专利名称：一种天山堇菜总黄酮提取纯化工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及维吾尔药成分纯化方法，尤其涉及天山堇菜总黄酮提取纯化工艺，属
于医药技术领域。
背景技术：
天山堇菜.多年生草本，高4 7cm，全株光滑。根茎多粗短，主根圆柱状或倒长圆 锥形，长2 5cm，黄白色或淡棕色，具少数须根。无地上茎和匍甸枝。叶基生，叶片卵状或长 圆状卵形，比较厚，无端钝，基部收縮成柄，与叶片近多长，长1 3cm，宽0. 5 0. 8cm，全缘 或具圆齿；托叶披针形成宽披外形，膜质，白色，边缘有短流苏状腺毛，3/4与叶柄合生。花 单生于花梗顶端，有长梗，花梗与叶等长或稍超出根生叶，花直径O. 5 lcm，苞片位于花葶 中部，2片对生，线状披针形，沿缘具腺，着生在中部以下；萼片5枚，长圆状卵形，先端渐失， 基部有带状附属器，花期6 7月，果期7 8月。湿寒，味辛。天山堇菜具有生湿生寒，成 熟异常胆液质，降低过盛的胆液质和血液质，清热解毒，消炎退烧，润肺消肿，润喉止咳，通 利二便等功效。全草经预试检出含黄酮类，挥发油，氨基酸，生物碱，鞣质和黏液质等。分布 于我国新疆大山、昆仑山和帕米尔高原及云南、四川、西藏。国外中亚地区亦有分布。
—般的黄酮类化合物的提取方法主要采用有机溶剂萃取法、乙醇冷浸法，乙醇溶 液回流法。其中溶剂萃取法所用有机溶剂具有不同程度的毒性，且萃取过程中易乳化，也只 能得到总黄酮总量的50%左右；用醇提法，对乙醇的需求量过多，成本过高。近年来对黄酮 的纯化方法多才用大孔树脂，但大孔树脂的重复利用度低，使用成本过高。

发明内容
针对现有提取与纯化方法针对天山堇菜上存在的不足之处，本发明提供一种天山 堇菜中总黄酮的提取与纯化方法，主要用用水做提取剂，节约溶剂，减压回流提取，对活性 成分损害少。同时，用本发明方法的天山堇菜提取物用硅胶柱层析，产品中总黄酮质量含量 可达50 %以上，且重现性好，硅胶可重复使用。
本发明所述的天山堇菜总黄酮提取纯化工艺，其特征是提取纯化步骤为
1)取粉碎的天山堇菜，加入药材质量10 30倍体积量的提取剂，先浸泡24小时， 然后减压回流提取2 8小时，收集提取液，过滤； 2)将步骤1得到的过滤液浓縮到10mg/ml，用80-100目或100-200目或200-300 目或300-400目柱层析硅胶纯化，装柱，上样，用体积分数30% 60%乙醇溶液为洗脱剂洗 脱，洗脱量为1BV 4BV，洗脱速度为lBV/h 4BV/h ; 3)收集步骤2的乙醇洗脱液，浓縮，5(TC真空干燥，得干燥的纯化产品。
其优选工艺为 以药材质量18倍体积量的蒸馏水为提取剂，减压回流提取时间为4小时，选用 200-300目的硅胶层析，洗脱剂为体积分数40 %乙醇溶液，洗脱用量为2BV，洗脱速度为 2BV。
其中步骤1所采用的提取剂为蒸馏水；步骤2所采用的装柱方式为湿法装柱，上
样的方式为湿法上样。选用硅胶目数过大洗脱阻力会大大增加，硅胶目数太小，吸附表面积
小，吸附效果不明显。
本发明具有以下优点 1.本发明提供的天山堇菜总黄酮提取纯化工艺操作简单、快捷，更适合于工业生 产和应用； 2.所选的硅胶具有吸附量大、解吸率大的功能，可重复利用；
3.以蒸馏水为溶剂，乙醇为洗脱剂，价廉、无毒。
具体实施例方式
为了更好理解本发明的技术方案，以下通过具体的实施例进一步详细描述。
实施例l 1)取粉碎的天山堇菜50g，加入药材质量15倍体积量的蒸馏水，先浸泡24小时， 然后减压回流提取4小时，收集提取液，过滤； 2)将步骤1得到的过滤液浓縮到10mg/ml，干燥的200-300目硅胶层析纯化，用体 积分数30% 60%乙醇溶液为洗脱剂洗脱，湿法装柱，湿法上样，用体积分数50%乙醇溶 液为洗脱剂洗脱，洗脱量为3BV，洗脱速度为2BV/h ; 3)收集步骤2的乙醇洗脱液，浓縮，5(TC真空干燥，得干燥的纯化产品2. 87g。
实施例2 1)取粉碎的天山堇菜50g，加入药材质量15倍体积量的蒸馏水，先浸泡24小时， 然后减压回流提取4小时，收集提取液，过滤； 2)将步骤1得到的过滤液浓縮到10mg/ml，干燥的200-300目硅胶层析纯化，用体 积分数30% 60%乙醇溶液为洗脱剂洗脱，湿法装柱，干法上样，用体积分数50%乙醇溶 液为洗脱剂洗脱，洗脱量为3BV，洗脱速度为2BV/h ; 3)收集步骤2的乙醇洗脱液，浓縮，5(TC真空干燥，得干燥的纯化产品2. 64g。
实施例3四种硅胶纯化天山堇菜总黄酮 分别称取已处理的80-100目、100-200目、200-300目和300-400目柱层析硅胶4 份(每份相当于干硅胶10g)，湿法装柱，湿法上样5ml提取浓縮液(10mg/ml)，用体积分数 40%乙醇溶液为洗脱剂洗脱，洗脱量为2BV，洗脱速度为2BV/h，收集洗脱液，测其吸光度， 计算总黄酮纯度分别为40. 3%、47. 7%、53. 8%、50. 6%，故200-300目的纯化效果不错。
实施例4洗脱剂浓度对总黄酮回收率的影响 称取已处理的200-300目柱层析硅胶4份(每份相当于干树脂10g)，湿法装柱， 湿法上样5ml提取浓縮液(10mg/ml)，分别用体积分数为30 % 、40% 、50 % 、60 %乙醇溶液 为洗脱剂洗脱，洗脱量为3BV，洗脱速度为3BV/h，收集洗脱液，测定黄酮的吸光度并计算总 黄酮的回收率分别为92. 03 % ， 94. 46 % ， 94. 59% ， 96. 67 % ，总黄酮的纯度分别为53. 6% ， 58. 2 % ， 57. 8 % ， 54. 1 % ， 56. 8 % ，回收率相近，用40 %乙醇为洗脱剂所得总黄酮的纯度高， 且节省洗脱剂，宜选乙醇溶液浓度为40% 。
实施例5洗脱剂用量对纯化的影响 称取已处理的100-200目柱层析硅胶4份(每份相当于干树脂10g)，湿法装柱，湿法上样5ml提取浓縮液(10mg/ml)，用体积分数为40%乙醇溶液为洗脱剂洗脱，洗脱用量分 别为1BV、2BV、3BV、4BV，流速为2BV/h，，收集洗脱液，测吸光度计算总黄酮含量，结果表明 总黄酮的回收率分别为90.8%、92.5%、93. 1 % 、93. 8% 。总黄酮的回收率接近，洗脱用量过 多会增加洗脱时间，同时造成一定的浪费，故选择2BV的40%乙醇进行洗脱。
实施例6洗脱剂流速对纯化的影响 称取已处理的100-200目柱层析硅胶4份(每份相当于干树脂10g)，湿法装柱， 湿法上样5ml提取浓縮液(lOmg/ml)，用体积分数为40 %乙醇溶液为洗脱剂洗脱，洗脱 量为2BV，流速分别为lBV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h，纯化后总黄酮回收率分别为92. 85%， 91.98%，91.09%，87.87%。洗脱剂流速lBV/h比2BV/h的回收率高，但相差不大，为了提 高效率，洗脱剂流速选择2BV/h。
权利要求
一种天山堇菜总黄酮提取纯化工艺，其特征是提取纯化步骤为1)取粉碎的天山堇菜，加入药材质量10～30倍体积量的提取剂，先浸泡24小时，然后减压回流提取2～8小时，收集提取液，过滤；2)将步骤1得到的过滤液浓缩到10mg/ml，用80-100目或100-200目或200-300目或300-400目柱层析硅胶纯化，装柱，上样，用体积分数30％～60％乙醇溶液为洗脱剂洗脱，洗脱量为1BV～4BV，洗脱速度为1BV/h～4BV/h；3)收集步骤2的乙醇洗脱液，浓缩，50℃真空干燥，得干燥的纯化产品。
2. 如权利要求1所述的一种天山堇菜总黄酮提取纯化步骤，其特征是步骤1所采用 的提取剂为蒸馏水。
3. 如权利要求1所述的一种天山堇菜总黄酮提取纯化步骤，其特征是步骤2所采用 的装柱方式为湿法装柱，上样的方式为湿法上样。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，涉及一种维吾尔中草药天山堇菜总黄酮成分的提取纯化工艺，用水做提取剂，节约溶剂，减压回流提取，对活性成分损害少。同时，用本发明方法的天山堇菜提取物用硅胶柱层析，产品中总黄酮质量含量可达50％以上，且重现性好，硅胶可重复使用。
文档编号A61P1/16GK101757298SQ20091023009
公开日2010年6月30日 申请日期2009年11月13日 优先权日2009年11月13日
发明者段洪东, 王世潇 申请人:段洪东