专利名称：一种含有番石榴二醛总杂源萜的提取物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用天然植物番石榴叶制备的含有番石榴二醛总杂源萜的提取物，和制备方法及其在医药、保健品方面的应用。
背景技术：
番石槽(Psidium guajava L)俗称拔子、鸡矢果、色乐、红心果、喇卩入果等，为桃金娘科番石榴属植物，是常绿小乔木或灌木，原产热带美洲和东南亚，现广泛分布和种植于热带、亚热带地区。Junyaprasert等发现番石槽叶提取物对Caco_2细胞上P糖蛋白介导的若丹明123 (Rho-123)外流的抑制作用明显(Junyaprasert VB, et al.1nhibitory effect ofThai plant extracts on P-glycprotein mediated efflux[J]. Phytother Res,2006,20(1) :79-81 )；Manosroi等研究17种药用植物对表皮癌细胞及鼠白血病细胞增殖的影响，发现番石榴叶挥发油成分对表皮癌细胞抗增活性最高，是长春碱的4. 37倍(ManosiOi J,etal. Ant1-proliferative activity of essential oil extracted from Thai medicinalplants on KB and P388 cell lines [J]. Cancer Lett, 2006, 235 (I) : 114-120) Aeo 等的研究认为番石榴叶提取物抗肿瘤细胞的机制在于抑制了 T调节细胞，并增强了 Thl细胞的作用(Seo N,et al. Ant1-allergic Psidium guajava extracts exert an antitumor effectby inhibition of Tregulatory cells and resultant augmentation of Thl cells[J].Anticancer Res,2005,25(6A):3763-3770)。Arima等证实番石榴叶提取物对肠炎沙门氏菌和蜡样芽胞杆菌有良好的抑制作用(Arima H, etal.1 solation of antimicrobial compounds from guava(Psidiumguajava L. ) and their structural elucidation[J]. Biosci Biotech Bioch,2002,66(8) :1727-1730);程天印等通过琼脂平板抑菌实验表明番石榴叶提取物对大肠杆菌、痢疾杆菌、沙门氏杆菌、巴氏杆菌、嗜水气单胞、金葡萄球菌均有抑制作用(程天印等.番石榴叶止泻机制的初步研究[J].畜牧与兽医，2005 ;37 (2) :13-15)。轮状病毒和诺瓦克样病毒是引起非细菌性腹泻的两个重要的病原体，张学森等进行番石榴叶和思密达对诺瓦克样病毒腹泻治疗的随机对照研究，表明番石榴叶组疗效明显优于思密达组，其具体的作用机制却不甚明了，推测可能与干预了病毒和受体的结合并抑制病毒的复制，调节机体免疫功能等有关(张学森，等.番石榴叶治疗小儿诺瓦克样病毒性腹泻的临床观察[J].成都中医药大学学报，2006 ;29 (3) :20-21)。陈国宝等通过复制轮状病毒(HRV)感染动物小鼠模型，t匕较番石榴叶与病毒唑的治疗作用，研究表明番石榴叶可以促进小肠对Na+和糖的吸收，促进小肠分泌SIgA，对小肠粘膜具有保护作用，能直接抑制病毒的复制(陈国宝，等.番石榴叶体内抗轮状病毒的实验研究[J].新中医，2003 ；35(12) :65-67)。糖尿病的发病率逐年递增，已成为继心脑血管疾病、癌症之后严重威胁人类健康的第三大疾病。番石榴叶降糖机制主要有保护胰岛功能、提高胰岛素的敏感性、抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶作用、促进肝糖元合成等。中国专利CN201110089195.8介绍了“具有降血糖作用的番石榴叶提取物及其制备方法”，该专利仅涉及从番石榴叶中获得的总三萜化合物，以其作为活性成分用于II型糖尿病的防治。中国专利CN101899171A介绍了一种使用大孔吸附树脂结合有机溶剂反复萃取获得番石榴叶多糖的精制方法。中国专利CN101703577B介绍一种传统水提醇沉法建立番石榴叶提取物的制备方法。中国专利CN200610041855. 4介绍了“番石榴叶的黄酮类化合物制取方法”，但该专利仅涉及番石榴叶总黄酮的制取方法，以及总黄酮治疗II型糖尿病与有关并发症的作用。中国专利ZL018066328. 4介绍了 “ α -淀粉酶活性抑制剂”，该专利仅涉及一种从番石榴叶中获得含有多酚类物质作为活性成分的α -淀粉酶活性抑制剂用于II型糖尿病的治疗。以上研究表明番石榴叶具有抗肿瘤、抗病原微生物、降血糖的药理学作用，但均未涉及到番石榴叶中番石榴二醛总杂源萜类化合物的制备方法及其用途，该内容尚未见文献报道。

发明内容
本发明的首要目的在于提供一种含有番石榴二醛总杂源萜的提取物的制备方法。本发明的目的之二在于提供上述方法制备的含有番石榴二醛总杂源萜的提取物。本发明的目的之三在于提供上述化合物在预防和治疗II型糖尿病、抗肿瘤、抗病原微生物方面的应用。本发明的目的通过以下技术方案实现

一种含有番石榴二醛总杂源萜的提取物的制备方法，包括以下步骤(I)将番石榴叶除杂，剪碎，用体积浓度5(Γ100%的乙醇回流提取广4次，每次r3h ;合并提取液，滤过，减压浓缩至无醇味，制得番石榴叶浓缩液；(2)将步骤(I)中制备的番石榴叶浓缩液通过大孔吸附树脂层析柱，先用水洗脱，弃去水洗脱液；接着用体积浓度5 20%的低浓度乙醇洗脱，弃去低浓度乙醇洗脱液；最后再用体积浓度4(Γ100%的高浓度乙醇洗脱，收集高浓度乙醇洗脱液；(3)将所得的高浓度乙醇洗脱液在3(T80°C经减压浓缩，再经减压干燥或冷冻干燥，即得含有番石榴二醛总杂源萜的提取物。优选地，步骤(I)中乙醇的体积为5 20ml/g番石榴叶。优选地，步骤(I)中回流用体积浓度70%的乙醇。优选地，步骤(2)中所述低浓度乙醇的体积浓度为1(Γ20%。优选地，步骤(2)中所述高浓度乙醇的体积浓度为9(Γ100%。优选地，步骤(2)中所述大孔吸附树脂是非极性、弱极性、中极性树脂。上述方法制备的含有番石榴二醛总杂源萜的提取物，该提取物主要含有多种活性成分的总杂源萜类(番石榴二醛骨架结构)，其主要成分包括PsidialA、PsidialB,PsidialC、PsiguadialsA、PsiguadialsB、Guajadial> Diguajadial,结构式如下
权利要求
1.一种含有番石榴二醛总杂源萜的提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)将番石榴叶除杂，剪碎，用体积浓度5(Tl00%的乙醇回流提取广4次，每次f3h ;合并提取液，滤过，减压浓缩至无醇味，制得番石榴叶浓缩液； (2)将步骤(I)中制备的番石榴叶浓缩液通过大孔吸附树脂层析柱，先用水洗脱，弃去水洗脱液；接着用体积浓度5 20%的低浓度乙醇洗脱，弃去低浓度乙醇洗脱液；最后再用体积浓度4(Tl00%的高浓度乙醇洗脱，收集高浓度乙醇洗脱液； (3)将所得的高浓度乙醇洗脱液在3(T80°C经减压浓缩，再经减压干燥或冷冻干燥，即得含有番石榴二醛总杂源萜的提取物。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)中乙醇的体积为5 20ml/g番石槽叶。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(I)中回流用体积浓度70%的乙醇。
4.根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述低浓度乙醇的体积浓度为10 20%。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述高浓度乙醇的体积浓度为90"I00%o
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述大孔吸附树脂是非极性、弱极性、中极性树脂。
7.权利要求re任意一项方法制备的含有番石榴二醛总杂源萜的提取物。
8.根据权利要求7所述的提取物，其特征在于，该提取物包括PsidialA、PsidialB,PsidialC、PsiguadialsA、PsiguadialsB、Guajadial 和 Diguajadial。
9.权利要求7或8所述含有番石榴二醛总杂源萜的提取物的应用，其特征在于，该提取物具有防治II型糖尿病以及抗肿瘤、抗病原微生物的作用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，该提取物用于制备防治II型糖尿病、抗肿瘤、抗病原微生物的药物、保健品或健康产品。
全文摘要
本发明提供了一种含有番石榴二醛总杂源萜的提取物及其制备方法和应用，包括以下步骤(1)将番石榴叶除杂，剪碎，用乙醇回流提取1~4次；合并提取液，滤过，减压浓缩，制得番石榴叶浓缩液；(2)将浓缩液通过大孔吸附树脂层析柱，先用水洗脱；接着用体积浓度5~20%的低浓度乙醇洗脱；最后再用体积浓度40~100%的高浓度乙醇洗脱，收集高浓度乙醇洗脱液；(3)将收集的洗脱液经减压浓缩，干燥，即得含有番石榴二醛总杂源萜的提取物。本方法制备工艺简单，提取物含量可以达到30~80%，与直接用有机溶剂萃取相比较，收率和含量更高，也更加经济环保，可用于制备预防和治疗Ⅱ型糖尿病、抗肿瘤、抗病原微生物的药物和保健品。
文档编号A61P31/00GK103027953SQ20121053517
公开日2013年4月10日 申请日期2012年12月11日 优先权日2012年12月11日
发明者刘美凤, 谷灵灵, 周惠, 蒋利荣 申请人:华南理工大学