专利名称：一种多叶棘豆黄酮提取物及其在制备抗氧化药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种多叶棘豆黄酮提取物及其在制备抗氧化药物中的应用。
背景技术：
多叶棘豆为豆科植物多叶棘豆(Oxytropis myriophylla)的干燥全草,又名狐尾藻棘豆，主产于内蒙古、河北、东北等省区，是蒙医临床常用药之一。多叶棘豆中含有多种黄酮类成分，如白杨素、黄芩素、刺槐苷、木犀草素、芹菜素、槲皮素、山柰酚、紫云英苷、杨梅树皮苷、鼠李素、芒柄花素等，其总黄酮对超氧阴离子、羟自由基、脂质过氧化物具有抑制或消除作用，多叶棘豆清热、愈伤生肌、合脉止血、消肿抗炎等功效与之密切相关。由于目前人工合成的抗氧化剂具有致畸、致癌等毒性，因此越来越多的国家开始限制或禁止使用某些合成抗氧化剂，转而从植物中寻求天然抗氧化成分。申请人研究发现，多叶棘豆黄酮提取物具有良好的抗氧化作用。但目前，未见对多叶棘豆黄酮类成分及其制备工艺的研究报道。因此，申请人开展了本发明研究。

发明内容
本发明的目的在于提供一种多叶棘豆黄酮提取物，本发明的另一个目的在于提供其制备方法，本发明的第三个目的在于提供其质量检测方法，本发明的第四个目的在于提供其在制备抗氧化药物中的应用。本发明的目的是通过如下技术方案实现的:本发明多叶棘豆黄酮提取物的制备方法包括如下步骤:步骤1:取多叶棘豆药材，用体积比为30 90%的乙醇回流提取I 3次，每次提取I 2.5小时；步骤2:大孔吸附树脂纯化。按质量百分比计，该多叶棘豆黄酮提取物中总黄酮含量为30 90% ;优选为按质量百分比计该多叶棘豆黄酮提取物中总黄酮含量为50 80%。将以上所得提取物，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂、口服液、注射剂。上述步骤I中，取多叶棘豆药材，用体积比为30 90 %的乙醇回流提取I 3次，每次提取I 2.5小时，合并提取液，得多叶棘豆乙醇提取液；其中，优选的方法为采用10倍量体积比为70%的乙醇提取2次，每次1.5h ；上述步骤2中，取步骤I所得乙醇提 取液，减压回收溶剂至无醇味，残留物加5 20倍量水超声分散，离心，取上清液，以多叶棘豆药材计，上样液浓度为0.05 0.20g/mL,通过大孔吸附树脂柱，最大上样量为20 35BV，大孔树脂柱径高比为1: 7 11，吸附流速为2 5BV/h，待吸附结束后，用体积比为O 20%的乙醇洗脱4 IOBV进行除杂，弃去，再用体积比为30 80%的乙醇洗脱4 10BV，洗脱流速为2 5BV/h，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得多叶棘豆黄酮提取物。
上述步骤2中优选的方法为，取步骤I所得乙醇提取液，减压回收溶剂至无醇味，残留物加8 15倍量水超声分散，离心，取上清液，以多叶棘豆药材计，上样液浓度为0.05 0.15g/mL，通过大孔吸附树脂柱，最大上样量为24 31BV，大孔树脂柱径高比为I: 7 11，吸附流速为2 5BV/h，待吸附结束后，用体积比为O 20%的乙醇洗脱4 IOBV进行除杂，弃去，再用体积比为50 80%的乙醇洗脱4 10BV，洗脱流速为2 5BV/h，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得多叶棘豆黄酮提取物；进一步优选的方法为减压回收溶剂至无醇味，残留物加10倍量水超声分散，离心，取上清液，以生药量计，即得浓度为0.10g/mL的上样液，上样于大孔树脂柱，最大上样量为28BV，大孔树脂柱径高比为1: 9，吸附流速为3BV/h，待吸附结束后，用体积比为15%的乙醇洗脱6BV进行除杂，弃去，再用体积比为60 %的乙醇洗脱6BV，洗脱流速为4BV/h，收集体积比为60 %的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得多叶棘豆黄酮提取物。上述步骤2中大孔吸附树脂为AB-8，D4006，HPD-600，HPD-826，X-5，型大孔吸附树脂。上述制备方法中，进一步优选的方法为多叶棘豆药材采用10倍量体积比为70%的乙醇提取2次，每次1.5h，提取液减压回收溶剂至无醇味，残留物加10倍量水超声分散，离心，取上清液，回收溶剂至无醇味，以生药量计，即得浓度为0.10g/mL的上样液，上样于HPD-600型大孔树脂柱，最大上样量为28BV，大孔树脂柱径高比为1: 9，吸附流速为3BV/h，待吸附结束后，用体积比为15%的乙醇洗脱6BV进行除杂，弃去，再用体积比为60%的乙醇洗脱6BV，洗脱流速为4BV/h，收集体积比为60%的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得多叶棘豆黄酮提取物。本发明多叶棘豆黄酮提取物为多叶棘豆经乙醇提取再通过大孔吸附树脂纯化得至IJ，经抗氧化活性实验表明，具有良好的抗氧化作用。实验例I多叶棘豆黄酮提取物抗氧化实验

I仪器与试剂RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-1II循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；KQ-500DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DS电热三用水浴锅(北京医疗设备厂)；Sart0ri0us BT25S型1/100000电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)；DNM-9602G型酶标仪(北京艾普在线科技有限公司)，DH-250型电热恒温培养箱(北京中兴伟业仪器有限公司)，电子天平(德国Sartorius公司)。DPPH试剂(2，2-二苯基苦味酰基苯肼基自由基)，维生素C(Sigma-Aldrich公司)，过硫酸钾(北京市红星化工厂)。其它化学试剂均为分析纯。样品有多叶棘豆黄酮提取物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，分别为按照实施例1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10方法制备所得。2方法与结果2.1样品液配制称取样品，用乙醇依次稀释成质量浓度为2.0、1.0、0.5、0.25、0.125,0.0625,
0.03125,0.015625mg/ml 的溶液。阳性对照品(维生素C)溶液质量浓度与上述样品溶液质量浓度相同。2.2DPPH自由基清除方法
将100 μ L不同质量浓度的供试样品溶液和100 μ L DPPH乙醇溶液共置于96空板小孔内，空白对照孔为100 μ L乙醇和100 μ L DPPH乙醇溶液，重复3次，37°C遮光放置反应30min，测其在515nm波长处吸光度。以维生素C做阳性对照，按公式计算样品对DPPH自由
基的清除率。清除率(%) = [1-(A1-Aj)/Ac] X 100%Ac为加入DPPH试剂后空白对照吸光度，Ai为加入DPPH试剂后样品液吸光度，Aj为未加入DPPH试剂时样品液吸光度。2.3 结果各样品清除DPPH自由基结果见表I。由结果可知，多叶棘豆黄酮提取物具有较明显的抗氧化作用。表I各样品清除DPPH自由基结果
权利要求
1.一种具有抗氧化作用的多叶棘豆黄酮提取物的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤: 步骤1:取多叶棘豆药材，用体积比为30 90%的乙醇回流提取I 3次，每次提取I 2.5小时，合并提取液，得多叶棘豆乙醇提取液； 步骤2:大孔吸附树脂纯化。
2.如权利要求1所述的多叶棘豆黄酮提取物的制备方法，其特征在于，取步骤I所得乙醇提取液，减压回收溶剂至无醇味，残留物加5 20倍量水超声分散，离心，取上清液，以多叶棘豆药材计，上样液浓度为0.05 0.20g/mL，通过大孔吸附树脂柱，最大上样量为20 35BV，大孔树脂柱径高比为1: 7 11，吸附流速为2 5BV/h，待吸附结束后，用体积比为O 20%的乙醇洗脱4 IOBV进行除杂，弃去，再用体积比为30 80%的乙醇洗脱4 10BV，洗脱流速为2 5BV/h，收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得多叶棘豆黄酮提取物。
3.如权利要求1所述的多叶棘豆黄酮提取物的制备方法，其特征在于，步骤2中所用大孔吸附树脂为AB-8，D4006, HPD-600，HPD-826，X-5大孔吸附树脂。
4.如权利要求1或2任一项所述制备方法制备得到的多叶棘豆黄酮提取物。
5.如权利要求4所述的多叶棘豆黄酮提取物，其特征在于，按质量百分比计该多叶棘豆黄酮提取物中总黄酮含量为30 90%。
6.如权利要求4所述的多叶棘豆黄酮提取物，其特征在于，制备方法包括如下步骤:步骤1，取多叶棘豆药材 ，用体积比为30 90%的乙醇回流提取I 3次，每次提取I 2.5小时，合并提取液，即得多叶棘豆乙醇提取液；步骤2，取步骤I所得乙醇提取液，减压回收溶剂至无醇味，残留物加8 15倍量水超声分散，离心，取上清液，以多叶棘豆药材计，上样液浓度为0.05 0.15g/mL,通过大孔吸附树脂柱，最大上样量为24 31BV，大孔树脂柱径高比为1: 7 11，吸附流速为2 5BV/h，待吸附结束后，体积比为O 20%的乙醇洗脱4 IOBV进行除杂，弃去，再用体积比为50 80 %的乙醇洗脱4 10BV，洗脱流速为2 5BV/h,收集乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即得多叶棘豆黄酮提取物。
7.如权利要求1所述制备方法制备得到的多叶棘豆黄酮提取物，其特征在于，加入常规辅料，按常规的制剂工艺制成药剂学可接受的任意常规剂型，包括胶囊剂、片剂、丸剂、口服液体制剂、注射剂、颗粒剂、凝胶剂、缓释剂。
8.如权利要求1所述制备方法制备得到的多叶棘豆黄酮提取物在制备抗氧化药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种多叶棘豆黄酮提取物及其制备方法以及其在制备抗氧化药物中的应用。本发明多叶棘豆黄酮提取物通过乙醇提取，再通过大孔吸附树脂分离纯化得到多叶棘豆黄酮提取物；该多叶棘豆黄酮提取物具有良好的抗氧化作用，可以制备成任何常用剂型。
文档编号A61K36/48GK103099840SQ20131002620
公开日2013年5月15日 申请日期2013年1月24日 优先权日2013年1月24日
发明者刘斌, 折改梅, 孙芳芳, 姜艳艳, 钟昆芮 申请人:刘斌