃仁、红花、灵芝、血竭、元胡、当归、三棱、莪术、陈皮、枳实、大黄、人参、生黄芪、熟地黄、葛根、龟板胶、鹿角霜、鳖甲胶、生地黄、玄参、山茱萸、乌药、枳壳、香附、陈皮、木香、沉香、厚朴、吴茱萸、薤白、九香虫。本发明中药组合物可按照常规的中药制剂方法制备成任何一种常用口服制剂。本发明可显著改善疲倦乏力、食欲减退及消化不良为主，可有恶心、厌油、腹部胀气、上腹不适、隐痛及腹泻、一般情况与营养状况较差，消瘦乏力，精神不振，重症者衰弱而卧床不起，并伴随皮肤干枯粗糙，面色灰暗黝黑，贫血、舌炎、口角炎、夜盲、多发性神经炎及浮肿以及水及电解质紊乱、门脉高压等症状，临床疗效确切，疗效显著,见效迅速。4、中国专利，申请号201110039130. 2申请日2011. 02. 17名称抑制肝癌的中药制剂及其制备方法申请(专利权)人邓鑫，地址广西壮族自治区南宁市华东路10号瑞康医院发明(设计)人邓鑫；梁健；吴发胜；张亚萍摘要本发明涉及一种抑制肝癌的中药制剂及其制备方法，其原料包括人参、黄芪、白术、龟板、白花蛇舌草、鳖甲、白芍、附子、杜仲和炙甘草等，制备方法是取人参、炙甘分别碾成粉末，再将各组分用水或乙醇提取，浓缩，合并，加入填充剂，制成固体制剂或液体制剂产品，本中药制剂攻补兼施，标本兼顾，消痛散结，共奏滋阴养血、益气复脉和调节人体免疫系统功能，对抵抗肿瘤、保持排毒管道畅通，抑制癌细胞的生长均有作用。由于本发明中药组合物基本采用了国家药典规定的药食同源药物进行组合，所以具有费用低廉、基本无毒副作用等优点
发明内容
为达到此目的，本发明人对传统中医理论进行研究，在祖传秘方和原专利201110039130. 2的基础上，加以补充和整理，挖掘并开发出一种调节内脏功能失调，费用低廉、基本无毒副作用的抑制肝癌转移的的中药制剂及其制备方法。本发明抑制肝癌转移的的中药制剂有效成分是由以下重量份数的中药原料制成的
黄芪10 — 30 ;
党参10 — 20 ;
白术5 — 15 ;
白花蛇舌草20 — 40 ;
丹参5 — 15 ;
枸杞10 — 20 ;
白芍5 — 15 ;
麦冬5 — 15 ;
龟板10 — 25 ;
鳖甲10 — 25;
陈皮5 — 15 ;
炎甘草5 — 15。
据中药文献记载，以上所述的中药各成份的分析如下
黄苗，拉丁名Leguminosae补气固表,利尿托毒,益气补中。黄苗是豆科植物,它是一味常用的中药。它的主要药理作用是“益气固表”，可以“利水”，也可以“托毒生肌”。党参，别名上党人参、防风党参、黄参、防党参、上党参、狮头参、中灵草、黄党，党参属植物，桔梗科，英文名Root of Pilose Asiabell, Pilose Asiabell Root ModerateAsiabell Root Szechwon Tangshen Root,拉丁学名Root of Pilose Asiabell,性味归经性平，味甘、微酸。归脾、肺经。具有补中益气，健脾益肺的功效。主治脾胃虚弱，食少便溏，倦怠乏力，肺虚喘咳，气短懒言，自汗，血虚萎黄，口渴。用于脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴等。《本草从新》记载“补中益气、和脾胃、除烦渴。中气微弱，用以调补，甚为平妥。”
黄芪和党参均属补气良药，但党参偏重于大补元气，回阳救逆，常用于虚脱、休克等急症，效果较好。而黄芪则以补虚为主，常用于体衰日久、言语低弱、脉细无力者。黄芪具而补而不腻的特点，若与党参，人参等补药配伍则效果更好。黄芪可单味使用，也可与其它药物配伍应用。白术，拉丁名RhizomaAtractylodis Macrocephalae,功能主治健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎。用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安。据报道，小鼠灌胃白术水煎液可防治四氯化碳所致的肝损伤，减轻肝糖原减少以及肝细胞变性坏死，促进肝细胞增长，使升高的ALT下降。白花蛇舌草(学名Hedyotis diffusa)是菌草科耳草属的植物。其中成药味苦、淡，性寒。主要功效是清热解毒、消痛散结、利尿除湿。尤善治疗各种类型炎症，在体外(相当生药6g/ml)对急性淋巴细胞型、粒细胞型、单核细胞型以及慢性粒细胞型的肿瘤细胞有较强抑制作用。丹参，别名血生根、赤参、血参、红根英文名Dan — ShenRoot拉丁文RadixSalviae Miltiorrhizae ;为双子叶植物唇形科,干燥根及根莖,功能主治祛瘀止痛,活血通经，清心除烦。用于月经不调、经闭痛经、症瘕积聚、胸腹刺痛、热痹疼痛、疮疡肿痛、肝脾肿大、心绞痛。
枸杞，别名枸杞菜、红珠仔刺、牛右力、狗牙子，是茄科枸杞属的多分枝灌木植物，英文名Barbary Wolfberry Fruit ,拉丁文Lycium chinense,具有补肾益精，养肝明目，补血安神，生津止渴，润肺止咳。治肝肾阴亏，腰膝酸软，头晕，目眩，目昏多泪，虚劳咳嗽，消渴，遗精。白苟，白苟药(学名Paeoniasterniana Fletcher in Journ.)也称白花苟药，是毛茛科芍药属植物，药理作用1、对心血管系统的作用白芍具有扩张冠状动脉，降低血压作用(d-儿茶精和没食子酸乙酯有抗血栓和抗血小板聚集作用)，2、护肝作用白芍对四氯化碳、黄曲霉毒素BI、D-半乳糖胺所致肝损伤有明显保护作用，3、解痉作用白芍对肠管和在位胃运动有抑制作用，能显著对抗催产素引起的子宫收缩，4、镇痛作用白芍能抑制小鼠扭体、撕叫、热板反应，对吗啡抑制扭体反应有协同作用，并能对抗戊四唑所致惊厥，5、抗菌作用。白芍对肝脏有保护作用，白芍提取物对D-半乳糖胺所致肝损伤和SGPT升高有明显的对抗作用，能使SGPT降低，并使肝细胞的病变和坏死恢复正常.白芍的乙醇提取物能使黄曲霉素B I引起的大鼠急性肝损伤所表现出来的乳酸脱氢酶及同功酶的总活性升高得以降低.白芍总甙可抑制四氯化碳所致小鼠血浆GPT和乳酸脱氢酶升高，并对肝脏组织噬酸性变性、坏死有一定的对抗作用.有人认为，四氯化碳所致的肝损伤是因细胞膜结构发生过氧化作用而破坏，使血中谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶升高，白芍总甙可能对肝细胞损伤具有保护作用，因此可使转氨酶降低。麦冬，又名麦门冬、沿阶草、书带草；百合科沿阶草属多年生常绿草本植物；拉丁学名O. japonicus (L. f. ) Ker-Gawl.,性味归经甘,微苦,微寒。归心、肺、胃经。功效
I.养阴清热治疗阴虚内热或热病病伤津、心烦口渴。2.润肺止咳治疗燥热伤肺所致的咳嗽、痰稠、气逆。功能主治养阴生津，润肺清心。用于肺燥干咳。虚痨咳嗽，津伤口渴，心烦失眠，内热消渴，肠燥便秘；咽白喉。治肺燥干咳，吐血，咯血，肺痿，肺痈，虚劳烦热，消渴，热病津伤，咽干口燥，便秘。龟板为龟科动物chinemys reevesii的腹甲及背甲。功用为滋肾潜阳，益肾健骨，养血补心。主治1.阴虚阳亢，阴虚内热，虚风内动。2.肾虚骨痿，囟门不合。3.阴血亏虚，惊悸，失眠，健忘。功效对免疫功能的作用，实验证明龟鹿补肾口服液及丸剂给小鼠口服，可提高其网状内皮系统的吞噬功能，显著增加吞噬指数和吞噬系数；亦有使正常及免疫抑制状态下小鼠的脾脏、胸腺增重的作用，对环磷酰胺引起的末梢白细胞减少有一定的保护作用.文献报道，龟板有抗肿瘤作用能提高机体抗肿瘤的免疫能力，其提取物对肉瘤S180、艾氏腹水瘤和腹水型肝癌有抑制作用.
鳘甲Carapax Amydae,为鳘科动物鳘Trionyx sinensis Wiegmann的背甲。性味归经咸，微寒。归肝、肾经。功能主治滋阴潜阳，软坚散结，退热除蒸。用于阴虚发热，劳热骨蒸，虚风内动，经闭，癥瘕，久疟疟母。有报告指出，鳖原粉末及鳖甲粉末对移植实质性癌有抑制作用，能使癌肿瘤直径显著减小，肿瘤重量显著减轻；但对腹水癌则无显著作用.亦有报告指出，用以鳖甲为主的复方中药鳖甲散丸药的水溶液上清液，给癌细胞定量接种后，观察其对癌细胞生长的作用情况，结果表明鳖甲散上清液对小鼠淋巴细胞白血病(L1210)、HL-60、和胃癌803细胞生长均有抑制作用。陈皮，为芸香科植物，异名橘皮《神农本草经》，黄橘皮《鸡峰普济方》，红皮《汤液本草》，橘子皮《滇南本草》，广橘皮《得宜本草》。拼音:Chenpi英文Dried TangerinePeel拉丁文Pericarpium Citri Reticulatae性味、归经辛、苦,温。归牌、肺经。陈皮的功效I.用于胸腹胀满等症。橘皮辛散通温，气味芳香，长于理气，能入脾肺，故既·能行散肺气壅遏，又能行气宽中，用于肺气拥滞、胸膈痞满及脾胃气滞、脘腹胀满等症。常与木香、枳壳等配伍应用。2.用于湿阻中焦、脘腹痞胀、便溏泄泻，以及痰多咳嗽等症。橘皮苦温燥湿而能健脾行气，故常用于湿阻中焦、脘腹胀闷、便溏苔腻等症，可配伍苍朮、厚朴同用。又善于燥湿化痰，为治湿痰壅肺、痰多咳嗽的常用要药，每与半夏、茯苓同用。3.用于脾虚饮食减少、消化不良，以及恶心呕吐等症。本品燥湿而能健脾开胃，适用于脾胃虚弱、饮食减少、消化不良、大便泄泻等症，常与人参、白朮、茯苓等配合应用。因其既能健脾，又能理气，故往往用作补气药之佐使，可使补而不滞，有防止壅遏作胀作用。此外，橘皮又能和中，可治胃失和降、恶心呕吐，若胃寒呕吐，可与生姜同用；胃热呕吐，又可配伍竹茹、黄连等药同用。陈皮的作用具理气降逆、调中开胃、燥湿化痰之功。主治脾胃气滞湿阻、胸膈满闷、脘腹胀痛、不思饮食、呕吐秽逆、二便不利、肺气阻滞、咳嗽痰多，亦治乳痈初起。经多年研究，现已知陈皮具有许多药理作用。炙甘草(RADIX GLYCYRRHIZAE PREPARATA)系豆科植物，炙甘草是用蜜烘制的甘草。功能与主治补脾和胃，益气复脉。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心动悸，脉结代，可解附子毒。主要功效补阴、补血、阴阳并调。以上诸药合用，攻补兼施，消痛散结，标本兼顾，共奏滋阴养血、益气复脉、活血止痛和调节消化系统和人体免疫系统功能，对抵抗肿瘤、保持排毒管道畅通，抑制癌细胞的生长均有作用。中草药治疗恶性肿瘤，足整体治疗相辨证施治，也就是整体与局部相结合、既看到机体对病邪的抵御能力，又看到局部病变对机体的影响，在辨病与辨证的基础上，通过一些针对性强的特殊药物的配伍组方，恰到好处地进入机体，调节气血、阴阳、津液的平衡。药物分子经过物理反应和化学反应进入全身，有的吸附在细胞的表面、腐蚀围杀癌细胞，这可称作“包围战”;有的药物组方，通过不同的作用，分割癌细胞，再各个击破，这可称作“歼击战”；有的通过药物本身的作用，附以协同作用的药物，可破坏癌细胞的血液循环，解除和改变恋体局部的血运，控制癌细胞的增殖，这可称作“策反战”;有的结合机体状况，通过药物来调动、增强、提高机体免疫细胞的功能去吞噬癌细胞，这可称作“免疫战”;有的通过药物的性味，加用局部用药，用温度去破坏崩细胞的结构和生成，这可称作“干扰战”;有的药物能调节气血，能使气血运行正常，隔离癌细胞，使之排出体外，这可称作”驱逐战”;有的能影响癌细胞内酶使其成为“端脂”，使癌细胞染色体、基因坏死，这可称作“破袭战”;有的能帮助免疫细胞染色体、基因复原，这可称作“拉拢战”;有的能使气血能量平均分配.饥饿癌细胞，使之恢复为正常细胞，这可称作“平衡战”。所以，本发明的中药制剂遵循了祖国医学整体现念和辨证施治原则，从分子水平研究探讨恶性肿瘤发生发展的规律.并采用活血化瘀、软坚散结、清热解毒、扶正培本等具有中医药特色的“作战”手段，做到“用药如用兵”，才能“知己知彼，百战百胜”，在征战癌症的攻坚战中，得心应手，建立奇功，使中医药显示出不可低估的巨大作用。本发明的中药制剂与本申请人的中国专利201110039130. 2申请日2011. 02. 17名称抑制肝癌的中药制剂及其制备方法的技术内容相比，药物增加了几种党参、枸杞、麦冬、丹参和陈皮。使得整个中药具有补中益气，健脾益肺，养阴生津，润肺清心，祛瘀止痛， 活血通经，益肝利脾、辛散通温，气味芳香，长于理气，能入脾肺等作用，控制住了肝癌继续生长，就可以抑制癌细胞向其它器官转移蔓延。本发明抑制肝癌转移的的中药制剂可以加入符合医药标准的填充剂或溶液，制成医学上的固体制剂或液体制剂，例如片剂、胶囊、颗粒、丸剂、口服液或糖浆剂等，以下分别介绍几种剂型的制备方法
所述的固体制剂制备方法如下
取党参碾成粉末，备用；将龟板、鳖甲置于铜锅中，加水淹没过面，用文火加热，保持微沸5 — 12小时，倾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出胶汁为度，然后过滤澄清，合并各次所煎胶液，过滤除去沉淀杂质，浓缩收胶，将过滤后的胶汁置铜锅中用文火加热浓缩，不断搅拌，以防焦化，待浓缩至“挂旗”后收胶，将胶倾入凝胶盘内，使之自然冷凝，为加快胶汁凝固，也可加入5%-10%阿胶，取出凝固好的胶块，用切胶刀切成小片，备用。黄芪、白术、白花蛇舌草、丹参、枸杞、白芍、麦冬、陈皮和炙甘草用体积浓度为50 — 90%的乙醇提取两次，合并提取液，备用；过滤后浓缩，然后回收乙醇，加入龟板、鳖甲胶汁、并浓缩，得干浸膏，再与上述的党参粉末合并，混合均匀，加入填充剂，制成胶囊或颗粒剂、片剂，得到产品；或者加入蔗糖或蜂蜜，混合均匀，做成丸剂。以上所述的口服液的制备方法是取党参、炙甘草，分别加水煮2-4小时，备用；将龟板、鳖甲置于铜锅中，加水淹没过面，用文火加热，保持微沸5 — 12小时，倾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出胶汁为度，然后过滤澄清，合并各次所煎胶液，过滤除去沉淀杂质，再浓缩收胶，将过滤后的胶汁置铜锅中用文火加热浓缩，不断搅拌，以防焦化，待浓缩至“挂旗”后收胶，将胶倾入凝胶盘内，使之自然冷凝，为加快胶汁凝固，也可加入5 %-10 %阿胶，取出凝固好的胶块，用切胶刀切成小片，备用。黄芪、白术、白花蛇舌草、丹参、枸杞、白芍、麦冬和陈皮用体积浓度为50 - 90%的乙醇提取两次，合并提取液，备用；过滤后回收乙醇，浓缩，然后，加入龟板、鳖甲胶汁、并浓缩，得干浸膏，再与上述的党参、炙甘草溶液合并，加入适量食用防腐剂，和加入干浸膏总药物重量3 — 5倍的纯净水，制成口服液，得到产品。本发明的有益效果是
本发明治疗早中期肝癌的中药制剂攻补兼施，标本兼顾，消痛散结，共奏滋阴养血、益气复脉和调节人体免疫系统功能，抑制癌细胞的生长均有作用。
具体实施例方式以下
具体实施例方式 实施例一
取党参10千克碾成粉末，备用；将10千克龟板、10千克鳖甲置于铜锅中，加水淹没过面，用文火加热，保持微沸5 - 12小时，倾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出胶汁为度，然后过滤澄清，合并各次所煎胶液，过滤除去沉淀杂质，浓缩收胶，将过滤后的胶汁置铜锅中用文火加热浓缩，不断搅拌，以防焦化，待浓缩至“挂旗”后收胶，将胶倾入凝胶盘内，使之自然冷凝，为加快胶汁凝固，也可加入5% -10%阿胶，取出凝固好的胶块，用切胶刀切成小片，备用。黄苗10千克、白术5千克、白花蛇舌草20千克、丹参5千克、枸杞10千克、白芍5千克、麦冬5千克、陈皮5千克和炙甘草5千克用体积浓度为50 - 90%的乙醇提取两次，合并提取液，备用；过滤后浓缩，然后回收乙醇，加入龟板、鳖甲胶汁、并浓缩，得干浸膏，再与上述的党参粉末合并，混合均匀，加入填充剂，制成胶囊。 实施例二
取党参12千克碾成粉末，备用；将13千克龟板、13千克鳖甲置于铜锅中，加水淹没过面，用文火加热，保持微沸5 - 12小时，倾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出胶汁为度，然后过滤澄清，合并各次所煎胶液，过滤除去沉淀杂质，浓缩收胶，将过滤后的胶汁置铜锅中用文火加热浓缩，不断搅拌，以防焦化，待浓缩至“挂旗”后收胶，将胶倾入凝胶盘内，使之自然冷凝，为加快胶汁凝固，也可加入5% -10%阿胶，取出凝固好的胶块，用切胶刀切成小片，备用。黄芪14千克、白术7千克、白花蛇舌草25千克、丹参7千克、枸杞13千克、白芍7千克、麦冬7千克、陈皮7千克和炙甘草7千克用体积浓度为50 - 90%的乙醇提取两次，合并提取液，备用；过滤后浓缩，然后回收乙醇，加入龟板、鳖甲胶汁、并浓缩，得干浸膏，再与上述的党参粉末合并，混合均匀，加入填充剂，制成片剂。实施例三
取党参15千克碾成粉末，备用；将15千克龟板、15千克鳖甲置于铜锅中，加水淹没过面，用文火加热，保持微沸5 - 12小时，倾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出胶汁为度，然后过滤澄清，合并各次所煎胶液，过滤除去沉淀杂质，浓缩收胶，将过滤后的胶汁置铜锅中用文火加热浓缩，不断搅拌，以防焦化，待浓缩至“挂旗”后收胶，将胶倾入凝胶盘内，使之自然冷凝，为加快胶汁凝固，也可加入5% -10%阿胶，取出凝固好的胶块，用切胶刀切成小片，备用。黄芪18千克、白术10千克、白花蛇舌草28千克、丹参10千克、枸杞15千克、白芍10千克、麦冬10千克、陈皮10千克和炙甘草10千克用体积浓度为50 - 90%的乙醇提取两次，合并提取液，备用；过滤后浓缩，然后回收乙醇，加入龟板、鳖甲胶汁、并浓缩，得干浸膏，再与上述的党参粉末合并，混合均匀，加入填充剂，制成颗粒剂。实施例四
取党参18千克碾成粉末，备用；将20千克龟板、20千克鳖甲置于铜锅中，加水淹没过面，用文火加热，保持微沸5 - 12小时，倾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出胶汁为度，然后过滤澄清，合并各次所煎胶液，过滤除去沉淀杂质，浓缩收胶，将过滤后的胶汁置铜锅中用文火加热浓缩，不断搅拌，以防焦化，待浓缩至“挂旗”后收胶，将胶倾入凝胶盘内，使之自然冷凝，为加快胶汁凝固，也可加入5% -10%阿胶，取出凝固好的胶块，用切胶刀切成小片，备用。黄芪25千克、白术12千克、白花蛇舌草30千克、丹参12千克、枸杞18千克、白芍12千克、麦冬12千克、陈皮12千克和炙甘草12千克用体积浓度为50 — 90%的乙醇提取两次，合并提取液，备用；过滤后浓缩，然后回收乙醇，加入龟板、鳖甲胶汁、并浓缩，得干浸膏，再与上述的党参粉末合并，混合均匀，加入填充剂，制成丸剂。实施例五
取党参20千克碾成粉末，备用；将25千克龟板、25千克鳖甲置于铜锅中，加水淹没过面，用文火加热，保持微沸5 - 12小时，倾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出胶汁为度，然后过滤澄清，合并各次所煎胶液，过滤除去沉淀杂质，浓缩收胶，将过滤后的胶汁置铜锅中用文火加热浓缩，不断搅拌，以防焦化，待浓缩至“挂旗”后收胶，将胶倾入凝胶盘内，使之自然冷凝，为加快胶汁凝固，也可加入5% -10%阿胶，取出凝固好的胶块，用切胶刀切成小片，备用。黄芪30千克、白术15千克、白花蛇舌草40千克、丹参15千克、枸杞20千克、白芍15千克、麦冬15千克、陈皮15千克和炙甘草15千克用体积浓度为50 — 90%的乙醇提取两次，合并提取液，备用；过滤后浓缩，然后回收乙醇，加入龟板、鳖甲胶汁、并浓缩，得 干浸膏，混合均匀，加入适量食用防腐剂，和加入干浸膏总药物重量5倍的纯净水，制成口服液，得到产品。本发明中药制剂抑制肝癌试验
以下是本发明中药制剂的应用实例
一、本发明实施例做出的本发明药物进行的体外抗肿瘤实验
摘要目的用体外细胞培养法研究本发明药物提取物对人肝癌细胞株Hele7404生长的抑制情况。结果本发明药物提取物对人肝癌细胞株Hele7404的生长有抑制作用。药物浓度低于(O. 5Pg/ml)，对肿瘤细胞的作用不明显。随着药物浓度升高至5. OPg/ml，肿瘤细胞株的生长受到明显抑制。结论本发明药物提取物在体外具有抑制肿瘤作用。
材料与方法 I材料
1.I本发明药物提取物浓缩部分，药液临用前用DMSO溶解后无菌过滤备用。I. 2肿瘤细胞株人肝癌细胞株Hele7404由广西医科大学药理教研室提供。I. 3试剂MTT (四甲基噻唑蓝)为德国Sigma公司产品，批号:020609 ；FBS (胚胎牛血清)为美国Hyclone公司产品，批号0405 ；RPMI1640和DMEM培养基为美国GIBCO公司产品，批号1120708和0311 ；Trypsin (胰蛋白酶)由天津市灏洋生物制品有限责任公司提供，批号200503 ；DMS0 (二甲基亚砜)由天津汇英化学试剂有限公司提供，批号20030526。I. 4实验仪器CO2培养箱(ThermO Forma),美国产。倒置显微镜(Olympus),日本产。酶标仪(Biocell)，澳地利产。2实验方法
2.I MTT法参考文献报道，在96孔培养板(NUNC)中每孔加入200 μ I (含有5000个/ml肿瘤细胞)含10% FBS的RPMI1640培养基的细胞悬液(除NG108-15细胞用含10% FBS的DMEM培养基外)，置37°C 10%C02培养箱中培养24h后，实验组分别加入最终浓度O. 5 Ug/ml、I. Oug/ ml、5. Oug/ ml的蒲葵提取物的培养液,对照组则加入等浓度等体积溶剂的培养液，每组4孔，重复4次。置37°C，10%C02培养箱培养5天后，弃去上清液，加入200 μ I/孔新鲜配制的含O. 2mg/ml MTT的无血清培养液，37°C继续培养4h.弃上清液，加入200 μ IDMSO,振荡混匀后，在酶标仪上以波长为550nm，参比波长为450 nm测定OD值.计算结果·
按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率.
肿瘤细胞生长抑制率％ = (I-实验组平均OD值/对照平均OD值)X 100%
2.2集落形成法取对数生长期的贴壁细胞(Hela、SGC790UB16)用10%FBS的RPMI1640培养液和NG108 - 15用10%FBS的DMEM培养液配成500个/ml细胞悬液，接种于35mm培养皿(NUNC)中，4个为一组，每个2ml;实验组加入终浓度为O. 5 ug /ml、I. Oug/ ml >5. Oug/ ml的蒲葵提取物的细胞悬液200ul。对照组加入等浓度等体积溶剂的细胞悬液200ul.置5%0)2的37°〇培养箱中静置7d;弃去培养液，用瑞氏_姬姆萨染色后计数含50个细胞以上的细胞集落。对悬浮细胞(L1210和P388DJ用10%FBS的RPMI1640 培养液配成1000个/ml细胞悬液，置37°C预温；取35mm培养皿(NUNC)，4个为一组，实验组分别加入浓度为O. 5 ug /ml、1.0ug/ ml >5. Oug/ ml的蒲葵提取物,对照组则加入等体积的溶剂；取已融化的5%琼脂液I份，加入到9份37°C含15%FBS的新鲜RPMI1640培养液中，摇匀加入平皿中，每个1ml，置室温使其凝固；取预温的细胞悬液按每9. 4ml加5%琼脂0.6ml的比例混匀，加到已铺底层琼脂的平皿中，每个lml，置37°C、5%C02培养箱中培养7d;在显微镜下计数含50个细胞以上的细胞集落。按下列公式计算药物对细胞集落形成抑制百分率
肿瘤细胞集落形成抑制百分率％ = (I-实验组细胞集落数/对照组细胞集落数)X100%
2.3生长曲线法将Hele7404细胞接种于含10% FBS的RPMI1640培养基，NG108-15贝U用含10%FBS的DMEM培养基，分别配成IOX IO3个/ml的细胞悬液，然后加入96孔培养板中，每孔200μ1,实验组加入最终浓度为O. 5 ug /ml、1.0ug/ ml >5. Oug/ ml的提取物，对照组加入等浓度等体积溶剂.每种细胞每浓度设三孔，重复4次，置10%C0237°C温箱中培养，然后按0d、ld、2d、3d、4d、5d、6d、7d各取样40μ 1，加入0. 4%台盼蓝液10μ 1，计数活细胞数。每孔计数4次，取均值，再累计3孔均值，根据细胞浓度值的对数值与时间作用绘成图，即为细胞生长曲线.
2.4统计学处理以SPSS 10. O统计软件分析，两组间的均数比较采用t检验。3.实验结果
结果显示，提取物对人肝癌细胞株Hele7404有抑制作用。
集落形成法观察不同浓度蒲葵提取物对肿瘤细胞抑制作用。结果见表2。表I不同浓度提取物对肿瘤细胞抑制的影响(％)
提取物浓度(Mg/ ml)
组别---
0.51.05.0
Hele 4040,85±2J334J2±7.04A 64.3
注:与对照组比较Ap〈0. 05，AAP<0. 01,AAAP<0. 005，AAAAP<0. 001
由图可知，蒲葵提取物作用于肿瘤细胞株P388D1后，通过药物组与对照组比较发现，浓度为I. OPg/ ml时己能看出药物对肿瘤细胞有着较明显的抑制杀伤作用。当药物浓度为5. 0μδ/ ml时，细胞培养到第3天己表现出对细胞有较强的抑制杀伤作用，到第4天以后细胞大量死亡。4、讨论
本实验通过采用实验方法，研究提取物在体外抗肿瘤作用，其抑制率随着药物浓度增加而相应增高。细胞生长曲线法结果所显示结果与MTT法和集落形成法的结果相吻合。提示提取物在体外具有抗肿瘤细胞作用。MTT法、集落形成法、生长曲线法和Hoechst 33258荧光染色法是观察体外抗肿瘤活性的常用方法，尤其MTT法快速简便，常作为抗肿瘤药的体外初筛试验，本发明采用几种实验方法的联合应用增加了实验结果的可靠性。对恶性肿瘤目前尚无十分理想的治疗药物。近年来，从天然植物中寻找新的抗肿·瘤药物己成为新药研究的主要发展
二、探讨本发明中药制剂对肝癌的抑制作用。本发明人实验发现，用黄芪、党参、白术、白花蛇舌草、丹参、枸杞、白芍、麦冬、龟板、鳖甲、陈皮和炙甘草制成的制剂可对小鼠活体腹水H22肝癌细胞有较强的抑制作用。I材料与方法
I. I昆明种小鼠，6周龄，21只，雄性BALB / C小鼠，随机分为3组，每组7只，体重18 22 g,购于广西医科大学实验动物中心。I. 2细胞培养
腹水型H22肝癌细胞株，由广西中医学院提供，培养于含10%胎牛血清的RPMI1640 (GIBC0公司)培养液中，置于CO2浓度为5%、相对湿度为95%、温度为37°C的细胞培养箱中培养。细胞传代后培养48、96 h的贴壁细胞为对数生长期细胞，取传代后48 h细胞。I. 3药物，(A组)上述实施例5的药物。(B组)用黄芪党参水提取液，黄芪党参各100克加水1000克煮2小时；(C组)I %乙醇，
I. 4试验方法，记录接种前每只小鼠体重。接种对数生长期H22细胞于小鼠右侧腹股沟皮下，接种量约6. 0X106 /只。自接种第6日起，(C组)对照组5%葡萄糖生理盐水溶液O. 2 O. 5 mL瘤内注射D6，8，10，12。实施例5的药物(A组)I g / mL O. 2 O. 5 mL瘤内注射D6，8，10，12 ;，(B组)用黄芪党参水提取液I g / mL O. 2 O. 5 mL瘤内注射D6，8，10，12 ;自接种第4日起每目测量小鼠右侧腹股沟皮下移植瘤大小。瘤体体积V/4XaXb2 (a为长径，b为短径)。接种第12日，小鼠称重后脱颈髓处死荷瘤小鼠，剥离瘤体后称取瘤重。抑瘤率=(对照组瘤重一给药组瘤重)/对照组瘤重X 100% :协同系数=对照组瘤重X联合用药组瘤重/ (单药组①瘤重X单药组②瘤重)；当抑瘤率>40%，P〈0. 05判定有抗肿瘤作用；当协同系数〈I时为有协同性。I. 5统计学方法
所有数据均用(Xb)表示，采用Microsoft excel软件对数据做统计学处理,采用方差分析。2结果(见表I)
表I本发明中药制剂对H22移植瘤的影响(C组，空白)
权利要求
1.一种抑制肝癌转移的的中药制剂，其特征在于其主要有效成分是由以下重量份数的中药原料制成的 黄芪10 — 30 ; 党参10 — 20 ; 白术5 — 15 ; 白花蛇舌草20 — 40 ; 丹参5 — 15 ; 枸杞10 — 20 ; 白芍5 — 15 ; 麦冬5—15; 龟板10 — 25 ; 鳖甲10 — 25 ; 陈皮5 — 15 ; 炎甘草5 — 15。
2.如权利要求I所述的抑制肝癌转移的中药制剂的制备方法，其特征在于取党参碾成粉末，备用；将龟板、鳖甲置于铜锅中，加水淹没过面，用文火加热，保持微沸5 — 12小时，倾出煎液，先后共煎3-5次，直至充分煎出胶汁为度，然后过滤澄清，合并各次所煎胶液，过滤除去沉淀杂质，浓缩收胶，将过滤后的胶汁置铜锅中用文火加热浓缩，不断搅拌，以防焦化，待浓缩至“挂旗”后收胶，将胶倾入凝胶盘内，使之自然冷凝，为加快胶汁凝固，也可加入5%-10%阿胶，取出凝固好的胶块，用切胶刀切成小片，备用；黄苗、白术、白花蛇舌草、丹参、枸杞、白芍、麦冬、陈皮和炙甘草用体积浓度为50 - 90%的乙醇提取两次，合并提取液，备用；过滤后浓缩，然后回收乙醇，加入龟板、鳖甲胶汁、并浓缩，得干浸膏，再与上述的党参粉末合并，混合均匀，加入填充剂，制成胶囊或颗粒剂、片剂，得到产品；或者加入蔗糖或蜂蜜，混合均匀，做成丸剂。
3.权利要求I所述的抑制肝癌转移的中药制剂在制备治疗肝癌的药物方面的应用。
全文摘要
本发明公开了一种抑制肝癌转移的中药制剂及其制备方法，其主要原料包括黄芪、党参、白术、白花蛇舌草、丹参、枸杞、白芍、麦冬、龟板、鳖甲、陈皮和炙甘草 等，制备方法是取党参碾成粉末，再将各组分用水或乙醇提取，浓缩，合并，加入填充剂，制成固体制剂或液体制剂产品，本中药制剂攻补兼施，标本兼顾，消痛散结，共奏滋阴养血、益气复脉和调节人体免疫系统功能，抑制癌细胞的生长均有作用。
文档编号A61K35/56GK102940773SQ20121051113
公开日2013年2月27日 申请日期2012年12月4日 优先权日2012年12月4日
发明者邓鑫, 梁健 申请人:邓鑫