专利名称：乌灵胶囊在制备抑制u251细胞增殖药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中成药的新用途，尤其涉及乌灵胶囊在制备抑制U251细胞増殖药物中的应用。
背景技术：
神经胶质瘤又被称为胶质细胞瘤，或者简称为胶质瘤，它是ー种发生在神经外胚层的肿瘤，所以又被称做是神经外胚层肿瘤或神经上皮肿瘤。肿瘤起源于神经间质细胞，即神经胶质、室管膜、脉络丛上皮和神经实质细胞，即神经元。大多数肿瘤起源于不同类型的神经胶质，但根据组织发生学来源及生物学特征类似，对发生于神经外胚层的各种肿瘤，一般都称为神经胶质瘤。神经胶质瘤的病程依其病理类型和所在部位长短不一，自出现症状至就诊时间一般多为数周至数月，少数可达数年。恶性程度高的和后颅窝肿瘤病史多较短， 较良性的肿瘤或位于所谓静区的肿瘤病史多较长。肿瘤如有出血或囊肿形成、症状发展进程可加快，有的甚至可类似脑血管病的发展过程。乌灵胶囊是浙江佐カ药业股份有限公司的独家产品，目前还没有其抑制神经胶质细胞瘤(U251)细胞增殖的文献报道。

发明内容
发明目的本发明的目的在于提供乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用。技术方案乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用。乌灵胶囊主要成分乌灵菌粉，内含腺苷、多糖、甾醇类及谷氨酸、Y-氨基丁酸、赖氨酸等19种氨基酸，还含有维生素(VitE、Bl、B6、Kl等)和微量元素(Zn、Fe、Ca等)等多种成份，补肾健脑，养心安神，适用于神经衰弱的心肾不交证，症见失眠，健忘，神疲乏力，腰膝酸软，脉细或沉无カ等，ロ服，一次3粒，一日3次，或遵医嘱，每粒装O. 33克，现发现其能抑制U251细胞増殖。有益效果乌灵胶囊抑制U251细胞増殖，效果良好。
具体实施例方式乌灵胶囊抑制U251细胞増殖的实验研究资料I实验材料I. I实验用细胞株神经胶质细胞瘤(U251)，来自本公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。I. 2实验药物研究药物乌灵胶囊，浙江佐カ药业股份有限公司，批号20110423药液储液称取IOOmg乌灵胶囊内容物，溶于5ml无水こ醇中，O. 2 μ m滤器过滤，500 μ Idoff管分装，-20°C存储，同时O. 2 μ m滤器过滤无水こ醇以备对照组之用。
I. 3实验试剂DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419)；NaHC03 (上海久亿化学试剂有限公司Cat. No. 11810_033Lot.No. 1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批号2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批号:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批号2010242);Str印tomycin SulfateCAMRESCO公司批号2010382);无水こ醇(南京化学试剂有限公司批号080310182);MTT(Biosharp批号:0793) ;PBS (实验室自配)；I. 4实验器材莱卡倒置显微镜(德国Leica型号DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪(美国MD公司型号SPECTRAMAX 190) ;C02培养箱(FORMA型号3111);超净台(苏净集団安泰公司 制造型号SW-CJ-ZFD);纯水仪(美国Spring公司型号S/N 020579);精密移液器(法国吉尔森公司型号P2);电子天平(德国赛多利斯有限公司型号BT323S);全自动高压灭菌锅(日本SANK)公司型号MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号DHG9123A);冰箱(西门子公司型号KG18V21TI);液氮罐(CBS型号2001);低速离心机(上海安亭科学仪器厂型号ΚΑ-1000) ;0. 2μπι滤器(MILLIP0RE型号SLGP033RB) ;10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板(NEST公司)；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。2实验方法I) U251细胞用DMEM+10%FBS于37 °C、5%C02进行常规培养(IOcm培养皿)，当细胞生长至对数期吋，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，IOOOrpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ 1，培养板放入细胞培养箱中(37 °C，5%C02 )常规培养。3)根据细胞生长情況，一般长至50%_70%，加入乌灵胶囊溶液，继续培养24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0. 5%MTT)，继续培养 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ I ニ甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底(不加细胞，只加培养液)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、ニ甲基亚砜)，每组设定6个复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示细胞增值抑制率(％)=(对照孔OD值-给药孔OD值)/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。3统计处理采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean + S. D.表不。4实验结果MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对U251细胞增殖抑制有差异(p〈0. 05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性(P〈0. 01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异(Ρ〈0· 001)。
表I乌灵胶囊对U251细胞增殖抑制影响研究(又土SD)
权利要求
1.乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了乌灵胶囊在制备抑制U251细胞增殖药物中的应用，乌灵胶囊主要成分乌灵菌粉，内含腺苷、多糖、甾醇类及谷氨酸、Y-氨基丁酸、赖氨酸等19种氨基酸，还含有维生素(VitE、B1、B6、K1等)和微量元素(Zn、Fe、Ca等)等多种成份，补肾健脑，养心安神，适用于神经衰弱的心肾不交证，症见失眠，健忘，神疲乏力，腰膝酸软，脉细或沉无力等，口服，一次3粒，一日3次，或遵医嘱，每粒装0.33克，现发现其能抑制U251细胞增殖。
文档编号A61K36/06GK102824375SQ201210346408
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月18日 优先权日2012年9月18日
发明者不公告发明人 申请人:南京正亮医药科技有限公司