专利名称：一种治疗前列腺炎的组合药物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种组合药物及其制备方法，尤其涉及一种治疗前列腺炎的组合药物 及其制备方法。
背景技术：
前列腺炎是青壮年男性最常见的疾病之一，发病年龄一般为15 55岁。一般统 计约占泌尿科门诊疾病的25% 30%，它可全无症状，也可以症状明显，迁延不愈，甚至可 以引起持续或反复发作的泌尿生殖系感染。根据患者的发病过程和临床表现，可将前列腺 炎分为急性前列腺炎与慢性前列腺炎；根据尿4杯试验结果，将前列腺炎分为急性细菌性 前列腺炎、慢性细菌性前列腺炎、慢性非细菌性前列腺炎和前列腺痛4类。临床上治疗前列 腺炎的常用方法是抗生素治疗。但是，抗生素只对急性细菌性前列腺炎和慢性细菌性前列 腺炎有效。另外，滥用抗生素有很多危害，主要表现为三个方面(1)大量使用抗生素会带 来较强毒副作用，直接伤害身体，尤其是对儿童听力；(2)抗生素用多了会使细菌产生耐药 性，使抗生素药物效果变差，甚至无效；(3)抗生素用得过多过滥，会大量杀灭体内正常细 菌，让致病细菌乘虚而入。前列腺炎的病因及发病机理十分复杂，治疗也较为棘手，目前还 没有一个很好的治疗手段，故世界卫生组织将该病称为“21世纪病”。

发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中抗生素只对急性细菌性前列腺 炎和慢性细菌性前列腺炎有效和滥用抗生素有很多危害的缺陷，提供一种治疗前列腺炎的 组合药物及其制备方法。本发明的技术方案本发明首先提供一种治疗前列腺炎的组合药物，所述组合药物的有效活性成分为 人生长激素和人粒细胞_巨噬细胞集落刺激因子。本发明提供的治疗前列腺炎的组合药物还可以通过以下优选的技术方案进一步 实现所述人生长激素由包含下述步骤的方法制得(1)保藏号CGMCC No. 2031的重组杆状病毒(该重组杆状病毒为重组杆状病毒 BmBachGH由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市海淀区中 关村北一条13号，保藏日期为2007年4月28日，保藏编号为CGMCC No. 2031，生物材料的 分类命名家蚕核型多角体病毒Bombyx mori nucleopolyhedrovirus)感染家蚕幼虫或蚕 蛹；(2)收集感染的家蚕幼虫或蚕蛹，粉碎，去除病毒粒子。所述人粒细胞_巨噬细胞集落刺激因子由包含下述步骤的方法制得(1)重组杆状病毒BmBachGM-CSF感染家蚕幼虫或蚕蛹；(2)收集感染的家蚕幼虫或蚕蛹，粉碎，去除病毒粒子。
上述重组杆状病毒BmBachGM-CSF的制备方法还可以进一步参考发明专 利 ZL97124614. 1 与非专利文献"Can 29 kDa rhGM-CSF expressed by Silkworm pupae bioreactorbring into effect as active cytokine through oralIy administration，，[european journal ofpharmaceutical sciences 28 (2006)212-223] 及"Expression,purification and characterizationof human GM-CSF using silkworm pupae(B ombyx mori)as a bioreactor，，[Journal ofBiotechnology 123 (2006)236-247] 所公开的技术内容。所述家蚕幼虫或蚕蛹在感染前，进行表面消毒。本发明还提供了制备上述组合药物的方法人生长激素和人粒细胞_巨噬细胞集 落刺激因子混合均勻。本发明提供的治疗前列腺炎的组合药物也可以通过以下优选的技术方案实现，所 述组合药物还加有辅料，有效活性成分在所述组合药物中的含量为26μ g/100mg以上；所 述辅料由下述方法制得家蚕幼虫或蚕蛹经70%的食用酒精浸泡3min后，于-20 0°C下 粉碎勻浆，过100目网，600rpm离心30 60min后过滤，取上清液于_50°C下冷冻干燥成 粉。本发明还进一步提供了制备上述组合药物的方法人生长激素、人粒细胞-巨噬细胞集 落刺激因子和辅料混合均勻，填装胶囊、包装。本发明达到的技术效果本发明克服了现有技术的缺陷，提供了一种治疗前列腺炎的组合药物及其制备方 法，为前列腺炎的治疗提供了一种新的药物及其制备方法。动物实验证明本发明提供的组 合药物安全有效，可治疗前列腺炎。本发明提供的所述组合药物的制备方法具有简单、容易 掌握的特点。生物保藏说明生物材料的分类命名家蚕核型多角体病毒；拉丁文学名Bombyx mori nucleopolyhedro virus ；保藏单位全称中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心； 保藏编号CGMCCNo. 2031 ；
保藏日期2007年4月28日；
保藏单位地址北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所。
具体实施例方式以下通过具体实施例进一步说明本发明的技术方案，本发明包括但不限于以下实 施方式。下面所列具体实施例仅用于理解本发明的实质，根据现有技术或公知常识对本发 明所进行的不脱离本发明实质内容的改变，如组合药物中两种有效活性成分比例的改变或 者其含量的改变，仍属于本发明的保护范围。本发明所采用的技术手段，本领域技术人员均可依据《分子克隆》或其他技术手册 而获知。实施例1基因的扩增1.人生长激素hGH基因的扩增设计一对引物，以从重组质粒PWR-hGH(上海生化所吴祥甫老师惠赠)为模板，PCR 扩增人生长激素hGH基因。
上游引物5，GGGAATTCAGATGGCTACAGGCTCCC3，(含 EcoR I 酶切位点)下游引物5，TTGAGCTCCTAGAAGCCACAGCTGCC3，(含 Sac I 酶切位点)。PCR 反应条件94 "C，5min, (94 "C，Imin ；57 °C, Imin ；72 °C, lmin) X 30cycles ； 72°C, IOmin0扩增得到目的hGH基因片段。2.人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子hGM-CSF基因的扩增。从人胚肺细胞中抽提总RNA作为模板，应用RT-PCR技术扩增得到hGM_CSF的 cDNA，引物设计如下上游引物为GTAGAATTCATGGGACCAGGACAGGCCGT (含 EcoRI 位点)下游引物为TCAGAGCTCTCAACACACCTCCCCAGGCT(含 Sac I 位点)PCR 反应条件94 "C，5min, (94 "C，Imin ；65 "C，Imin ；72 °C, lmin) X 30cycles ； 720C，IOmin0扩增得到目的hGM-CSF基因片段。实施例2构建载体(1) · pAcHLT-hGH 载体构建经EcoR I与Sac I双酶切的hGH基因片段通过T4DNA酶(MBI)连接克隆至经EcoR I与Sac I双酶切的pAcHLT-B杆状病毒转移载体(购自BD Biosciences Pharmingen)中， 使hGH基因置于多角体蛋白(p0lyhedrin，ph)基因启动子控制之下，构建pAcHLT-hGH载体 经酶切分析以及测序鉴定基因序列正确。在家蚕表达体系中重组蛋白hGH以融合蛋白的形 式表达。(2). pAcHLT-hGM-CSF 载体构建经EcoR I与Sac I双酶切的hGM-CSF基因通过T4DNA酶(MBI)连接克隆至经EcoRI 与Sac I双酶切的pUC18中，获得pUC-hGM-CSF载体。同理，再将hGM-CSF连接到pAcHLT-B 杆状病毒转移载体中，获得pAcHLT-hGM-CSF载体。实施例3重组杆状病毒BmBachGH (即保藏号CGMCC No. 2031的重组杆状病毒)与含 hGM-CSF基因的家蚕重组杆状病毒BmBachGM-CSF的获得取5 μ 1重组转移质粒pAcHLT-hGH DNA和6 μ 1经线性化病毒BmBacPAK6DNA (购自 上海生化细胞所)，加入100 μ 1无血清的TC-100培养基(GIBC0BRL公司)混均。取6 μ 1 Dosper (宝灵曼公司)加入100 μ 1无血清的TC-100培养基混均。将事先培养在35mm平 皿中的BmN细胞(购自上海生化细胞所)用无血清的TC-100培养基洗涤两次，并逐滴加入 pAcHLT-hGH转移质粒和Dosper混合物，27°C培养4_5天，收取上清进行第一轮噬斑筛选。 取5 μ 1上清感染35mm平皿中的Bm N细胞，1小时后弃去上清加入等量混合的TC-100培养 基和低熔点琼脂糖。4-5天后挑取噬斑，感染BmN细胞3-4天，保存上清，细胞用NaOH裂解 用于Southern blot斑点杂交，以hGH基因作模板用随机引物探针标记试剂盒(宝灵曼公 司)标记探针，杂交方法按照《分子克隆》(科学出版社，1995)。取阳性克隆的上清进行第 二轮噬斑筛选。取阳性克隆的上清感染家蚕细胞扩增。即可得到大量的含hGH基因的重组 杆状病毒BmBachGH(该重组杆状病毒已提交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心保藏，保藏日期为2007年4月28日，保藏编号为CGMCC No. 2031)。该病毒能感染家蚕 细胞，在显微镜下细胞呈发病状。家蚕重组杆状病毒BmBachGM-CSF的制备方法同上，也可以进一步参考发明专利 ZL97124614. 1 与非专利文献“Can 29 kDa rhGM-CSF expressed by Silkworm pupae bioreactorbring into effect as active cytokine through oralIy administration，，[european journal ofpharmaceutical sciences 28 (2006)212-223] 及“Expression，purification and characterizationof human GM-CSF using silkworm pupae (B ombyx mori) as a bioreactor，，[Journal ofBiotechnology 123 (2006) 236-247] 所公开的技术内容。实施例4重组hGH与hGM-CSF融合蛋白分别在家蚕5龄幼虫和蛹中表达约106PFU重组病毒通过接种针感染每条五龄蚕，接种后约120h幼虫或蛹几乎全 部发病，采取蚕体液和蛹体，经高速离心(12000rpm，30min)，取上清测血淋巴中hGH融合蛋 白的表达。蛋白样品于15% SDS-PAGE上进行电泳分离。结果在感染重组病毒的血淋巴样 品在约27KDa处有一明显条带，大小与hGH融合蛋白的理论值相当，而且在感染野生病毒的 蛋白样品中并不存在这一条带。为了验证这一特异性蛋白是否可以与hGH抗血清发生特异 性免疫反应，我们进行了 Western blot印迹反应。结果证明该蛋白条带可以与hGH抗血清 发生特异性反应，由此可以判断该蛋白为重组hGH融合蛋白。同样的方法，检测到hGM-CSF的表达。实施例5重组hGH与hGM-CSF融合蛋白生物活性测定(l).hGH的活性测定。hGH标准品(购自浙江邵逸夫医院)被配制成自2. 5 μ g/ml 至62ng/ml —系列浓度的溶液，参照《分子克隆》进行ELISA检测。4°C过夜的条件下蛋白 样品被包被到96孔上，PBST (PBS中加入Tween 20)洗涤后用含BSA(胎牛血清蛋 白)的PBS溶液封闭，37°C lh;hGH抗血清1 3000稀释，与包被蛋白37°C孵育2h ;PBST 溶液洗涤3次，每次5-lOmin ；加入1 2000稀释的二抗(兔抗hGH抗血清，购自sigma公 司)37°C孵育Ih ；OPD柠檬酸钠缓冲液显色后测0D492，并以此建立标准曲线表示蛋白浓 度与吸光度的关系。细胞表达蛋白样品与蚕血淋巴在同样的条件下进行ELISA，分别测得 0D492值，根据标准曲线可以计算样品中hGH融合蛋白的含量和效价。在蚕蛹感染120h后， 每个蛹体hGH融合蛋白的平均含量可达到0.5mg，活性大于lX107IU/ml。而常规的原核表 达，其表达量是0. 05-0. 3mg/ml菌液。(2). hGM-CSF活性测定。TF-1细胞是hGM-CSF依赖性细胞株，hGM-CSF对TF-I细 胞增殖曲线的影响与剂量在一定范围内呈正相关，噻唑蓝MTT比色法是一种定量检测活细 胞的方法，用TF-I细胞结合MTT比色法可检测样品中hGM-CSF的生物活性。先将实验所用溶液预热至37°C。制备细胞悬液取足量TF-I细胞培养物，2000rpm/min离心5分钟，收集细胞。 用基础培养液(1640培养液添加10%小牛血清FBS (ν/ν)，每升补加2ml巯基乙醇溶液、 IOml丙酮酸钠溶液、IOml谷氨酰胺溶液)洗涤细胞三次，每次均以2000rpm/min离心5分 钟，收集细胞。最后用基础培养液悬浮细胞，置37°C条件下5分钟，再用基础培养液配成 4.0X105/ml的细胞悬液，置37°C备用。制备标准样品溶液取1支标准品(购自Schering Plough公司)配成1000IU/ ml的标准品溶液。用基础培养液将标准品溶液在96孔细胞培养板上稀释至40IU/ml，称该
6溶液为标准样品溶液。每100倍稀释应分解为5X5X4的步骤，100倍以内的稀释应逐步进 行2倍或4倍稀释。稀释过程使用96孔细胞培养板，单倍体积为50 μ 1。制备样本溶液精密称取IOmg重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子冻干粉，加 无菌水20ml混勻，4°C冰箱放置lhr，4000rpm/min离心。取上清用0. 22 μ m的滤膜过滤，收 集滤液。根据估计生物活性，取滤液在96孔细胞培养板上稀释至约40IU/ml，稀释原则同标 准样品溶液。该稀释液称为样本溶液。制备样本梯度在96孔细胞培养板中，B-G行除第一列各孔外，每孔中加入50μ 1 基础培养液；A行每孔加入50 μ 1基础培养液；H行每孔加入50 μ 1完全培养液。在Dl、El 各孔中每孔加入100 μ 1标准样品溶液，在Bi、Cl ；FUHl各孔中每孔加入100 μ 1各待检样 本溶液，每个待检样品做2个复孔。自第一列至第12列作对倍稀释，每孔留50 μ 1余液。加入细胞悬液并培养将细胞悬液转移至一无菌的贮液槽中，在96孔细胞培养板 的每个孔加入50 μ 1细胞悬液。注意经常混勻贮液槽中细胞悬液，防止因细胞下沉引起分 布不勻。37°C、5% C02条件下培养40-48小时。加入MTT溶液并培养每孔加入20 μ 1 MTT溶液，37°C，5% C02条件下培养5小 时。加入裂解液并测定结果每孔加入100 μ 1裂解液，用8通道200 μ 1微量移液器吹 打混勻，使生色物质充分溶解，注意尽量避免产生气泡。在酶标仪上比色，测定波长570nm， 参比波长630nm，记录测定结果。实验结果用计算机程序或直线回归计算法进行处理。分别计算各实验样品的半效 稀释倍数，即从样本溶液至相当于标准品50%最大效应点的稀释倍数，并按下式计算实验 结果
胁烊口六“八疒》口六“八待检样品半效稀释倍数待检样品预稀释倍数 待检样品效价=标准品效价X H □x H 口 ^^.^Ll^rm,
标准品半效稀释倍数 标准品预稀释倍数实施例6高效表达人生长激素的蚕蛹研制成口服药物并进行动物实验蚕蛹在接种BmBachGH前经70%食用酒精浸泡3min，进行表面消毒。感染5_7 天，收集蚕蛹，-20°C冻存。取适量冻存蚕蛹样品，用二级胶体磨粉碎并通过100目网离心 (600rpm, IOmin)过滤。取过滤后的勻浆液，12000rpm离心20_60min，取上清，再30000rpm离 心30-90min，去除病毒粒子，离心结束后，取上清，真空冷冻干燥机中冷冻干燥(_50 V )， 制成冻干粉。辅料制造正常9日龄蚕蛹，用70%食用酒精浸泡3分钟进行表面消毒。经低温 (O -20°C )粉碎勻浆，过100目网筛(600rpmX30min)，取上清液冷冻干燥(冻干条件与 hGH相同)。冻干粉留样检定，其余冷藏于4°C，检定合格后作为辅料。根据hGH含量，按比例加入辅料使hGH含量在13 μ g/100mg以上。充分混勻后填 装胶囊，包装后为成品。以下动物实验，剂量均是hGH的实际含量计算的。实验动物猕猴(Macaca mulatta)由福建省计划生育科学技术研究所非人灵长 类实验中心提供，实验动物质量合格证(生产猕猴)闽实动质准第12号。猕猴16只，体 重3. 6 5. 8kg，雌雄各半，随机分为4组，重组人的生长激素(hGH)低、中、高三个剂量组分别100-300 μ g、400-800 μ g、1100-1300 μ g/kg/d，另设蒸馏水作溶剂对照组，采用鼻饲灌
胃给药，连续给药52天，剖杀一半动物(雌雄各半)，其余动物停药30天作恢复期观察，分 别对给药期和恢复期各剂量组猕猴体重、进食量、呼吸、血压、心电图、血液学、尿液、血液生 化学、脏器系数等各项指标进行检测，结果表明，各用药组上述检测指标与用药前比较均未 见明显异常。对各组猕猴主要脏器进行病理组织学检查，未发现有毒理意义的组织学改变。 猕猴灌胃给予重组人的生长激素(hGH)高剂量组，连续52天，未发现明显毒性反应，多项检 测均属正常。长毒实验结果显示，SD大鼠灌胃给药重组人的生长激素胶囊1250 μ g/kg/d，连续 60天，毒性反应为血糖含量明显增高，停药30天恢复正常水平，毒性反应系可逆性。大鼠灌 胃给药重组人的生长激素胶囊无毒副反应的安全剂量为250 μ g/kg/d以下。急毒结果显示 重组hGH对NIH小鼠和SD大鼠经灌胃给药的最大耐受量均大于3300 μ g/kg。实施例7高效表达人粒细胞_巨噬细胞集落刺激因子的蚕蛹研制成口服药物并进行动物 实验蚕蛹在接种BmBachGM-CSF前经70%食用酒精浸泡3min，进行表面消毒。感染5_7 天，收集蚕蛹，-20°C冻存。取适量冻存蚕蛹样品，用二级胶体磨粉碎并通过100目网离心 (600rpm, IOmin)过滤。取过滤后的勻浆液，12000rpm离心20_60min，取上清，再30000rpm 离心30-90min，去除病毒粒子，离心结束后，取上清，真空冷冻干燥机中冷冻干燥(_50°C )， 制成冻干粉。辅料的制备方法同实施例6中辅料的制备方法。根据hGM-CSF含量，按比例加入辅料使hGM_CSF含量在13 μ g/IOOmg以上。充分 混勻后填装胶囊，包装后为成品。以下动物实验，剂量均是hGM-CSF的实际含量计算的。动物实验选取猕猴16只，体重3. 6 5. 8kg，随机分为4组，每组雌雄各半， 设重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子胶囊低、中、高三个剂量组分别600 μ g/kg/d、 1800 μ g/kg/d,3600 μ g/kg/d，另设蒸馏水作溶剂对照组，连续给药60天，剖杀一半动物 (雌雄各半)，其余动物停药30天作恢复期观察，分别对给药期和恢复期各剂量组猕猴体 重、进食量、呼吸、血压、心电图、血液学、尿液、血液生化学、脏器系数等各项指标进行检测， 结果表明，各用药组上述检测指标与用药前比较均未见明显异常。对各组猕猴主要脏器进 行病理组织学检查，未发现有毒理意义的组织学改变。猕猴灌胃给予重组人粒细胞-巨噬 细胞集落刺激因子胶囊高剂量3600 μ g/kg/d,连续60天，未发现明显毒性反应，多项检测 均属正常，故可认为重组人粒细胞_巨噬细胞集落刺激因子胶囊3600 μ g/kg/d为猕猴的基 本安全剂量。以NIH小鼠和SD大鼠为受试动物观察重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子胶 囊的急性毒性反应。测定两种动物经灌胃给重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子胶囊的 最大剂量均为大于3300 μ g/mg，腹腔注射给重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子胶囊对 NIH 小鼠的 LD50 及 95%可信限=2. 02(1. 80 2. 25) X 1000 μ g/kg，对 SD 大鼠的 LD50 及 95%可信限=3. 66(3. 20X4. 14) X 1000 μ g/kg。在对SD大鼠长期毒性试验中，各给药组SD大鼠的白细胞总数，红细胞计数，血红 蛋白含量、红细胞比积、血小板计数及凝血时间等的测定值均在正常范围波动，系统尸检、脏器学数检查及组织病理学检查未发现雌雄大鼠的异常变化，停药恢复期的各项检查亦在 正常范围。在生殖毒性试验中，一般生殖毒性试验未见重组人粒细胞_巨噬细胞集落刺激因 子胶囊对母鼠受孕率和雄鼠授精功能的明显影响，给药组着床率、平均活胎数、呼吸胎率与 生理盐水对照组相比无显著差异。大鼠致畸敏感期毒性试验表明，重组人粒细胞-巨噬细 胞集落刺激因子胶囊对孕鼠没有毒性和致畸潜力，孕鼠给药后精神状况、食量、黄体数、胚 胎植入数、活胎数、活胎体重等与生理盐水组相比均无明显差异，胎仔外观检查未见畸形， 胚胎颅骨、躯干骨、四肢骨等的骨化与生理盐水组比较亦无明显差异。对小鼠围产期毒性试 验研究表明，重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子胶囊对母鼠和Fl代母鼠没有围产期毒 性，给药组未见妊娠期母鼠的异常症状，仔鼠发育指标和感觉运动协调功能均属正常，雄仔 鼠的交配能力、雌仔鼠的妊娠率等生殖相关指标亦正常。采用动物骨髓微核试验、Ames实验和CHL染色体畸变试验研究了重组人粒细 胞-巨噬细胞集落刺激因子胶囊的遗传毒性。动物骨髓微核试验显著性检验结果说明重组 人粒细胞_巨噬细胞集落刺激因子胶囊无致突变作用。Ames实验采用平皿掺入法，使用四 种标准突变型菌株测定，结果为阴性。CHL染色体畸变试验结果亦为阴性。实施例8 hGM-CSF和hGH组合药物治疗前列腺炎组合药物hGM_CSF与hGH 1 1混勻后，按比例加入辅料，有效成分达 26μ g/100mg 以上。实验动物前列腺炎模型大鼠24只，雄性，250 300g/只，按体重随机均分成4 组，分别为模型对照组，hGM-CSF和hGH组合药物高中低(5g/kg、3g/kg、0. 5g/kg)三个组。 每天定时给药一次，连续给药5天。末次给药1小时后，称重，并将大鼠置于密封的装有干 冰的箱子中，几分钟后大鼠死亡，进行无菌解剖，取前列腺液10μ 1，放入Iml白细胞稀释液 中，混勻后取1 μ 1镜检白细胞数，镜下随机观察15个视野取平均数，结果发现，与模型对照 组相比，给药组能在不同程度上减轻白细胞的浸润，高剂量组作用最明显(见表一)。表一组合药物对大鼠前列腺液白细胞数的影响
组别白细胞数(XIO9/L)模型对照组0. 41 士 0. 07低剂量组0. 35 士 0. 08中剂量组0. 32 士 0. 09高剂量组0. 30 士 0. 06无菌操作取下前列腺，称重，计算前列腺指数[=(前列腺重/体重)Χ100% ]， 见表二。前列腺10%甲醛固定后进行病理学检查，模型组切片腺体内结构明显破坏，间 质水肿及增生，有大量炎细胞；给药组切片腺体存在破坏，较模型组轻，有炎症反应，以水 肿、增生为特征，各组破坏程度与剂量呈正相关。表二 组合药物对大鼠前列腺炎体重及前列腺指数的影响
组别给药前给药后模型对照组273. 9 士 15. 6250. 6 士 41. 2
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权利要求
一种治疗前列腺炎的组合药物，其特征在于所述组合药物的有效活性成分为人生长激素和人粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子。
2.根据权利要求1所述的治疗前列腺炎的组合药物，其特征在于所述人生长激素由 包含下述步骤的方法制得(1)保藏号CGMCCNo. 2031的重组杆状病毒感染家蚕幼虫或蚕蛹；(2)收集感染的家蚕幼虫或蚕蛹，粉碎，去除病毒粒子。
3.根据权利要求2所述的治疗前列腺炎的组合药物，其特征在于所述家蚕幼虫或蚕 蛹在感染前，进行表面消毒。
4.根据权利要求1所述的治疗前列腺炎的组合药物，其特征在于所述人粒细胞_巨 噬细胞集落刺激因子由包含下述步骤的方法制得(1)重组杆状病毒BmBachGM-CSF感染家蚕幼虫或蚕蛹；(2)收集感染的家蚕幼虫或蚕蛹，粉碎，去除病毒粒子。
5.根据权利要求4所述的治疗前列腺炎的组合药物，其特征在于所述家蚕幼虫或蚕 蛹在感染前，进行表面消毒。
6.制备权利要求1 5所述的治疗前列腺炎的组合药物的方法，其特征在于所述人 生长激素和人粒细胞_巨噬细胞集落刺激因子混合。
7.根据权利要求1所述的治疗前列腺炎的组合药物，其特征在于所述组合药物还加 有辅料。
8.根据权利要求7所述的治疗前列腺炎的组合药物，其特征在于所述组合药物的有 效活性成分在所述组合药物中的含量为26μ g/100mg以上。
9.根据权利要求8所述的治疗前列腺炎的组合药物，其特征在于所述辅料由下述方 法制得家蚕幼虫或蚕蛹经70%的食用酒精浸泡3min后，于-20 0°C下粉碎勻浆，过100 目网，600rpm离心30 60min后过滤，取上清液于_50°C下冷冻干燥成粉即可。
10.制备权利要求7 9所述的组合药物的方法，其特征在于人生长激素、人粒细 胞_巨噬细胞集落刺激因子和辅料混合均勻，填装胶囊、包装。
全文摘要
本发明涉及基因工程技术领域，具体地说，为了解决现有技术中抗生素只对急性细菌性前列腺炎和慢性细菌性前列腺炎有效和滥用抗生素有很多危害的缺陷，本发明公开了一种治疗前列腺炎的组合药物及其制备方法。所述组合药物的有效活性成分为人生长激素和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，还可以再加入辅料。本发明还提供了所述组合药物的制备方法。所述组合药物经动物试验证明安全有效，可治疗前列腺炎。
文档编号A61P13/08GK101954068SQ20091011976
公开日2011年1月26日 申请日期2009年3月26日 优先权日2009年3月26日
发明者张耀洲 申请人:天津耀宇生物技术有限公司