专利名称：一种抽提蛋黄抗体的方法
技术领域：
本发明属于禽、畜免疫抗体及制法。
利用免疫抗体防治人畜，或禽类的某些传染性疾病，已有相当长的历史，传统的抗血清生产是利用小白鼠、免、马、牛、羊和猪等动物通过一定的免疫和加强免疫后，收集其血清而制得的。由于经疫苗免疫接种后的禽群中，相应疾病仍时有发生，作为疫苗的补充，国内在80年代后期，开始普通使用高免蛋黄液，但这类高免蛋黄液均由非SPF母鸡蛋制备，因而其广泛使用的结果，不可避免的带来人为播散病源，经蛋垂直传染性病原的传播，如沙氏杆菌、大肠杆菌、白血病毒等，同蛋黄本身含有的大量脂肪、蛋白质等成份，注入禽体后也可能引起类似过敏反应的“蛋黄病”问题，因此抽提蛋黄抗体液的研究就提到日程上来了，国内外对蛋黄抗体抽提方法大部分目的是想寻找血清的TgG替代品，要求纯度高，因而一般产量低，有一小部分蛋黄抗体的抽提方法也是需在低温下进行，操作繁杂，设备要求较高，成本较高，虽然有些在现场应用，但因设备、操作及成本问题而不能推广。
本发明的目的是根据蛋黄抗体的特点，提出一种适于大量生产、操作简便、成本低的蛋黄抽提抗体的制备方法，并取得满意结果。
本发明所提供的抽提方法的实施过程是这样的常规清洁消毒高免蛋壳表面后，去壳取蛋黄，尽可能除去粘附于蛋黄膜上的蛋白，反复用灭菌水漂洗蛋黄三次，沥干后剌破蛋黄膜，收集蛋黄，按蛋黄∶稀释液＝1∶5(体积比)的比例加入0.1M、PH为5.5的NaCl溶液，充分搅拌均匀后，边搅拌，边缓慢加入60％的聚乙二醇的贮备液，使终浓度为3.5％，充分混匀后，于室温18-20℃下静置过夜，用棉花和纱布过滤，除去游离脂肪及沉渣，收集滤液用滤膜孔径分别为0.8μm和0.45μm组成的正压双联过滤器过滤上述滤液以除去细小杂质和细菌，最后使用截留分子量为10000的超滤器除去残留的聚乙二醇和其它盐类，并适当浓缩，然后作常规抗体活性检查，微生物检查和安全性试验，产品分装后得到合格成品。本发明提供的抗体抽提方法与现有技术中沿用的抽提方法具有如下的优点和特点1、蛋黄抗体的有效提取率约为83.5％-95％抽提物的总蛋白浓度为3.70％-4.23克％，其中球蛋白约占总蛋白的43.9％-52.9％(采用双缩脲法测定)，抗体活性符合要求。
2、产品不含活的病原微生物，安全性高，无任何毒、副作用。
3、该方法全过程都可在室温下操作，设备要求不高，操作简便，成本较低，易于组织大批量生产。
实施例取鸡蛋去壳取黄，尽可能除去附粘于蛋黄膜上的蛋白，然后将蛋黄置于灭菌蒸馏水中，反复洗涤三次，以除去蛋黄膜上的蛋白，沥干后刺破蛋黄膜，收集蛋黄，将蛋黄充分搅拌均匀后，加入蛋黄匀桨5倍体积的0.1M、PH为5.5的NaCl稀释液，制成稀释蛋黄液，然后缓慢加入60％聚乙二醇贮备液，使终浓度为3.5％，充分混匀后于室温18-20℃下静置过夜，然后用棉花和纱布过滤，除去沉渣，收集滤液，再用滤膜孔往分别0.8μm和0.45μm的正压双联过滤器，过滤上述滤液，除去细小杂质和细菌，再用截留分子量为10000的超滤器除去残留的聚乙二醇和其它盐类，并适当浓缩，进行抗体活性检查和分装成为产品，经用双缩脲法测定，产品中抗体有效提取率平均为90％以上，抽提物总蛋白浓度平均为3.97％，球蛋白占总蛋白平均48.46％，抗体活性符合要求。
权利要求
1.一种禽畜蛋黄免疫抗体的抽提方法，该方法由蛋黄制成稀释液，其特征在于蛋黄匀浆中加入匀浆体积5倍的0.1MPH5.5氯化钠稀释液，然后加入60％浓度的聚乙二醇使终浓度为3.5％于室温下静置24小时，然后通过三次过滤除去沉渣和细菌，便得到抗体成品。
2.根据权利要求1中所述的抗体抽提方法，其特征在于过滤的步骤为先用棉花或纱布过滤沉渣，再用0.8μm和0.45μm组成的正压双联过滤器，除去细小杂质和细菌，最后，使用截留分子量为10000的超滤器除去残留的聚乙二醇和其盐类，过滤全过程均于室温下进行。
全文摘要
本发明属于禽、畜免疫抗体制法。国内外抽提蛋黄抗体的方法大部分是以实验室内的免疫学试验为目的,而抽提其中的IgG,因而要求纯度高,操作繁杂,且产量低,要求在低温下操作,因而难以生产推广。本发明提供的蛋黄抗体抽提方法,可在常温下,使用常规稀释液和置换液,操作简便。因而易于组织规模生产。
文档编号A61K39/395GK1196957SQ9710888
公开日1998年10月28日 申请日期1997年4月18日 优先权日1997年4月18日
发明者凌育燊, 郭予强, 杨连楷, 李健东, 罗映霞, 詹乐群, 余双祥, 邱深本, 朱国锋 申请人:广东省家禽科学研究所