专利名称：苦瓜多糖在治疗或预防原发性老年痴呆药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种苦瓜多糖的药效新用途，特别是一种苦瓜多糖在治疗或预防原发性老年痴呆药物中的应用。
背景技术：
苦瓜(Momordica charantia，MC),别名凉瓜、锦蒸枝、癫瓜,为葫芦科苦瓜属植物。苦瓜为著名的民间中草药。苦瓜的药用记载最早始于明代《滇南本草》，以后又有许多记载。《本草纲目》曰“去邪热，解劳乏，清心明目，益气壮阳”。国内外对苦瓜的药用价值研究已经取得了重要进展，目前苦瓜的活性成分的研究仍然在进行之中。
文献I :H Okabe, Y Miyahara, T Yamauchi, K Miyahara, T Kawasaki. Chem Pharm Bull [J], 1980，28(9): 2753-2762.研究表明，苦瓜中含有的多种活性成分具有降低血糖、抗突变、抗HIV、抗肿瘤以及提高人体免疫力的功效。
文献2 :J Pitipanapong, S Chitprasert, M Goto. Separation and Purification Technology [J]. 2007, 52(3): 416-422.研究发现，苦瓜多糖对某些病原菌有显著的抑制效果，如金黄色葡萄球菌，但对志贺氏菌、真菌等效果不明显。
文献3 :程霜，崔庆新，王勇.水溶性苦瓜多糖的提取与测定[J].郑州粮食学院学报，食品科学，2000，21⑵53-56.研究证明，苦瓜多糖对超氧阴离子自由基以及羟基自由基有显著的抑制作用。
但是，至今尚无任何数据支持苦瓜多糖可有效地用于老年痴呆的预防或治疗作用，而老年痴呆是世界范围内发病率很高的疾病，加强神经元保护是治疗老年痴呆的重要策略，但是迄今临床效果并不太理想。因此，寻求理想的老年痴呆预防及治疗药物一直是心脑血管医药领域研究的热点之一。发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处，提供一种苦瓜多糖在治疗或预防原发性老年痴呆药物中的应用。近期研究发现许多中药多糖具有自由基清除功能。多糖的抗氧化功能主要通过两种途径，第一，增强机体超氧化物歧化酶S0D、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px等内源性抗氧化酶类的活性，第二，直接清除和降低脂质过氧化物 LP0、丙二醛MDA的作用。本发明通过对老年痴呆模型前加药，证明苦瓜多糖对老年痴呆具有很好的预防作用模型前对SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(60mg/kg)，SOD、CAT酶活性分别增加 20. 2%,87%, MDA的含量降低为24. 4%，模型前对SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(100mg/kg)，SOD、 CAT酶活性分别增加24. 0%、104%，MDA的含量降低为27. 9% ;模型后加药证明苦瓜多糖具有很好的治疗作用模型后对SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(60mg/kg)，SOD、CAT酶活性分别增加 23. 7%、109%, MDA的含量降低率26. 8%，模型后对SD大鼠腹腔注射苦瓜多糖(100mg/kg)，SOD、 CAT酶活性分别增加22. 8%,91%, MDA的含量降低为18. 6%，通过模型后加药的实验研究，表明了苦瓜多糖临床治疗老年痴呆的可行性。因此，苦瓜多糖不但有可能用作预防药物使用，也有可能作为治疗药物，以提高老年痴呆的治愈率和生存率。
本发明是以如下技术方案实现的一种苦瓜多糖在治疗或预防原发性老年痴呆药物中的应用，其特征是所述的苦瓜多糖在预防原发性老年痴呆药物的剂量为 60-100mg/kgo
所述的苦瓜多糖在治疗原发性老年痴呆药物的剂量为60_100mg/kg。
所述的药物为水溶性的，根据体重按剂量稀释(60_100mg/kg)，稀释比例为1:100 (mg/ml)。
本发明的原理是苦瓜多糖能够消除老年痴呆应激状态下产生的过多自由基。正常情况下，动物机体内自由基生成量较小。但在但动物在受到应激、微生物入侵、患病、衰老或特殊生理情况下，机体内自由基会大量产生。研究老年痴呆状态下，大脑海马内超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT)等酶的活性显著下降，而脂质过氧化物LP0、丙二醛MDA等会显著上升。因此，老年痴呆状态下，动物本身不能有效地清除体内自由基的堆积，会造成细胞膜、线粒体、溶酶体等生物膜损伤，最终导致细胞肿胀变性、坏死，构成神经元的损伤。
多糖的抗氧化功能主要通过两种途径，第一，增强机体超氧化物歧化酶S0D、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px等内源性抗氧化酶类的活性，第二，直接清除和降低脂质过氧化物LP0、丙二醛MDA的作用。实验证明了苦瓜多糖可以增加老年痴呆状态下 SOD和CAT的活性，降低MDA的作用，见下表I :苦瓜多糖在老年痴呆模型(A ^ )中对海马组织中SOD、CAT活性及MDA含量的影响SOD■比率％CAT■比率％MDA增加比率％对腿112.80.23O.SfiA_f|E133.70.390.97pr&eo137,30.59QM-244pre-100160,824 JJ0.631040.73-275po60137.323.70.64im0.74-265po-100159.422JS0.60910.81-ISjS*7X0. 05本发明的优点是提供了苦瓜多糖在治疗老年痴呆中的新用途；无论老年痴呆模型前还是老年痴呆模型后加药，都对SOD、CAT酶活性有明显的增加作用，对MDA有明显的降低作用。通过对老年痴呆模型前加药，说明苦瓜多糖对老年痴呆具有很好的预防作用(60mg/ kg :S0D、CAT 酶活性分别增加 20. 2%,87%, MDA 的含量降低为 24. 4% ；100mg/kg :S0D、CAT 酶活性分别增加24. 0%、104%，MDA的含量降低为27. 9%。)；通过对脑梗死模型后加药，说明苦瓜多糖具有很好的治疗作用(60mg/kg :S0D、CAT酶活性分别增加23. 7%、109%，MDA的含量降低率26. 8% ；100mg/kg :S0D、CAT酶活性分别增加22. 8%,91%, MDA的含量降低为18. 6%)。 根据苦瓜多糖治疗老年痴呆显著的临床前的药效，表明了苦瓜多糖临床治疗老年痴呆的可行性，不但有可能用作预防药物使用，也有可能作为治疗药物，以提高老年痴呆的治愈率和生存率。


下面结合附图、附表及具体实施方式
对本发明作进一步详细说明。4
图I是本发明的苦瓜多糖对老年痴呆模型(AP)原代神经元的保护作用的实体图；图2是本发明的苦瓜多糖对老年痴呆模型(AP )原代神经元的保护作用的统计图。
图I中，AP代表SD大鼠神经元老年痴呆模型组；AP +3代表老年痴呆模型模型前神经元给药3 ug/ml组；A0 +10代表老年痴呆模型模型前神经元给药10ug/ml组；A0 +30 代表老年痴呆模型模型前神经元给药30ug/ml组；AP +100代表老年痴呆模型模型前神经元给药100ug/ml组；A0 +300代表老年痴呆模型模型前神经元给药300ug/ml组。
图2中各组和图I中各组相对应。
具体实施方式
以孕17-18天Sprague-Dawley (SD)大鼠海马神经元为实验材料,观察苦瓜多糖对大鼠神经元的影响。实验分为正常对照组(Sham)、老年痴呆模型AP对照组(AP溶于水浓度为 IOuM,作用 24 小时)、加药组(AP + 3ug/ml, A^+ 10ug/ml, A^+ 30ug/ml, A^ + 100ug/ml, + 300ug/ml)。不同浓度的苦瓜多糖作用于A0刺激I. 5h后的海马神经元, 使用DAPI荧光染色，观察实验结果(见图I)。各个实验组阳性细胞的凋亡率分别是27%、 64%、46%、38%、36%、30%、29%(见图2)。本发明的研究表明，苦瓜多糖对A P引起的老年痴呆神经元的损伤有保护作用，这种保护具有浓度依赖性。
(I)染色观察在OlympusVanox显微镜上，以400nm入射光激发，455nm接受观察。 染色较亮，呈蓝绿色，染色质浓缩，甚至破碎的细胞为凋亡样阳性细胞。
(2)阳性细胞的计算方法随机选取的10个400倍视野下的阳性细胞总数占假刺激对照组的百分率。
结合图2,通过Sigmastate统计数据及Sigmaplot作图软件处理，Control代表正常对照组、AP代表AP给药对照组、AP+ 3ug/ml代表AP给药模型前30分钟加苦瓜多糖3ug/ml组、AP + 10ug/ml代表AP给药模型前30分钟加苦瓜多糖10ug/ml组、A3 + 30ug/ml代表AP给药模型前30分钟加苦瓜多糖30ug/ml组、AP+ 100ug/ml代表A3给药模型前30分钟加苦瓜多糖100ug/ml组、A P + 300ug/ml代表A ^给药模型前30分钟加苦瓜多糖300ug/ml组，各组阳性细胞的凋亡率分别是27%、64%、46%、38%、36%、30%、29%。 T<0. 05相对正常组，bZXO. 05相对AP给药组。(见图2)。
结合表1，SD大鼠老年痴呆模型(AP ):大鼠以水合氯醛30mg/kg腹腔注射麻醉，在大鼠脑立体定位仪上将大鼠固定，通过不锈钢微量注射器将寡聚化A ￠ 25-35 20ug10u I (lu 1/min, 注射完留针5分钟)注射到大鼠侧脑室(前囟点后0. 8毫米，旁I. 5毫米，深3. 7毫米)。 Aman在A P注射前20分钟按50mg/kg腹腔注射。Ro在A P注射前20分钟在对侧脑室注射IOOnmol :5u I (lu 1/min,注射完留针5分钟)。NVP在A 0注射前20分钟在对侧脑室注射4nmol:10ia (lu 1/min,注射完留针5分钟)。CNQX在A3注射前20分钟在对侧脑室注射501111101:5111(1111/1^11，注射完留针5分钟)。58在八0注射后的第三天侧脑室注射100nmOl:5iil (liU/min，注射完留针5分钟)。模型后取海马、匀浆、测蛋白，按照试剂盒说明书步骤测定SOD和CAT酶活性及丙二醛MDA的含量。计算公式I、组织匀浆中SOD活力计算
权利要求
1.一种苦瓜多糖在治疗或预防原发性老年痴呆药物中的应用，其特征是所述的苦瓜多糖在预防原发性老年痴呆药物的剂量为60-100mg/kg。
2.根据权利要求I所述的一种苦瓜多糖在治疗或预防原发性老年痴呆药物中的应用， 其特征是所述的苦瓜多糖在治疗原发性老年痴呆药物的剂量为60-100mg/kg。
3.根据权利要求I所述的一种苦瓜多糖在治疗或预防原发性老年痴呆药物中的应用，其特征是所述的药物为水溶性的，根据体重按剂量稀释(60-100mg/kg)，稀释比例为 I:100 (mg/ml)。
全文摘要
本发明涉及一种苦瓜多糖的药效新用途，特别是一种苦瓜多糖在治疗或预防原发性老年痴呆药物中的应用。体外研究表明，苦瓜多糖可以对Aβ引起的神经元的损伤具有保护作用，其抑制率可以达到71%(Aβ+300ug/ml)。在此实验的基础上，将苦瓜多糖用于预防或治疗由Aβ诱导的原发性老年痴呆SD大鼠，无论老年痴呆模型前还是模型后给药，苦瓜多糖都具有增加SOD、CAT活性降低MDA的含量的作用。模型前给药60、100mg/kgSOD活性增加分别为20.2%、24.0%，CAT活性增加分别为87%、104%，MDA的含量降低分别为24.4%、27.9%，因此具有很好的预防效果；模型后给药60、100mg/kgSOD活性分别为增加23.7%、22.8%，CAT活性增加分别为109%、91%，MDA的含量降低分别为26.8%、18.6%，因此具有很好的治疗效果。
文档编号A61P25/28GK102526090SQ20121004377
公开日2012年7月4日 申请日期2012年2月26日 优先权日2012年2月26日
发明者孙福谋, 巩娟娟, 王旻, 齐素华 申请人:徐州医学院