专利名称：一种复方苦参冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及一种复方苦参冻干粉针剂及其制备方法。
背景技术：
复方苦参注射液由苦参、白土苓两味中药组成，该注射液的主要化学成分为氧化苦参碱、苦参碱、槐果碱、苦参黄酮、土茯苓皂苷等。具有清热利湿，凉血解毒，散结止痛的功能。复方苦参注射液具有止血、止痛、抑制癌细胞扩散等功能，同时还可以改善造血功能、增加机体免疫力作用，为肿瘤患者康复提供了可靠手段，有效提高了患者的生存质量。该药的研制，打破了西药在强效止痛方面一统天下的历史。复方苦参注射液不仅对癌性疼痛、癌性出血、改善患者生存质量有效，还有使瘤体缩小的作用。研究证明复方苦参注射液含有的苦参类生物碱具有显著的体内外抗肿瘤作用，其抗炎镇痛作用也十分肯定。白土苓来源于百合科肖菝契属植物短柱肖菝契及华肖菝契，具有清热除湿，解毒之功能。
复方苦参注射液在临床应用中除了局部使用有轻度刺激外，还有其它不良反应发生的报道，主要的不良反应症状有头晕、便秘、恶心、过敏等，有速发型和缓发型二类，也有出现寒战、高热输液反应的。有报道注射用苦参碱滴注过快也会生产头晕、恶心等症状，因此分析认为复方苦参注射液的不良反应也主要是由于其中的苦参引起的，主要原因是中药提取物的成分复杂、纯度不够以及存在的一些杂质或微粒成分的影响。同时复方苦参注射液含有的苦参碱和氧化苦参碱也不很稳定，在长期贮存过程中两成分会发生相互转化，这些也影响了复方苦参注射液的质量控制和临床应用。
专利(ZL97112532)“复方苦参注射液”公开了一种复方苦参注射液及其制备方法。
资料检索中没有任何复方苦参冻干粉针剂的报道。

发明内容
基于上述原因，为了克服上述不足，本发明研究人员经过深入研究，对苦参、白土苓的提取纯化工艺进行了改进，通过提取纯化，得到苦参、白土苓有效部位，苦参、白土苓有效部位与药用辅料混合，制备成冻干粉针剂。
本发明的目的在于提供一种有效成分含量高、疗效好的复方苦参冻干粉针剂。
本发明的目的还在于提供该冻干粉针剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现。
一.工艺制法(1)原料药重量份组成为苦参1-1.2份，白土苓0.5-0.6份。
(2)取苦参粉碎，过20-40目筛，用0.1％盐酸溶液润湿膨胀后装入渗漉筒中，加0.1％盐酸浸泡4h后，将渗漉筒与强酸性阳离子交换树脂相连，进行渗漉，渗漉液过树脂柱，已交换树脂用在乙醇中加入氨水至pH值9-10的氨醇分次回流洗脱，氨醇洗脱液回收乙醇并浓缩，得浓缩液1。苦参药渣和白土苓加水煎煮二次，每次1-3小时，合并煎煮液，浓缩至1.5g生药/ml；加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，减压回收乙醇并浓缩至2g生药/ml，再加乙醇使含醇量为90％，静置过夜，滤过，减压回收乙醇，得浓缩液2。合并浓缩液1和2，真空干燥，得苦参、白土苓有效部位。
(3)本发明的制剂的处方重量份组成为苦参、白土苓有效部位5-7份，药用辅料3.4-15份。
(4)取上述苦参、白土苓有效部位和药用辅料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液用截留分子量10000-30000的超滤膜滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
本发明苦参采取酸水渗漉提取，阳离子交换树脂、氨醇洗脱进行纯化，苦参药渣和白土苓水提醇沉进行精制，合并上述提取液、干燥，得到苦参、白土苓有效部位，使得采用本发明制备的苦参、白土苓有效部位中的苦参总碱含量达到50％-70％，显著提高了有效成分的的纯度。超滤工艺是一种新的分离技术，能通过分子选择性截留除去提取液中的大分子杂质，本发明用截留分子量10000-30000的超滤膜超滤对药液进行处理，可有效除去药液所含糅质、蛋白质、树脂、淀粉等大分子杂质，同时也具有一定去除热原作用，由于本发明复方苦参冻干粉针采用冷冻干燥生产工艺，药物在真空低温干燥，使药物不易氧化，避免了苦参碱和氧化苦参碱的相互转化及因高热而分解，制成品含水量低，有利于长期贮存。
本发明所述药用辅料为药剂学可接受的填加剂，可以是甘露醇或乳糖或葡萄糖或右旋糖苷或葡聚糖中的一种或两种。所述填加剂的用量为苦参、白土苓有效部位填充剂重量比为1∶0.5-3.0，优选1∶0.5-2.0。所说的稀酸是0.1％盐酸或1％醋酸。
本发明制得的冻干粉有效成分纯度高，具有较好的溶解性、稳定性，本发明与复方苦参注射液相比较降低了苦参的用量，后述药理实验表明本发明的复方苦参冻干粉针剂具有更好的药理作用。
二.有效部位的检测分析1.苦参总碱的测定1.1实验药物本发明苦参、白土苓有效部位(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供，按本发明制备方法制备)；复方苦参注射液提取物(按复方苦参注射液制备方法制备)。
1.2实验方法精密称取以上样品适量，精密吸取供试品2ml置小烧杯中，置水浴上加热浓缩至约2.sml，放冷至室温，滴加氨试液使呈碱性，定量移入分液漏斗中，分次加入氛仿20、20、20、10ml提取，至生物碱提尽.合并提取液置水浴上蒸至近干，加入3ml中性乙醉(甲基红指示)，蒸干，残渣加乙醚5ml使溶解。精密加硫酸液(0.01mol/L)10ml，摇匀，置水浴上加热使残渣完全溶解并除尽乙醚，放冷。加新沸过的冷水15ml与甲基红指示液2滴，用氢氧化钠液(0.02mol/L)滴定至黄色，即得；每1ml的硫酸液(0.o1mol/L)相当于4.967mg的苦参碱(C15H24N20)，结果用空白试验校正。结果见表1。
表1 有效部位总生物碱百分含量

结论通过上述检测分析实验我们可以得知本发明有效部位中有效成分百分含量明显提高，充分说明本发明的工艺比原工艺有显著的提高。
三.制剂中氧化苦参碱和苦参碱的含量测定仪器与试药Waters高液相色谱仪，2487紫外检测器，Millinium32色谱工作站；复方苦参注射液(山西金晶药业有限公司)，本发明复方苦参冻干粉(广东天之骄药物开发有限公司实验室提供，按本发明制备方法制备)；氧化苦参碱对照品、苦参碱对照品均购自中国药品生物制品检定所。
实验方法参照文献方法(张蕾等，离子对RP-HPLC同时测定复方苦参注射液中氧化苦参碱和苦参碱含量。中成药26(11)，2004876)对上述样品中的氧化苦参碱和苦参碱进行了测定，结果见表2。
表2氧化苦参碱和苦参碱的含量(mg/支)

由以上实验结果可知本发明制剂中氧化苦参碱和苦参碱含量比复方苦参注射液低，本发明由于降低了生药用量，因而有效成分降低，后述药理实验表明本发明具有更好的药理作用，同时由于降低了苦参的用量，使其不良反应降低，安全性更有保障，说明本发明的制备工艺更加科学合理。
四.药理实施例试药与动物本发明复方苦参冻干粉针剂(由广东天之骄药物开发有限公司实验室提供，按本发明制备方法制备)；复方苦参注射液(山西金晶药业有限公司)，生理盐水由广东天之骄药物开发有限公司实验室提供。健康小鼠，体重20±2g，雌雄各半(均由广州市实验动物中心提供)；瘤株小鼠S180(广州市实验动物中心)。
1.抗肿瘤作用1.1对小鼠S180肿瘤生长抑制作用取接种传代小鼠S180，在匀浆器中加入生理盐水，制成小鼠S180瘤匀浆液，再以生理盐水1∶3稀释，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小时称重，给药组小鼠每日尾静脉给药一次，给药剂量为复方苦参注射液组8g生药/kg，本发明复方苦参冻干粉针剂组7.2g生药/kg，给药容积同为0.2ml/只，对照组给予等量生理盐水，共7天。停药次日处死小鼠，称体重并细心剥离皮下瘤块，于EM50电子天平称取瘤重，并计算抑瘤率，见表3。
表3 各组制剂对小鼠S180肿瘤生长抑制作用

注与生理盐水组比较**P＜0.01，与复方苦参注射液比较ΔP＜0.05＜结果表明本发明复方苦参冻干粉针剂能显著抑制肿瘤生长，具有比复方苦参注射液更好的药理作用。
1.2对荷瘤小鼠死亡率和存活时间的影响取接种传代小鼠S180，在匀浆器中加入生理盐水，制成小鼠S180瘤匀浆液，再以生理盐水1∶3稀释，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，于接种肿瘤后一周，即第八天开始按1.1方法给药，让其自然死亡，待对照组动物全部死亡后，比较死亡率，并比较90天各组动物的存活时间差异，设给药组与对照组，每组小鼠20只，结果见表4。
表4 对各组小鼠死亡率和存活时间的影响

注与生理盐水组比较**P＜0.01，与复方苦参注射液比较ΔP＜0.05结果表明本发明复方苦参冻干粉针剂能显著降低荷瘤小鼠死亡率，延长荷瘤小鼠存活时间，与复方苦参注射液比较作用更显著。
2.镇痛试验2.1对小鼠热板致痛作用的影响取体重20±2g小鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，即生理盐水组、复方苦参注射液组、本发明复方苦参冻干粉针剂组，给药剂量为复方苦参注射液组8g生药/kg，本发明复方苦参冻干粉7.2g生药/kg，给药容积相同为0.2ml/只，空白对照组给予等量生理盐水，连续给药3天，末次给药后1h将各鼠分别固定于55±0.5℃的热板仪中，以舔后足作为“疼痛”的反应指标，观察给药后小鼠对热板痛的反应时间，结果见表5。
2.2对醋酸引起的扭体反应的影响取体重20±2g小鼠，雌雄各半，分组及给药方法同2.1，连续给药3天，末次给药后1h，腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/20g体重，观察10min内的小鼠扭体次数，结果见表5。
表5 镇痛试验结果(X±SD)

注与生理盐水组比较*P＜0.05**P＜0.01试验结果表明本发明复方苦参冻干粉针剂具有较好的镇痛作用，其中本发明冻干粉针剂的镇痛作用比复方苦参注射液的作用更为显著。
3.止血作用3.1对小鼠出血时间的影响取体重20±2g小鼠，雌雄各半，分组及给药方法同2.1，连续给药3天，于末次给药后30min将小鼠尾尖端3mm处剪断，待血液自行流出开始计时，每隔30s用滤纸吸去血滴1次，直至血流自行停止(滤纸吸无血)为止，计算出血时间，结果见表6。
表6对小鼠出血时间的影响(X±SD)

注与生理盐水组比较*P＜0.05**P＜0.01试验结果表明本发明复方苦参冻干粉针剂具有显著的止血作用，其止血效果好于复方苦参注射液组。
4.抗炎作用4.1对小鼠耳二甲苯致炎的影响取体重20±2g小鼠30只，雌雄各半，分组及给药方法同1.1，连续给药3天，于末次给药后30min，将二甲苯0.02ml涂于小鼠左耳，1h后脱臼处死小鼠，剪下二耳，打孔称重，以左耳与右耳片重量差值为肿胀度，结果见表7。
表7 对小鼠耳二甲苯致炎的影响结果(X±SD)

注与生理盐水组比较*P＜0.05**P＜0.01结果表明本发明复方苦参冻干粉针剂具有良好的抗炎作用，其抗炎效果好于复方苦参注射液组。
总结以上药理实验结果表明本发明冻干粉针剂虽给药量比复方苦参注射液更少，但药理作用显著好于复方苦参注射液，说明本发明冻干粉制剂制备工艺和方法更加科学合理。
五.制备实施例实施例1(1)取苦参1200g粉碎，过20目筛，用0.1％盐酸溶液润湿膨胀后装入渗漉筒中，加0.1％盐酸浸泡4h后，将渗漉筒与强酸性阳离子交换树脂相连，进行渗漉，渗漉液过树脂柱，已交换树脂用在乙醇中加入氨水至pH值9-10的氨醇分次回流洗脱，氨醇洗脱液回收乙醇并浓缩，得浓缩液1。苦参药渣和白土苓600g加水煎煮二次，每次1小时，合并煎煮液，浓缩至1.5g生药/ml；加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，减压回收乙醇并浓缩至2g生药/ml，再加乙醇使含醇量为90％，静置，滤过，减压回收乙醇，得浓缩液2。合并浓缩液1和2，真空干燥，得苦参、白土苓有效部位69g。
(2)本发明的制剂的处方为苦参、白土苓有效部位69g，甘露醇81g。
(3)取上述苦参、白土苓有效部位和甘露醇混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液用截留分子量10000的超滤膜滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉针剂500瓶。
实施例2(1)取苦参1200g粉碎，过40目筛，用1％醋酸溶液润湿膨胀后装入渗漉筒中，加1％醋酸浸泡4h后，将渗漉筒与强酸性阳离子交换树脂相连，进行渗漉，渗漉液过树脂柱，已交换树脂用在乙醇中加入氨水至pH值9-10的氨醇分次回流洗脱，氨醇洗脱液回收乙醇并浓缩，得浓缩液1。苦参药渣和白土苓600g加水煎煮二次，每次2小时，合并煎煮液，浓缩至1.5g生药/ml；加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，减压回收乙醇并浓缩至2g生药/ml，再加乙醇使含醇量为90％，静置，滤过，减压回收乙醇，得浓缩液2。合并浓缩液1和2，真空干燥，得苦参、白土苓有效部位70g。
(2)本发明的制剂的处方为苦参、白土苓有效部位70g，甘露醇80g。
(3)取上述苦参、白土苓有效部位和甘露醇混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液用截留分子量30000超滤膜滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉针剂500瓶。
实施例3(1)取苦参1200g粉碎，过30目筛，用0.1％盐酸溶液润湿膨胀后装入渗漉筒中，加0.1％盐酸浸泡4h后，将渗漉筒与强酸性阳离子交换树脂相连，进行渗漉，渗漉液过树脂柱，已交换树脂用在乙醇中加入氨水至pH值9-10的氨醇分次回流洗脱，氨醇洗脱液回收乙醇并浓缩，得浓缩液1。苦参药渣和白土苓600g加水煎煮二次，每次3小时，合并煎煮液，浓缩至1.5g生药/ml；加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，减压回收乙醇并浓缩至2g生药/ml，再加乙醇使含醇量为90％，静置，滤过，减压回收乙醇，得浓缩液2。合并浓缩液1和2，真空干燥，得苦参、白土苓有效部位67g。
(2)本发明的制剂的处方为苦参、白土苓有效部位67g，乳糖133g。
(3)取上述苦参、白土苓有效部位和乳糖混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液用截留分子量2000超滤膜滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉针剂500瓶。
实施例4(1)取苦参1200g粉碎，过20目筛，用1％醋酸溶液润湿膨胀后装入渗漉筒中，加1％醋酸浸泡4h后，将渗漉筒与强酸性阳离子交换树脂相连，进行渗漉，渗漉液过树脂柱，已交换树脂用在乙醇中加入氨水至pH值9-10的氨醇分次回流洗脱，氨醇洗脱液回收乙醇并浓缩，得浓缩液1。苦参药渣和白土苓600g加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎煮液，浓缩至1.5g生药/ml；加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，减压回收乙醇并浓缩至2g生药/ml，再加乙醇使含醇量为90％，静置，滤过，减压回收乙醇，得浓缩液2。合并浓缩液1和2，真空干燥，得苦参、白土苓有效部位67g。
(2)本发明的制剂的处方为苦参、白土苓有效部位67g，葡萄糖133g。
(3)取上述苦参、白土苓有效部位和葡萄糖混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液用截留分子量10000的超滤膜滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉针剂500瓶。
实施例5(1)取苦参1200g粉碎，过30目筛，用0.1％盐酸溶液润湿膨胀后装入渗漉筒中，加0.1％盐酸浸泡4h后，将渗漉筒与强酸性阳离子交换树脂相连，进行渗漉，渗漉液过树脂柱，已交换树脂用在乙醇中加入氨水至pH值9-10的氨醇分次回流洗脱，氨醇洗脱液回收乙醇并浓缩，得浓缩液1。苦参药渣和白土苓600g加水煎煮二次，每次2.5小时，合并煎煮液，浓缩至1.5g生药/ml；加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，减压回收乙醇并浓缩至2g生药/ml，再加乙醇使含醇量为90％，静置，滤过，减压回收乙醇，得浓缩液2。合并浓缩液1和2，真空干燥，得苦参、白土苓有效部位66g。
(2)本发明的制剂的处方为苦参、白土苓有效部位66g，右旋糖苷34g。
(3)取上述苦参、白土苓有效部位和右旋糖苷混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液用截留分子量30000的超滤膜滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉针剂500瓶。
实施例6(1)取苦参1200g粉碎，过30目筛，用0.1％盐酸溶液润湿膨胀后装入渗漉筒中，加0.1％盐酸浸泡4h后，将渗漉筒与强酸性阳离子交换树脂相连，进行渗漉，渗漉液过树脂柱，已交换树脂用在乙醇中加入氨水至pH值9-10的氨醇分次回流洗脱，氨醇洗脱液回收乙醇并浓缩，得浓缩液1。苦参药渣和白土苓600g加水煎煮二次，每次1小时，合并煎煮液，浓缩至1.5g生药/ml；加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，减压回收乙醇并浓缩至2g生药/ml，再加乙醇使含醇量为90％，静置，滤过，减压回收乙醇，得浓缩液2。合并浓缩液1和2，真空干燥，得苦参、白土苓有效部位66g。
(2)本发明的制剂的处方为苦参、白土苓有效部位66g，葡聚糖84g。
(3)取上述苦参、白土苓有效部位和葡聚糖混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液用截留分子量30000的超滤膜滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉针剂500瓶。
实施例7(1)取苦参1000g粉碎，过30目筛，用1％醋酸溶液润湿膨胀后装入渗漉筒中，加1％醋酸浸泡4h后，将渗漉筒与强酸性阳离子交换树脂相连，进行渗漉，渗漉液过树脂柱，已交换树脂用在乙醇中加入氨水至pH值9-10的氨醇分次回流洗脱，氨醇洗脱液回收乙醇并浓缩，得浓缩液1。苦参药渣和白土苓500g加水煎煮二次，每次1小时，合并煎煮液，浓缩至1.5g生药/ml；加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，减压回收乙醇并浓缩至2g生药/ml，再加乙醇使含醇量为90％，静置，滤过，减压回收乙醇，得浓缩液2。合并浓缩液1和2，真空干燥，得苦参、白土苓有效部位50g。
(2)本发明的制剂的处方为苦参、白土苓有效部位50g，甘露醇80g，葡聚糖70g。
(3)取上述苦参、白土苓有效部位和甘露醇、葡聚糖混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液用截留分子量20000的超滤膜滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得本发明冻干粉针剂500瓶。
权利要求
1.一种复方苦参冻干粉针剂，其特征在于它是由苦参、白土苓有效部位5-7重量份和药用辅料3.4-15重量份制备而成。其特征还在于苦参、白土苓有效部位中苦参总碱含量为50％-70％。
2.根据权利要求1所述的一种复方苦参冻干粉针剂的制备方法，其特征包括以下步骤(1)原料药组成为苦参1-1.2份，白土苓0.5-0.6份。(2)取苦参粉碎，过20-40目筛，用0.1％盐酸溶液润湿膨胀后装入渗漉筒中，加0.1％盐酸浸泡4h后，将渗漉筒与强酸性阳离子交换树脂相连，进行渗漉，渗漉液过树脂柱，已交换树脂用在乙醇中加入氨水至pH值9-10的氨醇分次回流洗脱，氨醇洗脱液减压回收乙醇并浓缩，得浓缩液1。苦参药渣和白土苓加水煎煮二次，每次1-3小时，合并煎煮液，浓缩至1.5g生药/ml；加乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，减压回收乙醇并浓缩至2g生药/ml，再加乙醇使含醇量为90％，静置，滤过，减压回收乙醇，得浓缩液2。合并浓缩液1和2，真空干燥，得苦参、白土苓有效部位。(3)取上述苦参、白土苓有效部位和药用辅料混合，加注射用水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液用超滤膜滤过，加注射用水至规定量，调节pH值至5.5-7.0，微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，即得。
3.根据权利要求1的复方苦参冻干粉针剂，其特征在于苦参、白土苓有效部位药用辅料的重量比为1∶0.5-3.0。
4.根据权利要求1的复方苦参冻干粉针剂，其特征在于苦参、白土苓有效部位药用辅料的重量比为1∶0.5-2.0。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所用超滤膜的截留分子量为10000-30000。
全文摘要
本发明公开了一种复方苦参冻干粉针剂及其制备方法，其特征在于它是由苦参、白土苓经提取纯化得到的有效部位5－7重量份和药用辅料3.4－15重量份制备成的冻干粉针剂，本发明有效部位中苦参总碱含量为50％－70％。本发明复方苦参冻干粉针剂具有较好的稳定性、安全性，药理实验结果表明，本发明的复方苦参冻干粉针剂，具有更强的药理作用。
文档编号A61P7/06GK1679883SQ20051000489
公开日2005年10月12日 申请日期2005年2月4日 优先权日2005年2月4日
发明者张海峰 申请人:张海峰