专利名称：人干扰素在制备治疗或预防hpv相关疾病的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别涉及人干扰素在制备治疗HPV相关疾病的药物中的用途。
背景技术：
宫颈糜烂是妇科临床最常见的一种疾病，是慢性宫颈炎的一种常见病理改变。表现为宫颈外口处的宫颈阴道部外观呈细颗粒状的红色区。近年国内外研究表明人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈糜烂的发病有关，而宫颈HPV感染是宫颈癌的主要致病原因，因此，合并HPV感染的宫颈糜烂有进展为宫颈癌的可能，与宫颈癌的发病密切相关。临床研究表明，宫颈糜烂患者HPV感染与宫颈局部病变轻重，是否合并其他感染及患者的年龄、职业、生育史等诸多因素有关。传统的宫颈糜烂的治疗主要以物理疗法为主，将宫颈糜烂面柱状上皮破坏，使其脱落坏死而被新生的复层鳞状上皮所覆盖，治愈宫颈糜烂。而对于合并有病毒感染的宫颈糜烂来说，目前较新的治疗方法为局部应用抗病毒药物如干扰素等进行治疗，取得了一定的治疗效果。干扰素通过其特异性的抗病毒作用，有效清除宫颈局部病毒感染的同时，提高机体免疫功能，促进宫颈糜烂的愈合。宫颈癌早期及宫颈不典型增生临床上均表现为慢性宫颈炎的改变，持续性宫颈HPV感染最终可能导致宫颈癌的发生。因此，对合并HPV感染的宫颈糜烂进行早期有效的治疗，可预防病变的进一步发展，使病变在早期阶段即得到治疗，可能在预防其向宫颈癌的进一步转变方面起作用。宫颈癌(cervical cancer)是最常见的妇科恶性肿瘤之一,在全球妇女癌症死亡率中位居第二，严重威胁着妇女的健康和生活质量。其发生发展已呈现出年轻化的趋势，每年约有50万新发病例，其中80%在发展中国家，由于地区间的不同宫颈癌发病有很大差异，我国约占世界1/3，严重危害着我国妇女的健康与生命安全。在近年来的研究中发现，HPV(人乳头瘤病毒)与宫颈炎的发生关系密切，尤其一些高危型的HPV是引起宫颈癌的重要因素，在宫颈癌的活检组织中几乎都能找到HPV感染。我国作为一个发展中国家是子宫颈癌的高发地区，每年平均有132300例新发病例，总发病率为0.27%。。大量流行病学调查和分子生物学研究表明，人乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus，HPV)，尤其是高危型HPV(high-risk HPV，hr_HPV)生殖道持续感染是引发子宫颈癌及的CIN重要病原学因素。据统计，在所有子宫颈癌的病例中超过99%可被检测到高危型HPV DNA。HPV感染后从正常宫颈细胞向宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的转化是多因素参与、渐进发展的过程，高危型人乳头瘤病毒持续感染是宫颈细胞恶性转化中的必要因素。大量流行病学和分子生物学研究资料表明，HPV与子宫颈癌及癌前病变密切相关，尤其是高危型HPV(high-risk HPV, hr-HPV)生殖道持续感染是引发子宫颈癌及CIN的重要病原学因素。大部分HPV感染无临床症状或亚临床感染，但可致严重后果，HPV感染预示宫颈上皮内瘤变(CIN)的存在。也有研究发现，持续携带HPV强烈提示感染者处于继发癌前病变的高度危险中。据统计，在所有子宫颈癌的病例中超过99%可被检测到高危型HPV DNA。研究表明，伴有HPV感染的宫颈上皮内瘤变(CIN)进一步可发展为宫颈癌。
人类乳头瘤病毒(HPV)属乳头瘤病毒家族，是特殊的DNA病毒，具有将正常细胞永生化的能力及高度种属特异性和特殊嗜上皮性，病毒DNA以整合形成存在于宿主细胞中。HPV是一种无包膜的双链闭环小分子DNA病毒,属乳多空病毒科乳头瘤病毒属。其感染具有种属特异性，HPV与多种疾病密切相关，是迄今已被肯定的DNA肿瘤病毒之一，HPV主要感染人的皮肤或粘膜上皮细胞，引发感染部位的良、恶性病变。目前已知HPV6、11、42、43、44等与性传播疣或尖锐湿疣有关，属低危型，一般不诱发癌变；而HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68属高危型，与子宫颈癌及子宫颈上皮内瘤变(CIN)的发生相关。分子生物学研究结果显示，90%以上宫颈癌伴有HPV感染，主要为HPV16、18亚型。由于从HPV感染一宫颈上皮内瘤变-宫颈癌，需要一个较为漫长的过程，一般为10年时间，且宫颈上皮内瘤变是可以逆转的病变，而早期宫颈癌5年治愈率高达90%。因此，积极防治HPV感染，特别是高危型HPV感染对预防和降低子宫颈癌的发生具有重要的临床意义。

发明内容
本发明要解决的技术问题为提供人干扰素在制备治疗HPV相关疾病的药物中的用途。优选地，所述人干扰素选自人干扰素α、人干扰素β和人干扰素Y。优选地，所述人干扰素α选自人干扰素a lb、人干扰素a 2a、人干扰素a 2b和所述三种蛋白的衍生物及类似物。 优选地，所述人干扰素为天然人干扰素或重组人干扰素。优选地，所述HPV相关疾病为单纯型HPV感染。在本发明的具体实施方式
中，针对单纯型HPV感染，研究本发明所述复方制剂组和对照组在第6个月时转阴率之间的差异，结果显示单纯型HPV感染在6个月治疗后，复方制剂组的总有效率和转阴率明显高于对照组。总有效率=FAS集，复方制剂组为69. 81%,对照组为57. 89%，复方制剂组大于对照组；而PPS集对照组大于复方制剂组，复方制剂组为77. 62%，对照组为62. 26%，复方制剂组和对照组有明显统计学差异。转阴率FAS集，复方制剂组为69. 18 %，对照组为52. 63 % ；PPS集，复方制剂组为76. 92 %，对照组为56. 60 %。可见本发明所述复方制剂组对单纯型HPV感染有显著的治疗效果。优选地，所述HPV相关疾病为高危型HPV生殖道持续感染。更优选地，所述HPV相关疾病为宫颈糜烂、尖锐湿疣、生殖器疱疹或口唇疱疹、带状疱疫、皮肤癌、宫颈癌、扁平抚、宫颈上皮细胞瘤变。在本发明的具体实施方式
中，所述药物的制备方法如下步骤I :在人干扰素原液中加入人血白蛋白得到混合溶液，使白蛋白终浓度为1% -5%，加入与混合溶液等体积的稳定剂混匀，水浴加热O. 5-3min，冷冻干燥成粉末；所述稳定剂选自SDS，尿素和巯基乙醇的混合物，甘氨酸，肝素，海藻糖，维生素C或还原型谷胱甘肽。步骤2 :称取羧甲基纤维素钠50-200g、甘油500_1500ml、山梨酸10_20g混合后，加注射用水至lOOOOg，加热至60-100°C混匀，待基质冷却至10-40°c时，调pH至4. 0-9. 5，备用;步骤3 :将步骤I人干扰素粉末加至步骤2制备的基质混合均匀，分装即得。优选地，所述药物的制备方法中每IOOOg基质中加入干扰素粉末
I.OXlO6-L OXlO9 国际单位。优选地，所述人干扰素为人干扰素a 2b。 本发明实施例制备的制剂为人干扰素，具有抗病毒，抗肿瘤及免疫调节活性，增强机体抗病毒能力，同时还具有消除DNA结构损伤的功能，从而导致细胞遗传机制的恢复，使损伤修复。它通过激活靶细胞的抗病毒基因，产生抗病毒蛋白，抑制病毒DNA的复制和mRNA的转录，从而起到抑制病毒的作用。而且干扰素尚可激活自然杀伤细胞、巨噬细胞，调控主要组织相容性抗原的表达。临床试验显示，本发明制得的药物制剂治疗HPV感染有一定疗效，而对高危型及单纯型HPV病毒感染有显著的治疗效果。与现有的注射用干扰素相比，本发明所述制剂具有无痛、方便、有效、无副作用等优点，其透皮吸收性好，能达到局部抗病毒有效抑制细胞増殖的作用；另外，其稳定性佳，常温保存3个月效价几乎没有变化，具有良好的临床应用前景。本发明对于防治HPV感染，特别是高危型HPV感染，预防和降低子宫颈癌的发生具有重要的临床意义。
具体实施例方式本发明公开了人干扰素在制备治疗HPV相关疾病的药物中的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进エ艺參数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技木。为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进ー步的详细说明。实施例I、制剂处方エ艺(I)人干扰素原液的处理根据人干扰素原液体积加入人血白蛋白，使人血白蛋白终浓度为5% (W/V)，然后根据加过白蛋白的人干扰素溶液的总体积加入等体积的稳定剂SDS，混匀，水浴加热O. 5-3min，冷却，分装后进行冷冻干燥成粉末。(2)基质制备精确称取羧甲基纤维素钠200g、甘油500ml、山梨酸20g混合后，加注射用水至lOOOOg，加热至100°C充分搅拌混匀，待基质冷却至40°C时，调pH至7. 5，备用。(3)人干扰素制剂的制备将人干扰素粉末加入至基质中(每IOOOg基质中加入人干扰素粉末I. OXlO9国际单位)，不断搅拌至完全混合均匀。实施例2、制剂处方エ艺(I)人干扰素原液的处理根据人干扰素原液体积加入人血白蛋白，使人血白蛋白终浓度为1% (W/V)，然后根据加过白蛋白的人干扰素溶液的总体积加入等体积的稳定剂还原型谷胱甘肽，混匀，水浴加热O. 5min，冷却，分装后进行冷冻干燥成粉末。(2)基质制备 精确称取羧甲基纤维素钠50g、甘油1500ml、山梨酸IOg混合后，加注射用水至IOOOOg,加热至60°C充分搅拌混匀，待基质冷却至10°C时，调pH至4. 0，备用。(3)人干扰素制剂的制备将人干扰素粉末加入至基质中(每IOOOg基质中加入人干扰素粉末I. OXlO6国际单位)，不断搅拌至完全混合均匀。实施例3制剂处方エ艺(I)人干扰素原液的处理根据人干扰素原液体积加入人血白蛋白，使人血白蛋白终浓度为3% (W/V)，然后根据加过白蛋白的人干扰素溶液的总体积加入等体积的稳定剂维生素C，混匀，水浴加热2min,冷却，分装后进行冷冻干燥成粉末。(2)基质制备精确称取羧甲基纤维素钠100g、甘油750ml、山梨酸15g混合后，加注射用水至lOOOOg，加热至80°C充分搅拌混匀，待基质冷却至30°C时，调pH至9. 5，备用。(3)人干扰素制剂的制备将人干扰素粉末加入至基质中(每IOOOg基质中加入人干扰素粉末I. OXlO8国际单位)，不断搅拌至完全混合均匀。实施例4制剂处方エ艺(I)人干扰素原液的处理根据人干扰素原液体积加入人血白蛋白，使人血白蛋白终浓度为2% (W/V)，然后根据加过白蛋白的人干扰素溶液的总体积加入等体积的稳定剂肝素，混匀，水浴加热
2.5min,冷却,分装后进行冷冻干燥成粉末。(2)基质制备精确称取羧甲基纤维素钠80g、甘油600ml、山梨酸18g混合后，加注射用水至lOOOOg，加热至90°C充分搅拌混匀，待基质冷却至20°C时，调pH至6. 0，备用。(3)人干扰素制剂的制备将人干扰素粉末加入至基质中(每IOOOg基质中加入人干扰素粉末I. OXlO7国际单位)，不断搅拌至完全混合均匀。实施例5、HPV转阴率临床研究I.试验总体设计本试验采用多中心、随机、开放、平行、空白对照设计。试验组(实施例I的制剂组)和对照组(安慰剂组)入组患者的比例为2 I。计划共入选432例病例，其中试验组为288例，对照组为144例。实施例I制备的试验药物的用法为一次一支，隔日用药一次，连续使用10次为I个疗程。2.治疗周期的确定试验目的主要是探索人干扰素对于HPV转阴率的影响，根据文献报道HPV病毒的复制周期是8-12周，因此用药周期为3个月。
3.样本量估算3. I计划共入选432例病例，其中试验组为288例，对照组为144例。研究实施步骤按照下表进行。
权利要求
1.人干扰素在制备治疗或预防HPV相关疾病的药物中的用途。
2.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述人干扰素选自人干扰素α、人干扰素β和人干扰素Y。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述人干扰素α选自人干扰素alb、人干扰素a 2a、人干扰素a 2b和所述三种蛋白的衍生物及类似物。
4.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述人干扰素为天然人干扰素或重组人干扰素。
5.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述HPV相关疾病为单纯型HPV感染。
6.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述HPV相关疾病为高危型HPV生殖道持续感染。
7.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述HPV相关疾病为宫颈糜烂、尖锐湿疣、生殖器疱疹或口唇疱疹、带状疱疹、皮肤癌、宫颈癌、扁平疣、宫颈上皮细胞瘤变。
8.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述药物的制备方法如下 步骤I :在人干扰素原液中加入人血白蛋白得到混合溶液，使白蛋白终浓度为1% -5%,加入与混合溶液等体积的稳定剂混匀，水浴加热O. 5-3min，冷冻干燥成粉末； 步骤2 :称取羧甲基纤维素钠50-200g、甘油500-1500ml、山梨酸10_20g混合后，加注射用水至lOOOOg，加热至60-100°C混匀，待基质冷却至10-40°C时，调pH至4. 0-9. 5，备用； 步骤3 :将步骤I人干扰素粉末加至步骤2制备的基质混合均匀，分装即得。
9.根据权利要求I所述的用途，其特征在于，所述药物的制备方法中每IOOOg基质中加入干扰素粉末I. OX IO6-L OX IO9国际单位。
10.根据权利要求8或9所述的用途，其特征在于，所述人干扰素为人干扰素a2b。
全文摘要
本发明涉及医药领域，公开了人干扰素在制备治疗或预防HPV相关疾病的药物中的用途。临床试验显示，人干扰素治疗HPV感染有疗效，尤其是单纯型HPV感染和高危型HPV生殖道持续感染有显著的治疗效果。本发明对于防治HPV感染，特别是单纯型HPV感染，预防和降低宫颈糜烂、宫颈癌的发生具有重要意义，具有良好的临床应用前景。
文档编号A61P17/12GK102614497SQ20121010494
公开日2012年8月1日 申请日期2012年4月11日 优先权日2012年4月11日
发明者凌娟, 吴艳, 张国辉, 戴向荣, 李小羿 申请人:兆科药业(合肥)有限公司