专利名称：朝天罐总黄酮提取工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于天然药物的加工提取，特别是以植物朝天罐opiparaC.Y.Wu et C. Chen全株植物为原料的朝天罐总黄酮提取工艺。
背景技术：
朝天罐opipara C. Y. Wu et C. Chen),为野牡丹科金锦香属多年生草本植物，分布于我国贵州、广西、台湾、长江流域各省及越南、泰国等国家，为广西少数民族地区常用本草药材[中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京科学出社，1984:238.]。主要以根入药，又名罐子草根，其味甘、微苦，性平，归肾、大肠经，功能益肾、止血、解毒，主治腰膝酸软，咯血，痢疾，咽喉痛等；亦可全株入药，用于小儿风热、久咳、咯血、胃痛、白带、月经不调、胎漏下血、痔疮出血及癌症等[广西壮族自治区中医药研究所.广西药用植物名录[M].南宁广西人民出版社，1986: 164.]。朝天罐药材资源丰富，我国中东部与西南各省均产，为民间常用的的中草药之一。 至2012年7月30日，已公开的、与朝天罐有关的专利文献共计4条，全部为发明专利，均为朝天罐的应用。朝天罐总黄酮和提取工艺，其中包括提取方法，提取溶剂、时间、次数和液料比、尚未见有专利文献报道。

发明内容
本发明的目的是要提供一种高效且能放大进行工业生产的朝天罐总黄酮提取工艺。实现本发明目的的技术方案是
一种朝天罐总黄酮提取工艺，包括如下步骤
(1)将朝天罐药材粉碎成粉末；
(2)将药材粉末置于圆底烧瓶中，加入乙醇，用回流提取法提取；
(3)过滤，并用乙醇洗涤滤渣；
(4)合并过滤液和洗涤液，用乙醇定容后，得到含黄酮的溶液；
(5)显色后测定吸光度，带入回归方程，计算出总黄酮含量。步骤(2)所述乙醇浓度为50、5% ;药材粉末与乙醇的料液比(g:ml)=l:l(T30，提取时间f2h，提取次数广3次。步骤(2)的优选参数为乙醇的浓度为75%，药材粉末与乙醇的料液比(g:mL)=1:20，提取时间为lh，提取次数3次，这些均由具体实施方式
中的实验得出。本发明的优点是本发明提供了一种朝天罐总黄酮的提取工艺，工艺条件简单，可进行工业化生产。
具体实施例方式朝天罐总黄酮提取工艺1.仪器与试药 1.1仪器
UV2550紫外分光光度计(日本岛津公司)；B2200S-T型超声仪(上海必能信超声有限公司)；WF-4000C型常压微波快速反应系统(上海屹尧分析仪器有限公司)；BT224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器 系统有限公司)；单道微量可调移液枪(芬兰ThermoFinnpipette) ；R-200 旋转蒸发仪(瑞士 BUCHI 公司)。I. 2 试药
芦丁标准对照品(批号10080-9705，中国药品生物制品检定所)；乙醇(分析纯，天津市大茂化学试剂厂，批号20080818);亚硝酸钠(分析纯，天津市博迪化工有限公司，批号20080904);硝酸铝(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20080404);氢氧化钠(分析纯，重庆市川江化学试剂厂，批号20080822);甲醇(分析纯，天津市博迪化工有限公司，批号:200807)；
水为超纯水。其他均为分析纯。朝天罐新鲜药材购于桂林药材市场，经桂林医学院生药学教研室杜泽乡副教授鉴定为为野牡丹科植物朝天罐opipara C. Y. Wu et C. Chen的全株。取药材根部阴干，粉碎，备用。2.方法与结果[3_5]
2.I测定波长的选择
取适量对照品与朝天罐样品溶液，分别置于5mL容量瓶中，加75%乙醇至I. 6mL,再加入
0.2mL亚硝酸钠溶液(SOg*!/1)，摇匀，放置5min ;加入0. 2mL硝酸铝溶液(lOOg^L—1)，摇匀，放置6min ;加入2mL氢氧化钠溶液(40g*L_i),用蒸懼水定容至刻度,摇勻,放置15min显色，立即测定；在200 800nm波长范围内进行扫描，结果表明对照品与样品溶液在505nm处均有最大吸收，故选择505nm为测定波长。2. 2标准曲线的制作
精密称定芦丁对照品5. 17mg，置5mL量瓶中，加75%乙醇至刻度，摇匀，得浓度为1.034mg^mr1 的对照品溶液。取对照品溶液 0. 04mL, 0. 08mL, 0. 16mL, 0. 24mL, 0. 32mL, 0. 40mL,分别置5 mL量瓶中，按“2. I”项操作，自“加75%乙醇至，I. 6mL”起，依法测定吸光度，以吸光度(A)为纵坐标、浓度(C)为横坐标绘制标准曲线。求得回归方程为A=19. 79C+0. 0034(r=0. 9999)，线性范围 0. 00827 0. 08272mg*mL'2. 3供试品溶液的制备
取朝天罐药材粉末(60目)0. 2g，精密称定，加入75%乙醇10mL，水浴回流提取I. 5h，重复2次。过滤，滤渣用75%乙醇洗涤，合并并浓缩滤液，置于IOmL容量瓶中，放冷，75%乙醇定容至刻度，摇匀，得供试品溶液。2. 4方法学考察
2.4. I稳定性考察
精密量取朝天罐供试品溶液0. 5mL，按“2. I”项操作，自“置5mL量瓶中”起，显色后每隔5min测定一次吸光度，共6次，RSD=3. 09%，表明在测定时间30min内样品稳定性良好。2. 4. 2精密度考察
取某一浓度对照品溶液0. 5mL,按“2. I”项操作，自“置5mL量瓶中”起，显色后测定吸收度，连续6次，RSD=O. 18%。表明仪器精密度良好。2. 4. 3重现性考察
精密称取同一批样品6份，每份约0. 2g，按“2. 3”项下方法平行制备，每份取0. 5mL,按“2. I”操作显色后，测定吸光度，带入回归方程，计算总黄酮含量平均含量1.90%，RSD二2. 33%。表明该方法重现性良好。2. 4. 4加样回收率实验
精密称取已知含量的朝天罐粉末6份，每份约0. lg，均加入已知含量的芦丁对照品l.Omg，按“2. 3”项下方法平行制备，每份取0.5mL，按“2. I”操作显色后，测定各份样品中吸光度，带入回归方程计算总黄酮的含量，计算得本法平均加样回收率=98. 09%。RSD二
3.0%。见表I
表I样品加样回收率实验(/7=6)
权利要求
1.朝天罐总黄酮提取工艺，其特征在于包括如下步骤 (1)将朝天罐药材粉碎成粉末； (2)将药材粉末置于圆底烧瓶中，加入乙醇，用回流提取法提取； (3)过滤，并用乙醇洗涤滤渣； (4)合并过滤液和洗涤液，用乙醇定容后，得到含黄酮的溶液； (5)显色后测定吸光度，带入回归方程，计算出总黄酮含量。
2.根据权利要求I所述的提取工艺，其特征在于步骤(2)所述乙醇浓度为50、5%;药材粉末与乙醇的料液比(g:ml)=l:l(T30，提取时间f2h，提取次数广3次。
3.根据权利要求I或2所述的提取工艺，其特征在于步骤(2)所述乙醇浓度为75%，药材粉末与乙醇的料液比(g:ml)=l:20，提取时间lh，提取次数3次。
全文摘要
本发明公开了一种朝天罐总黄酮提取工艺，采用如下方案取朝天罐药材粉末置于圆底烧瓶中，用75%的乙醇回流提取；过滤，滤渣用提取液洗涤，合并浓缩滤液，用乙醇定容后，利用紫外分光光度计进行比色测定。该工艺条件简单可行，为更有效的来发利用朝天罐资源提供了理论参考和实验指导，可进行工业化生产。
文档编号A61P11/04GK102772457SQ20121029095
公开日2012年11月14日 申请日期2012年8月16日 优先权日2012年8月16日
发明者张可锋, 段小群, 高雅 申请人:桂林医学院