专利名称：拮抗癌必消药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种拮抗癌必消药物，具体讲是一种以天然药物为药用有效成份的口服剂型拮抗癌必消药物。
背景技术：
肿瘤，特别是恶性肿瘤是目前尚无特效和可靠治疗方法的常见疾病之一。采用以天然药物为有效成份的药物治疗是各种治疗方式中的一种常用方法。提出和使用各种天然药物或其组合物已有不少报导。如在公开号为CN 1095274A的中国专利文献中提出的就是一种由包括甘遂、人参等数十种天然药物成份组成的抗癌药物。

发明内容
本发明的目的是提供一种经多种试验证明可对多种肿瘤疾病有治疗效果的由天然药物组成的药物组合物，其至少可以为医生和/或患者在肿瘤疾病，特别是在恶性肿瘤的治疗中提供一种有价值的选择。
本发明拮抗癌必消药物，由甘遂、人参、黄芪、白花蛇、芒硝、大黄和大枣为有效药用成份，以及制药允许的辅助添加性成份组成，其重量百分比为甘遂6，人参20，黄芪15，白花蛇9，芒硝20，大黄15，大枣15，制剂允许的辅助添加成份适量。
本发明上述药物的制备较为简单，一般可以将已制备成粉末状的各生药原料按所说的组成比例制成如胶囊剂、片剂、丸剂等常用的口服剂型，即可供使用。如，制备成供临床使用的胶囊制剂时，可以使其成为每粒胶囊含250毫克有效药用成份的形式。上述药物组成中所说的制药允许的辅助添加性成份，根据对药物所制备成的剂型的不同，其具体成份和/或用量可按相应药物剂型的常规方式和制备需要进行选择和操作，无需有其它的特殊处理和要求。
根据中医理论对肿瘤疾病的病理病因分析，癌瘤形成，是与痰凝湿聚，气滞血瘀，或热毒内蕴，或热毒聚结，或正虚邪实，气结瘀阻有关。气行则血行，气虚则血瘀，水湿蕴结，煎熬成痰。肺、脾、肾、肝等运化功能失调导致水湿内泛，加之癌毒久居，邪盛正虚，成聚成块，盘踞牢石。其早期，为正实邪侵，癌毒症缓，治宜抗癌抑瘤，涤痰散结；中期，为正邪丰争，癌毒发散，治宜攻坚散结，解毒抗癌，荡涤导滞；晚期，正虚邪实，癌毒平泛，治宜扶正祛邪，行滞化瘀。
在本发明的上述药物组成中，人参、黄芪与芒硝、大黄配伍使用后，人参味甘纯正，湿而不燥，为大补元气之正品；黄芪色黄气厚，味甘性温，为补气升阳固表止汗之品；大黄气味重浊，苦寒攻决，性主走泄，走而不守，为攻坚散结、泻热通便之品；芒硝沉坠，味苦气寒，可软坚泻下，导热下行，具有荡阳明湿热积滞，攻坚散结，涤三焦胃肠湿热，推陈致新之功。前两者以甘温补益为主，后两者苦寒攻下为主，所以气味相反，功能相异，反异相争，在药理功能上可产生拮抗作用。甘遂、黄芪、芒硝和大枣共用时，甘遂属峻下之品，大黄、芒硝攻下之剂，攻峻相伍者，一则取其峻下峻猛之力，能泻水逐饮，消肿散结，一则攻下能走泻三焦，上泻亢盛之火，中泻宿食停滞，下泻燥结，所以一峻一攻，走上达下，攻坚散结，消痞除胀。然遂黄硝虽有撼旋痰浊，泻下夺饮之功，但有耗气伤阴，损脾败胃之弊；而大枣味甘性温，质润而腻，具有补脾益阴、生津养胃之功。辛甘为阳，苦寒为阴，阴阳相激则可缓解泄下强度，又可以大枣之甘、和中益气，补土护脾，使泄下而不损脾土。毒、湿、痰、瘀为肿瘤致病之因，“大毒之病，必用大毒之药以攻之”，“坚结之病，非平和药所能捷，必令反夺以攻之”。白花蛇、甘遂与补泻药伍用时，白花蛇性善走串，有毒、味甘之品，内走脏腑，外彻肌肤，拔毒攻毒；甘遂有毒，入水窠，夺痰饮，泻水湿，通中州，破净腑；再以芒硝、大黄走上达下，泻下导滞，破坚消痞，这样补泻相反，毒益相亢，一升一降，一补一泻，共奏拮抗之功，达到“以药之毒，攻其病之毒，以药之反，治其病之反”的目的。因此，在本发明上述药物组成中，以甘遂、白花蛇为君，入水窠，逐水饮，拔毒邪，攻坚结，开闭塞，荡脏腑；大黄、芒硝苦攻导滞，攻坚破痞，为臣；佐人参、黄芪补元益气，助气化水；使大枣缓合药性，中和强度，反激相亢，拮中有成，实现攻而不伤正，泻而不伤阴的“有故无损”的治疗。
以下列组成形式的本发明药物为实验用药物进行了相关的毒性试验和药效学的试验。
实验用药物组成由上述组成形式的药物制成粉末混匀后制备成的胶囊型药物，每粒胶囊含250毫克有效药用成份。
具体实施例方式
安全性试验1.急性毒性试验以体重20～25克雌雄兼有的健康昆明种小鼠为试验动物，随机分为8组，每组10只。将上述实验药物按中药汤剂煎服法分别配置成总生药含量为50％和80％(克/毫升)的药液，按不同剂量以单次灌胃给药观察7天，和每日给药一次连续给药三天观察10天的两种试验，记载一般症状和死亡数。两种含量药物的灌胃给药量分别各为1.0毫升、0.8毫升、0.64毫升和0.52毫升四个剂量组。两种试验中除80％含量药物中单次给药试验的1.0毫升组及三天给药试验的1.0毫升和0.8毫升两组动物有毛松和腹泻现象外，其它各试验组动物均未见异常反应，表明本发明药物的LD50＞40克/千克体重，大于临床使用剂量1500倍以上，按体表面积折算大于临床用量142.8倍，符合急性毒性分级中的大于5.0克/千克的低毒标准。小鼠灌胃的最大耐受量试验结果为64克/千克体重，按体表面积折算相当于人用剂量的228.57倍。
2.亚急性毒性试验以体重为80～120克雌雄兼有的wistar系大鼠35只为试验动物，分为3组。两组用药组分别按1.0毫升/100克体重剂量给以40％和80％含量的本发明上述实验药物灌胃，对照组以同体积生理盐水灌胃，每天一次，连续42天，每周称体重一次，观察动物生长情况。试验第30天及试验结束，断头取血作血象、生物学检验、计算脏器系数和对主要脏器作病理组织学观察。结果大鼠一般状况良好，对生长未见抑制，对血象、肝、肾功能均无明显影响，病理组织学观察也未见明显的药物性损害。
上述毒性试验表明本发明药物的毒性小，临床用药是安全的。
3.诱发小鼠骨髓红细胞微核试验以体重18～20克雌雄各半的昆明种小鼠56只，按每组8只随机分为5个试验药物组、一个阳性对照组及一个阴性对照组共7组。试验药物组为将准确称取的本发明上述试验用药物20克加入100毫升煮沸蒸馏水中配成20％的混悬液，再稀释成8％、4％、2.67％和2％四种浓度梯度，pH6.0。阳性对照药物为用生理盐水配制成含量为1毫克/毫升的环磷酰胺药液；以灌胃给药法，阳性对照组的环磷酰胺按100毫克/千克体重给药；本发明药物试验组分别按上述40克/千克体重的LD50量的1/2、1/5、1/10、1/15和1/20分为5个试验组，于0时和24时各灌胃一次，在第二次灌胃后6小时处死，取胸骨作骨髓涂片，按Matter的单用Giemsa染色法加以简化，染色10分钟，自来水冲洗，晾干镜检。对各试验组结果与对照组结果比较并用泊松分布检验其差异的显著性显示，各试验组的嗜多染红细胞微核率之间无显著差异(P＞0.05)，各试验组与阴性对照组间也无显著差异(P＞0.05)，各试验组的嗜多染红细胞与正红细胞之间无显著差异(P＞0.05)，试验组与阴性对照组间也无显著差异(P＞0.05)；各试验组之间的正红细胞微核率无显著差异(P＞0.05)，试验组与阴性对照组间也无显著差异。该诱发红细胞微核试验证明，本发明药物即使在剂量接近LD50时也未能引起微核率的增加，表明其对遗传物质没有损伤作用，没有杀伤骨髓细胞或者导致有丝分裂延迟的效应。
4.诱变试验以本发明上述试验药物，以及4-硝基喹啉-N-氧化物(4-NQNO)、2-氨基芴(2-AF)和丝裂霉素为阳性对照物进行Ames试验。因本发明药物为口服药物，不能直接溶解，故采用二甲亚砜的浸泡提取液。Ames试验使用经生物学性状鉴定符合要求的需组氨酸的鼠伤寒沙门氏菌突变株TA98和TA100。重组修复试验中采用枯草杆菌具有充足修复功能的H17(Rec+、arg-、try-)和重组修复缺陷的衍生株M45(Rec+、arg-、try-)。Ames试验中用最低营养V-B培养基倾注平板作为底层，用软琼脂加10％的0.5mu生物素/组氨酸混合液作为上层软琼脂。重组试验中用含15％琼脂的营养肉汤倾注平板、37℃24小时干燥后使用。以不同梯度浓度药液进行的Ames试验点试和平板渗入试验结果分别均显示不论加或不加S9活化系统，本发明上述药物均不能诱发TA98和TA100株的回复突变。在枯草杆菌重复修复试验中也未表现有DNA损伤作用。
上述的各项试验均已表明本发明药物具有符合规定要求的使用安全性。
药效学试验以体重为90～110克大白鼠和体重为20～24克的非纯系小鼠及DBA/2系小鼠为试验动物。试验瘤株分别为小鼠肉瘤(S180)、肝癌实体型(H22)、EC、U27、W256、和P388。对照用组药物分别为西安国药制药厂的P-235(平消片)(对照1)和成都市药材公司的“小金丹”(对照2)。本发明药物试验组药物为取上述实验用药物10克，加蒸馏水100毫升浸泡30分钟后，加热煮沸20～30分钟，趁热用纱布挤滤，滤渣再加水煮沸过滤后，两次滤液合并浓缩至100毫升而成含生药量为10％的试验用药液，pH6.0。
一、对移植性瘤株的治疗作用1.对S180的治疗作用取健康小鼠50～60只，按常规腹腔接种后次日按体重分组给药，同时一等体积生理盐水作空白对照。各组动物每天给药一次，连续7～10天。结果如表1所示。表1结果显示，本发明药物以腹腔注射对S180有一定抑制作用，抑制率为26％～54％。P-235和小金丹无体内抑瘤作用。
表1对小鼠移植性瘤株S180的影响

2.对多种移植性瘤株的治疗作用试验方法同上。试验结果如表2所示。由表2结果显示，本发明药物对H22、U27和W256均由不同程度的抑制作用，其中对H22的效果较好，对EC和P388的疗效不明显。
表2对多种移植性瘤株的治疗作用

二、对瘤细胞直接细胞毒作用1.体外抑瘤试验取艾氏腹水癌、S180、H22瘤株细胞悬液(细胞数600万/毫升)0.1毫升，分别加入盛有0.8毫升Hank’s培养液的试管中，各管加入待测试药液0.1毫升，同时设加入生理盐水0.1毫升的对照管。各管混匀置37℃培养24小时。取出后以0.5伊红染色，按白细胞计数法计数四大格内着色死细胞数进行比较。结果如表3所示。表3结果显示，本发明药物对三株瘤细胞均有显著细胞毒作用，死细胞数非常显著地高于对照组。P-235对S180和H22也有明显的体外抑制作用，但对EC细胞无抑制作用。
表3体外抑瘤试验结果

注表中与对照组比较*为P＜0.05，**为P＜0.01。
2.在1∶3的H22悬液每2.0毫升中分别加入1％的本发明上述试验用药物、对照1和对照2药物及生理盐水，混匀后置冰箱2小时取出。将各混悬液分别接种健康小鼠右前肢腋下，常规饲养观察10天，解剖称瘤重，计算抑制率。结果如表4所示。表4结果显示出本发明药物和对照1药物P-235有半体内抑瘤作用，而对照2药物小金丹无半体内抑制作用。
表4半体内抑瘤作用试验结果

三、对移植性瘤株的灌胃治疗试验以体重18～22克雌雄各半的ICR系和昆明种小鼠为试验动物，本发明上述试验用药物用蒸馏水混悬调匀，分别配置成0.2、0.4和0.1克/毫升的不同浓度；以对照1药物和上海第十二制药厂生产的环磷酰胺为对照药物。以S180、H22和子宫颈癌(U14)瘤株，在无菌条件下制备1∶4的肿瘤细胞混悬液于健康动物右前肢腋下接种0.2毫升。接种后次日将动物随机分组，每组10只。本发明药物组分别设0.5、1.0和2.5(克/千克体重)三个剂量组，对照1药物组按0.32克/千克体重的剂量给药，环磷酰胺药物组按25毫克/千克体重剂量给药。各组动物每天灌胃一次，每只动物0.5毫升，空白对照给予等体积蒸馏水，连续给药10天，按照“抗癌药物筛选规程”的方法进行动物移植性瘤株治疗观察。停药24小时处死动物，称体重，解剖剥离并称瘤重，计算各组试验药物的肿瘤抑制率。
表5对移植性瘤株的灌胃治疗试验相关结果

相关试验结果如上述表5所示。表5结果显示，本发明药物对肉瘤S180及肝癌H22均有明显的抑制作用，但三个剂量组间无量效关系。其中本发明药物对S180的作用与对照1药物P-235相近，对肝癌的抑制作用则优于P-235。对子宫颈癌U14的抑制率虽不符合疗效评定标准，但经统计处理后显示，本发明药物的中、高剂量组仍有20％-30％的抑制率。各药物试验组与空白对照组间的统计处理均有显著差异。
四、体外对P388白血病细胞DNA合成的试验对DBA/2N小鼠P388细胞后7天，取腹水用RPMI1640培养液制备成细胞悬液，使细胞浓度约为3×166细胞数/毫升。在若干平底试管中分别加入细胞悬液0.5毫升，试验组加入不同浓度的药液0.5毫升，对照组加入等量培养液，置二氧化碳培养箱中37℃作用1小时，用膜片抽滤法处理细胞，用液体闪烁计数器测量cpm值，计算掺入抑制率。结果如表6所示。
表6对P388细胞3H-TdR掺入DNA的抑制作用

表6结果显示，本发明药物对3H-TdR掺入P388细胞的DNA合成都有抑制作用，且抑制作用随药物浓度的递增而逐渐增强。
五、对艾氏腹水癌小鼠癌细胞生物大分子合成的影响试验试验为昆明种小鼠。本发明试验用药物先用0.1N的氢氧化钠调至pH7.0后，配置成药物含量分别为5％、2.5％、1.25％、0.63％和0.32％不同的浓度药物组。标记物为中国科学院上海原子核研究所提供的3H-胸甘(3H-TdR，比活性为27.2ci/mm)、3H-尿甘(3H-UdR，比活性为13.3ci/mm)和3H-亮氨酸(3H-Leu，比活性为122ci/mm)，闪烁液为含0.4％PPO和0.01％POPOP的二甲苯溶液。
小鼠按常规腹腔接种小鼠艾氏腹水癌(EAC)癌细胞，7天后断颈处死，抽取癌性腹水液，用NS洗涤后，再用含10％小牛血清的Hank’s液制备成1×106细胞数/毫升的悬液，分组后分别加入标记前体及不同剂量的本发明试验药物药液，对照组加入等量的NS，置37℃温孵1小时，以预冷的NS终止反应，用抽滤法将细胞收集于玻璃纤维滤膜上，依次用NS、5％三氯醋酸和无水乙醇洗涤，烘干滤膜，加入装有5毫升闪烁液的测量瓶中，用西安产2005型液体闪烁计数仪测定CPM值，计算掺入抑制百分率，并算出掺入抑制率为50％时的药物浓度(IC50)，以评价药物作用强度。结果如表7所示。表7结果显示本发明药物对癌细胞生物大分子的合成有明显的抑制作用，其抑制作用表现为对RNA的作用最强，DNA次之，对蛋白质较弱，表明其抗癌作用可能与对癌细胞核酸和蛋白质合成的抑制作用有一定关系。
表7对小鼠艾氏腹水癌小鼠癌细胞DNA、RNA和蛋白质合成的影响

临床治疗试验对一般失去手术指征或不能进行放、化疗或是使用放、化疗无效的273例中、晚期癌症患者，均以上述的胶囊药物进行了治疗。患者年龄为5岁～85岁，其中56岁～74岁132例，占总数48.35％；患者中经病理诊断者204例，占74.7％，经临床诊断者69例，占25.3％；术后复发或转移者20例，占7.33％；经放、化疗者79例，占28.94％；经服其它抗癌药者29例，占10.62％；经一般药物治疗者136例，占49.82％。
治疗方法每日早晚各服药一次，每次8至12粒，12天为一疗程；每疗程间停药2天，两个疗程为一治程；每治程间停药4天。若脾胃虚弱可兼服六君丸，肾气亏损可兼服六味地黄丸、肾气丸。
疗效评定标准(1)完全缓解肿瘤包块完全消失，病检报告由阳性转为阴性，并超过1个月未复发；(2)部分缓解病灶包块最大直径及其最大垂直直径的乘积缩小50％以上，其它病灶无增大，持续超过1个月；(3)稳定病灶的两个互相垂直最大径乘积缩小不足50％，或增大不超过25％，持续在1个月以上；(4)恶化病灶的两个互相垂直最大径乘积超过25％以上，症状明显加重甚至死亡。
疗效的统计结果如表8所示。
表8临床治疗恶性肿瘤的疗效统计

表8结果显示，对于肿瘤，特别是恶性肿瘤本发明药物有一定的治疗作用。在改善肿瘤患者的症状，缩小包块，特别是对一些晚期肿瘤病人以及不能胜任手术或放、化疗的病人，在缩小包块、缓解疼痛、减轻痛苦、延长生存时间方面是有积极意义和价值的。
正如李时珍曾经提出的观点相恶者，夺我之能也，相畏者，受彼之制也，相反者，两不相合也。本发明根据中医对肿瘤病因机理的分析而提出的由气味相反的各原料成份组成、以主治相亢为特性的上述药物组合物，经上述各项试验证实能对肿瘤病产生明显抑制和治疗作用的重要原因之一正源于此，这也是本发明药物的一个重要特征。
权利要求
1.拮抗癌必消药物，由甘遂、人参、黄芪、白花蛇、芒硝、大黄和大枣为有效药用成份，以及制药允许的辅助添加成份组成，其重量百分比为甘遂6，人参20，黄芪15，白花蛇9，芒硝20，大黄15，大枣15，制剂允许的辅助添加成份适量。
2.如权利要求1所述的拮抗癌必消药物，其特征在于所述的药物为胶囊剂型。
全文摘要
本发明涉及一种拮抗癌必消药物，由甘遂、人参、黄芪、白花蛇、芒硝、大黄和大枣为有效药用成份，以及制药允许的辅助添加成份组成。
文档编号A61K9/48GK1393236SQ01119869
公开日2003年1月29日 申请日期2001年7月3日 优先权日2001年7月3日
发明者林通国 申请人:林通国