专利名称：硫酸化nf的制作方法
技术领域：
本发明属于生物制药技术领域。
近十余年来，硫酸化多糖作为一类新的抗AIDS药物，在国内外受到人们的重视。它是一类化学结构复杂，生物活性多样，构效关系鲜明的生物活性物质。
硫酸化多糖有干扰HIV对宿主靶细胞的粘附，抑制HIV抗原的表达，抑制合胞体的形成，抑制HIV逆转录酶的活性，增强免疫功能等生物活性，这些生物活性程度与其多糖上所挂的硫酸根数量有关，也与硫酸化多糖的空间结构有关。除了抗凝血作用的副作用以外，至今未发现有新的副作用。
在国外，1987年原联邦德国Bayer与Hoechst公司联合研制人工合成的木聚糖硫酸酯，此后美国人工合成的戊聚糖硫酸酯和硫酸化β-1，3-D葡聚糖都已经临床试用，均得到了满意的结果，除抗凝血作用外，未发现新的副作用。在国内，中国科学院上海药物所的方积年、向道斌等对硫酸化多糖都有深入的研究，但至今未见有用于治疗艾滋病的报道。
在发明专利《酒糟的净化与利用方法》(专利号85104057.8)的基础上，筛选培育出风尾菇NF1菌株，已由“中国微生物菌种保藏管理委员会，普通微生物中心”保藏(NF1菌株的保藏号为CGMCC NO.0852，保藏日期为2002年12月9日)，以酒糟作为培养基，接种NF1菌株，经液体深层发酵工程方法，获发酵液，从发酵液中分离、纯化获NF1菌多糖，用恩酮法检测其含糖量，其得率为2g/1000ml，经南京大学分析中心红外光谱检测其主要成份为β-1，3-葡聚糖(见附件一)，将其磺化反应获硫酸化NF1菌多糖，据C.R.Ricketts，《BiochemistryJournal》Vol.51报道，鉴定其硫酸化程度。将硫酸化NF1菌多糖用肠溶胶囊灌注，成为硫酸化NF1菌多糖肠溶胶囊，即为预防和治疗艾滋病的药。整个制备过程中不污染环境，无需附加环保治理设备。
硫酸化NF1菌多糖胶囊，经江苏省药物检验所，小鼠口服给药的急性毒性试验其结果为LD50＝10007mg/kg，肉眼观察，所有内脏器官未见明显异常(见附件二)。经中国医学科学院、中国协和医科大学、医药生物技术研究所病毒室，国内著名病毒学专家陈鸿珊研究员的设计、检验，该药物(NFS1)对HIV-1 RT(逆转录酶)的抑制率为94.02％，同时做的NFS2，因含硫酸根量相对NFS1少，其抑制率为71.63％(见附件三)。经云南省昆明市性疾病控制与预防中心对5例AIDS患者(志愿者)口服硫酸化NF1菌多糖肠溶胶囊(其剂量为0.3g/粒，5粒/次，2次/日)，为期6天，并在其口服前后进行CD4和CD8的检测，其结果表明，本药对AIDS症状明显的患者有治疗效果(见附件四)。
本发明所制备硫酸化NF1菌多糖的原料是酒糟，用液体深层发酵方法，整个制备工艺相对简单，因此成本低，由此制备的药价也相对低廉。而国内外常用的制备抗艾滋病的药，用人工合成方法和褐藻中提取方法等，其工艺相对复杂，因此药价昂贵。
也因制备硫酸化NF1菌多糖的原料和方法与国内外不同，因此其主要成份的空间结构也会不同，根据硫酸化多糖的构效关系原理，本药物治疗艾滋病的效果也会与国内外有所不同。
硫酸化NF1菌多糖，可以进一步作深度开发，据我们已有的研究表明，硫酸化NF1菌多糖可以制备降血糖、降血脂和治疗肝癌病药物的原料。
四、具体实施方案取蔗糖14公斤，玉米粉2公斤，麸皮5公斤加Ca(OH)2辅料混匀，调PH至6左右，将上述混合物加入已空消后的一吨发酵罐中，经实消时压力为15公斤，温度为125℃，历时40分钟后，当罐温降至30℃时，加入风尾菇NF1菌株，其重量约为100公斤的液体菌种，使发酵体积为1吨，经控温至30℃，压力为0.5大气压，经3天发酵即完成。从罐中放出发酵液，经过滤，获残渣(包括菌丝体在内)，作饲料出售，剩下液体经减压，浓缩成原体积的10％，然后在此浓缩液中加酒精沉淀法分离、纯化获NF1菌多糖，用恩酮法检测多糖含量。将此多糖用氯磺酸-吡啶法磺化反应方法(磺化反应多余吡啶入水回收)获硫酸化NF1菌多糖，用C.R.Rickett报道方法鉴定其硫酸化程度，最后将其灌注入肠溶胶囊，即成为硫酸化NF1多糖肠常用溶胶囊，也就是抗艾滋病的药。
权利要求
1.一种凤尾菇菌株，其特征在于风尾菇NF1菌株，已送“中国微生物菌种保藏管理委员会，普通微生物中心”保藏，保藏号为CGMCC No.0852。
2.一种硫酸化NF1菌多糖及其制备方法其特征在于以酒糟为培养基，接种NF1菌株，经液体深层发酵方法获发酵液，将其分离、纯化获NF1菌多糖，其主要成份为β-1，3-葡聚糖，将其硫酸化为硫酸化NF1菌多糖，将其灌注入肠溶胶囊，即为硫酸化NF1菌多糖肠溶胶囊。
3.根据权利要求“2”所述，硫酸化NF1菌多糖的应用其特征在于其灌注入肠溶胶囊，经口服可用于预防和治疗艾滋病。
4.根据权利要求“2”所述，硫酸化NF1菌多糖的应用其特征在于可用于制备降血糖、降血脂和治疗肝癌病的药物原料。
全文摘要
本发明属于生物制药技术领域。在《酒糟的净化与利用方法》专利基础上，筛选培育出凤尾菇NF
文档编号A61K31/715GK1473926SQ0214852
公开日2004年2月11日 申请日期2002年12月13日 优先权日2002年12月13日
发明者陈曦, 陈涛, 陈浩, 陈 曦 申请人:陈曦, 陈 曦