专利名称：皂苷化合物及其制备方法与在制备免疫佐剂中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物化学，具体涉及从中药金铁锁中提出分离得到的皂苷化合物及其制备方法与在免疫佐剂中的应用。
背景技术：
随着分子生物学的发展，第二代疫苗多以纯化重组蛋白、合成肽抗原和质粒DNA 抗原为主，以替代第一代疫苗活的弱病毒抗原产生的安全隐患。然而纯化抗原通常免疫原性较弱，为了克服这一弱点，抗原需要与适当的佐剂相混合。但是，需要该佐剂有较长的稳定期，不易产生降解并易于生产。另外，最重要的是佐剂可以激发机体强烈的细胞免疫应答与抗体生成能力，使机体产生较强的免疫保护能力。由于不同的佐剂需要和不同的抗原进行作用，因而疫苗在研究中对各种类型的感染，就需要有选择性地促进机体诱导适宜的免疫应答。目前，用于人用疫苗的佐剂为铝盐佐剂(主要是氢氧化铝及其磷酸盐，Alum)。 1拟6年至今，铝盐佐剂已成为人用疫苗中经常使用的佐剂。但铝盐佐剂存在一些问题，主要有(1)因其理化性质特点，铝盐疫苗冷冻后胶体状态被破坏，因此不能冷冻干燥和在低温状态下运输。( 因含盐量高，贮存日久有结晶沉淀，而分批制备相同的疫苗也显得比较困难。( 虽然，铝是否与老年性痴呆诱发相关尚无定论，但对人、畜的神经系统可能有影响。(4)在注射部位有时会发生局部无菌性脓肿，甚至可以形成肉芽肿，轻度局部反应较为常见。(5)以铝盐佐剂作疫苗较少，它主要适用于以抗体为保护性免疫的疫苗。(6)由于主要激活2型T辅助(TM)细胞和诱导体液免疫应答，佐剂活性低，因此，一般在如白喉、破伤风、乙肝、麻疹等疫苗中使用。(7)铝盐佐剂释放抗原物质的速度缓慢，效应也比较弱，对许多抗原都不够有效，对抗原的要求比较高。皂苷经研究发现其可以激活哺乳动物的免疫系统，故它们的免疫佐剂活性受到了广泛关注。皂苷QS-21是最具代表性的物质，其研究已进入临床试验阶段。皂苷QS-21是南美皂树树皮提取物皂树皮皂苷(Quil A)的主要成分，研究表明其产生抗体应答持续保护时间要比铝盐佐剂长，因此可以作为铝盐佐剂替代物。但是，Quil A存在严重的毒性，对小鼠的致死量在100-125 μ g，除此还有严重的溶血性，在注射部位可引起肉芽肿和注射部位症状，所以限制了在人用疫苗中的使用。至今，从Quil A中分离得到23种单体化合物。皂苷QS-21对小鼠的致死剂量是500 μ g，毒性虽小于Quil A，但是它还是仅用于肿瘤疫苗中。 而且，皂苷QS-21等分子结构中存在酯键结构影响了其稳定性。因而，人们越来越关注从其它植物中寻找具免疫佐剂活性且毒性相对较低的皂苷。
权利要求
1. 一种皂苷化合物，其特征在于，所述化合物包括金铁锁皂苷B和金铁锁皂苷C，以下列结构式表示
2. 一种如权利要求1所述皂苷化合物的制备方法，其特征在于，该方法包括下列步骤(1)金铁锁干燥根，粉碎后80%乙醇加热回流提取三次，合并提取液，减压浓缩得浸膏无醇味，浸膏kg用纯水L按1 10的比例稀释后，过大孔树脂柱HP-20，分别用纯水，70% 乙醇，丙酮依次洗脱；取70 %乙醇洗脱部位为总皂苷，该总皂苷部位过C-18反相键合硅胶柱划段，用纯水，30%乙醇，70%乙醇，90%乙醇依次洗脱，共分为四个洗脱部分S1-S4 ；取 S4段过硅胶柱，以甲醇-乙酸乙酯1 1洗脱分为3部分S6-1，S6-2和S6-3，按照薄层板上斑点的Rf值对斑点依次收集划断，薄层板色谱展开剂为甲醇-乙酸乙酯1 1体积比， 20%硫酸显色显色剂；取S6-2部分经过C-18反相键合硅胶柱，依次用40%，60%，80%和纯甲醇洗脱，得到4个洗脱部分S6-2-a，S6-2-b，S6_2_c和S6-2_d，按照薄层板上斑点的 Rf值依次收集划断，薄层板色谱展开剂为甲醇水1 1体积比，20%硫酸显色显色剂；取 S6-2-C过凝胶柱，用甲醇作流动相洗脱，最后分离到1个化合物金铁锁皂苷A，其化学结构以下式表不
3.—种如权利要求1所述皂苷化合物在制备免疫佐剂中的应用。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述皂苷化合物为金铁锁皂苷B或金铁锁皂苷C。
5.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述免疫佐剂是由金铁锁皂苷B作为活性成分与药用载体组成的药物组合物。
6.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述免疫佐剂是由或金铁锁皂苷C作为活性成分与药用载体组成的药物组合物。
7.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述免疫佐剂中，皂苷化合物的量为 5 μ g-1000 μ g/ 单剂量。
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述免疫佐剂中，皂苷化合物的量为 10-50 μ g/单剂量。
全文摘要
本发明提供一种皂苷化合物，包括金铁锁皂苷B和金铁锁皂苷C，从中药金铁锁中提取分离得到。本发明的皂苷化合物可诱导机体同时产生Th1型和Th2型免疫应答，且显示出比铝胶佐剂能诱导机体对疫苗产生更强的细胞免疫和体液免疫反应，因此，可以作为多种疫苗的免疫佐剂，达到较强的免疫效果。本发明提供的皂苷化合物溶血性小和安全性好，制备方法简便、质量容易控制、使用方便、可冷冻保存，有较大的临床应用价值。金铁锁皂苷B金铁锁皂苷C
文档编号A61P37/04GK102382154SQ20111026703
公开日2012年3月21日 申请日期2011年11月9日 优先权日2011年11月9日
发明者俞飚, 单磊, 孙建松, 张卫东, 曹文杰, 沈云亨, 田均勉, 苏娟 申请人:中国人民解放军第二军医大学, 中国科学院上海有机化学研究所