专利名称：一种具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及一组中药提取物的制备方法，特别涉及一组具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法。
背景技术：
海南九节I3Sychotria hainanensis为茜草科植物，又名山大刀、青龙吐珠，为长绿性灌木，耐阴性极强，喜温暖多湿阳光的环境。根叶用药，味苦、涩，性凉，有清热解毒、消肿拔毒、祛风除湿、活血止痛之效，主治感冒、白喉、痢疾、跌打损伤和无名肿痛等。国外的学者从茜草科九节属植物I^syehotriaforstcrianaA. Gray.中分离出了多聚假吲哚生物碱(九节属植物中多聚假吲哚生物碱与核苷酸之间的相互作用[J].国外医药植物药分册，1990， 5(5) :230-231.)。在我国海南岛，黎族人民用其茎和叶治疗骨折、跌打损伤。草海桐为草海桐科植物草海桐kaevola scricea Vahl.，生长于海边，通常在海边沙地上或海岸峭壁上。在台湾、福建、广东、广西等省区均有分布，在海南岛主产于文昌、 昌江、东方等地。其茎、叶用药，黎族地区用其茎和叶治疗骨髓炎。落地生根，别名土三七，打不死，为景天科植物落地生根Bryophyllum pirmatum(L.f.)0ken。根及全株入药，味苦、酸，性寒。具有止血凉血，清热解毒的作用，主治吐血，外伤出血，跌打损伤，疔疮痈肿，乳痛，丹毒，溃疡，烫伤，胃痛，关节痛，咽喉痛，肺热咳嗽等症。近代药理研究表明，落地生根叶的甲醇提取物对多种细菌的生长具有抑制作用， 水提物具有镇痛、抗炎、抗糖尿病等活性。在海南岛黎族地区用其全株治疗骨折、跌打损伤。 目前对以上三种黎药提取物促进骨折愈合作用的实验研究还未见报道。

发明内容
本发明的目的是提供一种具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法。为实现上述目的，本发明的技术方案为提供一种具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法，其特征在于如下步骤(1)、将海南九节叶或草海桐或落地生根药材粉碎，保存备用，药材粉末目数为 10 60目；O)、将步骤(1)得到的药材粉末用蒸馏水进行提取，过滤药渣，合并滤液，浓缩， 得到药材蒸馏水提取浓缩液，干燥，计算提取率；其中提取次数为1 10次，每次提取时间为1 10小时，提取溶剂与药材的物料比(mL/g)为1 1 30 1，干燥方式包括水浴蒸干，减压干燥和真空冻干；(3)、将步骤O)中的药渣晒干，用乙醇进行二次提取，过滤药渣，合并滤液，回收溶剂，得到药材乙醇提取浓缩液，干燥，计算提取率；其中乙醇提取的方式包括回流提取，索式提取和超生提取；乙醇浓度为30% 95%，优选95% ；提取次数为1 10次，每次提取时间为1 15小时，药材浓缩液的干燥方式包括水浴蒸干，减压干燥和真空冻干，药材浓缩液真空冻干的时间包括0 72小时。
较佳地，所述步骤O)中，药材粉末用蒸馏水进行提取次数优选为3次，第一次2 小时，第二次15.小时，第三次1小时。较佳地，所述步骤O)中，药材粉末用蒸馏水进行提取，提取提取溶剂与药材的物料比(mL/g)优选为15 I0较佳地，所述步骤O)中药材浓缩液的干燥方式优选真空冻干方式，药材浓缩液真空冻干的时间优选为M小时。较佳地，所述步骤(3)中的乙醇提取的方式优选为回流提取，提取次数优选为2 次，第一次提取时间优选为2小时，第二次提取时间优选为1. 5小时。较佳地，所述步骤(3)中药材浓缩液的干燥方式优选为真空冻干方式，药材浓缩液真空冻干的时间包括优选为M小时。
具体实施例方式下面结合优选实施例对本发明作进一步说明，但本发明决不限于下述实施例。实施例1海南九节叶提取物的制备海南九节叶粉碎，过60目筛，保存备用。(一 )海南九节叶蒸馏水提取试验1、提取次数的筛选设定提取溶剂与药材的物料比(mL/g)为15 1，每次提取 2. 5h，分别提取1、2、3、4、5次，以确定合适的提取次数。2、提取时间的筛选设定提取次数为3次，提取溶剂与药材的物料比(mL/g)为 15 1，在此条件下，每一次分别提取0. 5h、2. 5h、3. 5h、5h、7. 5h，10h，以确定每一次合适的提取时间。3、提取溶剂与药材的物料比(mL/g)的筛选设定提取次数为3次，提取时间3 次分别为2.0h、ljh、1.0h，在此条件下，将提取溶剂与药材的物料比分别设定为1 1、 5 UlO 1、15 1,20 1,30 1进行试验，以确定合适的提取溶剂与药材的物料比。4、药材浓缩液液干燥方式的筛选对经提取浓缩得到的药材浓缩液进行干燥，分别采取水浴蒸干，减压干燥和真空冻干的方式进行，以确定合适的干燥方式。5、真空干燥时间的确定采取真空冻干的方式对提取浓缩得到的药材浓缩液进行干燥，分别干燥5h、10h、15h、Mh、48h、72h，以确定合适的干燥时间。( 二)海南九节叶蒸馏水提取后药渣的乙醇提取试验1、乙醇提取方式的筛选海南九节叶经蒸馏水提取后的药渣晒干，采用95%乙醇分别进行回流提取、超声提取和索式提取，以确定合适的提取方式。2、乙醇浓度的筛选海南九节叶经蒸馏水提取后的药渣晒干，分别采用30%、 60%,70%,80%,95%乙醇进行回流提取，以确定合适的提取用乙醇浓度。3、提取次数的筛选海南九节叶经蒸馏水提取后的药渣晒干，采取95%乙醇回流提取法式进行提取，分别提取1、2、3、4、5次，以确定合适的提取次数。4提取时间的筛选海南九节叶经蒸馏水提取后的药渣晒干，采取95%乙醇回流提取法式进行提取，提取次数为2次，每一次分别提取0. 5h、2. 5h、3. 5h,5h,7. 5h，IOh,以确定每一次合适的提取时间。5 药材浓缩液液干燥方式的筛选对经提取浓缩得到的药材浓缩液进行干燥，分别采取水浴蒸干，减压干燥和真空冻干的方式进行，以确定合适的干燥方式。6、真空干燥时间的确定采取真空冻干的方式对提取浓缩得到的药材浓缩液进行干燥，分别干燥5h、10h、15h、Mh、48h、72h，以确定合适的干燥时间。(三)海南九节叶促进骨折愈合提取物的制备称取海南九节叶药材100g，粉碎，过60目筛，加入1500mL蒸馏水浸泡1小时，然
后进行第一次水提取，水提取时间为2个小时，提取完毕，过滤药渣，收集滤液。药渣再加入 1500mL蒸馏水进行第二次水提取，提取时间为1.5个小时，提取完毕，过滤药渣，收集滤液。 药渣再加入1500mL蒸馏水继续进行第三次水提取，提取时间为1个小时，提取完毕，过滤药渣，收集滤液。合并三次水提液，浓缩，得到水提浓缩液。水提浓缩液经真空冻干对小时后， 对冻干粉末进行称重，计算提取率。结果约得到12. 5g干燥粉末，海南九节叶的蒸馏水提取率约为12.5%。海南九节叶药渣经蒸馏水提取后自然晒干，进行乙醇回流提取。加入约10 倍量95%乙醇进行第一次回流提取，提取时间为2个小时，过滤药渣，收集滤液。药渣继续加入约10倍量95%乙醇进行第二次回流提取，提取时间为1.5个小时，过滤药渣，收集滤液。合并两次乙醇提取液，回收溶剂，得到海南九节叶的95%乙醇提取浸膏，真空冻干M小时，对冻干粉末进行称重，计算提取率。结果约得到3. 7g干燥粉末，海南九节叶的95%乙醇提取率约为3.7%。实施例二草海桐提取物的制备称取草海桐药材100g，粉碎，过60目筛，加入1500mL蒸馏水浸泡1小时，然后进行第一次水提取，水提取时间为2个小时，提取完毕，过滤药渣，收集滤液。药渣再加入1500mL 蒸馏水进行第二次水提取，提取时间为1. 5个小时，提取完毕，过滤药渣，收集滤液。药渣再加入1500mL蒸馏水继续进行第三次水提取，提取时间为1个小时，提取完毕，过滤药渣，收集滤液。合并三次水提液，浓缩，得到水提浓缩液。水提浓缩液经真空冻干M小时后，对冻干粉末进行称重，计算提取率。结果约得到12. 5g干燥粉末，草海桐的蒸馏水提取率约为 12.5%。草海桐药渣经蒸馏水提取后自然晒干，进行乙醇回流提取。加入约10倍量95%乙醇进行第一次回流提取，提取时间为2个小时，过滤药渣，收集滤液。药渣继续加入约10倍量95%乙醇进行第二次回流提取，提取时间为1.5个小时，过滤药渣，收集滤液。合并两次乙醇提取液，回收溶剂，得到草海桐的95%乙醇提取浸膏，真空冻干M小时，对冻干粉末进行称重，计算提取率。结果约得到3. 7g干燥粉末，草海桐的95%乙醇提取率约为3. %。实施例三落地生根提取物的制备称取落地生根药材100g，粉碎，过60目筛，加入1500mL蒸馏水浸泡1小时，然后
进行第一次水提取，水提取时间为2个小时，提取完毕，过滤药渣，收集滤液。药渣再加入 1500mL蒸馏水进行第二次水提取，提取时间为1.5个小时，提取完毕，过滤药渣，收集滤液。 药渣再加入1500mL蒸馏水继续进行第三次水提取，提取时间为1个小时，提取完毕，过滤药渣，收集滤液。合并三次水提液，浓缩，得到水提浓缩液。水提浓缩液经真空冻干对小时后， 对冻干粉末进行称重，计算提取率。结果约得到12. 5g干燥粉末，落地生根的蒸馏水提取率约为12.5%。落地生根药渣经蒸馏水提取后自然晒干，进行乙醇回流提取。加入约10倍量95%乙醇进行第一次回流提取，提取时间为2个小时，过滤药渣，收集滤液。药渣继续加入约10倍量95%乙醇进行第二次回流提取，提取时间为1.5个小时，过滤药渣，收集滤液。 合并两次乙醇提取液，回收溶剂，得到落地生根的95%乙醇提取浸膏，真空冻干M小时，对冻干粉末进行称重，计算提取率。结果约得到3. 7g干燥粉末，落地生根的95%乙醇提取率约为3. 7%。 以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。
权利要求
1.一种具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法，其特征在于如下步骤(1)、将海南九节叶或草海桐或落地生根药材粉碎，保存备用，药材粉末目数为10 60目；O)、将步骤(1)得到的药材粉末用蒸馏水进行提取，过滤药渣，合并滤液，浓缩，得到药材蒸馏水提取浓缩液，干燥，计算提取率；其中提取次数为1 10次，每次提取时间为 1 10小时，提取溶剂与药材的物料比(mL/g)为1 1 30 1，干燥方式包括水浴蒸干， 减压干燥和真空冻干；(3)、将步骤O)中的药渣晒干，用乙醇进行二次提取，过滤药渣，合并滤液，回收溶剂， 得到药材乙醇提取浓缩液，干燥，计算提取率；其中乙醇提取的方式包括回流提取，索式提取和超生提取；乙醇浓度为30% 95%，优选95% ；提取次数为1 10次，每次提取时间为1 15小时，药材浓缩液的干燥方式包括水浴蒸干，减压干燥和真空冻干，药材浓缩液真空冻干的时间包括0 72小时。
2.如权利要求1所述的具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法，其特征在于所述步骤O)中，药材粉末用蒸馏水进行提取次数优选为3次，第一次2小时，第二次 15.小时，第三次1小时。
3.如权利要求1所述的具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法，其特征在于所述步骤( 中，药材粉末用蒸馏水进行提取，提取提取溶剂与药材的物料比(mL/g)优选为15 1。
4.如权利要求1所述的具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法，其特征在于所述步骤O)中药材浓缩液的干燥方式优选真空冻干方式，药材浓缩液真空冻干的时间优选为M小时。
5.如权利要求1所述的具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中的乙醇提取的方式优选为回流提取，提取次数优选为2次，第一次提取时间优选为2小时，第二次提取时间优选为1. 5小时。
6.如权利要求1所述的具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法，其特征在于所述步骤(3)中药材浓缩液的干燥方式优选为真空冻干方式，药材浓缩液真空冻干的时间包括优选为M小时。
全文摘要
本发明公开了一种具有促进骨折愈合作用的中药提取物的制备方法，其特征在与海南九节叶、草海桐、落地生根药材粉碎后，首先应用蒸馏水进行提取，提取溶剂与药材的物料比按照15∶1进行，总共提取3次，每次的提取时间采用等量递减的方式进行，分别为2小时、1.5小时和1小时。提取完毕，过滤药渣，收集合并滤液，浓缩，得到药材的蒸馏水提取浓缩液。药渣晒干后再应用95％乙醇进行回流提取，总共提取2次，提取时间分别为2小时和1.5小时。提取完毕，过滤药渣，收集合并滤液，回收溶剂，得到药材的95％乙醇提取浓缩液。以上两种提取浓缩液经真空冷冻干燥24小时后，得到药材干粉，对药材真空干燥后得到的干粉进行称重，分别计算蒸馏水提取和乙醇提取的提取率。
文档编号A61K36/74GK102429973SQ201110384829
公开日2012年5月2日 申请日期2011年11月28日 优先权日2011年11月28日
发明者仁兆平, 张小坡, 李洪福, 钟霞, 陈年根, 黄剑 申请人:海南医学院