专利名称：结合人白介素-18的抗体及制备和使用方法
结合人白介素-18的抗体及制备和使用方法本申请是申请号为“01807735. 8”，发明名称为“结合人白介素-18的抗体及制备和使用方法”的发明专利申请的分案申请。相关申请本申请要求于2000年2月10日申请的、题目是“结合人白介素-18的抗体及制备和使用方法”的美国临时专利申请顺序号60/181，608的非临时专利申请的优先权，该专利申请的内容通过引用结合到本文中。另外，整个本申请引用的包括参考文献、授予的专利和公布的专利申请的所有引用参考文献的内容均通过引用结合到本文中。
背景技术：
白介素-18(IL-18)最早于1989年被描述为干扰素-γ诱导因子(IGIF)，它是除了能够诱导干扰素Y外还具有各种功能的促炎细胞因子。这些生物学特性包括激活 NF-Kb, Fas配体表达、诱导CC趋化因子和CXC趋化因子以及增加产生感受态人免疫缺陷病毒。由于IL-18能够诱导T细胞和巨噬细胞内产生干扰素Y，因此它在Thl型免疫应答中起重要作用且参与先天性免疫和获得性免疫。IL-18在结构和功能上与IL-I家族有关。有关IL-18结构、功能和生物活性的综述，参见例如Dinarell0，C.等(1998) J. Leukoc. Biol. 63 :658-654 ；Dinarello, C. A. (1999)Methodsl^ :121-132 和 Dinarello, C. A. (1999) J. Allergy Clin. Immunol. 103 :11_24。特别需要调节各种各样的人免疫应答中的IL-18。具体来说，与IL-18结合并中和IL-18的抗体是特别理想的。此外，由于存在小鼠抗体给予人体的相关问题，例如血清半寿期短、不能触发某些人类效应子功能并且在人体内诱发针对小鼠抗体不需要的免疫应答 (“人抗小鼠抗体”(HAMA)反应)，因此小鼠IL-18抗体的体内应用受到限制。一般而言，尝试克服与将完全小鼠抗体用于人类相关的问题，已经涉及对所述抗体进行基因工程改造以使其更“人样化(human-like)”。例如，已经制备出这样的嵌合抗体其中所述抗体链的可变区来源于小鼠，而所述抗体链的恒定区来源于人(Junghans等 (1990)Cancer Res. 50 1495-1502 ；Brown 等(1991)Proc. Natl. Acad. Sci. 88 :2663-2667 ； Kettleborough 等(1991)Protein Engineering. 4 :773-783)。然而，因为这些嵌合人源化抗体仍保留某些小鼠序列，所以它们仍可能诱发不需要的免疫反应、人抗嵌合抗体(HAMA) 反应，当长期给予时情况尤其如此。针对小鼠抗体或其衍生物(例如嵌合抗体或人源化抗体)的优选IL-18抑制剂将完全是人抗IL-18抗体，由于这样的药物不会诱发HAMA反应，因此即使长期应用也不会诱发HAMA反应。然而，这样的抗体本领域尚未见介绍，因此仍然需要这样的抗体。发明概述本发明涉及结合人IL-18的诸如抗体的化合物以及制备和应用这类化合物或抗体的方法。一方面，本发明涉及能够结合人IL-18氨基酸序列或其部分的化合物，其中所述氨基酸包含SEQ ID NO 70或SEQ ID NO 71提供的人IL-18的N末端部分或C末端部分。在一个实施方案中，所述化合物是一种小分子、肽、多肽、抗体或抗体片段，例如完全人抗体或片段。另一方面，本发明涉及能够与人IL-18结合的人单克隆抗体或其抗原结合部分。 在其它实施方案，根据表面等离子体共振(surface plasmon resonance)测定，所述抗体或其片段与人IL-18解离的koff速率常数为0. Is-I或以下、lxlOE-2s-l或以下、lxlOE-3s-l 或以下、lxlOE-4s-l或以下、lxlOE-5s-l或以下、lxlOE-6s_l或以下；或者抑制人IL-18活性的IC50为1χ10Ε-6或以下、1χ10Ε-7或以下、lxlOE-8或以下、lxlOE-9或以下、IxlOE-IO 或以下、或IxlOE-Il或以下。另一方面，本发明涉及这样的分离抗体或其抗原结合部分它结合包含氨基酸 PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO 1) ,VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO :33)或二者任何一个的一部分的人IL-18表位。所述抗体最好是中和抗体。所述抗体最好是人抗体。在各种实施方案中，所述抗体是重组抗体(例如单链抗体(scFv))或单克隆抗体。在其它实施方案中，所述分离抗体或其抗原结合部分与人IL-18表位或二者任何一个的一部分结合，其中根据表面等离子体共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人 IL-18解离的k。ff速率常数为0. Is"1或以下；或者其抑制人IL-18活性的IC5tl为IxKTfiM或以下。或者，根据表面等离子体共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的 k。ff速率常数为Ix IO-2S-1或以下；或者抑制人IL-18活性的IC5tl为1χ1(ΓΜ或以下。或者， 根据表面等离子体共振测定，所述抗体或其抗原结合部分可以与人IL-18解离，其k。ff速率常数为IxKT3iT1或以下；或者可以抑制人IL-18活性，其IC5tl为1x10_8M或以下。或者，根据表面等离子体共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为 IxlO-4S-1或以下；或者抑制人IL-18活性的IC5tl为IxKTi3M或以下。或者，根据表面等离子体共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxlO-5S-1或以下；或者抑制人IL-18活性的IC5tl为IxlO-ltlM或以下。或者，根据表面等离子体共振测定， 所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxlO-6S-1或以下；或者抑制人IL-18活性的IC50为IxlO-11M或以下。本发明的另一方面涉及含有能够结合IL-18表位的至少一个可变区⑶R结构域的分离的人抗体或其抗原结合部分。在相关实施方案中，所述分离抗体或其抗原结合部分的可变区含有如表6或表9所示的重链和/或轻链⑶Rl结构域、⑶R2结构域或⑶R3结构域， 所述结构域可以在表7-8和表10-11中所示的任一 Kabat位置上或邻近所述位置具有例如一个或多个氨基酸取代或插入。在一个优选实施方案中，所述分离抗体或其抗原结合部分含有一个含氨基酸序列SEQ ID NO 29的轻链可变区(LCVR)和一个含氨基酸序列SEQ ID N0:26的重链可变区(HCVR)。在另一个优选实施方案中，所述分离抗体或其抗原结合部分含有一个具有氨基酸序列SEQ ID NO 29的轻链可变区(LCVR)和一个具有氨基酸序列SEQ ID NO 27的重链可变区(HCVR)。本发明的另一方面涉及包含本发明的抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体的药用组合物。在一个实施方案中，所述药用组合物还包含至少一种另外的治疗其中 IL-18活性是有害的疾病的治疗药物。本发明的另一方面涉及制备结合人白介素-18(IL_18)的抗体的方法。本发明提供的方法包括将抗体库(antibody repertoire)暴露于包含含氨基酸PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO : 1)、VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO :33)或二者任何一个的一部分的人IL-18表位的抗原；并且从所述抗体库选择结合包含氨基酸PLFEDMTDSDCRDNA(SEQ ID NO :1)、VIRNLNDQVLFIDQ(SEQ ID NO :33)或者二者任何一个的一部分的人IL-18表位的抗体。在一个实施方案中，所述抗体库是动物体内的体内抗体库，所述方法包括用包含以下组分的抗原免疫所述动物包含氨基酸PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO :1)、 VIRNLNDQVLFIDQ(SEQ ID NO :33)的人IL-18表位、人IL-18的N末端部分或C末端部分(SEQ ID NO 70-71)或这些表位中任一表位的一部分。在另一个实施方案中，所述抗体库是重组抗体文库，所述方法包括用含有以下组分的抗原筛选所述文库具有氨基酸 PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO 1)、VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO :33)的人 IL-18 表位、SEQ ID NO :31-32和SEQ ID NO :34-60表示的肽或任一前述组分的一部分。所述文库最好是人抗体文库。另一方面，本发明提供编码任一上述方面的抗体(例如重链和/或轻链可变区) 或其部分的分离核酸。在相关实施方案中，所述编码抗IL-18抗体或其部分的分离核酸位于重组表达载体中，例如在宿主细胞中表达。因此，另一方面，本发明涉及采用已经导入所述重组表达载体中的前述宿主细胞合成结合人IL-18的抗体的方法，所述方法包括在培养基中培养所述宿主细胞直到所述细胞合成结合人IL-18的抗体。本发明的另一方面涉及抑制人IL-18活性的方法，所述方法包括将人IL-18与本发明的抗体或其抗原结合部分接触，使得人IL-18活性被抑制。本发明的再一方面涉及抑制罹患其中人IL-18活性是有害的疾病的病人体内的人IL-18活性的方法，所述方法包括给予所述病人本发明的抗体或其抗原结合部分，使得所述病人体内的人IL-18活性被抑制。在一个实施方案中，可以例如在给予另外的药物之前、同时或之后，给予所述抗IL-18抗体，所述另外的药物例如抗IL-12抗体或其抗原结合片段、氨甲蝶呤、抗TNF抗体或其抗原结合片段、皮质类固醇、环孢菌素、雷帕霉素、Π(506或非甾体消炎药。附图简述

图1显示与IL-I β (左)和ILlRA(右)相比的IL_18(中间)的结构模型。图2显示与IL-18受体复合的IL-18的结构模型，其中IL-18的包含氨基酸 PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO 1)的肽表位以深灰色表示。该肽表位被抗IL-18抗体2E1结
口 O图3显示与IL-18受体复合的IL-18的结构模型，其中IL-18的包含氨基酸 VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO 33)的肽表位以深灰色表示。该肽表位被抗IL-18抗体
纟口口。图4显示与IL-18受体复合的全长IL-18的结构模型。球形浅灰色和深灰色表位代表IL-18的N末端和C末端接触表位(分别为SEQID NO :70和71)。图5显示三种不同的抗IL-18抗体中和IL-18的生物效应的效价与抑制KGl细胞内IFN-Y诱导作用的关系。抗体125H(方框)和2ElIgG抗体(圆形)或2E1单链抗体 (三角形)的 IC50 值分别为 2. 1E-10、9· 0E-10 和 3. 3E-9。
发明详述本发明涉及选择能够对IL-18介导的信号转导产生中和作用的抗体的肽表位、制备抗这些表位的抗体以及这些抗体的应用，包括用来治疗涉及IL-18的疾病。选择表位的策略必须构建IL-18蛋白及其相应的受体的同源性模型。然后组合应用目测和计算估计选择用于合成和抗体产生的代表性肽区段。本文所示的氨基酸序列运用标准单字母缩写代码。IL-18表位的诜择运用程序Modeler (Sali, Α.等，通过MODELLER评价比较性蛋白质建模 (Evaluation of comparative protein modeling by MODELLER)。Proteins :Struct., Funct.，Genet. (1995)，23(3)，第 318-26 页。CODEN =PSFGE Y ；ISSN :0887-3585)产生用于IL-18和IL-18受体两者的同源性模型。IL-I β (Priestle, J.等，人白介素 的三维结构精确到 2. 0. ANG.分辨率(The three-dimensional structure of human interleukin-1. beta, refined to 2. 0. ANG. resolution)。Prog. Cl in. Biol. Res. (1990) ,349 (Cytokines Lipocortins Inflammation Differ.),第 297—307 页)禾口 IL-IRA(Schreuder, H.等，白介素_1受体拮抗剂的精细晶体结构二硫键和顺式脯氨酸的存在(Refined crystal structure of the interleukin-1 receptor antagonist presence of a disulfide link and a cis_proline)。 Eur.J. Biochem. (1995),227(3), 第838-47页)的X射线晶体结构是可得到的并且用作IL-18模型构建的参考坐标。应用 IL-I受体结构(Viger，G.等，与白介素_1 β复合的I型白介素_1受体的晶体结构(Crystal structure of the type-1 interleukin-l-receptor complexed with interleukin-1. beta)。Nature (London) (1997)，386 (6621)，第 190-194 页)对 IL-18 受体建模。下文进一步描述IL-18和IL-18受体的结构模型建立。IL-18模型建立与所述两种蛋白质(即IL-I β和IL-18)的总体序列同源性低，然而，令人信服的证据是IL-18是IL-I家族成员(参见Dinarello，C. A. IL-18 一种THl诱导型促炎细胞因子及 IL-I 家方矣新成员(IL-18 :aTHl-inducing, proinflammatory cytokine and new member of the IL-lfamily)。J.Allergy Clin. Immunol. (1999),103 (1, Pt.1),第 11- 页)，并且总体蛋白质折叠非常相似。和IL-Ιβ —样，IL-18最初以前体形式分泌出来。前体 IL-I β (pro-IL-1 β )和前体 IL-18 (pro_IL_18)两者均被 IL-I β 转化酶(ICE) 激活(Fantuzzi, G.和 Dinarello，C. Α.白介素-18 和白介素-1 β :ICE(caspase-1)的两种细胞因子底物(Interleukin-18 and Interleukin-1 β -.two cytokine substrates for ICE (caspase-1))。J. Clin. Immunol. (1999)，19 (1)，第 1-11 页)。还知道 IL-1 受体和IL-18受体相似(Dinarello，C. Α.等，白介素-18的综述不止是一种干扰素、诱导因子(Overview of interleukin-18 :more than an interferon- y inducing factor)。 J. Leukocyte Biol. (1998)，63 (6)，658-664)。IL-I β 能够与 IL-18 受体结合。虽然这两种蛋白质间的总体序列同源性和IL-18的序列同源性相同，但是作为最终论证，IL-I β和 IL-IRA显示出相同的折叠。对这三种蛋白质(即IL-18、IL-li3和IL1-RA)间的序列比对运用程序hsightll人工进行。该序列比对可以参见表1 表1 JL-18与IL-I β和IL-IRA的序列比对
1权利要求
1.一种能够结合人IL-18氨基酸序列或其部分的化合物，其中所述氨基酸包含选自 SEQ ID NO 67 和 SEQ ID NO 68 的序列。
2.权利要求1的化合物，其中所述化合物选自小分子、肽、多肽、抗体和抗体片段。
3.权利要求2的化合物，其中所述抗体或抗体片段是完全人抗体或抗体片段。
4.一种人单克隆抗体或其抗原结合部分，它能够与人IL-18结合。
5.权利要求4的抗体，其中根据表面胞质团共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为0. Is"1或0. Is"1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl为 IxKT6M 或 IxKT6M 以下。
6.权利要求4的抗体，其中根据表面胞质团共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxKT2iT1或IxKT2iT1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 为 1χ1(ΓΜ 或 IxKT7M 以下。
7.权利要求4的抗体，其中根据表面胞质团共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxKT3iT1或lxlO、—1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 为 IxKT8M 或 IxKT8M 以下。
8.权利要求4的抗体，其中根据表面胞质团共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxKT4iT1或lxlO、—1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 为 IxKT9M 或 IxKT9M 以下。
9.权利要求4的抗体，其中根据表面胞质团共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxKT5iT1或lxlO、—1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 为 IxlO-iciM 或 ΙχΙΟ,Μ 以下。
10.权利要求4的抗体，其中根据表面胞质团共振测定，所述抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxKTfV1或IxKTfV1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 为 IxKT11M 或 IxKT11M 以下。
11.一种分离抗体或其抗原结合部分，它结合包含选自SEQ ID NO :3和SEQ ID NO 33 的氨基酸序列的人IL-18表位或其部分。
12.权利要求11的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体是中和抗体。
13.权利要求11的抗体或其抗原结合部分，所述抗体是人抗体。
14.权利要求11的抗体或其抗原结合部分，所述抗体是重组抗体。
15.权利要求11的抗体或其抗原结合部分，所述抗体是单克隆抗体。
16.一种与人IL-18表位结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中根据表面胞质团共振测定，所述分离抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为0. Is—1或0. Is"1 以下；或者它抑制人IL-18活性的IC50为IxlO-6M或IxlO^M以下。
17.权利要求16的分离抗体或其抗原结合部分，其中根据表面胞质团共振测定，所述分离抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxlO-2S-1或Ix ΙΟ、—1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50为IxlO-7M或IxlO-7M以下。
18.权利要求16的分离抗体或其抗原结合部分，其中根据表面胞质团共振测定，所述分离抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxlO-3S-1或IxlO-3S-1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50为IxlO-8M或IxKT8M以下。
19.权利要求16的分离抗体或其抗原结合部分，其中根据表面胞质团共振测定，所述分离抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为IxlO-4S-1或IxlO-4S-1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50为IxlO-9M或Ix 1(Γ9Μ以下。
20.权利要求16的分离抗体或其抗原结合部分，其中根据表面胞质团共振测定，所述分离抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为Ix ΙΟ、—1或IxlO-5S-1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50为IxlO-10M或Ix 1(Γ10Μ以下。
21.权利要求16的分离抗体或其抗原结合部分，其中根据表面胞质团共振测定，所述分离抗体或其抗原结合部分与人IL-18解离的k。ff速率常数为Ix IO-fV1或IxlO-6S-1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50为IxlO-11M或Ix KT11M以下。
22.—种分离的人抗体或其抗原结合部分，所述抗体包含能够结合人IL-18表位的至少一个可变区CDR结构域。
23.权利要求22的分离抗体或其抗原结合部分，其中与未修饰抗体或其抗原结合部分相比，所述抗体或其抗原结合部分含有至少一个改进结合IL-18的氨基酸取代或插入。
24.权利要求22的分离抗体或其抗原结合部分，其中与未修饰抗体或其抗原结合部分相比，所述抗体或其抗原结合部分含有至少一个改进中和IL-18的氨基酸取代或插入。
25.权利要求22的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述可变区包含一个选自以下的 CDR结构域一个重链⑶Rl结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO :9或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 9序列；一个重链⑶R2结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 10或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO :10序列；一个重链⑶R3结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 11或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 11序列。
26.权利要求25的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述可变区包含一个选自以下的 CDR结构域一个重链⑶Rl结构域，在位置H30、H31、H32、H33或H35上至少一个氨基酸取代而修饰的 SEQ ID NO 9 ；一个重链CDR2结构域，在位置Η52、Η5^ι、Η53、!Β4、Η56或H58上至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 10 ；一个重链⑶R3结构域，在位置H95、H96、H97或H98上至少一个氨基酸取代而修饰的 SEQ ID NO :11。
27.权利要求22的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述可变区包含一个选自以下的 CDR结构域一个轻链⑶Rl结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 12或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 12序列；一个轻链⑶R2结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 13或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO :13序列；一个轻链⑶R3结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 14或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 14序列。
28.权利要求27的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述可变区包含一个选自以下的CDR结构域一个轻链⑶Rl结构域，在位置L30、L31、L32或L34上至少一个氨基酸取代而修饰的 SEQ ID NO 12 ；一个轻链⑶R2结构域，在位置L50、L52、L53或L55上至少一个氨基酸取代而修饰的 SEQ ID NO 13 ；一个轻链 CDR3 结构域，在位置 L89、L90、L91、L92、L93、L94、L95、L95a、L%b、L96 或 L97上至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO :14。
29.一种分离抗体或其抗原结合部分，所述抗体具有一个包含选自SEQ ID NO 15, SEQ ID NO 16和SEQ ID NO 17的氨基酸序列的可变区。
30.一种分离抗体或其抗原结合部分，所述抗体具有一个包含氨基酸序列SEQ ID NO 15的轻链可变区(LCVR)和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO 16的重链可变区(HCVR)。
31.一种分离抗体或其抗原结合部分，所述抗体含有一个具有氨基酸序列SEQ ID NO 15的轻链可变区(LCVR)和一个具有氨基酸序列SEQ ID NO 17的重链可变区(HCVR)。
32.权利要求22的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述可变区包含一个选自以下的 CDR结构域一个重链⑶Rl结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 20或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 20序列；一个重链⑶R2结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 21或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 21序列；一个重链⑶R3结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO :22或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 22序列。
33.权利要求32的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述可变区包含一个选自以下的 CDR结构域一个重链⑶Rl结构域，在位置H30、H31、H32、H33或H35上至少一个氨基酸取代而修饰的 SEQ ID NO 20 ；一个重链CDR2结构域，在位置Η50、Η51、Η52、Η5^ι、Η53、Η54、Η56或H58上至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 21 ；一个重链 CDR3 结构域，在位置 H96、H96、H97、H98、H99、H100、HlOOa, HlOl 或 H102 上至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ IDNO :22ο
34.权利要求32的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述可变区包含一个选自以下的 CDR结构域一个轻链⑶Rl结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 23或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 23序列；一个轻链⑶R2结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 24或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 24序列；一个轻链⑶R3结构域，它的氨基酸序列为SEQ ID NO 25或因为至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO 25序列。
35.权利要求34的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述可变区包含一个选自以下的 CDR结构域一个轻链⑶Rl结构域，在位置L30、L31、L32或L34上至少一个氨基酸取代而修饰的 SEQ ID NO 23 ；一个轻链⑶R2结构域，在位置L50、L52、L53或L55上至少一个氨基酸取代而修饰的 SEQ ID NO 24 ；一个轻链 CDR3 结构域，在位置 L89、L90、L91、L92、L93、L94、L95、L95a、L95b, L96 或 L97上至少一个氨基酸取代而修饰的SEQ ID NO :25。
36.一种分离抗体或其抗原结合部分，所述抗体具有一个包含选自SEQ ID NO 26, SEQ ID NO 27和SEQ ID NO 29的氨基酸的可变区。
37.一种分离抗体或其抗原结合部分，所述抗体含有一个包含氨基酸序列SEQ ID NO 29的轻链可变区(LCVR)和一个包含氨基酸序列SEQ ID NO 26的重链可变区(HCVR)。
38.一种分离抗体或其抗原结合部分，所述抗体含有一个具有氨基酸序列SEQ ID NO 29的轻链可变区(LCVR)和一个具有氨基酸序列SEQ ID NO ,21的重链可变区(HCVR)。
39.一种分离的核酸，所述核酸编码权利要求4-38中任一项的抗体CDR的氨基酸序列。
40.权利要求39的分离核酸，所述核酸位于重组表达载体内。
41.一种宿主细胞，所述宿主细胞内已经导入了权利要求40的重组表达载体。
42.一种合成结合人IL-18的抗体的方法，所述方法包括在培养基中培养权利要求41 的宿主细胞，直到所述细胞合成结合人IL-18的抗体为止。
43.权利要求42的方法，其中所述抗体是人抗体。
44.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求4-38中任一项的抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体。
45.权利要求44的药用组合物，所述组合物还包含至少一种另外的治疗药物，所述治疗药物用于治疗其中IL-18活性是有害的疾病。
46.权利要求45的药用组合物，所述另外的药物选自能够结合人IL-12的抗体或其片段、氨甲蝶呤、抗TNF、皮质类固醇、环孢菌素、雷帕霉素、Π(506或非留体消炎药。
47.一种制备结合人白介素-18(IL-18)的抗体的方法，所述方法包括将一种抗体库暴露于包含人IL-18表位或其部分的抗原；从所述抗体库选择结合人IL-18表位或其部分的抗体。
48.权利要求47的方法，其中所述抗体库是动物体内抗体库，所述方法包括用包含人 IL-18表位或其部分的抗原免疫所述动物。
49.权利要求46或47的方法，其中所述表位包含选自SEQID NO 3和SEQ ID NO 33 的氨基酸序列。
50.权利要求47的方法，其中所述体内抗体库是整合入所述动物基因组中的完全人免疫球蛋白库。
51.权利要求47的方法，其中所述抗体库是重组抗体文库，所述方法包括用包含人 IL-18表位或其部分的抗原筛选所述文库。
52.权利要求47的方法，其中所述文库是人抗体文库。
53.一种抑制人IL-18活性的方法，所述方法包括将人IL-18与权利要求1的化合物接触，使得人IL-18活性被抑制。
54.一种抑制人IL-18活性的方法，所述方法包括将人IL-18与权利要求4_38中任一项的抗体或其抗原结合部分接触，使得人IL-18活性被抑制。
55.一种抑制罹患其中IL-18活性是有害的疾病的病人体内的人IL-18活性的方法，所述方法包括给予所述病人权利要求1的化合物，使得所述病人体内的人IL-18活性被抑制。
56.一种抑制罹患其中IL-18活性是有害的疾病的病人体内的人IL-18活性的方法，所述方法包括给予所述病人权利要求4-38中任一项的抗体或其抗原结合部分，使得所述病人体内的人IL-18活性被抑制。
57.一种治疗罹患其中IL-18活性是有害的疾病的病人的方法，所述方法给予权利要求1的化合物，以便实现治疗。
58.一种治疗罹患其中IL-18活性是有害的疾病的病人的方法，所述方法给予权利要求4-38中任一项的抗体，以便实现治疗。
59.权利要求57或58的方法，其中所述疾病选自类风湿性关节炎、骨关节炎、青少年慢性关节炎、莱姆关节炎、牛皮癣性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节炎、系统性红斑狼疮、节段性回肠炎、溃疡性结肠炎、炎性肠病、胰岛素依赖性糖尿病、甲状腺炎、哮喘、变应性疾病、 牛皮癣、皮炎性硬皮病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、与器官移植有关的急性或慢性免疫性疾病、肉样瘤病、动脉粥样硬化、播散性血管内凝血、川崎病(Kawasaki's disease)、格雷夫斯病(Graves's disease)、肾病综合征、慢性疲劳综合征、韦格纳肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、亨诺赫 _ 舍恩莱因紫癜(Henoch-Schoenlein purpurea)、显微镜可见的肾脉管炎、慢性活动性肝炎、眼色素层炎、脓毒性休克、中毒性休克综合征、脓毒病综合征、恶病质、感染性疾病、寄生虫病、获得性免疫缺陷综合征、急性横贯性脊髓炎、亨廷顿舞蹈病、帕金森氏病、早老性痴呆、中风、原发性胆汁性肝硬化、溶血性贫血、恶性肿瘤、心力衰蝎、心肌硬塞、艾迪生病(Addison's disease)、I型散发性多腺体缺陷和II型多腺体缺陷、 施密特综合征(khmidt’ s syndrome)、成人(急性)呼吸窘迫综合征、脱发、斑形脱发、血清反应阴性关节病、关节病、赖特病(Reiter’ s disease)、牛皮癣性关节病、溃疡性结肠炎性关节病、肠病性滑膜炎、衣原体、耶尔森氏菌和沙门氏菌相关性关节病、脊椎关节病、动脉粥样硬化病/动脉硬化、特应性变态反应、自身免疫性大疱病、寻常天疱疮、落叶状天疱疮、 类天疱疮、线性IgA病、自身免疫性溶血性贫血、库姆斯(Coombs)阳性溶血性贫血、获得性恶性贫血、青少年恶性贫血、肌痛性脑炎/Royal Free病、慢性粘膜皮肤念珠菌病、巨细胞性动脉炎、原发性硬化性肝炎、隐原性自身免疫性肝炎、获得性免疫缺陷病综合征、获得性免疫缺陷相关疾病、丙型肝炎、常见变异型免疫缺陷(常见可变型低丙种球蛋白血症)、扩张性心肌病、女性不育症、卵巢功能衰竭、成熟前卵巢功能衰竭、纤维化肺病、隐原性纤维化肺泡炎、炎症后间质性肺病、间质性肺炎、结缔组织病相关性间质性肺病、混合型结缔组织病相关性间质性肺病、全身性硬化相关性间质性肺病、类风湿性关节炎相关性间质性肺病、系统性红斑狼疮相关性肺病、皮肌炎/多肌炎相关性肺病、斯耶格伦病(Sj6gren’s disease) 相关性肺病、关节强硬性脊椎炎相关性肺病、血管炎性弥漫性肺病、含铁血黄素沉着病相关性肺病、药源性间质性肺病、放射性纤维变性、闭塞性支气管炎、慢性嗜酸细胞性肺炎、淋巴细胞浸润性肺病、感染后间质性肺病、痛风性关节炎、自身免疫性肝炎、1型自身免疫性肝炎 (典型自身免疫性或狼疮样肝炎)、2型自身免疫性肝炎(抗LKM抗体肝炎)、自身免疫介导的低血糖、B型胰岛素抵抗伴随黑色棘皮症、甲状旁腺机能减退症、与器官移植有关的急性免疫性疾病、与器官移植有关的慢性免疫性疾病、骨关节病、原发性硬化性胆管炎、1型牛皮癣、2型牛皮癣、特发性白细胞减少症、自身免疫性中性白细胞减少症、肾病N0S、肾小球肾炎、显微镜可见的肾脉管炎、莱姆病、盘状狼疮红斑、男性不育性特发性或N0S、精子自身免疫、多发性硬化(所有亚型)、交感性眼炎、结缔组织病继发性肺动脉高压、古德帕斯彻综合征(Goodpasture's syndrome)、结节性多动脉炎的肺部表现、急性风湿热、类风湿性脊椎炎、斯蒂尔氏病(Still’ s disease)、全身性硬化、斯耶格伦综合征、Takayasu病/动脉炎性、自身免疫性血小板减少、特发性血小板减少、自身免疫性甲状腺病、甲状腺机能亢进、甲状腺肿自身免疫性甲状腺机能减退(桥本病)、萎缩性自身免疫性甲状腺机能减退、原发性粘液性水肿、晶状体性眼色素层炎、原发性脉管炎、白斑、急性肝病、慢性肝病、变态反应和哮喘、精神障碍(例如抑郁症和精神分裂症)以及Th2型和Thl型介导的疾病。
60. 一种治疗罹患其中IL-18活性是有害的疾病的患者的方法，所述方法包括在给予第二种药物之前、同时或之后，给予抗IL-18抗体的步骤，其中所述第二种药物选自抗 IL-12抗体或其抗原结合片段、氨甲蝶呤、抗TNF抗体或其抗原结合片段、皮质类固醇、环孢菌素、雷帕霉素、Π(506或非甾体消炎药。
全文摘要
本发明涉及结合人白介素-18的抗体及制备和使用方法。本发明提供了结合人白介素-18(hIL-18)的抗体、尤其是结合人IL-18表位的抗体。所述抗体可以是例如完整的人抗体、重组抗体或单克隆抗体。优选抗体对hIL-18具有高亲和力并且在体外和体内均中和hIL-18活性。本发明的抗体可以全长抗体或其抗原结合部分。本发明也提供本发明抗体的制备方法和应用方法。本发明的抗体或抗体部分可用来检测hIL-18和可用来抑制hIL-18活性，例如抑制罹患其中hIL-18活性是有害的疾病的病人体内的hIL-18活性。
文档编号A61P25/14GK102504024SQ20111031153
公开日2012年6月20日 申请日期2001年2月9日 优先权日2000年2月10日
发明者A·R·敦坎, B·拉布科夫斯基, C·P·索尔罗克, J·E·汤普森, J·曼科维奇, J·萨菲尔德, M·怀特, M·罗古斯卡, R·W·迪克松, S·M·布洛克勒胡尔斯特, S·N·伦纳德, T·哈于尔 申请人:雅培制药有限公司