专利名称：钩藤总生物碱的制备方法
技术领域：
本发明涉及药用植物有效部位提取和分离方法领域，具体来说是涉及一种钩藤总生物碱的制备方法。
背景技术：
钩藤(Uncaria rhyncchophylla(Miq. ) Jacks)为菌草科植物，以带钩莖枝入药，传统医学认为其具有清热平肝，熄风定惊之功效，用于小儿癫痫及成人血压偏高，头晕目眩等。现代研究证明，钩藤总生物碱对降低血压、抗血小板聚集、抑制心肌收缩力等方面作用明显。随着钩藤总生物碱的药理作用的研究深入，其提取方法也越来越受到人们的重视。目前文献中提取方法主要是大孔树脂法和离子交换树脂法。如中国专利200710098441. X，公开了一种从中药钩藤提取液中分离钩藤总生物碱的方法、200710099900. 6公开了一种用离子交换树脂分离钩藤总生物碱的方法和200810011900. O公开了一种从钩藤叶、带钩茎枝或全草中提取生物碱有效部位的方法及用途。其主要存在的问题是大孔树脂法和离子交换树脂法对于成分复杂的中药提取液来说，树脂再生困难，加之处理树脂产生大量酸碱水，导致环境污染。本发明人采用酸水渗漉提取，提取物经乙醇醇沉后，提取物拌入硅藻土分散处理，丙酮渗漉提取，提取物经酸碱处理后，得钩藤总生物碱。该钩藤总生物碱具有纯度高，吸收好，质量稳定，整个过程在常温进行，不需加热，节约了能源，减少了加热导致的溶媒挥散等安全问题，同时制备方法分离效果佳，工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。

发明内容
本发明的目的是开发出一种成本低、工艺简单、对环境无污染、安全性高的钩藤总生物碱的制备方法。取钩藤药材或全草粉碎成粗粉，用酸性水溶液进行渗漉，收集渗漉液，加氢氧化钠溶液调节PH至中性后浓缩成清膏，加入乙醇醇沉，取上清液，回收乙醇，减压浓缩成稠膏，加等量硅藻土减压干燥，粉碎成粗粉，用丙酮进行渗漉，收集渗漉液，减压回收丙酮，浸膏加稀盐酸溶液加热溶解，趁热滤过，滤液冷却至室温，在搅拌下加氨水调调至碱性，室温放置过夜，吸除上清液，沉淀减压干燥，粉碎成细粉，得钩藤总生物碱。本发明的钩藤总生物碱的制备方法，其特征包括以下步骤(I)取钩藤药材或全草粉碎成粗粉，用10 20倍O. I % O. 5%的盐酸溶液进行渗漉，收集渗漉液，加氢氧化钠溶液调节PH至中性后浓缩至相至密度I. 10 I. 20 (800C )的清膏。(2)清膏加入乙醇使醇浓度达50 60%，充分搅拌，静止24小时，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩成稠膏，加等量硅藻土减压干燥，粉碎成粗粉。(3)粗粉用10 20倍丙酮进行渗漉，收集渗漉液，减压回收丙酮，得钩藤总生物碱浸膏。
(4)钩藤总生物碱浸膏加I 2%盐酸溶液加热溶解，趁热滤过，滤液冷却至室温，在搅拌下加氨水调调至碱性，室温放置过夜，吸除上清液，沉淀减压干燥，粉碎成细粉，得钩藤总生物碱。本发明中所制备的钩藤总生物碱，加入适量的辅料，制成各种片剂、胶囊剂和滴丸
坐寸O下面通过有关具体药效学试验对本发明作进一步的阐述。一、对原发性高血压模型动物(SHR)的影响I、血压测定在稳定的环境中，保持室温28°C将大鼠置于(38±0.5°C)温箱中预热10分钟，将大鼠尾穿过压尾器，平放于传感器上，适应5分钟向压尾器充气加压，阻断 尾部血流，待容积脉搏波消失后，缓慢而均匀地放气，听到容积脉搏波恢复有规律的声音，此时的血压表上指数即为收缩压，注意在血压测定过程中，动作要轻，不要引起动物过分激动。2、分组、给药及结果将购进的自发性高血压大鼠在新的环境中喂养一周后测其血压。根据血压将32只大鼠随机分成四组模型组；降压O号(北京双鹤药业股份有限公司生产)10. 3mg/kg剂量给药组；钩藤总生物碱30. O、15. Omg/kg两个剂量给药组；另设一组空白对照组(9只)，共计五个实验组。每日灌胃给药一次，连续三日，空白对照组及模型组同时给同体积蒸馏水10ml/kg。分别于第一次给药后4小时及第二、三日给药后I小时测大鼠尾动脉血压(BP)，最后断关取血，分离血清，用放免法测血清中NO、ANP、ALD的含量或活性。见表I、表2。由表中结果可见，空白对照组血压正常、平稳；SHR血压均在22-23Kpa，其BP与空白对照组比较明显升高(P <0.001)。给药后降压O号组动物BP下降明显(实测值与模型相KP < 0.01、P < O. 001，给药前后自身变化百分率与模型组比较P < 0.01、P < O. 001)，连续给药后各个时间点降压幅度平均维持在26%左右；钩藤总生物碱高剂量组给药后BP下降明显(实测值与模型组比P < O. 05，给药前后自身变化百分率与模型组比较P < O. 05、P < O. 01)，连续给药后各个时间点降压幅度平均维持在12%左右；低剂量组连续给药后也显示出明显降压效果(给药前后自身变化百分率与模型组比较P < O. 05)。SHR比正常大鼠血浆中醛固酮(ALD)显著升高(P < O. 05)，心钠素(ANP)含量有降低趋势，一氧化氮(NO)含量有降低趋势；降压O号组给药后ALD有降低趋势，而ANP和NO无明显变化；钩藤总生物碱高剂量给药后明显降低ALD含量，但对NO、ANP影响不明显。二、对肾性高血压模型动物(RHR)的影响I、模型制备Mstar大鼠在固定的环境中饲养,5日后测基础血压三次,取平均血压作为手术前动物正常血压。然后施二肾一夹手术，以3%水合氯醛腹腔注射(10ml/kg)麻醉，消毒后，游离左肾动脉，用内径O. 2_的银夹夹闭，使左肾动脉部分狭窄，右肾不触及，逐层缝合皮肤，手术在10分钟内完成。术后为了避免感染，腹腔注射青霉素3ml/日(250万单位/15ml)，连续7日。第二周开始以1% NaCl浴液代饮用水，第三周起以2% NaCl溶液代饮用水正常喂养，术后第三、四周测血压，观察血压变化，待血压平均升高30mmHg汞柱以上，认为模型成功。2、血压测定方法同前。3、分组、给药及结果术后第四周根据血压升高程度将40只大鼠随机分为五组模型组，降压O号10. 3mg/kg剂量给药组，钩藤总生物碱30. O、15. 0,7. 5mg/kg三个剂量给药组。每日灌胃一次，连续三日，对照组同时给同体积蒸馏水10ml/kg。分别于第一次给药后4小时、8小时、12小时及第二日给药后I小时、第三日给药后th、24小时测尾动脉血压。末次测血压后将动物断头取血，分离血清，用放免法测血清中的ET和AII的活性。见表3、表4。由表中实验结果可见,手术(造模后)第四周血压较手术前升高5Kpa (约30mmHg)视为模型成功。模型组BP —直维持在18Kpa左右；降压O号第一次给药后BP明显下降(与对照组比P < O. 05，P < O. 01)，BP下降一直持维到12小时以上，连续给药后血压下降幅度平均维持在21%左右；钩藤总生物碱高剂量组给药后BP降低明显(与模型对照组比较P < O. 05)，第一次给药后12小时血压下降与对照组比具有明显差异，连续给药后血压下降幅度平均维持在15%左右；中剂量给药组给药后BP明显下降(与对照组比P < O. 05);低剂量组给药后血压也逐渐下降。钩藤总生物碱给药后降压效果明显，持续时间长。降压O号和钩藤总生物碱高剂量给药组均能使血浆中的AII和ET含量有降低趋势，但无统计学差异。三、连续多次给药对清醒状态下正常大鼠血压的影响取Wistar大鼠50只随机分成五组空白对照组，降压O号10. 3mg/kg剂量给药组，钩藤总生物碱30. O、15. 0,7. 5mg/kg三个荆量给药组。给药前在稳定的环境中适应三天，于大鼠尾动脉血压测定仪上测其正常血压。然后开始给药，每天一次，连续给药十天，空白对照组给蒸馏水10ml/kg，并分别于第三、七、十天给药后I小时测清醒状态下大鼠血压。结果见表5。由表5结果可见，连续给药后空白对照组血压基本稳定，而降压O号及钩藤总生物碱各给药组，血压较空白组明显下降，降压幅度维持在10%左右。
权利要求
1.钩藤总生物碱的制备方法，其特征包括以下步骤 取钩藤药材或全草粉碎成粗粉，用酸性水溶液进行渗漉，收集渗漉液，加氢氧化钠溶液调节PH至中性后浓缩成清膏，加入乙醇醇沉，取上清液，回收乙醇，减压浓缩成稠膏，加等量硅藻土减压干燥，粉碎成粗粉，用丙酮进行渗漉，收集渗漉液，减压回收丙酮，浸膏加稀盐酸溶液加热溶解，趁热滤过，滤液冷却至室温，在搅拌下加氨水调调至碱性，室温放置过夜，吸除上清液,沉淀减压干燥，粉碎成细粉，得钩藤总生物碱。
2.根据权利要求I所述的一种钩藤总生物碱的制备方法，其特征在于，取钩藤药材或全草粉碎成粗粉，用10 20倍O. I % O. 5%的盐酸溶液进行渗漉，收集渗漉液，加氢氧化钠溶液调节PH至中性后浓缩至相至密度I. 10 I. 20 (800C )的清膏。
3.根据权利要求I所述的一种钩藤总生物碱的制备方法，其特征在于，清膏加入乙醇使醇浓度达50 60%，充分搅拌，静止24小时，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩成稠膏，加等量娃藻土减压干燥,粉碎成粗粉。
4.根据权利要求I所述的一种钩藤总生物碱的制备方法，其特征在于，粗粉用10 20倍丙酮进行渗漉，收集渗漉液，减压回收丙酮，得钩藤总生物碱浸膏。
5.根据权利要求I所述的一种钩藤总生物碱的制备方法，其特征在于，钩藤总生物碱浸膏加I 2%盐酸溶液加热溶解，趁热滤过，滤液冷却至室温，在搅拌下加氨水调调至碱性，室温放置过夜，吸除上清液，沉淀减压干燥，粉碎成细粉，得钩藤总生物碱。
全文摘要
本发明公开一种从中药钩藤全草中提取钩藤总生物碱的方法，属于中药领域。该方法包括的技术方案取钩藤药材或全草粉碎成粗粉，用酸性水溶液进行渗漉，收集渗漉液，加氢氧化钠溶液调节pH至中性后浓缩成清膏，加入乙醇醇沉，取上清液，回收乙醇，减压浓缩成稠膏，加等量硅藻土减压干燥，粉碎成粗粉，用丙酮进行渗漉，收集渗漉液，减压回收丙酮，浸膏加稀盐酸溶液加热溶解，趁热滤过，滤液冷却至室温，在搅拌下加氨水调调至碱性，室温放置过夜，吸除上清液，沉淀减压干燥，粉碎成细粉，得钩藤总生物碱。该方案整个过程在常温进行，不需加热，节约了能源，减少了加热导致的溶媒挥散等安全问题，同时制备方法分离效果佳，工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。也克服了现有的多采用树脂法提取钩藤总生物碱的弊端。
文档编号A61K36/74GK102626453SQ20111026653
公开日2012年8月8日 申请日期2011年9月9日 优先权日2011年9月9日
发明者仲崇琳, 杨美林, 许康 申请人:吉林省博时药物新技术开发有限公司