专利名称：裸花紫珠提取物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及指裸花紫珠提取物及其制备方法和用途，更具体的说，裸花紫珠提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛的药物的应用以及在制备牙膏、口胶、漱口水、口香喷雾剂、含片等口腔清洁用品中的应用。
背景技术：
裸花紫珠(CallicarpanudifIoraHook.exArn.)为马鞭草科(Verbenaceae)紫珠属植物，主产于我国海南，是一种海南地道药材，我国广东、广西也有分布。国外主要分布于印度、越南和马来西亚。其根、叶可入药，有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消肿，驱风祛湿等功效，主治化脓性炎症、急性传染性肝炎、呼吸道及消化道出血、创伤出血等症，外用治烧、烫伤及外伤出血等。裸花紫珠近年来广泛应用于医药、化妆品等领域中，如 CN200910142774.7，该发明提供了一种本发明提供了一种有抗菌、抗炎及止血作用的
黎药裸花紫珠提取物及其制备方法以及含有该活性提取物的药物组合物。用它可以制备成用来治疗细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，子宫、阴道、呼吸道及消化道等腔道出血的口服制剂。JP20060035045，该发明提供一种含有裸花紫珠提取物的抗老化剂、减肥制剂和化妆品。目前已有的裸花紫珠提取工艺主要为水提或者有机溶剂提取，且一般使用的原料为裸花紫珠采收后干燥的原料。但发明人发现裸花紫珠干品的有效成分含量不高，影响提取物及下游终端产品的有效成分含量和组成，进而影响其作用效果。因此，本发明所要解决的技术问题在于对裸花紫珠的工艺进行进一步的深入研究，从而提供一种活性成分含量更高，更有效的裸花紫珠提取物及其以及以该提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛等作用的药物的应用，同时还提供以该提取物在口腔清洁产品中的应用。

发明内容
本发明的第一个目的是提供一种裸花紫珠提取物，该提取物以裸花紫珠鲜药材为原料，新鲜原料经提取，浓缩得到裸花紫珠提取物。裸花紫珠提取物的原料采用新鲜状态的裸花紫珠地上部分，优选夏季和秋季的裸花紫珠叶和/或嫩枝。所述的提取物的制备方法包括以下几种
方法一采用裸花紫珠新鲜原料，加入水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。
方法二 采用裸花紫珠新鲜原料，加入水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10% 90%的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。方法三新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。方法四新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。方法五新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10 % 90 %的乙醇洗脱，洗脱液滤过， 浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。方法六，新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10 % 90 %的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。方法七新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。方法八新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10 % 90 %的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。方法三至八中所述的压榨是采用重量比为广3 1的水或稀醇或稀酮与新鲜裸花紫珠混合。本发明实现了最大程度地从裸花紫珠中提取有效活性成分，发明人对裸花紫珠的提取方式(榨取、加热)、采收时间(春季、夏季、秋季、冬季)和不同干燥状态(新鲜、干品)进行了系统研究，结果如下表書J %J //1K
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注意以上指标均按鲜品计。在常规的提取工艺中，一般所用的为晒干的裸花紫珠，研究结果说明裸花紫珠的提取得率、总黄酮和木犀草素、总鞣质含量与采收季节、提取方式和药材干燥状态有关。1)新鲜的状态的裸花紫珠加热提取的提取得率、总黄酮和木犀草素、总鞣质含量均比相同时期的干品高。以秋季采收的裸花紫珠为例，新鲜裸花紫珠中的提取得率、总黄酮含量、木犀草素、总鞣质含量分别是干品的1. 20、1. 59、1. 52、1. 05倍，说明原料在干燥过程中有效成分的丧失了大部分。2)与加热提取相比，榨取明显提高了裸花紫珠的得率、总黄酮和木犀草素、总鞣质含量。以秋季采收的裸花紫珠为例，新鲜裸花紫珠榨取的得率、总黄酮含量、木犀草素、总鞣质含量分别是干品的1. 13,1. 23,1. 20,1. 14倍。3)不同采收季节的裸花紫珠的得率、总黄酮和木犀草素含量有一定差异，研究表明夏季和秋季时期的提取得率、总黄酮和木犀草素含量优于春季和冬季。发明的第二个目的是提供上述提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛的药物的应用。
发明的第三个目的是提供上述提取物在制备牙膏、口胶、漱口水、口香喷雾剂、含片等口腔清洁用品中的应用，由裸花紫珠提取物与常规原料按常规工艺制成，裸花紫珠提取物为上述口腔清洁用品重量的1_20%。
本发明相对于现有技术，具有如下优点和技术效果
本发明以裸花紫珠鲜药材为原料，其活性成分总黄酮和木犀草素、总鞣质含量较干品高，提取率大大提高，有利于节约成本，提高资源利用率。另一方面直接以裸花紫珠鲜品为原料，减少有效物质的损失，有利于提高有效物质成分群的作用，提高产品的作用效果。
具体实施例实施例一
取8月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加热提取两次，每次加水mcg，提取2小时，合并滤液，滤过，浓缩，干燥得90. 6g提取物，裸花紫珠提取得率为9. 06%,测得总黄酮含量为 48. ang/g，木犀草素含量为0. 65mg/g，总鞣质含量15. 61% (按新鲜药材计)。实施例二
取8月采收的新鲜裸花紫珠叶和嫩枝各0. 5kg,加热提取两次，每次加水^g，提取2小时，合并滤液，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用80 % 的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得74. 3g提取物，裸花紫珠提取得率为7. 43%，测得总黄酮含量为53. lmg/g，木犀草素含量为0. 50mg/g (按新鲜药材计)。实施例三
取10月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成勻浆，压榨，滤过，浓缩，干燥得 109. 3g提取物，裸花紫珠提取得率为10. 93%，测得总黄酮含量为59. 4mg/g,木犀草素含量为0. 75mg/g,总鞣质含量17. 95% (按新鲜药材计)。实施例四
取10月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成勻浆，压榨，压榨渣加3kg水加热提取，提取液滤过，浓缩，干燥得12. Ig提取物，裸花紫珠提取得率为1. 21%，测得总黄酮含量为10. ang/g，木犀草素含量为0. 06mg/g,总鞣质含量2. 11% (按新鲜药材计)。实施例五
取8月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成勻浆，压榨，压榨液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用70%的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩， 干燥得83. 4g提取物，裸花紫珠提取得率为8. 34%，测得总黄酮含量为58. 6mg/g，木犀草素含量为0.75mg/g (按新鲜药材计)。实施例六
取8月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成勻浆，压榨，压榨渣加3kg水加热提取，提取液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用70%的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得9. 5g提取物，裸花紫珠提取得率为0. 95%，测得总黄酮含量为8. 7mg/g，木犀草素含量为0. 04mg/g (按新鲜药材计)。实施例七取10月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成勻浆，压榨，压榨渣加3kg水加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，浓缩，干燥得122. Ig提取物，裸花紫珠提取得率为 12. 21%，测得总黄酮含量为64. 7mg/g，木犀草素含量为0. 82mg/g，总鞣质含量19. 22%(按新鲜药材计)。实施例八
取8月采收的新鲜裸花紫珠叶1kg，加2kg水破碎成勻浆，压榨，压榨渣加3kg水加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用70%的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得94. 2g提取物，裸花紫珠提取得率为 9. 42%，测得总黄酮含量为67. %ig/g，木犀草素含量为0. 79mg/g (按新鲜药材计)。实施例九
本发明裸花紫珠提取物的有关药效试验如下 1、抑菌作用
通过体外抑菌实验，以最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)指标评价本发明制备的裸花紫珠提取物对常见菌株的抗菌作用。菌液制备挑取斜面菌种接种于20%牛浸汁培养基中，37°C培养过夜，再用20%牛浸汁培养基将菌液稀释至lOcfu/ml，立即接种。MIC测定采用液体试管连续稀释法，用20%牛浸汁培养基将样品作连续对倍稀释。将1.0 ml加入灭菌试管中，每管加入0.05 ml标准新鲜菌液，并设菌株对照及溶媒对照组，37°C培养18 M小时，观察细菌生长情况，以无菌生长的最高稀释度为MIC。MBC测定采用平板划线接种法，从被判为MIC及MIC相邻两管的培养基中挑取培养液接种至10%血清MH肉汤琼脂平板上，37°C培养18 M小时，以生长菌落数彡5个的最高稀释度为MBC。试验结果见表一。表一裸花紫珠提取物体外抗菌试验结果
本发明制备的裸花紫珠提取物与裸花紫珠干药材提取物均具有对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、肺炎球菌、绿脓杆菌、乙型链球菌、丙型链球菌和幽门螺旋杆菌均有不同程度的抑制和杀灭作用，但本发明制备的裸花紫珠提取物效果更好。、止血作用
用本发明制备的裸花紫珠提取物300、600mg/kg2个剂量组，空白对照组，裸花紫珠干药材提取物组，云南白药组。将50只健康昆明小白鼠随机分5组(每组10只，雌雄各半)。 连续给药7天，最后一天给药45min后，用剪尾法测定小鼠出血时间(BT)，用毛细玻管法测凝血时间(CT)，评价药物止血效果。血液放出后测定凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、 活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)含量。实验数据见下表二和三。表二本发明裸花紫珠提取物对小鼠止血作用的试验结果 (均数士标准差，N =10)；..岬
*Ρ < 0·05，**Ρ < 0. 01与空白对照组比较。
表三本发明裸花紫珠提取物对小鼠止血作用的试验结果
(均数士标准差，N =10)
*Ρ < 0.05，#Ρ < 0.01与裸花紫珠干药材提取物组比较。以上表二和三的数据分析，表明本发明制备的裸花紫珠提取物能缩短BT、CT和 PT、APTT及降低FIB含量，具有明显的止血作用。、镇痛作用
醋酸所致小鼠扭体反应(扭体实验)
将健康昆明小鼠随机分成5组(每组10只)，即用本发明制备的裸花紫珠提取物300、 600mg/kg两个剂量组，空白对照组，裸花紫珠干药材提取物组，云南白药组。每日灌胃给予相应药物，连续7天。末次给药后1小时，各组分别腹腔注射0. 6%醋酸溶液0. 2 ml/只， 5分钟后观察10分钟内扭体次数，与对照组比较计算扭体抑制率，评价药物的镇痛效果。实验结果见表四。表四本发明裸花紫珠提取物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响 (均数士标准差，N = 10)
权利要求
1.一种裸花紫珠提取物，其特征在于其原料采用新鲜状态的裸花紫珠地上部分，其制备方法为新鲜原料经提取，浓缩得到裸花紫珠提取物。
2.根据权利要求1所述的裸花紫珠提取物，其特征在于其原料采用新鲜状态的裸花紫珠的叶和/或嫩枝，其制备方法为新鲜原料经提取，浓缩得到裸花紫珠提取物。
3.根据权利要求1或2所述的提取物的制备方法，其特征在于采用裸花紫珠新鲜原料，加入水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。
4.根据权利要求1或2所述的提取物的制备方法，其特征在于采用裸花紫珠新鲜原料，加入水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10% 90%的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。
5.根据权利要求1或2所述的提取物的制备方法，其特征在于，新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。
6.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于，所述的压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。
7.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于所述的压榨液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10 % 90%的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩， 干燥得裸花紫珠提取物。
8.根据权利要求6所述的提取物的制备方法，其特征在于所述的滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10 % 90%的乙醇洗脱，脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。
9.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于新鲜状态的裸花紫珠原料， 经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液和压榨液合并，滤过，滤液浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。
10.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于新鲜状态的裸花紫珠原料，经压榨得到压榨液及压榨渣，压榨渣加水或稀醇溶剂，加热提取，提取液和压榨液合并， 滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱层析，用水洗涤柱体，弃去水洗液，再用10% 90%的乙醇洗脱，洗脱液滤过，浓缩，干燥得裸花紫珠提取物。
11.根据权利要求5所述的提取物的制备方法，其特征在于，所述的压榨是采用重量比为广3 :1的水或稀醇与新鲜裸花紫珠混合。
12.权利要求1或2所述的提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛的药物的应用。
13.权利要求1或2所述的提取物在制备牙膏、口胶、漱口水、口香喷雾剂、含片等口腔清洁用品中的应用，裸花紫珠提取物为上述口腔清洁用品重量的1_20%。
全文摘要
本发明提供了一种裸花紫珠提取物、制备方法及其应用，具体提供了一种裸花紫珠提取物和制备方法，以及该提取物在制备抑菌、止血、镇痛、收敛的药物的应用，同时还提供以该提取物为在口腔清洁产品中的应用。
文档编号A61P29/00GK102258637SQ20111020097
公开日2011年11月30日 申请日期2011年7月19日 优先权日2011年7月19日
发明者卢捷, 周芳, 袁莉, 谷陟欣, 黄胜 申请人:九芝堂股份有限公司