专利名称：生物活性物质神经酸钙的分离提取纯化生产工艺及其在治疗老年痴呆症中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及天然药物领域，具体涉及生物活性物质神经酸钙的分离提取纯化生产 工艺及其在治疗老年痴呆症中的用途。
背景技术：
老年痴呆症，又称阿尔茨海默病(Alzheimer，s disease, AD)是发生在老年期 及老年前期的一种原发性退行性脑病，指的是一种持续性高级神经功能活动障碍，即在 没有意识障碍的状态下，记忆、思维、分析判断、视觉空间辨认、情绪等方面的障碍。其特 征性病理变化为大脑皮层萎缩，并伴有β-淀粉样蛋白(β-amyloid，β-AP)沉积，神经 原纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFT)，大量记忆性神经元数目减少，以及老年斑 (senileplaque,SP)的形成。目前尚无特效治疗或逆转疾病进展的治疗药物。也是四大常 见的神经退行性疾病之一(其它三种为亨廷顿氏病、卢伽雷氏症、帕金森氏病)。老龄化趋 势让老年性痴呆患者数量增多随着现代医学的发展，越来越多的老人变得年轻而又充满了 活力。但是请不要忘记在不久的将来，我国将进入老龄社会。同时伴随着一个不可忽视的 问题——老年痴呆症的发病率在逐年增高。痴呆已不是老年人的“专利”四五十岁就痴呆 的人，数量也在逐年增加，老年痴呆逐步呈现年轻化趋势，血管性因素在发病中所起的作用 也日益突出。事实上，老年痴呆在中年就开始有症状和反应，如果不提早发现和治疗，等发 展严重了就无法治愈了。以目前的医学技术，人的中枢神经纤维一旦因为意外或疾病感染而损坏，就无法 修复。我们对于神经酸及神经酸钙在神经系统疾病方面的应用研究成果，使预防中枢神经 纤维损坏及有效提高记忆性神经元活性的研究工作迈进了一步。我们的神经系统控制着整 个身体。神经纤维犹如一条条电线，电线表面断断续续有些部分由绝缘体包绕着。神经纤 维表面的绝缘体部分称为髓鞘，未包绕的部分称为郎飞结，电流沿着髓鞘从一个郎飞结快 速地"跳"到另一个郎飞结，人体内的信号就是由这些电流，让大脑和人体各部分在一瞬 间能够互相"沟通"。髓鞘可说是让电流"跳"得更快的跳板。如果没有髓鞘，电流在神 经纤维上小步小步地跳，信号就会流动得很慢，变得越来越弱，甚至消失掉。体内信号流动 得慢，人就会变得迟钝从而形成痴呆。如果把神经纤维想像成一个身体，髓鞘就像是一个一 层层包裹着神经纤维的的保护衣，没有髓鞘保护的神经纤维像一个没穿衣服的人那样饱受 风吹雨打，神经纤维会疼痛，甚至坏死。研究发现，那些患上神经退行性疾病的人，其中一种 是老年痴呆症病患者，患有这种疾病的人，包绕大脑和脊椎内神经的髓鞘被破坏，记忆性神 经元细胞数目减少，影响到有关神经的功能，譬如在没有意识障碍的状态下，记忆、思维、分 析判断、视觉空间辨认、情绪等方面的障碍。研究发现，患老年痴呆症的病人，出现了上述 症状，其中一个步骤，就必须让髓鞘再生，提高记忆性神经元细胞数目。我们对于神经酸及 神经酸钙在神经系统疾病方面的应用研究成果，使髓鞘发育和再生成为了可能，这个研究 成果的临床试验有效地找出了治疗老年痴呆症的方法。要为神经纤维做保护衣，首先要有布料，这布料就是髓鞘质，而神经酸(NA)又主要是以鞘糖脂(NA占48% )和鞘磷脂(NA占 35% )存在于髓鞘中，这么一来，神经酸钙就通过形成髓鞘包扎着神经纤维，形成了神经纤 维的的保护衣。患老年痴呆症的病人，通过神经酸及神经酸钙对神经纤维的保护，从而增强 了神经讯息的传输；通过对髓鞘内脑细胞膜功能的调节，可增强信息在脑细胞间连接传递， 提高钙离子的作用，有利于稳定神经系统及促进记忆性神经元细胞活性，起到改善大脑，增 强记忆，改善思维、分析判断、视觉空间辨认等方面的能力。神经酸钙(calcium nervonate)是一种长链的单不饱和脂肪酸钙盐，化学名 z-15-二十四碳烯酸钙，分子式C48H9tlO4Ca,结构简式[CH3 (CH2) 7CH = CH(CH2) 13C00]2Ca，分 子量771.3，熔点；133-135 。神经酸钙是大脑发育、维持的必须营养物，是髓鞘的重要组 成成分之一，对保护神经纤维及神经信息的传输起着重要作用，对提高脑神经细胞的活性， 防止记忆性神经元细胞数目减少有很大作用。神经酸钙是神经细胞膜的重要组成部分，对 神经介质和受体起着重要的调节作用，对脑神经系统和发育生长，脑细胞间的连接形成均 有明显的作用，而脑神经细胞膜在信息传递和信息加工中起着十分重要的作用，脑神经细 胞通过其膜上的离子通道和受体来完成信息传递和信息加工，通过神经酸及神经酸钙对髓 鞘功能的调节，可增强脑神经细胞间的信息传递和信息加工能力，从而提高钙离子的作用， 有利于稳定神经系统及促进记忆性神经元细胞活性的恢复，起到改善大脑，增强记忆，改善 思维、分析判断、视觉空间辨认等方面的能力。发明人经过研究发现，神经酸钙对提高正常 小鼠的记忆能力(跳台实验；避暗实验；水迷宫实验)，提高东莨菪碱致痴呆小鼠模型的学 习记忆能力，提高酒精致痴呆小鼠模型学习记忆能力，从而表明了神经酸韩对老年痴呆症 具有良好的治疗作用，另外，对属于痴呆早期表现的轻度认知损害，记忆力减退和健忘等也 具有相同的治疗作用。

发明内容
本发明的目的是提供的一种生物活性物质神经酸钙的提取，纯化工艺流程及其在 治疗老年痴呆症中的用途。本发明的另一目的是提供含有生物活性物质神经酸钙，其衍生物和药学上可接收 的载体混合，制成的各种剂型，在治疗老年痴呆症中的用途。神经酸钙可以进行衍生化，例 如用酸，使上述化合物上的钙被氢取代，或与其它化合物反应，使钙被其它基团所取代；混 合制成的各种剂型，包括固体制剂，如胶囊片剂颗粒制剂等，液体制剂如口服液注射剂，滴 剂等。本发明生物活性物质神经酸钙及其衍生物的日剂量可以是200mg-600mg/60KG体重， 可以分一次或多次使用。超临界流体萃取法(SFE)超临界流体萃取法是利用超临界状态下的流体为萃取 剂，从液体或固体中萃取中药材中的有效成分并进行分离的方法。CO2因其本身无毒、无腐 蚀、临界条件适中(7.488Mpa，304. 15K)的特点，成为超临界流体萃取法最为常用的超临界 流体(SF)。在超临界流体萃取过程中使用夹带剂，即萃取时加入具有良好溶解性能的溶剂， 如乙醇、丙酮等，不仅改善和维持萃取选择性，而且提高难挥发溶质的溶解度。应用超临界 CO2萃取的优点是a.操作范围广，便于调节。最常用的操作范围是压力8 30Mpa，温度 35-8012 ；b.选择性好，可通过控制压力和温度，改变超临界CO2的密度，从而改变其对物质 的溶解能力，有针对性地萃取中草药中某些成分；c.操作温度低，在接近室温(31.0612)条件下萃取，尤适宜于热敏性成分的提取。萃取过程密闭、连续进行，排除了遇空气氧化和见 光反应的可能性，使萃取物稳定；d.从萃取到分离可一步完成。萃取后CO2不残留于萃出 物；e. C02价廉易得，可循环使用。将粉碎的油果，使用夹带剂，直接用CO2超临界设备，在温度80°C -120°C及压力 18-27MPa的条件下萃取，制得神经酸甘油酯；将神经酸甘油酯与氢氧化钙发生皂化反应生 成以神经酸钙盐为主要化合物的混合物；然后经过重结晶，金属盐沉淀，高速离心分离，干 燥，制得神经酸钙。通过利用本发明提供的工艺流程，来实现生产神经酸钙，可以达到不污 染环境，生物活性物质神经酸钙纯度高，回收率高，成本低等优点，具有明显的市场竞争优 势，能够基本满足目前国内外市场对该产品的要求，必将产生广泛的经济效益和社会效益.下面将结合具体实施实例及实验，对本发明作进一步说明。实施实例1 生物活性物质神经酸钙的提取，纯化生产工艺流程实施实例将300KG粉碎的油果，使用正己烷做夹带剂，用CO2超临界设备，在温度90°C及压 力27MPa的条件下萃取，制得粗神经酸甘油酯130KG左右。用10%的氢氧化钙乙醇溶液充 分反应，然后在室温下结晶生产神经酸钙粗品，然后加入60KG正己烷，加热溶解完全，然后 让其溶液在温度-10°C的冷库中充分沉淀，然后高速离心分离，结晶，干燥，制得15. 8KG纯 度为96. 8%的神经酸钙。神经酸钙(calcium nervonate)是一种长链的单不饱和脂肪酸钙盐，化学名 z-15-二十四碳烯酸钙，分子式C48H9tlO4Ca,结构简式[CH3 (CH2) 7CH = CH(CH2) 13C00]2Ca，分 子量771. 3，熔点:133-135°Co实施实例2 神经酸钙对提高正常小鼠的记忆能力实验(跳台实验；避暗实验；7jC 迷宫实验)。1.实验动物来源昆明种小白鼠，体重18_22g，由上海医科大学动物房提供。2.实验剂量设计样品推荐量为每天200g/10KG，本实验设高，中，低三个剂量组， 分别是推荐量的5，10,20倍，即将100g/KG，200g/KG，400g/KG，对照组饮用蒸馏水。3.实验方法与结果3.1.跳台试验各剂量组与对照组组小白鼠连续给样四周，末次给样后次日开始训练，将小白鼠 放入反应箱内适应3分钟，然后立即通以36V的交流电，小白鼠受到电击，其正常反应是跳 回平台，以躲避伤害性刺激，多数小白鼠可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回 平台。如此训练5-8分钟，记录5分钟内错误次数，以此作为学习成绩，24小时或48小时后 重作试验，记录受电击动物3分钟内的错误总数，同时计算动物出现错误反应的频率。记录 数据见表1。
权利要求
生物活性物质神经酸钙在治疗老年痴呆症中的用途。
2.根据权利要求1所述的一种药物组合物，其特征在于其中含有治疗有效量的生物活 性物质神经酸钙和药学上可接收的载体混合，制成的各种剂型。
3.根据权利要求2所述的一种药物组合物，其特征在于其中含有治疗有效量的生物活 性物质神经酸钙及其衍生物和药学上可接收的载体混合，制成的各种剂型。
4.根据权利要求1所述的生物活性物质神经酸钙的分离提取纯化生产工艺，其特征 是将粉碎的油果首先使用夹带剂，通过CO2超临界萃取法，控制温度在80°C -120°C及压力 18-27MPa的条件下，萃取制得甘油酯形式存在的神经酸衍生物，然后加入氢氧化钙经皂化 反应，生成钙盐，采用多种分离纯化方法，结晶，干燥，制得纯度为96%以上的神经酸钙产品·
5.根据权利要求3所述的生产工艺，其特征在于所述的夹带剂为乙醇或正己烷。
6.根据权利要求3所述的生产工艺，其特征在于所述的分离纯化方法包括重结晶，金 属盐沉淀的方法。
全文摘要
本发明涉及一种生物活性物质神经酸钙(calcium nervonate)的分离提取，纯化工艺流程。该工艺流程是将粉碎的油果，使用夹带剂，直接用CO2超临界设备萃取，制得神经酸衍生物粗品，然后加入氢氧化钙经皂化反应，分离，纯化，结晶，干燥，制得纯度极高的神经酸钙产品.本工艺流程具有工艺简单，不污染环境，操作温度低，有效成份神经酸钙纯度高，得率高，成本低等优点，具有明显的市场竞争优势，鉴于此，本工艺流程已被杭州萨韦坦生物科技有限公司工业化生产所采用；本发明的生物活性物质神经酸钙可与药学上适用的载体混合，制成各种剂型，用于治疗老年痴呆症。
文档编号A61K31/201GK101991564SQ200910101699
公开日2011年3月30日 申请日期2009年8月18日 优先权日2009年8月18日
发明者王建林, 王建民, 胡晓凯, 金伟娟 申请人:杭州萨韦坦生物科技有限公司