专利名称：一种蔓荆子提取物及其超临界制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及天然中草药蔓荆子的提取工艺，特别是一种超临界流体萃取分离中药 蔓荆子提取物有效成分的工艺方法，属中草药制备化学化工技术领域。
背景技术：
蔓荆子为马鞭草科植物单叶蔓荆Vitex uifolia L. Var. simplicifolia Cham.或 蔓荆Vitextrifolia L.的干燥成熟果实，为辛凉解表药，具有疏散风热，清利头目之功效， 常用于风热感冒头痛、齿龈肿痛、目赤多泪、目暗不明、头晕目眩等症。现代药理研究表明， 蔓荆子有镇痛作用、蔓荆子有抗菌、抗病毒作用、降压作用、镇静、平喘作用、祛痰作用、抑制 黑色素形成的作用，还有抗炎、抗癌、抗缓激肽、抗脂氧合酶的作用。有效成分为莰烯、菔烯 等挥发油与蔓荆子黄素等黄酮类成分。中药标准提取物的化学成分是多种药理活性物质按特定比例组成的集合，继承了 中药多成分的特点，体现着原中药材特定的中医功效，且有效活性物质富集程度高(如银 杏标准提取物中有效成分含量是原药材原料中的50倍)，因此无论作为单味药还是组成复 方，均可替代原生药作为中药制剂的科学化原料药。传统中药提取常用的方法为浸渍法，渗流法，水煎煮法，回流提取法及连续回流提 取法等，所用溶剂为水或有机溶剂。但这些方法对中草药的提取物一般需进一步除去杂质， 分离并进行精制，而且存在有机溶剂残留，工艺步骤复杂，耗费时间长等不足之处。近年来， 超临界流体萃取技术获得了发展，由于具有适合提取天然热敏性物质、产品无溶剂残留、产 品质量稳定、操作方便、萃取效率高且能耗少等优良特性，为中药现代化研究提供了一种高 效的提取与分离的全新手段，在中草药有效成分的分离提取领域中具有广阔的应用前景。 但目前关于中药蔓荆子提取物超临界流体萃取的研究尚未有人报道。文献(胡居吾，熊 伟，李雄辉响应面法优化超临界CO2萃取蔓荆子油工艺研究江西食品工业，2008年第3期 20-21，24页)仅报道了采用超临界CO2萃取蔓荆子油，未见极性成分特别是蔓荆子黄素等 黄酮类有效成分的报道，所以其制备的蔓荆子油与本发明蔓荆子提取物不是相同的物质。

发明内容
发明内容本发明的目的是提供一种超临界流体萃取中药蔓荆子提取物的制备工 艺。本发明的另一目的是通过采用该工艺方法，能最大程度富集蔓荆子中有效成分，制得具 有较高蔓荆子黄素等黄酮类与挥发性成分的提取物。本发明的超临界流体萃取中药蔓荆子的有效成分制备蔓荆子提取物的工艺，以中 药蔓荆子为原料按照下述方法分离提取制备提取物采用超临界流体萃取法，以二氧化碳 为溶剂，加入适量的夹带剂，萃取压力为20 30Mpa，温度为35 55°C，萃取时间为1 2 小时，CO2流量为40 80L/h，对萃取釜和2个解析釜进行加热，贮罐进行冷却，当温度达到 预定的温度时，打开CO2气瓶送气，并打开高压泵升压，压力达到预定压力时，循环萃取，调 节流量，恒温恒压萃取出料，得到含有夹带剂的蔓荆子萃取物，所得萃取物为黄褐色液体。蔓荆子提取物超临界萃取工艺，经试验优化为萃取压力为20Mpa，温度为35°C，萃取时间 为1小时。所用的夹带剂为乙醇或乙酸乙酯，用量为原料的1 2倍(体积重量比)，最好 为1.5倍。本发明的蔓荆子提取物，以中药蔓荆子为原料，干燥至含水量为5 15%后(最好 干燥至含水量为8 10% )，按照上述超临界萃取工艺制备，将制备得到液体经浓缩、干燥 后即得蔓荆子提取物。本发明方法工艺简单，操作方便，产品中无溶剂残留，对人体安全无毒，适合作为 保健食品或药物使用。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的描述。实施例1蔓荆子超临界C02萃取物GC/MS分析1.1仪器与试药超临界流体萃取设备，江苏南通华安超临界萃取有限公司(HA221-40-11型，萃 取釜容积1L)，CO2气体为食品级，纯度> 99% ；美国安捷伦公司6890GC-5975MS型气相色 谱-质谱联用仪，NIST05质谱检索库；R206旋转蒸发器，上海申生科技有限公司；乙醇、无 水硫酸钠和乙醚均为分析纯。蔓荆子购自福州回春堂中药饮片厂，并经福建省医学科学研究所药物室鉴定为单 叶蔓荆子 Vitex trifolia L. var. Simplicifolia Cham.。1. 2蔓荆子提取物萃取方法超临界CO2萃取流程CO2钢瓶一冷冻系统一高压泵一萃取釜一解析釜I-解析釜II-冷冻系统 (循环)。称取200g蔓荆子(已干燥至含水量为10%左右)粉末样品装入萃取釜中，在萃 取釜压力20MPa，萃取温度35°C，解析釜压力4. 4MPa，解析温度35°C，CO2流量控制60L/h， 样品夹带剂用量为300mL的条件下，对萃取釜和2个解析釜进行加热，贮罐进行冷却，当温 度达到预定的温度时，打开CO2气瓶送气，并打开高压泵升压，压力达到预定压力时，循环萃 取lh，调节流量，恒温恒压萃取出料，得到含有夹带剂的蔓荆子萃取物，所得萃取物为黄褐 色液体，进行预处理后用于GC-MS分析。1. 3GC/MS分离与鉴定1. 3. 1样品处理取蔓荆子超临界CO2萃取物，采用旋转蒸发仪回收乙醇至为稠浸 膏，得蔓荆子提取物约18. 72g，计算萃取物得率。称取6. 24g用50ml乙醚溶解，振摇5min， 加无水硫酸钠适量，干燥，过滤，挥去乙醚至50ml，即可进样。1. 3. 2GC/MS 分离条件1.3. 2. IGC条件色谱柱HP-5MS 5% 苯基甲基硅氧烷 (30. OmX 250 μ mXO. 25 μ m)毛细管柱；载气为氦气(99. 999% )，体积流量为lml/min恒流 模式；程序升温50°C (保持3min)，以6°C /min升至200°C，以2°C /min升至250°C (保持 2min)；进样室温度280°C ；不分流进样，进样量为1 μ 1。1.3. 2. IMS条件离子源温度230°C，接口温度280°C，电离方式为电子轰击(EI)源，70eV电子轰击能量，扫描范围40 450amu，溶剂延迟时间为3min.2 结果在上述实验条件下，蔓荆子萃取物得率为9. 36%。对蔓荆子挥发油进行了测定，将 其总离子流采用面积归一化法计算各峰的相对百分舍量。通过NIST05质谱数据库检索、人 工谱图解析，确认该挥发油中部分化学成分，共鉴定出30种成分。由表1可见，主要成分为 9. 17-十八烷二烯酸、7-异丙基-1. 1. 4a-三甲基-1. 2. 3. 4. 4a. 9. 10. IOa-八氢菲、6-十八 烷酸、η-棕榈酸、十八烷酸等。表1蔓荆子SPF-CO2萃取物化学成分分析结果 实施例2正交试验优化蔓荆子超临界提取物制备工艺
1仪器与试药1. 1仪器P/ACE MDQ高效毛细管电泳分析仪(美国Beckman Coulter公 司)，二极管阵列(DAD)检测器、32KaratTM Software ver 7. 0分析软件、非涂层毛细管 (47. 5cmX50 μ m)(河北锐沣色谱器件有限公司)，艾科浦超纯水机(重庆颐洋企业发展有 限公司)。1.2.试剂蔓荆子黄素对照品(购于中国药品生物制品检定所)，硼砂、硼酸、甲醇 等均为国产分析纯。2试验方法2. ICO2超临界萃取正交实验设计影响超临界CO2萃取的因素很多，因此本试验在 预实验的基础上固定其它因素，选取对萃取效率影响较为显著的3个因素，即萃取温度、萃 取压力、萃取次数，按L9 (34)正交表设计安排实验，以得膏率和超临界萃取物中蔓荆子黄素 的含量为考察对象，优选确定最佳萃取工艺条件，并按正交实验结果得出的最优萃取工艺 条件，重复实验3次，以考察萃取工艺的重现性。正交实验因素水平，结果见表2。表2正交实验因素水平表 2. 2超临界CO2萃取工艺C02钢瓶一冷冻系统一高压泵一萃取釜一解析釜 I--解析釜II-冷冻系统(循环)。称取200g蔓荆子粉末样品装入萃取釜中，设置解析釜 压力4. 4MPa, CO2流量控制60L/h，样品夹带剂用量为300ml，在上述正交表的萃取釜压力， 萃取温度，解析温度的条件下，对萃取釜和2个解析釜进行加热，贮罐进行冷却，当温度达 到预定的温度时，打开CO2气瓶送气，并打开高压泵升压，压力达到预定压力时，循环萃取， 调节流量，恒温恒压萃取出料，得到含有夹带剂的蔓荆子萃取物，所得萃取物为黄褐色液 体。将该液体置旋转蒸发仪浓缩至浸膏，至真空干燥箱中干燥至恒重。2. 3超临界萃取物中蔓荆子黄素含量的测定2.3. 1对照品溶液的制备取蔓荆子黄素对照品10mg，精密称定，加超纯水IOml超
声溶解，定容至刻度，摇勻即得。2. 3. 2样品溶液的制备分别取不同工艺条件下的蔓荆子超临界CO2萃取物约 50mg,精密称定，置IOmL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，混勻，静置，用0. 45 μ m针头 式微孔过滤器滤过，弃去初滤液，取续滤液备用，作为蔓荆子超临界萃取物供试品溶液。2. 3. 3电泳分离条件毛细管长55cm，内径50 μ m,缓冲液为100mmol/L硼 酸100mmol/L硼砂甲醇=5 1 1，压力进样0. 5psi X lOsec，分离电压30kV，温度 25°C，分析时间20min，扫描波长190 600nm，检测波长260nm。2. 3. 4标准曲线及线性将1. 0mg/ml的蔓荆子黄素对照品母液分别稀释成0. 1、0.2,0. 4,0. 6,1. Omg/ml 5种浓度，于上述条件下进行分析，以蔓荆子黄素浓度(Y)和蔓荆 子黄素峰面积(X)作标准曲线，得出其回归方程为Y = 420752X+15449，线性范围为0. 1
1.Omg/ml，其相关系数r2 = 0. 9919，表明线性关系良好。2. 3. 5方法学考察按照常规的方法考察精密度、稳定性、回收率等，均符合含量 测定要求。3 结果将各蔓荆子超临界萃取物供试品溶液及蔓荆子药材供试品溶液注入毛细管电泳 仪，按毛细管“电泳分离条件”项下的色谱条件进行测定，记录色谱图，采用外标法计算蔓荆 子素含量，结果见表3、表4。表3蔓荆子超临界萃取工艺正交实验出膏率结果 表4蔓荆子超临界萃取工艺正交实验蔓荆子黄素含量测定结果 由表3、表4中数据可以看出，对蔓荆子黄素超临界萃取影响最大的因素是萃取温 度，其次为萃取压力，萃取时间因素影响最小，取各因素最好的水平组合，可得到蔓荆子黄 素超临界萃取的最佳工艺条件为在萃取温度为35°C、压力为20Mpa、萃取2小时时蔓荆子提 取物的出膏率和萃取物中蔓荆子黄素的含量最高，考虑到萃取时间对萃取效率影响不大， 但萃取时间对工业生产影响较大，所以萃取1小时为佳，故实际生产的最佳工艺条件为佳 工艺条件为在萃取温度为35°C、压力为20Mpa、萃取2小时。按照此工艺条件，重复萃取3 次，以验证工艺的稳定性，结果，3次重复实验所得蔓荆子黄素的出膏率与萃取物中蔓荆子 黄素的含量比较稳定，均值分别为12. 35和405. 48，RSD分别为1. 80%和2. 36%，表明该工 艺的重复性良好。
权利要求
一种蔓荆子提取物超临界萃取工艺，其特征在于，以中药蔓荆子为原料按照下述方法分离提取制备提取物采用超临界流体萃取法，以二氧化碳为溶剂，加入适量的夹带剂，萃取压力为20～30Mpa，温度为35～55℃，萃取时间为1～2小时，CO2流量为40～80L/h，对萃取釜和2个解析釜进行加热，贮罐进行冷却，当温度达到预定的温度时，打开CO2气瓶送气，并打开高压泵升压，压力达到预定压力时，循环萃取，调节流量，恒温恒压萃取出料，得到含有夹带剂的蔓荆子萃取物，所得萃取物为黄褐色液体。
2.根据权利要求1所述的蔓荆子提取物超临界萃取工艺，其特征在于，萃取压力为 20Mpa，温度为35°C，萃取时间为1小时。
3.根据权利要求1所述的蔓荆子提取物超临界萃取工艺，其特征在于，所用的夹带剂 为乙醇或乙酸乙酯，用量为原料的1 2倍(体积重量比)，优选为1. 5倍。
4.一种蔓荆子提取物，其特征在于，以中药蔓荆子为原料，干燥至含水量为5 15% 后，按照权利要求1所述的超临界萃取工艺制备，将制备得到液体经浓缩、干燥后即得蔓荆 子提取物。
5.根据权利要求4所述的蔓荆子提取物，其特征在于，以中药蔓荆子为原料，干燥至含 水量为8 10%后，按照权利要求1所述的超临界萃取工艺制备，将制备得到液体经浓缩、 干燥后即得蔓荆子提取物。
全文摘要
本发明涉及一种蔓荆子提取物及制备工艺，特别是一种采用超临界流体萃取技术制备的蔓荆子提取物及其制备工艺，属中药制备化学化工技术领域。本发明的特征在于，采用纯CO2超临界萃取中药蔓荆子中的挥发油等脂溶性成分，同时以有机溶剂乙醇作为夹带剂，萃取中药蔓荆子黄酮类等有效成分，超临界流体萃取流出物有两级解析过程，最终萃取釜中收集到了含有蔓荆子挥发油与黄酮类有效成分的提取物；本发明方法所制备的中药蔓荆子提取物同时具备挥发油与黄酮类等有效成分。本发明方法工艺简单，操作方便，产品中无溶剂残留，对人体安全无毒，适合作为药物使用。
文档编号A61P27/02GK101904947SQ20091011192
公开日2010年12月8日 申请日期2009年6月8日 优先权日2009年6月8日
发明者张亚敏, 徐榕青, 林文津 申请人:福建省医学科学研究所