专利名称：新的含有巯基的三环内酰胺类及其在药理学上应用的方法
人们需要能够抑制血管紧张肽转化酶(以下称为ACE)的化合物。抑制ACE就阻滞了十肽血管紧张肽Ⅰ转化为血管紧张肽Ⅱ。血管紧张肽Ⅱ是强的增压物质，因此，由于其生物合成受到抑制，可以引起血压降低，这特别是在动物和人中其高血压与血管紧张Ⅱ有关者。此外，ACE抑制也可通过增强舒缓激肽而降低血压。虽然这些和其他可能的机制的相对重要性仍有待确立，但是在各种动物模型中已经表明ACE抑制剂是有效的抗高血压剂，并且临床上可用于治疗患有肾血管高血压、恶性高血压和本质性高血压的病人，例如，参见D.W.Cushman等，Biochemistry，16，5484(1977)。
此外，人们还需要用于治疗再灌注(reperfusion)损伤的抗局部缺血剂。再灌注损伤是当分子氧重新导入局部缺血组织时所发生的损伤。聚部缺血组织是由于血管功能性收缩或实际梗阻而造成缺血的组织。局部缺血(即在组织中缺乏含氧的血液)可用任一方法在任一组织中引起，这包括由于心脏或部分心脏冠状动脉血栓形成或任一其他的血液供应阻滞而造成的心脏缺血或部分心脏缺血，由于对病人进行心脏外科手术或冠状分流手术所致的外科性局部缺血，在器管移植中所应用的器管或器管系统(例如心脏、心脏-肺、肝脏或肾脏)出现的局部缺血，循环休克时出现的聚部缺血，由于阻塞供应脑血液的动脉(即中风)所致的聚部缺血。
同样，人们也需要对心力衰竭患者的心脏组织具有增强功能的化合物。心力衰竭(heartfailure或Cardiotonia)是临床上的疾病，它们是由于心室的心肌不能维持一定量的血液流到身体所有组织而产生的结果，它们包括后向性心力衰竭、充血性心力衰竭、前向性心力衰竭以及左心室衰竭和右心室衰竭。强心剂是一种能够增强心脏功能的药剂。能够有效地治疗心力衰竭的化合物，是依靠其增加心肌收缩力从而增强心肌和依靠其血管舒张作用以减少工作负荷而起作用。
本发明是关于下式含有巯基的具有一定固定构象的稠合三环内酰胺及其药学上适用的盐，
式中R代表氢、C1-6低级烷基或(C6～C12)芳基(C1～C6)低级烷基;
R′代表氢或-COR，其中R的定义同上。本发明还涉及用于制备式Ⅰ化合物的中间体及其制备方法，它们的药理学作用以及在治疗高血压(即抑制血管紧张肽转化酶)、局部缺血(即治疗局部缺血组织再灌注时发生的损伤)以及心力衰竭(即增强心肌收缩力和治疗心力衰竭)方面的应用。
这里所用的术语“C1～C6低级烷基”和芳基-(C1～C6)低级烷基中的“C1～C6低级烷基”部分，是指有1-6个碳原子的直链或支链烷基，包括例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等。以及乙烯基、炔丙基、丁烯基等。术语“C6～C12芳基”是指含有6-12个碳原子的芳基，包括例如苯基、萘基、茚基、联苯基和苯并环烷基(例如2，3-二氢化茚基和1，2，3，4-四氢萘基)。
本发明化合物的具体实例包括[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-(巯基甲基)-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-(乙酰硫基)甲基]-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-[(苯甲酰硫基)甲基]-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-(巯基甲基)-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸甲酯[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-(巯基甲基)-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸二苯甲酯[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-[(苯甲酰硫基)甲基]-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸甲酯[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-[(苯甲酰巯基)甲基]-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸二苯甲酯。
对于某一类型的治疗上有效的化合物而言，其中往往有某一些或某个化合物比其它化合物更为有效，因而成为优选的化合物。在本申请中，优选R和R′均代表氢的式Ⅰ化合物。
具有下列结构的非对映构型的化合物也是较好的，
式中R和R′与式Ⅰ中的定义相同，其中立体化学为4(S)，7(S)和12b(R)，优先选用的R和R′的定义同上。
式Ⅰ化合物的所有对映异构体和非对映异构体及其混合物均包括在本发明范围内。应用本领域已知的标准方法可以完成上述异构体混合物的分离。
通过反应路线Ⅰ所示的反应，可以容易地制得本发明的三环内酰胺
反应路线Ⅰ
其中R和R′的定义同上，但它们必须不代表氢，R″代表异戊基或正丙基。
反应路线Ⅰ基本叙述了制备式Ⅰ三还内酰胺的方法，该方法是在合适的有机溶剂，例如甲醇(CH3OH)中，于氮气流和回流条件下，使起始原料邻苯二酰胺Ⅱ(其中phth是保护氮的苯邻二甲酰亚胺)与过量水合肼(NH2NH2)反应，转变为胺(式Ⅲ)。然后使生成的胺(式Ⅲ)与等当量的亚硝酸烷基酯(R″ON＝O)，例如亚硝酸异戊酯或亚硝酸丙基酯反应，反应在乙酸和惰性溶剂(例如二氯甲烷或氯仿)存在下，于氮气流和回流条件下进行，得到中间体重氮酰胺(式Ⅳ)。重氮化合物Ⅳ首先与二个当量的强酸(例如甲磺酸或三氟甲磺酸)和过量膦(例如三苯膦或三丁基膦)的混合物于氮气流中，在约-70℃～50℃，最好在约-40℃～-20℃进行反应，然后使生成的混合物随之与二个当量的强碱(例如碳酸钾)和过量甲醛(CH2O)反应，得到烯化的内酰胺V。用碱通过迈克尔反应，使烯属内酰胺(V)与合适的硫酯(R′SH)偶合，得到硫酯Ⅶa，然后用氢氧化锂(LiOH)进行皂化，得到式Ⅰ化合物(产物中含有的R是否为氢取决于反应的持续时间)。或者，当R不是氢时，用氢氧化锂(LiOH)使化合物V水解，得到烯属酸Ⅵ。然后应用碱进行迈克尔反应，化合物Ⅵ可以与合适的硫酯(R′SH)偶合，得到硫酯Ⅶb，在合适的脱氧溶剂(例如甲醇)中，用甲醇钠(+Na-OCH3)使化合物Ⅶb进行裂解，得到式Ⅰ含硫的三环内酰胺。
在合成式Ⅰ化合物中，式Ⅳ和Ⅴ化合物是有用的中间体。
起始原料(式Ⅱ)的制备以下列合成路线Ⅱ表示。在甲酯(式Ⅱ)的制备中，一般最好是用N-保护的苯基丙氨酸开始一系列的反应将其转变成酰氯(Ⅷ，其中phth是保护氮的邻苯二酰胺基团)，然后按熟知的肖特-包曼(Schott-Baumann)反应，使酰龋ㄊ舰┯氚被蚁┞ (Ⅸa)偶合，或与-OH受保护的乙烯基氨基酸(Ⅸb)反应。在该步反应中，反应物在碳酸钠/丙酮和水存在下，最好在室温下进行偶合，然后进行酸化，得到中间体(Ⅹa和Ⅹb)。这些中间体Ⅹa或Ⅹb在含有醇[例如甲醇(CH3OH)]的二氯甲烷中，于-78℃与臭氧(O3)反应，再用甲硫醚(Me2S)和吡啶处理，分离出的产物与三氟乙酸/二氯甲烷(H+)一起回流，得到另外的中间体(Ⅺa和Ⅺb)。再按照熟知的弗瑞德-克来福环合反应，将中间体Ⅺa和Ⅺb与三氟甲磺酸(CF3SO3H)处理，得式(Ⅱ)化合物。
反应路线Ⅱ
其中R的定义同上。
下面具体实例用以阐明本发明化合物的合成方法，但是决不能把它们看作是对本发明范围的限制。
实例1[2(S)]N-(2-氯-2-环己烯-1-基)-1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-(S)-苯基甲基-2-乙酰胺(Ⅹa)步骤A.2-(2-氯-2-环己烯-1-基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮将11.0g(72.8mmol)1，6-二氯环己烯、20.0g(108mmol)苯邻二甲酰亚胺钾和1.0g(6.0mmol)碘化钾在50ml无水二甲基甲酰胺中的溶液于110℃在氮气流下搅拌24小时。使反应混合物冷却而后倒入30ml乙醚中，将黑色的混合物过滤，然后在真空下除去乙醚和DMF。使带黑色的结晶状残余物溶于乙酸乙酯中，而后于500g硅胶柱上进行快速层析，用10%～20%乙酸乙酯/己烷洗脱。洗脱液的适当部分经过浓缩，再用乙酸乙酯/己烷重结晶，得14.0g(产率73.5%)所需的苯邻二甲酰亚胺，m.p.99～103℃。
步骤B.将6.0g(120mmol)水合肼和26.1g(100mmol)N-苯二甲酰亚氨基-6-氨基-1-氯代环己烯在150ml甲醇中的溶液在氮气流下加热回流3小时，使其冷却至25℃并搅拌3小时。混合物经过滤、浓缩后倒入300ml1N盐酸中，用200ml二氯甲烷洗涤。将水层碱化，用二氯甲烷萃取3次，每次500ml。有机层经硫酸镁干燥、过滤并浓缩，得9.25(70mmol)粗品胺。将中性萃取液经过浓缩，得到6.0g未反应的起始苯邻二甲酰亚胺。在25℃和氮气流下，在30分钟内于21g(71mmol)苯二甲酰亚氨基-L-苯基丙氨酸和18.5g(75mmol)N-乙酯基-2-乙氧基-1，2-二氢化喹啉的200ml二氯甲烷溶液中，边搅拌边加入9.25g(70mmol)6-氨基-1-氯代环己烯在20ml二氯甲烷中的溶液。搅拌18小时后，反应混合物用10%盐酸溶液洗涤二次，每次200ml，再依次用200ml饱和碳酸氢钠溶液和盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥、过滤和浓缩，得到固体。用二氯甲烷/己烷重结晶，得26.1g所需的2-(S)非对映的酰胺(Ⅹa)混合物(此处未经分离，总收率为64%)。
IR(KBr)3400，1775，1715，1650，1530，1380，cm-1;1H NMR δ1.60(m，2H)，1.82(m，2H)，2.05(m，2H)，3.49(s，1H)，3.59(s，1H)，4.60(m，1H)，5.05(dd，1/2H，Ja＝10Hz，Jb＝2Hz)，5.17(dd，1/2H，Ja＝10Hz，Jb＝2Hz)，5.95(t，1H，J＝7Hz)，6.45(m，1H)，7.10(s，5H)，7.70(m，4H).
元素分析，C23H21ClN2O3，计算值C，67.56;H5.18;N，6.85。
实测值C，67.40;H5.30;N，6.80。
实例2[S(R＊，R＊)]-1-[2-(1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-基)-1-氧代-3-苯基丙基]-1，2，3，4-四氢-2-吡啶羧酸甲酯(Ⅺa)将12.2g(30mmol)由实例1得到的氯乙烯物在含20ml无水甲醇的300ml二氯甲烷中的溶液冷却至-70℃，一边搅拌一边将氧气中的臭氧流(由Welsbach臭氧发生器发生┚劢岬亩嗫撞Ａㄈ肷鲜鋈芤褐小５比芤罕涑衫忌蛉芤褐型ㄈ敫稍锏牡猿ス康某粞酢７从旌衔镉 0ml二甲硫和4ml吡啶处理，然后使其逐渐地温热至25℃并搅拌20小时。将溶液倒入200ml10%盐酸溶液中，分离有机层，用水充分洗净，经硫酸镁干燥并浓缩，得到13.0g琥珀色油状物。使粗品臭氧分解产物溶于含0.5ml三氟乙酸的200ml二氯甲烷中，在氮气流下加热回流3小时。冷却后的溶液用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩，得12.2g琥珀色油状物。用制备高效液相色谱分离，以用50%乙酸乙酯/己烷(Waters prep-500，一次循环)洗脱，得4.3g(10.1mmol)各非对映的酰基烯胺Ⅺa和Ⅺb(总收率为68%)。异构体Ⅺa用二氯甲烷/己烷重结晶，得到细的白色结晶状粉末，m.p.146～147℃;[α]AmbD＝-320.1°(C＝1.1，氯仿);
IR(KBr)1770，1740，1720，1670，1650，1390，1220，722cm-1;1H NMR δ1.85(m，2H)，2.30(m，2H)，3.50(d，2H，J＝7Hz)，3.72(s，3H)，4.71(m，1H)，5.20(m，1H)，5.27(t，1H，J＝7Hz)，6.45(d，1H，J＝9Hz)，7.12(s，5H)，7.71(m，4H).
元素分析，C23H22N2O5，计算值C，68.89;H5.50;N，6.69。
实测值C，68.61;H5.26;N，6.56。
实例3[4S-(4α，7α，12bβ)]-7-(1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-基)-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-6-氧代吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸二苯基甲酯(Ⅱa)在搅拌和氮气流下，于4.20g(10.0mmol)所需的酰基烯胺(由实例2得到)的20ml二氯甲烷溶液中加入6ml三氟甲磺酸。在20℃搅拌18小时后，将溶液倒入冰中并用200ml乙酸乙酯萃取。有机层用水充分洗涤，用硫酸镁干燥，再浓缩。残余物溶于二氯甲烷中，并用2.2g重氮二苯甲烷处理，使其静置12小时。浓缩溶液，残余物于400g硅胶上行闪式柱层析，用33%乙酸乙酯/己烷洗脱，得4.5g(7.7mmol，产率为77%)标题化合物二苯甲酯(R＝CHPh2)，为泡沫状物。用二氯甲烷/己烷缓慢地重结晶，得4.3g(产率为75%)纯的透明片状物，m.p.156～157℃;[α]AmbD＝-87.6°(C＝0.6，氯仿);
IR 1780，1717，1643，1450，1379cm-1;1H NMRδ1.8-2.1(m，4H)，2.38(m，2H);3.23(dd，1H，Ja＝18Hz，Jb＝16Hz)，4.38(dd，1H，Ja＝19Hz，Jb＝12Hz)，5.30(dd，1H，Ja＝6Hz，Jb＝2Hz)，5.42(dd，1H，Ja＝6Hz，Jb＝4Hz，6.05(dd，1H，Ja＝12Hz，Jb＝6Hz)，6.30(s，1H)，6.61(d，1H，J＝7Hz)，6.9-7.4(m，13H)，7.75(m，2H)，7.92(m，2H).
元素分析，C36H30N2O5，计算值C，75.77;H5.30;N，4.91。
实测值C，75.79;H5.46;N，4.77。
实例4[4S-(4α，7α，12bβ)]-7-(1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-基)-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-6-氧代吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸甲酯(Ⅱb)或者，环化产物可以用重氮甲烷处理，得到实例3的甲基酯(R＝CH3);m.p.138～149℃，[α]AmbD＝-122.4°(C＝0.97，乙醇);
IR 1778，1720，1655，1620，1375cm-1，1H NMRδ1.7-2.2(m，4H)，2.43(m，2H)，3.10(s，3H)，3.44(dd，1H，Ja＝17Hz，Jb＝6Hz)，4.42(dd，1H，Ja＝17Hz，Jb＝12Hz)，5.23(dd，1H，Ja＝6Hz，Jb＝2Hz)，5.47(dd，1H，Ja＝6Hz，Jb＝4Hz)，6.08(dd，1H，Ja＝12Hz，Jb＝6Hz)，7.23(m，4H)，7.77(m，2H)，7.89(m，2H).
元素分析，C24H22N2O5，计算值C，68.89;H5.30;N，6.69。
实测值C，68.98;H5.83;N，6.63。
实例5[4S-(4α，7α，12bβ)]-7-氨基-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸甲酯(Ⅲ)于4.18g(10.0mmol)实例4的甲酯在30ml甲醇的混合物中加入20ml(20mmol)1M水合肼的甲醇溶液。混合物在室温和氮气流下搅拌18小时。然后将混合物通过硅藻土过滤，用甲醇充分地洗涤，并在真空下浓缩。所得的油在二氯甲烷和水之间分配，二氯甲烷层用另外20ml水洗净。溶液用无水硫酸镁干燥，过滤，并在真空下浓缩，得3.05g(产率为106%)标题化合物酯。产物用二氯甲烷/己烷重结晶，得分析纯胺，为部分水合物。
1H NMR(CDCl3)7.15(m，4H);5.46(m，1H);5.34(m，1H)4.69(dd，Ja＝11Hz，Jb＝5Hz，1H);2.98(S，3H);2.94(dd，Ja＝17Hz，Jb＝14Hz);2.43(m，2H);2.08-1.70(complex，)1.82(s，2H).
元素分析，C16H20N2O3·0.3HO，计算值C，65.42;H6.45;N，9.54。
实测值C，65.39;H7.18;N，9.58。
实例64S-反式-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-亚甲基-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂卓-4-羧酸甲酯(Ⅴ)于1.17g(4.0mmol)实例5标题化合物酯和44μl(0.8mmol)乙酸的20ml干燥二氯甲烷溶液中，加入1.13g(4.8mmol)亚硝酸异戊酯。溶液在氮气流下加热回流85分钟，并使其冷却。将溶液用20ml5%硫酸水溶液萃取一次，用水洗涤，再用20ml饱和碳酸氢钠溶液振摇。酸性萃取液被碱化并用乙酸乙酯萃取，回收得到约300mg未反应的起始原料胺。二氯甲烷部分用硫酸钠干燥并浓缩，得616mg4S-反式-7-重氮-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂卓-4-羧酸甲酯(Ⅳ)(产率为51.4%)。将616mg(2.1mmol)重氮化合物溶于10ml二氯甲烷中，并在-40℃和氮气流下，于13分钟内滴加到由2.16g(8.23mmol)三苯膦和0.33ml(4.1mmol)三氟甲磺酸组成的搅拌溶液中。在-20℃继续搅拌2.5小时。溶液在真空下浓缩，将得到的油状物溶于25ml95%乙醇中。向该搅拌溶液中加入0.59g(4.2mmol)碳酸钾在6ml水中的溶液，立即再加入4ml37%甲醛溶液。在25℃搅拌23分钟后，向反应混合物中加入4ml1N盐酸，过滤，固体用10ml50%乙醇/水洗涤。滤液在真空下浓缩，残余物溶于乙酸乙酯中，并用硫酸镁干燥，在真空下浓缩。于硅胶上进行快速柱层析，用40%乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得197mg(总产率为17.3%)标题化合物。
1H NMR δ(CDCl3)7.1-7.3(m，4H);5.70(s，1H);5.42(s，1H);5.3-5.4(m，2H);4.02(d，J＝20Hz，1H);3.95(d，J＝20Hz，1H);3.05(s，3H);2.3-2.5(m，2H);1.6-2.1(m，4H).
实例74S-反式-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-亚甲基-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸(Ⅵ)于32mg(0.11mmol)实例6标题化合物的1ml甲醇溶液中加入0.22ml(0.22mmol)1M氢氧化锂溶液。溶液在室温和氮气流下搅拌20小时。然后混合物用10ml水稀释，用10ml乙酸乙酯萃取一次。水层用1N盐酸酸化，再用二氯甲烷萃取三次，每次7ml，将二氯甲烷萃取液合并，用无水硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩，得20mg(产率为66%)标题化合物。
1H NMRδ(CDCl3)7.40-7.10(复杂峰，4H);5.75(s，1H);5.45(s，1H);5.30(t，J＝3Hz，1H);5.20(dd，Ja＝4Hz，Jb＝2Hz);3.98(d，J＝15Hz，1H);3.85(d，J＝15Hz，1H);2.5-2.3(复杂峰，2H);2.0-1.7(复杂峰，4H);13C NMR δ(CDCl3);17.77，17.94，24.43，25.18，38.11，50.84，52.40，120.12，124.73，126.09，127.90，129.32，137.03，138.03，142.74，171.34，174.45.
实例8-7-[(苯甲酰硫基)甲基]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸(Ⅶb)在室温和氮气流下，于115mg(0.42mmol)实例7标题化合物的7ml甲醇溶液中加入59mg(0.42mmol)硫羟苯甲酸和65μl(0.47mmol)三乙胺。搅拌24小时后，当反应尚未完全时，将溶液浓缩至1ml，向其中加入另外的60μl(0.43mmol)三乙胺和7滴硫羟苯甲酸。再搅拌24小时后，反应混合物用过量的1N盐酸溶液处理，并用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用盐水洗涤一次，用无水硫酸镁干燥，并在真空下浓缩。经球管蒸馏除去一些硫羟苯甲酸(60℃/0.7托)。将残余物冷却得190mg(产率为110%)标题化合物的粗品。化合物经高效液相色谱法纯化(7.5mm×250mm10μ全多孔型硅胶柱;以0.5%乙酸，5%异丙醇，94.5%己烷为洗脱剂;流速为4ml/分)，得35mg标题化合物(产率为20%NMR(CDCl3)δ8.00(d，J＝7Hz，2H)，7.60(m，1H)，7.45(m，2H)，7.25-7.05(复杂多重峰，4H)，5.55(m，1H)，5.25(m，1H)，3.90(m，1H)，3.50～3.35(复杂多重峰，3H)，2.95(dd，Ja＝17Hz，Jb＝13Hz，1H)，2.50(复杂二重峰，J＝10Hz，1H)，2.35(复杂二重峰，J＝10Hz，1H)，2.00(复杂多重峰，2H)，1.80(复杂多重峰，2H)。
按实例8的方法，并用硫羟乙酸代替上述硫羟苯甲酸，可以制得下述化合物[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-[(乙酰硫基)甲基]-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸。
按实例8的方法，并用实例5标题化合物的不饱和甲酯代替实例7的标题化合物，可以制得下述化合物[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-[(苯甲酰硫基)甲基]-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸甲酯。
在氮气流下将上述制得的产物用过量甲醇钠在脱气的甲醇中短时间处理后，经色谱法分离得[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-(巯基甲基)-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸甲酯。
下述化合物可以用重氮二苯基甲烷与实例8的标题化合物反应而制备，经色谱法分离得[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-[(苯甲酰硫基)甲基]-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸二苯甲酯。
在氮气流下将上述制得的产物用过量甲醇钠在脱气的甲醇中短时间处理后，经色谱法分离得[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-(巯基甲基)-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸二苯甲酯。
实例9[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-(巯基甲基)-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸(Ⅶa)在室温和氩气流下，于27mg(66μmol)实例6标题化合物的7ml甲醇(用氩气除去甲醇中的游离氧)溶液中加入350μl1M甲醇钠溶液。搅拌2小时后，溶液用过量1N盐酸酸化，用氯化钠饱和，然后用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯溶液在真空下浓缩，得标题化合物，该标题化合物经高效液相色谱法纯化(7.5mm×250mm10μ全多孔型硅胶柱;以0.5%乙酸，5%毂迹 4.5%己烷作为洗脱剂;流速为4ml/分)，得10mg(产率为50%)纯的标题化合物。
1H NMR(CDCl3)δ7.25～7.00(m，4H)，5.55(m，1H)，5.20(m，1H)，5.75(m，1H)，3.30(dd，Ja＝18Hz，Jb＝8Hz，1H)，3.10(dt，Jd＝13Hz，Jt＝8Hz，1H)，2.85(dd，Ja＝14Hz，Jb＝18Hz，1H)，2.50(复杂多重峰，2H)，2.35(宽二重峰，J＝10Hz，1H)，2.05-1.90(复杂峰，2H)，1.85(dd，Ja＝8Hz，Jb＝10Hz，1H)，1.801.65(复杂峰，2H)。
13C NMR(CDCl3)δ175.26，173.42，136.90，136.28，130.68，127.61，125.71，125.06，50.92，50.59，44.78，35.77，26.50，25.15，25.11，16.97。
本发明化合物的游离羧酸酯的形式或盐的形式均有效。“药学上适用的盐”意指式(Ⅰ)羧酸酯化合物的有机或无机的加成盐。这些盐包括在本发明的范围内。这些盐包括铵盐;碱金属盐，例如钠盐和钾盐;碱土金属盐，例如钙盐和镁盐;与有机碱形成的盐，例如二环己基胺盐，N-甲基-D-葡糖胺盐，以及与氨基酸，例如精氨酸和顿氨酸形成的盐等。最好选用无毒的、生理上适用的盐，尽管也可以应用其他的盐，例如，在分离或纯化产物时。
盐可以按常规的方法制备，例如使产物的游离酸与1个或1个以上当量的合适碱在盐不溶的溶剂或介质中反应，或者使反应在溶剂，例如水中进行，然后再在真空下或用冷冻干燥法将溶剂(水)除去，或者在合适的离子交换树脂上使现有盐的阳离子交换成另一阳离子。
通过在体外酶抑制作用评价抑制ACE的作用来测定本发明化合物作为抗高血压药的效用。例如，Y.Piquilloud，A.Reinharz和M.Roth在Biochem.Biophys.Acta，206，N36(1970)所述的方法是一个有效的评价方法，其中测定了羰基苄氧基苯丙氨酰基组氨酰基-亮氨酸的水解。体内的评价可以用，例如按照J.R.Weeks和J.A.Jones在Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，104，646(1960)上所述的方法，用血管紧张肽Ⅰ刺激正常血压的大白鼠，或者按Koletsky等在Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，125，96(1967)上所述的方法，在高肾素大白鼠模型上进行试验。
下表表明了本发明化合物作为ACE抑制剂的活性，其活性是用标准和已知的方法确定，因为酶促进底物转化成产物的情况可作为酶活性的指示。在ACE和底物/产物复合体预平衡相互作用之后，应用连续的分光光度法测定[Holmquist等，AnalyticalBiochemistry，95(1979)，540-548]。底物(1mM2-呋喃丙烯酰-L-Phe-Gly-Gly)和所示浓度的抑制剂在2ml缓冲液中，于凯利210分光光度计的暗室中在25℃热平衡，然后将兔肺ACE加至上述待试混合物中，用计算机监测反应并记录。用已知的ACE抑制剂巯甲丙脯酸作为试验的阳性对照。在本发明化合物存在下进行反应时出现的产物浓度明显降低，表明本发明化合物是有效的ACE抑制剂，详见表Ⅰ。
表Ⅰ抑制剂浓度时间最终产物的浓度巯甲丙脯酸，10nM8分钟160nM(阳性对照)化合物1＊，10nM8分钟95nM化合物1＊，5nM8分钟148nM＊化合物1为[4S-(4α，7α，12bβ)]-1，2，3，4，6，7，8，12b-八氢-7-(巯基甲基)-6-氧代-吡啶并[2，1-a][2]苯并氮杂
-4-羧酸;即其中R和R′均为氢。
根据所应用的具体剂量单位、治疗周期、患者的年龄和性别、需治疗疾病的性质和程度，治疗高血压病患者所需给予有效成分的量可以在较宽的范围内变化。给予有效成分的总量其范围一般约为0.1mg/kg-100mg/kg，最好为0.3mg/kg～30mg/kg。单位剂量可以含有25～525mg/kg的有效成分，可以每天服用一次或多次。式Ⅰ化合物可以与药用载体一起采用常规的剂型给药(如下述的口服剂型、胃肠外给药剂型、局部给药剂型等)。
本发明化合物可以作为单独的抗高血压药物给药，或者与其他的抗高血压剂和/或利尿剂和/或钙通道阻断剂一起联用。例如，本发明化合物可以与苄噻嗪、氯压定、去甲氧利血平、利尿磺胺、盐酸肼苯哒嗪、英达克立酮(indacrinone)及其可变比例的对映体、哌唑嗪、心得安、利血平等联用，或是它们的掺合物，或是它们的复合物。
这些复方各个成分的每日剂量一般可以约为其单独服用时推荐使用的临床最小剂量的五分之一到推荐使用的最大剂量。
本发明的化合物能够减少再灌注损伤的能力可以通过其降低心肌颤动(stunning)的能力来表现。心肌颤动是心肌缺期局部缺血后而未坏死时长期丧失心肌收缩功能的一种表现(详见E.BraunwaldandR.A.Kloner，Circ.66，1146-1149(1982)。在多种紊乱和疾病下，其中由于自心脏的血液循环被暂时切断，或者当表明存在相对高浓度的氧衍生的自由基时都可能发生心肌颤动。
用麻醉狗测定心肌颤动，观察指标有血压、心率、心电图(ECG)、心肌收缩力和左心室收缩压及其衍生指标。将二套超声晶体测量器(每套有二个超声晶体片)植入左心室肌以测量二个晶体片间心肌段的缩短。在心底及心尖部各植入一套。在左冠状动脉前降支(LAD)中点处夹闭血管，心尖部的超声晶体片则置于局部缺血区内，而心底部的超声晶体片在局部缺血期时则处于正常心肌内。对照期观察后，LAD夹闭15分钟，然后再灌注3小时，使用短暂的夹闭是为了防止心肌的任一实质性坏死。在夹闭期间心尖部晶体间(缺血区心肌)心肌节段的缩短幅度降低而在对照狗中在收缩时实际表明伸长，而心底部晶体(非缺血心肌)的缩短幅度则保持不变。解除夹闭时缺血心肌的再灌注即行开始，曾是缺血区心肌的收缩性即有所改进，但在3小时的再灌注期间未完全恢复。这种曾是缺血区和正常区之间的收缩性差别称之谓心肌颤动(用缩短的%表示)，详见表1。为避免本发明有效化合物的增强收缩力作用对心肌颤动的任何可能的影响，应在本化合物的增强收缩力效应至少消失80%后方可阻断LAD。
用于治疗再灌注损伤(局部缺血)时，式Ⅰ化合物的理想给药方案是组织再灌注的同时对患者给药，并一直维持到再灌注损伤被控制，这一般应持续到实际再灌注组织后约2-3天，例如，可以方便地将式Ⅰ化合物与链激酶或尿激酶等溶栓剂一起给药治疗冠状动脉血栓病人，在某些情况下在缺血之前给予式Ⅰ的化合物的适应证为，例如当患者存在实际的心脏病或中风的危险时，则给药可持续到缺血的危险期消失为止，例如，当患者最近曾有心脏病发作或中风，或者当患者在外科手术需要暂时性和外科性引起的器管缺血，例如在直视心脏手术及冠脉搭桥等时。
根据所应用的具体化合物和剂量单位、服药方式、治疗周期、患者的年龄和性别、需治疗疾病的性质和程度，治疗局部缺血患者所需服用有效成分的量可以在较宽的范围内变化。服用有效成分的总量其范围一般约为0.1～100mg/kg，最好为0.3～30mg/kg。单位剂量可含有25-525mg的有效成分，可以每日服用一次或数次，式Ⅰ的有效化合物可以与药用载体一起制成常规剂型服用，如下述的口服剂型、胃肠外给药剂型、局部给药剂型等。
式Ⅰ化合物作为强心剂使用的效用可按照下述实验方法确定。将受试化合物(0.1～100mg/kg)于合适的赋形剂中通过静脉内、腹腔内、十二指肠内或胃内给予杂种狗(雄性或雌性)。试验狗经麻醉，分离出合适的动脉(例如股动脉或颈动脉)和静脉(例如股静脉、颈外静脉)，将充满0.1%肝素钠的聚乙烯导管分别插入动脉和静脉内，作记录动脉压及给药之用。从前正中线切开胸骨或在左侧第五肋间切开胸壁，暴露出胸腔，将心包切开缝于胸壁上以固定心脏，将Walton-Bredie张力计缝于左心室或右心室上以监测心肌收缩力。电磁流量计探头可置于升主动脉根部周围以测量不含冠脉流量的心输出量，亦可在左心房或左心室插管以记录左房或左室的压力。按20-40mg/kg剂量服用戊巴比妥钠后，随之以0.25-2mg/kg/分的速度连续灌注，或服用心得氨(4mg/kg)后，随之以0.18mg/kg/分的叔丁连续灌注的心脏以引起心衰。给予上述任一种心脏抑制剂后，右心房压力大大增加，而输出量显著减少，受试化合物如逆转上述效应则表明有强心作用。
根据所用的具体化合物的剂量单位，治疗周期，患者年令和性鹨约爸瘟频募膊⌒灾屎统潭鹊纫蛩氐目悸牵瘟菩牧λソ呋颊咚栌行С煞值牧靠梢栽诤芸淼姆段诒浠７糜行С煞值淖芰客ǔＴ嘉 .1～100mg/kg，最好为0.3～20mg/kg。单位剂量可以含有25-500mg有效成分，每天可服用一次或数次。式(Ⅰ)化合物可和药用载体一起以常规剂量单位形式口服、肠胃外给药、局部给药等，如下所述。
为了得到理想的药理作用，可以给需治疗的患者服用由本发明化合物适当配制的药用组合物。因此，本发明包括由药用载体和药学上有效量的式(Ⅰ)化合物组成的药用组合物。化合物的药学上有效用量是指对需要治疗的具体患者能产生疗效或发挥影响的用量。式(Ⅰ)化合物可以和药用载体一起以常规的剂量单位形式按口服、肠胃外给药、局部给药等方式给药。根据本发明的目的，患者是患有需要治疗的特定病征、损伤或疾病的包括人在内的哺乳动物。
供口服时，可以将化合物配制成固体或液体制剂，如胶囊剂、丸剂、片剂、糖锭剂、锭剂、熔融液(melts)、粉剂、溶液剂、悬浮剂或乳剂、并且可以按照制备药用组合物技术领域任一已知的方法制备。固体单位剂量形式可以是含有例如表面活性剂、润滑剂和惰性填充剂(如乳糖、蔗糖、磷酸钙和玉米淀粉)的普通硬明胶或软明胶胶囊。另一具体实例是本发明化合物可以与常规的片剂基质(如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)、粘合剂(如阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶)、崩解剂(如马铃薯淀粉、藻酸、玉米淀粉和爪耳胶，崩解剂有助于片剂服用后崩解和溶解)、润滑剂(如滑石粉、硬脂酸或硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌，润滑剂有助于改进片剂颗粒的流动性和避免片剂物质与冲模和冲头表面的粘着)、着色剂(染料)和矫味剂(用以提高片剂的美观质量并使其易为患者接受)结合在一起压成片剂。用于口服液体剂型合适的赋形剂包括稀释剂，如水和醇(例如乙醇、苄醇和聚乙烯醇)，可以加入或不加入药学上适用的表面活性剂、悬浮剂或乳化剂。
本发明化合物也可用于肠胃外给药，即皮下、静脉内、肌肉内或腹腔内给药。对于本发明化合物用生理上适用的稀释剂以及药用载体配制的注射剂，所用的稀释剂和载体可以是无菌液体或液体混合物(如水、盐水、葡萄糖水溶液和有关糖溶液的混合物)、醇(例如乙醇、异丙醇或十六烷基醇)、乙二醇(例如丙二醇或聚乙二醇)、丙三醇缩酮(例如2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-甲醇)、醚(例如聚乙二醇400)、油、脂肪酸、脂肪酸酯或甘油脂，或乙酰化的脂肪酸甘油脂，可以加入或不加入药学上适用的表面活性剂(例如肥皂或洗涤剂)、悬浮剂(例如果胶、Carbomers、甲基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、或羧甲基纤维素)、乳化剂和其他药学上适用的辅助剂。可以用于本发明胃肠外给药配方的油有石油产物、动物油、植物油或合成的油脂，例如花生油、豆油、芝麻油、棉子油、玉米油、橄榄油、凡士林和矿物油。合适的脂肪酸有油酸、硬脂酸和异硬脂酸。合适的脂肪酸酯，例如有油酸乙酯、肉豆蒄酸异丙酯。合适的脂肪酸盐有脂肪酸碱金属盐、脂肪酸铵盐和脂肪酸三乙醇胺盐，合适的洗涤剂有阳离子洗涤剂，例如囟化二甲基二烷基铵、囟化烷基吡啶鎓和烷基胺乙酸盐;阴离子洗涤剂，例如烷基、芳基和烯属磺酸盐，烷基、烯属、醚和单酸甘油酯硫酸盐和磺基琥珀酸盐;非离子洗涤剂，例如脂肪胺氧化物，脂肪酸链烷醇酰胺和聚氧乙烯聚丙烯共聚物，以及两性洗涤剂，例如烷基-β-氨基丙酸盐和2-烷基咪唑啉季铵盐，以及它们的混合物。本发明胃肠外给药的组合物在溶液中一般含有约0.5～25%(按重量计)的有效成分。应用防腐剂和缓冲剂也是有利的。为了减少或消除在注射部位的疼痛，该组合物可以含有亲水-亲脂平衡(HLB)约为12-17的非离子表面活性剂。在该配方中表面活性剂的量约为5-15%(按重量计)。表面活性剂可以是具有上述HLB的单一成分，或者是具有上述所需HLB的二种或二种以上成分的混合物。用于胃肠外复方的表面活性剂的具体实例有聚乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯，例如脱水山梨醇单油酸酯和环氧乙烷与巯水基质(由氧化丙烯与丙二醇缩合而得)的高分子量加成物。
药用组合物可以是无菌的注射水悬浮液。该悬浮液可以按照已知的方法应用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制而成，悬浮剂可以用羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍树胶及阿拉伯树胶;分散剂或湿润剂可以是天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、烯化氧与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七碳乙烯氧基十六烷醇)、环氧乙烷与偏酯的缩合产物(偏酯是由脂肪酸与己糖醇制得的，例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)或环氧乙烷与偏酯的缩合产物(偏酯是由脂肪酸与己糖醇酐制得的，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。
悬浮液还可以含有一种或一种以上的防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯);一种或一种以上的着色剂;一种或一种以上的矫味剂;以及一种或一种以上的甜味剂(如蔗糖或糖精)。
油悬浮剂可以将有效成分悬浮在植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)中，或悬浮在矿物油(例如液体石蜡)中制得。油悬浮剂可以含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。无菌注射剂还可以指在无毒的可用于胃肠外给药的稀释剂或溶剂中制得的无菌注射溶液或悬浮液。可以应用的稀释剂和溶剂的实例有水、林格氏溶液和等渗的氯化钠溶液。此外，无菌的非挥发性油通常可以用作为溶剂或悬浮介质。为此，可以应用温和的非挥发性油，包括合成的单酸甘油酯和二脂酰甘油酯。此外，在配制注射剂中还可以应用脂肪酸，例如油酸。
本发明的组合物也可以栓剂形式经直肠给药。这些组合物可用药物和合适的无刺激性的赋形剂混合而制得，所用的赋形剂在常温下是固体，而在直肠温度下则为液体，因此在直肠内组合物熔融而释放出药物。上述赋形剂有例如可可脂和聚乙二醇。
对于局部使用，可应用含有本发明组合物的乳剂、软膏剂、凝胶剂、溶液剂、悬浮剂等剂型。
可分散的粉末和颗粒适用于配制水悬浮剂。该水悬浮剂是使有效成分和分散剂或润湿剂、悬浮剂以及一种或多种防腐剂混合成掺合物。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂的实例已在上面列举出。还可以应用其他的赋形剂，例如以上所述的甜味剂，矫味剂和着色剂。
本发明的药用组合物还可以是水包油型的乳剂。油相可以是植物油，例如液体石蜡或混合植物油。合适的乳化剂可以是(1)天然胶，如阿拉伯树胶和黄蓍树胶，(2)天然磷脂，如大豆和卵磷脂，(3)酯或由脂肪酸和己糖醇酐生成的偏酯，如脱水山梨糖醇单油酸酯，(4)上述偏酯和环氧乙烷的缩合产物，如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳剂还可以含有甜味剂和矫味剂。
糖浆剂和剂可以用甜味剂(如丙三醇、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖)配制。上述制剂也可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂和着色剂。
供给药时，如需要或愿意，本发明的组合物也可以含有其他常规的药学上适用的化合物成分。例如组合物可以含有通常所用的载体或稀释剂。上述组合物还可以加入抗氧化剂(如抗坏血酸)或其他合适的防腐剂保存。
可以应用常规的方法将上述组合物制备成合适的剂型。无论什么剂型，它都含有药学上有效量的本发明化合物。
很显然，熟悉本领域的人员可以对本发明进行变动和改进而不脱离本发明的精神和范围。
权利要求
1.下式化合物及其药学上适用的盐，
式中R代表氢、C1～C6低级烷基或(C6～C12)芳基(C1～C6)低级烷基；R′代表氢或-COR，其中R的定义同上。
2.权利要求1所述化合物的所有对映异构体和非对映异构体及其混合物。
3.具有下式所示非对映异构体构型的权利要求2所述化合物
式中立体化学为4(S)，7(S)，12b(R)。
4.权利要求3所述化合物，其中R和R′均代表氢。
5.权利要求3所述化合物，其中R代表甲基，R′代表氢。
6.下式化合物
式中R代表C1～C6低级烷基或(C6～C12)芳基(C1～C6)低级烷基。
7.下式化合物
式中R代表氢、C1～C6低级烷基或(C6～C12)芳基(C1～C6)低级烷基。
8.治疗高血压的方法，该方法包括给需要的患者服用能够有效地治疗高血压所需剂量的下式化合物或其药学上适用的盐，
式中R代表氢、C1～C6低级烷基或(C6～C12)芳基(C1～C6)低级烷基。R′代表氢或-COR，其中R的定义同上。
9.治疗心力衰竭的方法，该方法包括给需要的患者服用能够有效地增加心肌收缩力所需剂量的下式化合物或其药学上适用的盐，
式中R代表氢、C1～C6低级烷基或(C6～C12)芳基(C1～C6)低级烷基，R′代表氢或-COR，其中R的定义同上。
10.治疗局部缺血的方法，该方法包括给需要的患者服用能够有效地抗局部缺血所需剂量的下式化合物或其药学上适用的盐，
式中R代表氢、C1～C6低级烷基或(C6～C12)芳基(C1～C6)低级烷基，R′代表氢或-COR，其中R的定义同上。
11.制备式(A)化合物的方法，
式中R代表氢、C1～C6低级烷基或(C6～C12)芳基(C1～C6)低级烷基，该方法包括在乙酸和惰性溶剂存在下，于回流条件下使式(B)化合物与亚硝酸烷基酯(R″ON＝O)反应，其中R″代表异戊基或正丙基，得到中间体式(C)，
式(B)中R的定义同上。
然后将式(C)首先与强酸和膦(选自三丁基膦或三苯膦)于约-70℃～50℃反应，然后与强碱和甲醛反应，得到式(A)化合物。
全文摘要
本发明是关于构象固定的含硫三环内酰胺、制备它们的有用中间体和制备方法，以及它们在抑制血管紧张素转化酶、治疗再灌注损伤以及治疗心力衰竭方面的药理作用。
文档编号A61P9/08GK1034721SQ88105629
公开日1989年8月16日 申请日期1988年12月29日 优先权日1987年12月30日
发明者加利·A·夫林, 都格拉斯·W·贝特 申请人:默里尔多药物公司