专利名称：一种鲜土贝母提取物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物及其制备方法，特别涉及ー种鲜土贝母ニ氯甲烷提取物及其制备方法，属于医药生物技术领域。
背景技术：
土贝母为葫芦科植物土贝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim. )Franquet]的干燥块茎，是ー种传统中药。其又被称为土贝、大贝母、地苦胆、草贝等。主产于河南、陕西、山东等地。临床具有清热解毒、消肿散结之功效。土贝母所含的主要成分有脂肪酸、留醇、三萜皂苷等。分离出来的多种化学成分经实验表明具有抗肿瘤作用。据文献调查，所进行的理化实验材料多为土贝母干品，而用土贝母鲜品进行研究者甚少。

发明内容
本发明目的在于提供一种鲜土贝母提取物，本发明另一目的在于提供该提取物的制备方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明鲜土贝母提取物的制备方法包括如下步骤取土贝母鲜品800 1200重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏·提取器中，用6 10重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用6 10重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C状态下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本发明鲜土贝母提取物的制备方法可以优选为如下步骤取土贝母鲜品1000重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用8重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用8重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在60°C状态下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本发明鲜土贝母提取物制备方法还可以优选为如下步骤取土贝母鲜品900重量份，用蒸馏水洗浄，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用9重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用9重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在55°C状态下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本发明鲜土贝母提取物的制备方法还可以优选为如下步骤取土贝母鲜品1100重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用7重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用7重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在65°C状态下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；取本发明土贝母ニ氯甲烷提取物，加入常规辅料，按照常规ェ艺，制成片剂、胶囊
4剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剤、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、ロ服液体制剂、冻干粉针剂或注射制剂。上述本发明药物组合物及其制备方法中的重量份与体积份的关系为g/ml的关系O本发明首次以鲜土贝母为原料，通过提取富集及柱层析的方法富集特定洗脱组分。该发明方法提取的有效部位提取物成分纯度高，成分相对清晰，富集方法简单，重复性好。下述实验例和实施例用于进ー步说明但不限于本发明。实验例一 MTT法测定取对数生长期的肿瘤细胞，用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调配成浓度为7000个/ml，接种于96孔板，每孔加入200 μし细胞贴壁后，分别加入50 μ L 土贝母鲜品ニ氯甲烷提取物(实施例I制备)药物溶液，试药按浓度递增原则各设5个不同的浓度，终浓度分别为O. l、l、10，20，40g/ml，每种药的每种浓度均设10个平行孔，空白阴性对照组为等容积的RPMI-1640培养基。在37°C、5% CO2条件下培养48h。每孔加入20 μ L浓度为5mg/ml的MTT溶液，振荡混匀后继续培养4h。弃去上清液，每孔加入150 μ L DMSO溶液，轻轻振荡10分钟使MTT甲瓒沉淀溶解，用酶标仪(測定波长为570nm)測定其OD值，计算抑制率，求IC50、IC90。按下列公式计算药物对肿瘤细胞増殖的抑制率。抑制率(％ ) = [1_(药物组OD值-空白组OD值V(对照組-空白组OD值)]*100%为了证明实验结果的客观性及可重复性，我们进行了三次重复实验，结果见表ー
和表ニ。 表ー该药物对MCF-7细胞体外抑制作用结果
权利要求
1.一种鲜土贝母提取物，其特征在于该提取物由如下方法制成 取土贝母鲜品800 1200重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用6 10倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用6 10倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C状态下，真空干燥，即得土贝母提取物。
2.如权利要求I所述的土贝母提取物，其特征在于该提取物由如下方法制成 取土贝母鲜品1000重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用8倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用8倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在60°C状态下，真空干燥，备用，即得土贝母提取物。
3.如权利要求I所述的土贝母提取物，其特征在于该提取物由如下方法制成 取土贝母鲜品900重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用9倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用9倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在55°C状态下，真空干燥，即得土贝母提取物。
4.如权利要求I所述的土贝母提取物，其特征在于该提取物由如下方法制成 取土贝母鲜品1100重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用7倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用7倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在65°C状态下，真空干燥，即得土贝母提取物。
5.如权利要求1-4任一所述的土贝母提取物，其特征在于取本发明土贝母提取物，加入常规辅料，按照常规エ艺，制成片剂、胶囊剂、散剂、软胶囊剂、滴丸、蜜丸、丸剂、颗粒剂、蜜炼膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、ロ服液体制剂、冻干粉针剂或注射制剂。
6.一种鲜土贝母提取物的制备方法，其特征在于该方法为 取土贝母鲜品800 1200重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用6 10倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用6 10倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C状态下，真空干燥，即得土贝母提取物。
7.如权利要求6所述的土贝母提取物的制备方法，其特征在于该方法为 取土贝母鲜品1000重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用8倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用8倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在60°C状态下，真空干燥，即得土贝母提取物。
8.如权利要求6所述的土贝母提取物的制备方法，其特征在于该方法为 取土贝母鲜品900重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用9倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用9倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在55°C状态下，真空干燥，即得土贝母提取物。
9.如权利要求6所述的土贝母提取物的制备方法，其特征在于该方法为取土贝母鲜品1100重量份，用蒸馏水洗净，用研钵研碎，过10目筛，置索氏提取器中，用7倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近无色，挥去药渣中的石油醚，用7倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近无色，提取液减压回收ニ氯甲烷至干，在65°C状态下，真空干燥，即得土贝母提取物。
全文摘要
本发明公开了一种土贝母提取物的制备方法。该提取物由以下制备方法制成取土贝母鲜品，经石油醚回流提取，挥去药渣中的石油醚，再经二氯甲烷提取，回收二氯甲烷至干，真空干燥，备用即得。本发明首次以鲜土贝母为原料，通过常规提取富集，并采用柱层析的方法富集特定洗脱组分。该发明方法提取的有效部位提取物成分纯度高，成分相对清晰，富集方法简单，重复性好。
文档编号A61K36/42GK102908381SQ20111022199
公开日2013年2月6日 申请日期2011年8月4日 优先权日2011年8月4日
发明者傅延龄 申请人:北京中医药大学