专利名称：新的西克拉敏皂苷化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的西克拉敏皂苷化合物，含有该化合物的用于治疗癌症或炎症的药物组合物，以及该化合物在制备抗癌或抗炎药物中的应用。
背景技术：
红毛根是紫金牛科植物，在中国传统医学中它被认为具有清热利湿，活血和瘀的作用。据《中药大辞典》中记载，该植物可用于治疗痢疾、肝炎、胆囊炎、风湿、跌打损伤、咳血、疮疖肿痛等疾病。
到目前为止，尚没有见到西克拉敏皂苷类成分具有抗癌、抗炎、镇痛活性的报道。

发明内容
发明人经过广泛的筛选，发现了新的一类西克拉敏皂苷化合物具有良好的抗癌和消炎镇痛作用。
本发明涉及式I的西克拉敏皂苷化合物。
式I其中R1为氢、羟基、C1-C4烷基；R2为氢、羟基、卤素原子、C1-C4烷基或由1-3个选自羟基、卤素原子、C2-C4链烯基、C3-C8环烷基和苯基的基团取代的C1-C4烷基；R3为甲基或氢；R4为甲基或氢。
本发明还涉及含有上述式I西克拉敏皂苷化合物的药物组合物，特别是用于治疗癌症或炎症的药物组合物。
本发明还涉及上述式I西克拉敏皂苷化合物在制备药物、特别是治疗癌症或炎性疾病的药物的用途。
本发明还涉及一种治疗癌症或炎性疾病的患者的方法，包括给予该患者治疗有效量的上述式I西克拉敏皂苷化合物。
具体实施例方式
本发明提供如上所定义的式I西克拉敏皂苷化合物
式I本发明中，C1-C4烷基指含有1到4个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基等。
C2-C4链烯基是指含有2到4个碳原子的直链或支链烯基，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基、异丁烯基等。
C3-C8环烷基是指含有3到8个碳原子的环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
卤素原子是指氟、氯、溴或碘，优选为溴或氯。
在本发明的一个优选方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R1为氢或甲基的式I化合物。
在本发明的另一个优选方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R2为氢或甲基的式I化合物。
在本发明的另一个优选方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R3为氢的式I化合物。
在本发明的另一个优选方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R4为氢的式I化合物。
本发明中最优选的化合物是R1、R2、R3和R4均为甲基的式I化合物。该化合物为3β-O-{α-L-鼠李糖-(1-4)-[β-D-葡萄糖-(1-2)-β-D-葡萄糖(1-2)]-α-D芹菜糖}西克拉敏苷(化合物1)。
本发明化合物1可以从紫金牛科植物红毛根(Ardesia mamilataHance)中提取得到的。提取方法包括将粉碎的毛红根用有机溶剂提取，然后对有机溶剂提取物进行层析分析，从而获得本发明的化合物1。所用的有机体溶剂包括卤代烷类如二氯甲烷、三氯甲烷等；醇类如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等；酯类如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯等；醚类如石油醚、乙醚；或它们的混合物。在本发明的提取方法中，优选在有机溶剂提取之前，用非极性有机溶剂如石油醚、乙醚或环己烷对毛红根粉末进行脱脂处理。本发明方法的有机溶剂提取步骤优选使用极性较高的有机溶剂，如甲醇、乙醇、或醇/水混合物。本发明更优选在上述高极性有机溶剂提取后，将提取物溶于水中再用极性较小的极性有机溶剂如正丁醇、乙酸丁酯等提取。上述提取步骤最好包括乙醇提取和随后对乙醇提取物的正丁醇提取。上述有机溶剂提取后获得的产物随后进行层析分离，优选是硅胶层析。硅胶层析可以是柱层析或制备性薄层层析。层析用的洗脱剂容易有本领域技术人员根据本发明化合物的性质确定。本发明优选的洗脱剂是正丁醇与水的混合物，更优选添加适量的醋酸。例如使用正丁醇∶醋酸∶水＝7∶1∶2的溶剂混合物洗脱。
本发明的其它化合物可以以化合物1或已知的其它天然西克拉敏苷的配基为起始物，用常规的有机合成方法获得。
本发明已证明，本发明式I化合物具有较好的抗癌、抗炎镇痛作用。
因此，本发明的化合物可用于治疗和/或预防癌症、炎性疾病或治疗疼痛等相关疾病。本发明提供一种治疗癌症或炎性疾病的患者的方法，包括给予该患者治疗有效量的上述式I西克拉敏苷衍生物。
可以将本发明的化合物用于制备药物，特别是用于治疗癌症、炎性疾病或疼痛的药物。因此，本发明涉及式I化合物在制备药物中的用途，特别是在制备用于治疗癌症、炎性疾病或疼痛的药物中的应用。
本发明还涉及药物组合物，其包括式I化合物及药用载体。
本发明式I化合物或药物组合物可通过注射、口服或局部途径给药，给药剂型可以是例如片剂，胶囊、缓释和注射液等。
本发明的药物组合物可按本领域已知方法制备，例如将式I化合物与药用载体混合。
通过以下实施例进一步描述本发明，但本发明的范围并不限于这些实施例。
制备实施例化合物1的制备将红毛根5kg(干品)粉碎，过40目筛，筛过物用石油醚提取。每次用5升，提取3次。药渣用乙醇提取，每次用乙醇4升，提取3次，将提取液合并。将该乙醇提取液减压蒸发至衡重。得到乙醇提取物200g。该乙醇提取物用水溶解，将其在正丁醇/水中进行分配。将正丁醇层减压蒸发至干，得到提取物23g。将水层蒸发至干得到提取物150g。将正丁醇取物用少量溶剂溶解，并上样至硅胶柱上Φ100mm×1500mm，用正丁醇∶醋酸∶水＝7∶1∶2混合溶剂洗脱。得到50g化合物1。
化合物1为黄色粉末。10％EtOH-H2SO4检验呈红黑色(加热)，表明有糖存在。FAB-MS质谱(m/z[M+H]+)确定其分子量是1074，同时具有M/Z 133(芹菜糖脱水)，147(鼠李糖脱水)和163(葡萄糖脱水)峰。经过气相层析(GC)与标准品比对，表明分子中含有芹菜糖、鼠李糖和葡萄糖，其摩尔比为1∶1∶2。其分子结构经13C-NMR、1H-NMR得到确证，其数据见表一、二。
表一 化合物1的13C-NMR数据(δppm，DMC0-d6，400MHz)

表二化合物1的1H NMR数据(δppm DMSO-d6，600MHz)

试验实施例1化合物1的抗肿瘤活性肿瘤细胞体外生长抑制实验(MTT法)表明，本发明化合物1对人胃癌细胞株(Kato-III)、人红白血病细胞株瘤(K562)、人卵巢癌细胞株(.OVCA2780)、小鼠淋巴白血病细胞株(L1210)、人肺癌细胞株(A549)等具有很好的抑制作用。见表三、表四。表中显示，K562、L1210对本发明化合物1较为敏感。本实验中，化合物1在10μg.mL-1浓度时，肿瘤细胞生长抑制率达50％，而阳性对照药顺铂的抑制率为35.7％。
表三 MTT显色法检测化合物1的体外抗癌活性(n＝12)组别 剂量OD值(x±s)微克 K562 Kato-III OVCA2780/毫升对照- 0.83±0.07 0.69±0.03 1.380±0.03顺铂15 0.32±0.03###(43.7) 0.51± 0.28±0.03###(75.2)0.03###(18.0)化合物 5 0.65±0.02***(71.2) 0.63± 1.29±1 0.02***(89.2)0.03***(93.2)化合物 10 0.54±0.05***(52.5) 0.51± 1.22±1 0.04***(79.1)0.05***(80.7)化合物 15 0.43±0.04***(31.6) 0.64± 0.96±1 0.02***(73.2)0.08***(74.3)化合物 17.50.36±0.02***(3.6) 0.52± 0.96±1 0.02***(76.7)0.08***(69.4)化合物 20 0.12±0.02***(2.6) 0.53± 0.69±1 0.05***(75.9)0.14***(49.4)IC50/ 6.8μg.mL-134.2μg.mL-140.8μg.mL-1注(1).括号里的数字为OD值占溶剂对照组的百分率
(2).###P＜0.001与溶剂对照组比较(3).**P＜0.01，***P＜0.001与溶剂对照组比较(4).Kato-III为人胃印戒癌细胞株(5).K562为人白血病细胞株(6).OVCA2780为人卵巢癌细胞株表四MTT比色法检测化合物1的体外抗癌活性(n＝10)组别 剂量 OD值(x±s)微克/毫升A549 L1210对照 0 0.98±0.04(100.0)1.23±0.01(100.0)顺铂 10 0.53±0.02###(48.2) 0.13±0.01###(12.8)化合物15 0.89±0.02(98.2) 1.04±0.02**(94.4)化合物110 0.85±0.02***(93.1) 0.81±0.16***(73.4)化合物115 0.72±0.015***(78.2)0.13±0.04***(13.3)化合物120 0.21±0.05***(31.1) 0.034±0.02***(6.1)IC5014.27μg/ml 7.74μg/ml注(1)括号里的数字为OD值占溶剂对照组的百分率(2)###为阳性对照药顺铂(DDP)与溶剂对照组比较P＜0.001(3)***实验组与溶剂对照组比较P＜0.001(4)L1210小鼠淋巴白血病细胞株(5)A549人肺癌细胞株试验实施例2化合物1的消炎镇痛试验将70只小鼠随机分为7组，于二甲苯致炎前1小时，6个组的动物分别经口服给予如下剂量的化合物1(3.125、6.25、12.5、25、50、100mg.kg-1)，另外一组动物接受等体积的溶媒。致炎后30分钟取两侧耳片，求得肿胀度。表五结果显示，化合物1对二甲苯致小鼠耳部水肿有一定抑制作用，其中25mg.kg-1的剂量下作用最为显著，抑制率达89.3％表五 化合物1对二甲苯诱发小鼠耳部水肿的抑制作用(n＝10，ig给药)组别剂 量 肿块重量(mg)抑制率(％)(mg.kg-1)生理盐水组 - 7.34±2.15 0化合物1 50 2.42±1.23 74.8化合物1 25 1.22±1.289.3化合物1 12.03.12±1.13 64.5化合物1 6.0 4.21±1.12 45.权利要求
1.下式I化合物 式I其中R1为氢、羟基、C1-C4烷基；R2为氢、羟基、卤素原子、C1-C4烷基或由1-3个选自羟基、卤素原子、C2-C4链烯基、C3-C8环烷基和苯基的基团取代的C1-C4烷基；R3为氢或甲基；R4为氢或甲基。
2.权利要求1的化合物，其中R1为甲基或氢。
3.权利要求1的化合物，其中R2为甲基或氢。
4.权利要求1的化合物，其中R3甲基或氢。
5.权利要求1的化合物，其中R4甲基或氢。
6.权利要求1的化合物，其中R1、R2、R3和R4各自为甲基。
7.一种药物组合物，其含有权利要求1-6中任一项的化合物和药用载体。
8.权利要求7的药物组合物，其为用于治疗癌症或炎症的药物组合物。
9.权利要求1-6中任一项的化合物在制备药物中的用途。
10.权利要求9的用途，其中所述药物是治疗癌症或炎性疾病的药物。
全文摘要
本发明公开了式I的西克拉敏皂苷类化合物，其中各基团的定义见说明书。这些化合物具有较好的抗癌和抗炎镇痛作用。因此，本发明还涉及含有这些化合物的药物组合物，以及它们用于治疗肿瘤和炎性疾病的应用。
文档编号A61P35/00GK1524871SQ0310493
公开日2004年9月1日 申请日期2003年2月27日 优先权日2003年2月27日
发明者郑祥福 申请人:北京瑞康医药技术有限公司